5.7: Bileşik Uygulama II

1. Topikal uygulama

1. Herhangi bir merhem ve krem uygulamadan önce, tüy dökücü bir krem kullanarak veya tıraş ederek bölgedeki tüm tüyleri çıkarın.
2. Cildi iyice temizleyin ve kurulayın.
3. Teknisyenin temasını önlemek için maddeyi pamuk uçlu bir aplikatör ile veya doğrudan yerleştirilmiş bir damla ile doğrudan cilde uygulayın.
4. En iyi sonucu elde etmek için, kalın bir tabakanın bir kerelik uygulanmasına karşı birkaç ince merhem veya krem tabakası uygulayın.
5. Saçı ayırarak ve açıkta kalan cilde bir damla uygulayarak sıvı uygulayın.
6. Bir maddeyi topikal olarak uygularken, hayvanın bölgeyi tımar etmesi nedeniyle sistemik emilim şansı vardır. Maddenin kazara yutulmasını veya erken çıkarılmasını önlemek için önleyici tedbirler alınmalıdır. Hayvanın etkilenen vücut bölgelerine ulaşmasını önlemek için küçük tasmalar veya kalkanlar mevcuttur. Kafes arkadaşlarından allogrooming'i önlemek için bireysel barınma da gerekebilir.

Şekil 1. Farelerde topikal uygulama.

2. Oral dozlama

1. Hayvanlara yem veya su yoluyla bileşikler verilirken, vücut ağırlığına dayalı minimum günlük doz hesaplanmalıdır. Deneyde kullanılan fare veya sıçan suşunun ortalama ağırlığı, her bir hayvanın tartılması ve her bir birey için dozun hesaplanması belirtilmedikçe, hesaplamaları yapmak için kullanılabilir.
2. Yiyecek ve/veya su alımının hassas bir şekilde ölçülmesini gerektiren protokoller için hayvanların ayrı ayrı barındırılması gerekir.
3. Deneysel ihtiyaçları karşılamak için özel yem veya ikramlar üretilebilir.
   1. Standart diyeti, hayvanların gün boyunca bileşiği yutmasına izin veren formüle edilmiş diyetle değiştirin.
   2. Bileşik kararsızlığı nedeniyle gıdanın standart gıdadan daha sık değiştirilmesi gerekebilir.
4. Maddeler ayrıca içme suyunda çözülerek de uygulanabilir ve bu da hayvanların gün boyunca bir bileşik almasına izin verir
   1. Suya lezzetli hale getirmek için az miktarda şeker eklenir. Eklenecek kesin miktar, suyun fareler tarafından kabul edilmesiyle belirlenir. Mümkün olan en küçük artışı kullanın.
   2. Suyu değiştirme sıklığı, bileşiğin stabilitesine bağlıdır. Bazı maddeler ışığa duyarlı olabilir veya zamanla çökelebilir.

3. Gavaj prosedürü

20-25 gauge x 1.5 inç düz veya kavisli dozaj iğneleri kullanılır. Sıçanlar için 18-20 gauge x 2-3 inç düz veya kavisli dozaj iğneleri kullanılır. Bunlar yeniden kullanılabilir paslanmaz çelik iğneler veya tek kullanımlık iğneler olarak mevcuttur. Tek kullanımlık iğneler, silikon uçlu metal veya esnek bir plastik şafta sahip olabilir.

