Name: Zebra balığı Embriyolar mRNA ve morfolino Antisens Oligonükleotidler Mikroenjeksiyon. (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-07T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 33 s
Description: Öğrenin, zebrafish embriyolarına mRNA ve morfolino mikroenjeksiyonu tekniğini. Bu yöntem gen aşırı ifadesi ve gen susturma çalışmaları için güvenilir bir araçtır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, ZS, Ulusal Sağlık Enstitüsü ve PKD vakıf tarafından desteklenmiştir. Yale Hayvan Kaynakları Merkezi (YARC) ve Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu (IACUC) yönergeleri doğrultusunda tüm hayvan deneyleri yapılmıştır.

Bölüm 1: mikropipetler hazırlanması ve mikroenjeksiyon odası plakalar <ol><li> Isıtma ve borosilikat cam kapiller tüplerin (Dünya Precision Instruments, Inc, 1B100-4) çekerek bir mikropipet çektirmenin cihazı (Sutter Instruments Inc, Flaming / Brown P-97) mikropipetler imal. Az miktarda kil veya yapışkan bant üstünde bir Petri kabındaki saklayın. </li><li> (Zebra balığı Kitap &quot;ta anlatıldığı gibi), enjeksiyon sırasında embriyoların tutmak için kolay bir yöntem olarak hizmet verecek kama şeklindeki olukları ile kalıp 1x E3 orta plakalar% 1.5 agaroz (American Bioanlytical, Inc, AB00972-00.500) dökün 1. agar odasına plakalar 4 º C&#39;de kullanımı ve mağaza önce kuvvetlendirmek </li></ol> Bölüm 2: RNA hazırlanması Zebrafish embriyoların in vitro kapaklı transkripsiyonu RNA gen fonksiyon çalışmaları için güçlü bir yaklaşım microinject. Kapaklı RNA CAP analog varlığı nedeniyle in vivo bulundu ökaryotik mRNA&#39;ların benzer şekilde davranır. Zebra balığı araştırmacılar rutin kendi ilgi gen eksprese veya misexpress için bu yöntemi kullanmaktadır. Bu gösteri, bir EGFP etiketli transkript microinject ve başarılı bir enjeksiyon için görünür bir okuma olarak canlı embriyo tüm GFP-ifade kullanmak. <ol><li> In vitro CAP RNA transkripsiyonu tepki ilgi transkript bir gerçekleştirin. Laboratuvarda rutin bir pCS2 + vektör ilgi bir cDNA yerleştirin ve kapaklı RNA mMessage mMachine SP6 kiti (Ambion, Inc, AM1340) kullanarak büyük miktarda in vitro sentez reaksiyon gerçekleştirilir. </li><li> Purify RNA örneği RNeasy Mini kiti (Qiagen, Inc 74.104) ile çalışan veya fenol: kloroform ekstraksiyonu ve izopropanol yağış. </li><li> Dikkatli bir şekilde kullanıma hazır olana kadar -80 º C&#39;de RNA hazırlık ve mağaza konsantrasyonu belirler. </li><li> Enjeksiyon gününde, RNA örnek, girdap hafifçe Çözülme ve kısaca aşağı doğru döndürün. </li><li> 0.050% fenol kırmızısı (Sigma-Aldrich Co, P0290) - Steril su ve 0.025 bir final konsantrasyon ile bir çalışma çözeltisi hazırlayın. Fenol kırmızı görünür bir çözüm embriyo içine enjeksiyon için işaretleyici olarak hizmet vermektedir. Bu makalede, biz% 0.050 fenol kırmızısı ile 100 ng / uL EGFP mRNA çalışan bir solüsyon hazırlanır. </li><li> -80 ° C&#39;ye kadar buz ve dönüş RNA stok çalışma örneği tutun </li><li> Bölüm 4 Bu örnek enjekte etmek için hazır geçin. </li></ol> Bölüm 3: morfolino hazırlanması Morfolino antisens oligonükleotidler hedeflenen protein çeviri bloke ederek veya pre-mRNA ekleme 2,3 değiştirerek gen ekspresyonu yaygın olarak değiştirmek için kullanılır. Zebrafish Morpholinos genin fonksiyonu aşağı vurma güçlü bir ters genetik aracı olarak hizmet vermektedir. Bu makalede, biz pkd2 translasyonel başlatılması sitesi (5&#39;-AGGACGAACGCGACTGGAGCTCATC-3 &#39;) hedef alan bir morfolino oligo microinject. Daha önce kurulan çalışma dayanarak, enjekte edilen embriyolar fenotipik pkd2 mutant balık 4 taklit etmek için bekliyoruz. <ol><li> Biz rutin olarak özel bir gen Gen Araçlar faiz, LLC (Philomath OR) için tasarlanmış bir morfolino oligo 300 nmol sipariş. </li><li> 3 mM stok solüsyonu yapmak için 100 uL steril su ekleyin. Kullanıma hazır olana kadar -20 ° C&#39;de kısım çözüm ve mağaza. </li><li> Enjeksiyon gününde, 65 morfolino çözümü ısı ° C 5 dakika. Hemen buz üzerine serin çekin ve kısaca döndürün. Bu adım, oligo herhangi bir ikincil yapılar yıkılır ve çözüm tamamen çözünür olmasını sağlar. </li><li> 0.050% fenol kırmızı - steril su ve 0.025 final konsantrasyonda morfolino çözüm seyreltilmesi ile çalışan bir çözüm hazırlayın. Bu gösteri,% 0.050 fenol kırmızı ile 0.50 mM pkd2 morfolino bir çalışma çözeltisi hazırlanıyor. </li><li> Oda sıcaklığında çözüm çalışmaya devam edin. </li><li> Bu örnek enjekte etmek için hazır Bölüm 4 geçin .