Plak Testi: Plak Oluşturan Birimler (PFU) Olarak Viral Titreyi Belirlemek İçin Bir Yöntem
Kaynak: Tilde Andersson1, Rolf Lood1
1 Lund, Enfeksiyon Tıbbı Anabilim Dalı, Biyomedikal Merkezi, Lund Üniversitesi, 221 00 Lund, İsveç
Bakteriyofajla…
1. Kurulum
- Mikrop içeren herhangi bir çalışmaya başlamadan önce, çalışma alanının sterilize edildiğinden emin olun (örn. p etanol ile silinmiş). Daima bir laboratuvar önlüğü ve eldiven giyin, uzun saçları arkada bağlayın ve yaraların özellikle iyi korunduğundan emin olun.
- Bittiğinde, tüm yüzeyleri sterilize edin ve ellerinizi ve bilekleri iyice yıkayın/sterilize edin.
2. Protokol
- LB Medya hazırlama
not: Konak bakteri suşuna ve bakteriyofaja bağlı olarak, konakçı bakteri suşunun ilk kültürü için farklı bir sıvı ortam daha uygun olabilir veya sonraki büyüme için farklı bir katı ortam daha uygun olabilir. Bu protokolde et suyu ve agar için lizojeni et suyu (LB) kullanılır.- 4 g LB'yi 200 mL damıtılmış suda, LB suyu, katı alt agar ve yumuşak üst agar için üç nütel halinde karıştırın. Tüm çözeltiler, otoklavlama sırasında taşmayı önlemek için son hacmin iki katını tutabilen kaplarda hazırlanmalıdır.
not: Tahlili üç nüsha halinde yapıyorsanız, LB alt agar miktarının iki katını hazırlayın. - Uygun şekilde NaOH veya HCl kullanarak üç çözeltinin de pH'ını 7.4'e ayarlayın.
- Katı agar için% 1.5'lik bir agar çözeltisi yapmak için alt agar şişesine 3 g agar gücü ekleyin
- Yumuşak agar için% 0.6'lık bir agar çözeltisi yapmak için üst agar şişesine 1.2 g agar gücü ekleyin.
- Solüsyonları sterilize etmek için şişeleri yarı sıkılmış kapaklarla 20 dakika boyunca 121°C'ye ayarlanmış bir otoklava yerleştirin. Kontaminasyonu önlemek için çalışma biter bitmez kapakları kapatın.
- LB ortamı yaklaşık 45-50 ° C'lik bir sıcaklığa ulaştığında, 2.25 mM'lik bir nihai konsantrasyon elde etmek için 200 mL LB çözeltilerinin üçüne de 450 μL steril 1 M CaCl2 ekleyin.
- Katı agar ortamının 15 mL alikotlarını steril Petri kaplarına dökün (köpürmeyi önlemek için sallamaktan kaçının) ve agarın oda sıcaklığında birkaç saat veya gece boyunca katılaşmasına izin verin (Şekil 4A). Plakalar birkaç gün boyunca 4°C'de baş aşağı saklanabilir.
- 4 g LB'yi 200 mL damıtılmış suda, LB suyu, katı alt agar ve yumuşak üst agar için üç nütel halinde karıştırın. Tüm çözeltiler, otoklavlama sırasında taşmayı önlemek için son hacmin iki katını tutabilen kaplarda hazırlanmalıdır.
- Konak hücrelerin kültürlenmesi
- Tahlilden bir gün önce, 10 mL LB et suyuna 10 μL E. coli kültürü ekleyin.
- Bakterileri 37 ° C'de, gece boyunca 160 rpm'de çalkalanan bir inkübatörde inkübe edin.
- Tahlil sabahı, 10 mL taze LB.
'ye 0.5 mL gece kültürü ekleyin not: Tahlili üç nüsha halinde yapıyorsanız, bu kültürün iki katını hazırlayın. - Bakteri kültürü log faz büyümesine gelene kadar çalkalanan bir inkübatörde 37 ° C'de 160 rpm'de inkübe edin. Bu, spektrofotometrik olarak 0.5-0.7'lik bir OD600 ile belirlenebilir.
- Bakteriler üst LB agar'a eklenene kadar kültürü oda sıcaklığında tutun.