1. Dozlama iğnesini, test çözeltisinin hacmine ve viskozitesine göre seçilen bir şırıngaya takın. Kalın sıvıları dozajlamak için bir Luer kilit şırıngası tercih edilir. Bunlar genellikle 100 μl'lik derecelendirmelere sahip 3 cc'lik bir boyuttan başlayarak mevcuttur. Bu, daha küçük hacimler için veya daha küçük artışlarla tam doz hacimlerine ihtiyaç duyulduğunda uygun olmayabilir.
2. Şırıngayı, namlu üzerindeki derecelendirmeler iğneyi çevirmeden okunabilecek şekilde iğneye sabitleyin. İğne yemek borusuna yerleştirildikten sonra, herhangi bir rotasyon yemek borusunu yırtabilir ve hayvanın ölümüne neden olabilir.
3. Bir şırıngayı uygulanacak uygun hacimde eşya ile doldurun (optimal hacim = 5 ml / kg ve maksimum hacim = 20 ml / kg)⁴
4. Bu prosedür için uygun kısıtlama şarttır. ⁷
   1. Başın tabanındaki cildi kavrayarak ve tırmalayarak fareleri manuel olarak kısıtlayın. Vücudun baştan kuyruğa doğru düz bir çizgide asılı kalacak şekilde tutulması önemlidir. Vücudun herhangi bir şekilde bükülmesi, gavaj iğnesinin yemek borusuna yerleştirilmesini engelleyecektir.
   2. Kafanın minimum yan yana hareketi olacak şekilde tırnağı sıkıca kavrayın. Vücudun dönmesini önlemek için arka kısım stabilize edilmelidir.
   3. Bir fareyi tahrip etmek için, boynun her iki yanındaki işaret ve orta parmakları ve hayvanın sırtındaki avuç içi kullanarak omuzların üzerinden kavrayın. Başparmak, üçüncü ve dördüncü parmaklar, hayvanın ileri veya geri hareket etmesini önlemek için göğsü çevrelemelidir. Boynun her iki yanındaki parmakların konumu, farenin başını çevirmesini engeller.
   4. Gavaj iğnesinin ağız, yutak, yemek borusu veya mideye zarar vermeden yerleştirilmesine yardımcı olmak için vücudun düz bir çizgide olması ve bükülmemesi önemlidir.
   5. Kafanın aşırı yan yana hareketi olmadığından emin olun.
   6. Vücut rotasyonunu önlemek için arka kısım stabilize edilebilir. Bu, arka ayakların tezgah veya kafes üstü üzerinde durmasına izin verilerek gerçekleştirilir.
5. Maddenin uygulanması
   1. İğneyi, eğri aşağı bakacak ve boynun doğal eğrisi ile aynı hizada olacak şekilde konumlandırın. İğneyi sağ veya sol taraftan, kesici dişler ve azı dişleri arasından, farenksin arkasına doğru bir açıyla ağza sokun.
   2. İğne ağız boşluğuna girdikten sonra, burun yukarı bakacak şekilde gavaj iğnesini kullanarak başı geriye doğru eğin. Bu özellikle düz iğneler kullanıldığında önemlidir. İğne yemek borusuna kolayca kaymalıdır. İğneyi aşağı doğru zorlamayın. Herhangi bir direnç hissedilirse, iğneyi geri çekin ve tekrar deneyin.
   3. İğne midede yerine oturduğunda, bileşiği nazikçe biriktirin.
   4. Kavisli bir iğnenin dönmediğinden emin olarak iğneyi çıkarın.
   5. Hayvan mücadele etmeye başlarsa, doz iğnesini çıkarın ve hayvanı daha güvenli bir şekilde tutun.
   6. İşlemi gerçekleştirirken, hayvan siyanoz veya solunum sıkıntısı belirtileri gösteriyorsa veya ağzından akan solüsyon varsa, dozaj iğnesi derhal çıkarılmalı ve hayvan kafesine bırakılmalıdır.
   7. Genel olarak, sıçanları ve fareleri, özellikle kostik bir maddeyle tahrip ederken, tüm hacim verilmeden önce öksürüğü test etmek için küçük bir miktarın ilk olarak verilmesi önerilen bir uygulamadır. Bu şekilde, iğne yanlış yerleştirilirse, akciğerlere iletilen hacim küçüktür ve hayvanın iyileşme şansı daha yüksektir.

Şekil 2. Farelerde (solda) ve sıçanlarda (sağda) oral gavaj.

Birçok deney, bir bileşiğin bir hayvana oral veya topikal bir yolla uygulanmasını gerektirir, böylece yöntem, deney maddesinin doğal alımını daha iyi taklit eder.