---- </li></ol> Bölüm 4: çalışma çözeltisi ile mikropipet Dolum <ol><li> Forseps ile mikropipet distal ucu veya 50X büyütme (Nikon Instruments, Inc SM2645) diseksiyon mikroskobu altında görünür bir açılış oluşturmak için bir cerrahi jilet kesin. </li><li> Place 2 lamel üzerine bir damla olarak çalışan çözüm uL. </li><li> 5 ml şırınga derialtı iğne ve biraz çalışma çözüm damla içine daldırın mikropipet distal ucu boru ile donatılmış bir mikropipet geri takın. Mikropipet ucu kırmamaya özen gösterin. </li><li> Şırınganın pistonu çekerek mikropipet distal sonuna kadar çalışma çözeltisi Sifon. </li></ol> Bölüm 5: mikropipet enjeksiyon hacmi Kalibre <ol><li> Mikrometre slayt üzerinde mineral yağ, bir damla (Amerikan Biyoanalitik, Inc, AB00921-00025) (Fi yerleştirinsher, 12-561-SM1). </li><li> Basınç darbeli mikro enjektör cihazları (Dünya Precision Instruments Inc, PV830) güç ve hava kaynağı açın. </li><li> Mikropipet mikropipet sahibine mikro enjektör aparat takın. Mikro enjektör basınç düzenlenir ve deşarj ayak pedalına basarak aktive edilir. </li><li> Diseksiyon mikroskobu altında enjeksiyon hacmi, çalışma çözüm mikrometre yağı, üzerine bir damla yere mikro enjektör kullanarak test edin. Yağın üstüne bir küre olarak yüzer gibi damla çapı ölçün. </li><li> Süresi ve enjeksiyon basıncı enjeksiyon hacmi dikkatle kalibre etmek için ayarlayın. Bu adım, mikroenjeksiyon deney tekrarlanabilirlik yardımcı olur. Bu gösteri, tüm microinjections bir damla çapı 0,15 mm (hacmi yaklaşık 1.76 nL) ile yapılacaktır. </li><li> Enjeksiyon hacmi kalibre edildikten sonra, dolgu ve mikropipet sızmasını önlemek için &quot;Tut&quot; düğmesi mikro enjektör kullanın. </li></ol> Bölüm 6: mikroenjeksiyon için hazırlanması döllenmiş zebrafish embriyolar <ol><li> Zebra balığı her sabah ilk birkaç saat içinde rastgele arkadaşı olacak. 1-hücreli aşamada embriyoların toplayın ve 1x E3 orta koyun. </li><li> 3 ml transfer pipetlemeyin (Becton Dickinson Laboratuvar, 357.524) kullanarak, mikroenjeksiyon odası plakalar kama şeklindeki olukları boyunca embriyolar düzenliyoruz. </li><li> Embriyoların basık batık ve sular değil böylece orta çıkarın. Bu adım, sıra mikropipet koryon penetrasyon olukları alt embriyolar çözümünde yardımcı olur. </li></ol> Bölüm 7: koryon ile Mikroenjeksiyon <ol><li> 1-hücreli aşamada embriyo sitoplazma diseksiyon mikroskop altında görülebilir böylece mikropipet embriyolar işleyin. Mikropipet ucu kırmamaya özen gösterin. </li><li> Mikropipet koryon ve sonra sarısı embriyonun içine enjekte etmek için nüfuz. Bu gösteri, ilk doğrudan hücre altında sarısı içine microinjecting ve hücre içine çalışma çözüm getirmek için izin sitoplazmik akışı ve difüzyon. Bu akış, emekçi çözüm için fenol kırmızısı nedeniyle görünür. </li><li> Ayrıca hücre sitoplazma içine direkt enjeksiyon gösterecektir. Hücre içine doğrudan mikroenjeksiyon daha güçlü ama uygun embriyo yönelim ve mikroenjeksiyon tekniği gereklidir gibi zaman alıcı. Hücre zarı, yumurta zarı daha sıkı olduğu için, hücre sitoplazma ulaşmak için yumurta sarısı ile mikropipet girmek için genellikle daha hızlıdır. Hayvan kutup çukur alt kısmına doğru yönlendirmek ve kararlı ellerle bu enjeksiyon yöntemi yardımcı olabilir. </li><li> E3 orta mikroenjeksiyon sonra, embriyoların bir Petri kabı içine yerleştirin ve 28,5 az inkübe ° C normal gelişimi için. </li><li> Embriyo gelişiminin sonraki birkaç saat ve gün içinde, ilgi fenotipleri embriyolar gözlemliyoruz. </li></ol> Bölüm 8: Temsilci sonuçları EGFP mRNA aşırı ekspresyonu: mikroenjeksiyon başarısını doğrulamak için, biz (Leica Microsystems GmbH, MZFLIII) in vivo embriyo tüm floresan mikroskopi kalkan aşamada (~ 6 hpf) başlayarak, gelişmekte olan embriyolar, GFP ifade izleyecek . Yapı İfade erken embriyonik gelişim olaylar sırasında en güçlü ve genellikle geliştirme sırasında enjekte kapaklı RNA yavaş yavaş düşer ve ifade protein istikrar bağlı olarak azalacaktır. pkd2 translasyonel engelleme morfolino: daha önce yayınlanan sonuçlara dayanarak, yaklaşık 2 pkd2 mutant Zebra balığı ve mevcut böbrek kistleri bulunan dorsal vücut ekseni eğrilik pkd2 morphants - 3 dpf&#39;e 4 taklit etmek için bekliyoruz. <img src="/files/ftp_upload/1113/1113fig1.png" alt="Şekil 1" /> Şekil 1: EGFP mRNA ve pkd2 Ağustos morfolino mikroenjeksiyon Temsilcisi sonuçlar. (A) TAB embriyolarının EGFP mRNA 0.17 ng 1-hücreli aşamada microinjected ve in vivo GFP ifade 1 dpf&#39;e görüntülendi. (B, c) TAB embriyolarının 0.50 mM pkd2 translasyonel engelleme morfolino ~ 1.7 nl 1-hücreli aşamada microinjected ve 4 dpf&#39;e dorsal vücut eğriliği için attı.