- Bakteriyofajın 10 kat seri seyreltilmesi
- 180μL LB suyu ekleyin a'nın ilk sırasındaki yedi oyuktan 96 oyuklu bir plakaya
not: İstatistiksel güvenilirliğini artırmak için seyreltmenin üç kopya halinde yapılması önerilmektedir. Bunu yapmak için, plakanın ikinci ve üçüncü sıralarında bakteriyofajın ek seyreltmelerini hazırlayın. - Homojenliği sağlamak için orijinal bakteriyofaj örneğini dikkatlice girdaplayın ve 20 μL'yi ilk oyuğa aktarın.
- Numuneyi pipetleyerek iyice karıştırın ve aşağı doğru karıştırın.
- Elde edilen süspansiyonun 20 μL'sini ikinci kuyucuğa aktarın.
- İkinci kuyucuktaki çözeltinin 20 μL'sini üçüncü kuyucuğa aktararak seri seyreltmeye devam edin ve altıncı kuyucuğa kadar devam edin, yedinci kuyuyu faj süspansiyonunun eklenmeyeceği negatif bir kontrol olarak bırakın. Bu, 10-1-10-6'lık bir seyreltme aralığı oluşturacaktır.
- 180μL LB suyu ekleyin a'nın ilk sırasındaki yedi oyuktan 96 oyuklu bir plakaya
- Kaplama
- Petri kaplarının tabanını (daha önce adım 2.1.7'de hazırlanmıştı) isim, tarih ve kısa bir numune açıklaması (faj numunesi seyreltme faktörü dahil) ile etiketleyin. Petri kaplarını testten bir saat önce 37 ° C inkübatörde önceden ısıtın.
- Katılaşmış yumuşak agar-ortamı eritin (tipik olarak bir mikrodalga kullanılarak yapılır; katılaşmış agar 85 ° C'de erir) ve yaklaşık 45 ° C'ye gelmesine izin verin. Isıtılmış ortam, uygun bir sıcaklığa ulaşmak için ~ 1 saat boyunca 45 ° C'lik bir su banyosuna yerleştirilebilir. Sıvı halde kalacak kadar sıcak, ancak eklenen bakterileri öldürmeyecek kadar soğuk olmalıdır.
- 4 mL bakteri kültürünü (adım 2.2'den itibaren) 35 mL LB yumuşak agar (45 ° C'de) ile karıştırın. Hücreleri eşit şekilde dağıtmak için döndürün, ancak köpürmeyi önlemek için sallamaktan kaçının (Şekil 4A).
- Toplam 7 etiketli test tüpü için seri seyreltme adımlarının her biri için bir steril test tüpü ve kontrol numunesi için bir steril test tüpü etiketleyin. Adım 2.4.3'teki bakteri kültürü / yumuşak agar karışımının 5 mL alikotunu 7 tüpe yerleştirin. Adım 2.4.6'ya kadar hızlı bir şekilde çalışın, çünkü bu kadar küçük hacimlerde agar bazlı ortamlar oda sıcaklığında hızla katılaşacaktır.
- 100 μL kontrol numunesini (adım 2.3'ten itibaren) kontrol test tüpüne ekleyin ve dikkatlice döndürün. Kullanılmış pipet ucunu atın ve seri olarak seyreltilmiş bakteriyofaj örneklerinin her birinden (adım 2.3) aynı hacmi karıştırmak için döndürerek ilgili test tüplerine aktarın.
- 5 mL karışımları hemen etiketli, önceden ısıtılmış, katı agar plakalarına aktarın (Şekil 4A). Karışımları eşit şekilde yaymak için plakaları hafifçe döndürün.
not: Testi üç nüsha halinde gerçekleştiriyorsanız, 2.4.3-6 adımlarını iki kez daha tekrarlayın. - Her plakayı laboratuvar filmi ile kapatın ve her iki katmanın da oda sıcaklığında (yaklaşık 15 dakika) düzgün bir şekilde katılaşmasına izin verin, 37 ° C'lik bir inkübatöre baş aşağı yerleştirin, hem bakterilerin hem de fajın büyümesini uyarın, 24 saat boyunca veya plaklar gelişene kadar, Plakların ortaya çıkması tipik olarak yaklaşık 1-5 gün sürer (Şekil 4B), ancak zamanlama kuluçka koşullarına, ortama ve bakteri türüne bağlı olarak önemli ölçüde değişir.