Oral dozlama için, bileşik içme suyuna çözülebilir veya hayvanların tükettiği yiyeceğe dahil edilebilir. Bir başka, daha kesin oral dozlama yöntemi, bileşiği doğrudan mideye yerleştirmek için büyük bir iğnenin kullanıldığı oral gavajdır. Öte yandan, topikal bir ajan doğrudan cilt yüzeyine yerleştirilebilir ve genellikle sadece uygulandığı alanı etkilemesi amaçlanır. Bu stratejilerin her birinin, bu videoda tartışacağımız avantajları ve sınırlamaları vardır. Bunu takiben, bu bileşik uygulama tekniklerinin laboratuar hayvanlarında nasıl uygulanacağını ve bazı uygulamalarını göstereceğiz.

Protokolleri incelemeden önce, bu tekniklerin dikkate alınması gereken hususları, faydalarını ve eksikliklerini gözden geçirelim. Tabletler, kapsüller veya sıvı ile oral dozlama, insanlarda en yaygın kullanılan ilaç uygulama yöntemidir. Bununla birlikte, tabletler ve kapsül kemirgenler için pratik değildir, bu nedenle ortak oral dozlama, bileşiğin içme suyu veya yiyecek içinde çözülmesiyle gerçekleştirilir.

İçme suyu ile dozlama yapılırken, lezzeti artırmak için suya genellikle sükroz eklenir. Bununla birlikte, şekerli tadı nedeniyle normal su alımını teşvik etmek ve aşırı içmemek için ince bir şekilde dengelenmelidir. İyi bir kural,% 10'luk bir sükroz çözeltisi ile başlamak ve daha sonra alıma bağlı olarak ayarlamaktır. Hayvanı ağızdan dozlamanın bir başka yolu da özel yiyeceklerdir. İçine dahil edilmiş fenbendazol gibi yaygın olarak dozlanmış bileşiklere sahip ticari olarak temin edilebilen yem vardır. Kemirgen yemi şirketleri, deneysel bir gereksinimi karşılamak için özel test diyetleri de oluşturabilir.

Bu oral dozlama formunun avantajları, invaziv olmaması, bileşiği sürekli olarak uygulaması ve insan oral ilaç uygulamasını taklit etmesidir. Bununla birlikte, bileşik alımı, yiyeceğin veya suyun kabulüne, bileşiğin stabilitesine ve kafeste bulunan hayvan sayısına bağlı olduğu için hassasiyetten yoksundur. Tam dozlama deney için kritik değilse, bu non-invaziv yöntem hayvanların refahı için en iyisidir.

Daha kesin oral uygulama için, bileşiği belirli bir zamanda ve belirli bir hacimde doğrudan mideye bırakan oral gavaj kullanılabilir. Bununla birlikte, bu tekniği uygulamak için uygun eğitim gereklidir, çünkü uygun şekilde kısıtlanmazlarsa hayvanda ciddi hasarlar meydana gelebilir.

Topikal ajanlara gelince, bunlar arasında kremler, losyonlar, merhemler, spreyler ve jeller bulunur. Tipik olarak, topikal ajanların sadece uygulandıkları alanı etkilemesi amaçlanmıştır. Bununla birlikte, kasıtlı veya kasıtsız olabilen kan dolaşımına da emilebilirler. Bu emilim şunlara bağlıdır: cildin durumu, kullanılan yüzey alanı, maddenin konsantrasyonu, temas süresi ve ajanın lipit çözünürlüğü.

Oral ve topikal uygulama yöntemlerinin arka planını tartıştığımıza göre, şimdi yem veya su yoluyla oral uygulamadan başlayarak protokolleri öğrenelim.

Doz hesaplamaları için öncelikle uygulanacak dozu bilmeniz gerekir. İkincisi, vücut ağırlığını belirlemelisiniz. Hayvanları tek tek tartmak yerine, aksi belirtilmedikçe hesaplamalarınız için fare veya sıçan türünün ortalama ağırlığını kullanabilirsiniz. Üçüncüsü, kafes başına düşen hayvan sayısının farkında olmalısınız ve dördüncüsü, kafes başına ortalama günlük su veya yiyecek tüketimini bilmeniz gerekir.