<ol><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book.++A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio)</a>. , 4th, University of Oregon. (2000).</li>
<li>Nasevicius, A., Ekker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+targeted+gene+%27knockdown%27+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Effective targeted gene 'knockdown' in zebrafish.</a> Nat Genet. 26, 216-220 (2000).</li>
<li>Draper, B., Morcos, P., Kimmel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+zebrafish+fgf8+pre-mRNA+splicing+with+morpholino+oligos%3A+a+quantifiable+method+for+gene+knockdown%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">Inhibition of zebrafish fgf8 pre-mRNA splicing with morpholino oligos: a quantifiable method for gene knockdown.</a> Genesis. 30, 154-156 (2001).</li>
<li>Sun, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+screen+in+zebrafish+identifies+cilia+genes+as+a+principal+cause+of+cystic+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A genetic screen in zebrafish identifies cilia genes as a principal cause of cystic kidney.</a> Development. 131, 4085-4093 (2004).</li>
<li>Stuart, G., McMurray, J., Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication%2C+integration+and+stable+germ-line+transmission+of+foreign+sequences+injected+into+early+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Replication, integration and stable germ-line transmission of foreign sequences injected into early zebrafish embryos.</a> Development. 103, 403-412 (1988).</li>
<li>Stuart, G., Vielkind, J., McMurray, J., Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+lines+of+transgenic+zebrafish+exhibit+reproducible+patterns+of+transgene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Stable lines of transgenic zebrafish exhibit reproducible patterns of transgene expression.</a> Development. 109, 577-584 (1990).</li>
<li>Culp, P., Nüsslein-Volhard, C., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-frequency+germ-line+transmission+of+plasmid+DNA+sequences+injected+into+fertilized+zebrafish+eggs%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">High-frequency germ-line transmission of plasmid DNA sequences injected into fertilized zebrafish eggs.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88, 7953-7957 (1991).</li>
<li>Strehlow, D., Heinrich, G., Gilbert, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fates+of+the+blastomeres+of+the+16-cell+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The fates of the blastomeres of the 16-cell zebrafish embryo.</a> Development. 120, 1791-1798 (1994).</li>
<li>Helde, K., Wilson, E., Cretekos, C., Grunwald, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+early+cells+to+the+fate+map+of+the+zebrafish+gastrula%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Contribution of early cells to the fate map of the zebrafish gastrula.</a> Science. 265, 517-520 (1994).</li>
<li>Lin, S., Long, W., Chen, J., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+germ-line+chimeras+in+zebrafish+by+cell+transplants+from+genetically+pigmented+to+albino+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Production of germ-line chimeras in zebrafish by cell transplants from genetically pigmented to albino embryos.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 89, 4519-4523 (1992).</li>
<li>Long, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GATA-1+expression+pattern+can+be+recapitulated+in+living+transgenic+zebrafish+using+GFP+reporter+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">GATA-1 expression pattern can be recapitulated in living transgenic zebrafish using GFP reporter gene.</a> Development. 124, 4105-4111 (1997).</li>
<li>Murphey, R., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecule+screening+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Small molecule screening in the zebrafish.</a> Methods. 39, 255-261 (2006).</li>
</ol>