3. Veri Analizi ve Sonuçlar
- Plakaları sayma
- Viral kontaminasyonu göstereceğinden, "kontrol" olarak işaretlenmiş plakalarda hiçbir plak görünmediğinden emin olun.
- En seyreltilmiş bakteriyofaj örneğini içeren 10-6 etiketli plakalarla başlayın. Kapağı çıkarmadan plakları sayın, hangi plakların daha önce sayıldığını belirtmek için giderken bir kalemle işaretleyin.
- Kalan plakaları sayın. Bazı plaklarda sayılamayacak kadar az veya çok fazla plak olabilir. Daha fazla analiz için 10-150 plakalı plakaları kullanın.
- PFU'nun hesaplanması
- 100 μL faj >. en seyreltilmiş numune için 10-6). not: Testi üç kopya halinde yapıyorsanız, üç plakadan ortalama plak sayısını kullanın.
- Orijinal numunenin konsantrasyonunu (PFU/mL cinsinden) belirlemek için, yalnızca 100 μL numune kaplandığı için 10'luk ek bir seyreltme faktörü ile çarpın. (yani
) - Daha güvenilir bir sonuç elde etmek için 10 ila 150 plak içeren tüm seyreltmeler için PFU/mL'nin ortalama değerini hesaplayın.
Fajlar olarak da adlandırılan bakteriyofajlar, bakterileri spesifik olarak enfekte eden virüslerdir ve plak tahlili adı verilen bir araç kullanarak varlıklarını doğrulayabilir ve bunları ölçebiliriz. Bakteriyofajlar, önce bakteri hücre duvarına yapışarak ve genetik materyallerini enjekte ederek duyarlı konakçılarını enfekte eder. Daha sonra, DNA'larını kopyalamak için hücrenin biyosentetik makinesini ele geçirirler ve daha sonra konakçı hücreyi parçalayarak ve öldürerek serbest bıraktıkları çok sayıda döl faj parçacığı üretirler.
Bu litik aktivite, plak tahlili veya çift agar tabakası tahlili olarak bilinen, yaygın olarak kullanılan bir faj numaralandırma tekniğinin temelidir. Burada, düşük konsantrasyonlu agar içeren erimiş bir besin suyu içinde önce bir bakteriyofaj karışımı hazırlanır. Karışımda kullanılan tüm bakteriler, büyümelerinin günlük aşamasında canlı ve aktif olarak bölünmelidir, bu da bakterilerin büyük bir yüzdesinin canlı olmasını ve plakların etrafında yoğun bir çim oluşturabilmesini sağlayacaktır. Daha sonra, bu erimiş bakteriyel-faj agar karışımı, bir Petri kabı üzerinde zaten katılaşmış olan daha katı, konsantre bir agar besin ortamına yayılır. Oda sıcaklığında inkübasyonda, düşük konsantrasyonlu agar-faj-bakteri suyu da yumuşak bir agar tabakası oluşturmak üzere katılaşır.
Burada, bakteri hücreleri alt tabakadan ek besinler elde edebilir ve birleşik bir bakteri çimi oluşturmak için hızla çoğalmalıdır. Bununla birlikte, faj parçacıkları yumuşak tabakada da bulunduğundan, bunlar genetik materyallerini bakteriler içinde enfekte edecek ve çoğaltacak, bu da çoklu dölleri serbest bırakan hücre lizisi ile sonuçlanacaktır. Bu faj dölleri daha sonra komşu hücreleri enfekte eder, çünkü bakteri-faj tabakasının yarı katı hali, daha uzakta bulunan konakçı hücrelere hareketlerini kısıtlar. Bu enfeksiyon ve lizis döngüsü, lokalize bir alanda çok sayıda bakteriyi öldürerek birden fazla tur boyunca devam eder. Komşu hücrelerin yok edilmesinin etkisi, çıplak gözle görülebilen, fajın bakteri litik aktivitesini etkili bir şekilde artıran ve sayımlarını sağlayan plak adı verilen tek bir dairesel şeffaf bölge üretmektir.