Unutmayın, formüle edilmiş gıda veya çözünmüş bileşik içeren içme suyunun, bileşik kararsızlığı nedeniyle standart gıda veya sudan daha sık değiştirilmesi gerekebilir. Bazı bileşikler ışığa duyarlı olabilir veya zamanla çökelebilir.

Şimdi, farelerde ve sıçanlarda oral gavaj yaparak kesin dozların oral olarak nasıl uygulanacağını öğrenelim.

İlk adım, işlem için uygun bir iğne seçmektir. Bunlar ya paslanmaz çelikten yapılmış yeniden kullanılabilir ya da esnek bir plastik şaft ve silikon uç ile tek kullanımlıktır. Fareler için, 1,5 inç uzunluğunda 20-25 gauge düz veya kavisli dozaj iğneleri uygundur. Sıçanlar için, 2-3 inç uzunluğunda 18-20 gauge düz veya kavisli doz iğneleri seçin. Doğru iğne ölçüsü ve şırınga seçimi aynı zamanda hacim ve viskoziteye de bağlıdır. Bu faktörlerin etkisini anlamak için Bileşik Yönetim I videosunu inceleyin. Kalın sıvıları dozajlamak için bir Luer kilit şırıngası tercih edilir.

Seçimi yaptıktan sonra, şırıngayı, iğneyi çevirmeden namlu üzerindeki derecelendirmeler okunabilecek şekilde iğneye yapıştırın. Bu önemlidir, çünkü iğne yemek borusuna yerleştirildikten sonra, herhangi bir rotasyon yemek borusu duvarını yırtabilir ve bu da hayvanın ölümüne neden olabilir. Daha sonra, şırıngayı uygulanacak çözeltinin doğru hacmi ile doldurun.

Bu yöntem, yanlışlıkla soluk borusuna yerleştirilmesini önlemek için her zaman yutma refleksleri sağlam olan bilinçli hayvanlarda uygulanmalıdır. Bu prosedür için uygun kısıtlama tekniğinin kullanılması çok önemlidir. Fare için, cildi başın tabanından kavrayın ve tırnağı sıkıca tutun. Bu, başın yan yana hareket için minimum fırsata sahip olmasını sağlar. Ayrıca, vücudun baştan kuyruğa doğru düz bir çizgide asılı olduğundan emin olun; Herhangi bir bükülme, gavaj iğnesinin yemek borusuna yerleştirilmesini engelleyecektir. Vücudun dönmesini önlemek için arka kısım da stabilize edilmelidir.

Bir fareyi dizginlemek için, boynun her iki yanındaki işaret ve orta parmakları kullanarak omuzların üzerinden kavrayın. Bu, farenin başını bir yandan diğer yana çevirmesini önleyecektir. Başparmak, üçüncü ve dördüncü parmaklar, hayvanın ileri veya geri hareket etmesini önlemek için göğsü çevreler.

Hayvanı düzgün bir şekilde dizginledikten sonra, iğneyi eğrisi aşağı bakacak ve boynun doğal eğrisi ile aynı hizada olacak şekilde konumlandırın. Daha sonra iğneyi sağ veya sol taraftan, diastematadan ve kesici dişler ile azı dişleri arasından farenksin arkasına doğru bir açıyla ağza sokun. Artık iğne ağız boşluğuna yerleştirildiğine göre, burun yukarı dönük olana kadar başınızı geriye doğru eğmek için kullanın. Bu noktada, iğne yemek borusuna kolayca kaymalıdır. İğne mideye yerleştirildikten sonra, bileşiği nazikçe biriktirin. Ardından, döndürmemeye dikkat ederek iğneyi hayvandan çıkarın. İğneyi aşağı doğru zorlamamak önemlidir. Herhangi bir direnç hissederseniz, çıkarın ve tekrar deneyin. İşlem yapılırken, hayvan siyanoz veya solunum sıkıntısı belirtileri gösteriyorsa veya ağzından solüsyon akıyorsa, dozlama iğnesi derhal çıkarılmalı ve hayvan kafesine bırakılmalıdır.