Zebrafish embriyolar içine mikroenjeksiyon gelişimi belirli bir genin rol keşfetmek için köklü ve sağlam bir tekniktir. Uygulamalar ilgi yanı sıra birden fazla genin arasındaki epistatik analizi gen aşırı ekspresyonu, misexpression ve demonte deneyleri içerir. Transgenik hayvanlar oluşturma ve erken blastula embriyolar 5,6,7,8,9 hücre kaderi haritalama zebrafish içinde Mikroenjeksiyon yaygın olarak kullanılmaktadır. Buna ek olarak, bu tekniğin uygulama hücre nakli yöntemleri 10 germ-line kimeralar ...

Tüm diğer malzemeler, protokolde yer almaktadır.

zebra balığı embriyolar mrna ve morfolino antisens oligonükleotidler mikroenjeksiyon.

Microinjection of mRNA and Morpholino Antisense Oligonucleotides in Zebrafish Embryos.

Geliştirme sırasında bir genin rolünün araştırılması için gerekli bir araç gen demonte, aşırı ekspresyonu ve misexpression çalışmalar gerçekleştirmek için yeteneğidir. Zebrafish yılında (<em&gt; Danio rerio</em&gt;), Gelişmekte olan embriyonun içine RNA, DNA, proteinler, antisens oligonükleotidler ve diğer küçük moleküller mikroenjeksiyon araştırmacılar gen fonksiyonu keşfetmek için hızlı ve sağlam bir çalışma sağlar<em&gt; In vivo</em&gt;. Bu video makalede, biz nasıl hazırlamak ve microinject gösterecektir<em&gt; In vitro</em&gt; Sentezlenmiş EGFP mRNA ve translasyon engelleme morfolino oligo karşı<em&gt; Pkd2</em&gt; 1-hücre sahne zebrafish embriyolara otozomal dominant polikistik böbrek hastalığı (bireylerinde) ile ilgili bir gen. Daha sonra, GFP ifade ve fenotip analizi doğrulayarak mRNA ve morfolino microinjections başarısı analiz edecektir. Bu tekniğin geniş uygulama transgenik hayvanlar ve germ-line kimeralar üreten hücre kaderi haritalama ve gen taraması içerir. Bu yazıda tarif EGFP ve demonte aşırı ekspresyonu için bir protokol<em&gt; Pkd2</em&gt; MRNA ve morfolino oligonükleotid enjeksiyon.