Bir Petri kabı üzerindeki plakların sayısı, Plak Oluşturan Birimler veya PFU'lar olarak adlandırılır ve ilk bakteriyofaj konsantrasyonunun yeterince seyreltik olması koşuluyla, orijinal numunedeki enfektif faj partiküllerinin sayısına doğrudan karşılık gelmelidir. Bu teknik aynı zamanda plak morfolojisinin karakterizasyonu, faj tiplerinin tanımlanmasına yardımcı olmak veya faj mutantlarını izole etmek için de kullanılabilir. Bu laboratuvarda, örnek olarak E. coli'nin T7 fajını kullanarak, fajları numaralandırmak için plak testinin nasıl yapılacağını öğreneceksiniz.
İlk olarak, konakçı bakteri hücrelerinin ve bakteriyofajın kültürlenmesi için uygun bir ortam belirleyin. Burada lizojeni suyu veya LB ortamı, E. coli ve T7 fajını kültürlemek için kullanıldı. Daha sonra, üç temiz cam şişe alın ve bunları medya, isim ve ardından ilki LB-Broth, ikincisi LB-Bottom Agar ve üçüncüsü LB-Top Agar olarak etiketleyin. Şimdi, dört gram önceden formüle edilmiş LB tozunu üç set halinde tartın ve ardından her bir şişeye bir set tartılmış kuru ortam aktarın. İlk şişeye 200 mililitre su ekleyin. İçeriği manyetik bir karıştırma çubuğu kullanarak karıştırın.
Ardından, bir pH metre ve sürekli karıştırma kullanarak, sodyum hidroksit veya hidroklorik asit ilavesiyle nihai pH'ı 7.4'e getirin. Kalan diğer iki şişe için de su ilavesini ve pH ayarını tekrarlayın. Şimdi, üç gram agar tozunu tartın ve %1,5'lik bir alt agar yapmak için ikinci şişeye ekleyin. Son olarak, 1 tartın. 2 gram agar ve .6 % LB üst agar'ı yapmak için üçüncü şişeye ekleyin. Birinci şişedeki et suyu durumu agar ilavesine ihtiyaç duymaz. Şişeyi yarı sıkı bir şekilde kapatın ve ardından 121 santigrat derecede 20 dakika otoklavlayarak ortamı sterilize edin. Tamamlandığında, medya şişelerini otoklavdan çıkarın ve kontaminasyonu önlemek için şişe kapaklarını hemen çevirerek tamamen kapatın. LB-Broth ve LB-Top Agar ortamını daha sonra kullanmak üzere tezgahın üzerinde tutun. LB-Bottom Agar'ı yaklaşık 45 santigrat dereceye önceden ayarlanmış bir su banyosuna soğuması için yerleştirin.
LB-Bottom agar yaklaşık 45 santigrat dereceye ulaştığında, çalışma tezgahına aktarın. Ardından, çalışma alanını %70 etenol kullanarak sterilize edin. Daha sonra, 2.25 milimolar'lık bir nihai konsantrasyon elde etmek için erimiş alt agar'a 450 mikrolitre steril bir molar kalsiyum klorür ekleyin. Karıştırmak için şişeyi hafifçe döndürün. Ardından, yedi temiz Petri kabı hazırlayın. Alt kısımdaki her yemeği medya adı ve hazırlanma tarihi ile etiketleyin. Ardından, yedi Petri kabının her birine 15 mililitre alt agar dökün. Plakaların oda sıcaklığında birkaç saat veya gece boyunca sertleşmesine izin verin. Bir kez ayarlandıktan sonra, kültür plakaları, yoğuşmayı en aza indirmek için gerekirse birkaç gün boyunca baş aşağı dört santigrat derecede saklanabilir. Petri kaplarını testten bir saat önce dört santigrat derece buzdolabından 37 santigrat derece inkübatöre aktarın.
Testin hazırlanmasından bir gün önce, E. coli kültürlenmelidir. Burada, 10 mikrolitre E. coli kültürü, 10 mililitre LB-Et Suyuna aşılandı. Bakterileri gece boyunca büyümek için 160 RPM'de 37 santigrat dereceye ayarlanmış sallanan bir inkübatöre yerleştirin. Daha sonra, tahlil gününde, bakteri kültürünü inkübatörden çıkarın. 0,5 mililitre gece boyunca kültür ile taze 10 mililitre taze LB suyu tohumlayın. Bu hücreleri, 160 RPM'de 37 santigrat dereceye ayarlanmış sallanan bir inkübatöre büyütün. Daha sonra, bu kültürün 0,5 ila 0,7 optik yoğunlukla gösterilen log faz büyümesine ne zaman ulaştığını kontrol etmek için bir spektrofotometre kullanın. OD bu seviyeye ulaştığında, hücre kültürünü tezgaha aktararak inkübasyonu durdurun. Artık faj kaplama testi için kullanılmaya hazırlar.