Son olarak, laboratuvar hayvanlarında topikal uygulama prosedürlerini gözden geçirelim. Hayvanı uyuşturarak başlayın. Bu genellikle hızlı etkili bir inhalan kullanılarak yapılır, bu da hızlı hayvan iyileşmesini sağlar. Anestezi uygulaması hakkında daha fazla bilgi için lütfen bu koleksiyondaki başka bir videoya bakın.

Daha sonra, bir saç kesme makinesi kullanarak uygulama alanındaki tüm tüyleri çıkarın. Herhangi bir kesiği önlemek için, saç kesme makinesinin düz yüzeyini cilde yerleştirin ve tüylerin uzama yönünün tersi yönde tıraş edin. Daha sonra cildi suyla temizleyin ve bir gazlı bezle kurulayın. Şimdi, pamuk uçlu bir aplikatör kullanarak, maddeyi doğrudan cilde uygulayın. En iyi sonuçları elde etmek için, kalın bir tabakanın bir kerelik uygulanmasının aksine, birkaç ince merhem veya krem tabakası uygulayın. Tımar nedeniyle topikal olarak uygulanan bileşiğin yanlışlıkla yutulmasını önlemek için, hayvanın etkilenen vücut kısmına ulaşmasını önlemek için küçük bir tasma veya kalkan yerleştirin. Ayrıca, kafes arkadaşlarından allogrooming'i önlemek için hayvanlar ayrı ayrı barındırılmalıdır.

Artık bu alternatif uygulama yollarını anladığınıza göre, bugün biyomedikal araştırmalarda nasıl kullanıldıklarını görelim.

Oral gavajın önemli uygulamalarından biri, gastrointestinal sistem üzerindeki doğrudan etkilerini incelemek için maddelerin hassas bir şekilde uygulanmasıdır. Burada, araştırmacılar bu yöntemi dönüştürülmüş bir probiyotik mayayı doğrudan hayvanın midesine vermek için kullandılar. Daha sonra, verilen mikroorganizmanın yapışmasını incelemek için ince bağırsaktan organize lenf nodülleri olan Peyer yamalarını incelediler.

Non-invaziv oral yol, gıda kaynaklı enfeksiyonun doğal modunu taklit etmek için kullanılabilir. Bu deneyde, bilim adamı, kontamine gıdaların yutulması yoluyla farelerde Listeria monocytogenes'in oral yolla bulaşması için bir model geliştirdi. Enfeksiyonu takiben, araştırmacılar enfeksiyonun bu dokulara yayılmasını analiz etmek için ince bağırsak, kolon, dalak, karaciğer ve safra kesesi gibi çeşitli organları topladılar.

Son olarak, bazı araştırmacılar UV radyasyonunun güneş yanıklarına yol açabileceği mekanizmayı incelemekle ilgilenmektedir. Burada bilim adamları, bir UV koruyucu ajan olan epidermal melanin üretimini indükleyen farmakolojik bir maddeyi uygulamak için topikal yol kullandılar. Bunu takiben, topikal olarak uygulanan ajanın UV radyasyonunun neden olduğu eritemiye karşı koruyucu etkisini incelemek için insan çalışmalarına benzer bir protokol kullandılar.

JoVE'nin oral ve topikal dozlama ile ilgili bileşik uygulama yöntemlerinin ikinci bölümünü izlediniz. Artık hayvana yem veya su kullanarak oral yoldan nasıl doz verilebileceğini ve daha kesin oral gavaj uygulamasının nasıl gerçekleştirilebileceğini anlamalısınız. Son olarak, topikal uygulama için dikkat edilmesi gereken hususları ve yöntemi ve bu çeşitli tekniklerin uygulamalarını bilmelisiniz. Her zaman olduğu gibi, izlediğiniz için teşekkürler!