Faj titreleri, farklı faj türleri ve örnekleri arasında üstel olarak değişebilir. Bu nedenle, onları etkili bir şekilde saymak için, çok çeşitli faj konsantrasyonları oluşturmak için seyreltilmeleri gerekir. Tahlil gününde, 10 katlı bir seyreltme tekniğini takiben, onda bir ila milyonda bir konsantrasyon arasında değişen bir dizi faj seyreltmesi oluşturun. İstatistiksel olarak anlamlı ve doğru veriler elde etmek için, seri seyreltmeyi üç nüsha halinde gerçekleştirin.
Ardından, katılaşmış LB üst agarı bir mikrodalga kullanarak eritin. Ardından, bir saat boyunca 45 santigrat dereceye ayarlanmış bir su banyosuna yerleştirin. Bir saat sonra, alt agar tabakasını içeren Petri kaplarını inkübatörden toplayın. Plakaları faj konsantrasyonu ve tahlil tarihi ile etiketleyin. Ardından, yedi temiz test tüpü yerleştirin. Her test tüpünü seri faj seyreltme numarasıyla etiketleyin ve birini kontrol olarak belirleyin.
LB üst agar 45 santigrat dereceye ulaştığında, çalışma tezgahına aktarın. Şimdi, 2.25 milimolar nihai konsantrasyon elde etmek için 200 mililitrelik agar'a 450 mikrolitre bir molar kalsiyum klorür ekleyin. Karıştırmak için şişeyi hafifçe döndürün. Daha sonra, steril bir konik tüpe 35 mililitre LB üst agar ve dört mililitre bakteri süspansiyonu ekleyin. Hücreleri eşit şekilde dağıtmak için hafifçe döndürün, ancak köpürmeyi önlemek için sallamaktan kaçının.
Şimdi, bu bakteri-üst agar karışımından beş mililitreyi yedi test tüpünün her birine alikot edin. Daha sonra, seri olarak seyreltilmiş bakteriyofaj örneklerinden 100 mikrolitre ve bakteriyofaj içermeyen basit bir ortam olması gereken kontrol ortamı, saygıyla etiketlenmiş test tüplerine aktarın. Düzgün bir şekilde karıştırılmasını sağlamak için karışımı hafifçe döndürün. Beş mililitre bakteriyofaj karışımını ilgili Petri plakasına nazikçe aktarın. Petri plakasını hafifçe döndürerek karışımı tüm yüzeye eşit şekilde yayın.
Tüm Petri plakaları karışımla katmanlandıktan sonra, oda sıcaklığında 15 dakika inkübe ederek üst katmanın katılaşmasına izin verin. Bu adımların tamamlanmasından sonra, kalan iki set faj seyreltmesini kullanarak Petri kaplarının ikinci ve ardından üçüncü setleri için işlemi tekrarlayın. Her yemeği parafilm ile kapatın ve oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin. Kültür plakasını 24 saat boyunca veya plaklar gelişene kadar uygun bir sıcaklıkta baş aşağı yerleştirin. Burada, plakalar bir gün boyunca 37 santigrat derecelik bir inkübatöre yerleştirildi, bu da E. coli ve T7 fajı için uyarıcı bir büyüme koşulu oldu.
Plaklar, bakteri türüne, kuluçka koşullarına ve ortam seçimine bağlı olarak bir ila beş günlük inkübasyondan sonra ortaya çıkacaktır. Burada, 37 santigrat derecede bir günlük inkübasyondan sonra plaklar görülebildi. Kontrol olarak işaretlenmiş plakaları kontrol ederek başlayın ve bu plakalarda herhangi bir plak oluşmadığından emin olun, çünkü bu viral kontaminasyonu gösterir. Orijinal numunedeki faj titresini belirlemek için, önce en çok seyreltilmiş faj numunesini içeren plakalarla başlayın ve kapakları çıkarmadan plakları sayın, hangilerinin daha önce sayıldığını belirtmek için işaretleyin. Her sette her plaka için sayımı tekrarlayın. Bazı plaklarda sayılamayacak kadar çok veya çok az plak olabilir. İdeal bir plak sayısı olarak 10 ila 150 arasında düşünün.
Ardından, farklı seyreltmeler ve replikasyonlar için plak sayısı değerlerini listeleyen bir tablo oluşturun. Ardından, ideal plak sayısı sayısını içeren seyreltme plakaları için ortalama plak sayısı değerlerini hesaplayın. Bu örnekte, bunlar 10 ila eksi üç ve 10 ila eksi dört seyreltme plakasında oluşan ortalama plak sayısıydı. Şimdi, elde edilen ortalama plak değerlerini ilgili faj seyreltme faktörlerine bölerek faj seyreltme faktörünü ayarlayın. Burada, 10 ila eksi üç ve 10 ila eksi dört seyreltme plakasına kadar oluşturulan ortalama plak sayısı, 100 mikrolitre faj karışımında plak oluşturan birimlerin veya PFU'ların sayısını elde etmek için ilgili seyreltme faktörlerine bölündü. Değeri mililitre başına PFU'ya dönüştürmek için, bakteriyofaj kaplama hazırlama adımı sırasında yalnızca 100 mikrolitre faj seyreltme karışımı kullanıldığından ve 10'luk ek bir seyreltme faktörü ürettiğinden, üretilen değerleri 10 ile çarpın. Son olarak, farklı seyreltme plakalarından elde edilen değerlerin ortalamasını hesaplayın. Bu, mililitre başına ortalama PFU sayısını verecektir. PFU'ların sayısı, orijinal numunedeki enfektif faj partiküllerinin sayısına karşılık gelir.
View the full transcript and gain access to JoVE Science Education videos
Q1: What are bacteriophages and how do they infect bacterial cells?
Bacteriophages, or phages, are viruses that specifically infect bacteria. They attach to the bacterial cell wall and inject their genetic material into the host. The phage then hijacks the cell's biosynthetic machinery to replicate its DNA and produce numerous progeny phage particles, which are released by lysing and killing the host cell.
Q2: Why is the plaque assay considered a reliable method for determining viral titer?
The plaque assay remains one of the most reliable methods for determining viral titer because it directly visualizes the lytic activity of phages. Each plaque represents a single infective phage particle that has infected and lysed multiple neighboring bacterial cells, creating a clear, countable zone. This amplification of lytic activity enables accurate enumeration of phage particles in a sample.
Q3: What is the purpose of using bacteria in log-phase growth for the plaque assay?
Bacteria in log-phase growth are actively dividing and have the highest viability, ensuring that a large percentage of cells are capable of forming a dense, confluent lawn on the agar plate. This dense bacterial lawn is essential for the plaque assay because it provides abundant host cells for phage infection and allows clear visualization of plaques as transparent zones against the turbid bacterial background.
Q4: How does the double agar layer technique work in a plaque assay?
The double agar layer technique uses a solid, concentrated bottom agar layer and a soft, low-concentration top agar layer containing bacteria and phage. The soft overlay allows phage particles to move locally and infect neighboring cells while restricting their movement to distant areas. This creates localized zones of cell lysis, producing visible plaques that can be counted to determine phage concentration.
Q5: Why are serial dilutions necessary before performing a plaque assay?
Phage titers vary exponentially across different samples and types, so serial dilutions generate a wide range of phage concentrations to ensure countable plaque numbers. Performing dilutions in triplicate provides statistically significant and accurate data. An ideal plaque count ranges from 10 to 150 plaques per plate, making dilutions essential for obtaining reliable results.
Q6: What does PFU stand for and how is it calculated from plaque counts?
PFU stands for Plaque-Forming Units, representing the number of infective phage particles in a sample. To calculate PFU per milliliter, divide the mean plaque count by the dilution factor, then multiply by 10 to account for the additional dilution from using only 100 microliters of phage mixture during overlay preparation. The final average PFU per milliliter corresponds to the number of infective phage particles in the original sample.
Q7: How can the plaque assay be used beyond viral enumeration?
Beyond quantifying phage titer, the plaque assay can characterize plaque morphology to aid in identification of different phage types and isolate phage mutants. Additionally, the resistance or sensitivity of bacterial strains to specific phages can be used for phage typing, dividing bacterial species into subgroups based on their susceptibility to different bacteriophages.