Mikroenjeksiyon döllenmiş zebrafish embriyolar içine yabancı maddeler tanıtmak için bir köklü ve etkili bir yöntemdir. Burada, mRNA aşırı ekspresyonu gerçekleştirmek için sağlam bir mikroenjeksiyon tekniği ve morfolino oligonükleotid gen devirme çalışmaları zebrafish göstermektedir.

Zebra balığı Embriyolar mRNA ve morfolino Antisens Oligonükleotidler Mikroenjeksiyon.

Bir genin gelişim sırasındaki rolünü araştırmak için temel bir araç, gen susturma (knockdown), aşırı ekspresyon ve yanlış ekspresyon gerçekleştirme yeteneğidir...

Bu prosedür, morpho ve in vitro transkribe edilmiş cap mRNA'nın hazırlanmasıyla başlar. Morpho içeren çözelti sifonlanarak bir mikro pipete doldurulur ve ardından enjeksiyon hacmi, mikrometreli tek hücreli bir sahne kullanılarak kalibre edilir. Daha sonra Zebrafish embriyoları toplanır ve vitellus mikro enjeksiyonları için bir mikroenjeksiyon haznesine yerleştirilir.Çalışma çözeltisi, hücrenin hemen altındaki yumurta sarısına enjekte edilir ve çözeltiyi hücre mikroenjeksiyonları için taşımak amacıyla sitoplazmik hareketlerden yararlanılır. Enjeksiyonları takiben çözeltiyi hücre sitoplazmasına enjekte edin. Embriyoları E3 ortamında 28,5 °C'de inkübe edin ve sonraki evrelerde ilgilenilen fenotipler açısından değerlendirin.Merhaba, ben laboratuvardan Shiloh Yuen; Dr. Sasha'nın oğlu ve Yale Üniversitesi Tıp Fakültesi Genetik Bölümü'ndenim. Bugün, zebrafishlerde mRNA aşırı ekspresyonu ve morfo oligonükleotid gen susturma çalışmaları yürütmek için kullanılan güçlü bir mikroenjeksiyon tekniğini göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu prosedürü, kistik böbrek hastalıklarında primer siliumun rolünü incelemek için kullanmaktayız.Hadi başlayalım. Gen fonksiyonu çalışmaları için güçlü bir yaklaşım,

microinjection-mrna-morpholino-antisense-oligonucleotides-zebrafish

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video morfolino veya mRNA sonraki gelişimi sırasında spesifik gen ürünlerinin seviyesini azaltmak veya artırmak için tek hücreli aşamada zebrafish embriyoların nasıl enjekte edilebilir gösterir.

Gen Fonksiyon Analiz Zebra balığı Embriyolar Mikroenjeksiyon

24hpf zebrafish otocyst doğrudan morpholinos sunmak için bir yöntem geliştirilmiştir. Otik vezikül ve penetrasyon etkisi elektroporasyon lümenine morpholinos, mikroenjeksiyon, morpholinos beyin üzerinde etkisi atlayacak ve iç kulak özgü efektler elde etmek mümkün.

Enjeksiyon ve Elektroporasyon Zebra balığı Otocyst içine MIF Morpholinos Stoktan teslim İç Kulak Geliştirme etkiler

Intravitreal antisens morpholinos enjekte ve retina içine electroporating koşullu yetişkin zebrafish retinanın bir hedef protein ifade demonte bir yöntem açıklanmıştır. Ortaya çıkan protein yenileyici veya sağlam retina proteinin rolünü test edilmesine imkan sağlayan birkaç gün, nakavt edilir.

Morpholinos in vivo Elektroporasyon Yetişkin Zebra balığı Retina

Protokol, zebra balığında gen ekspresyonunun kuyrukta morfolino enjeksiyonu ile hedefli olarak yok edilmesini açıklar.

Morfolino Enjeksiyonu: Zebra Balıklarında İşlevi İncelemek İçin Hedef Gen Ekspresyonunu Yıkmak İçin Bir Yöntem

Bu videoda, bileşikleri Zebra balığı yumurta sarısı kesesine vermek için bir Embriyo mikroenjeksiyon tekniği açıklanmaktadır.

Embriyo Mikroenjeksiyonu: Zebra Balığı Sarısı İçine Bir Bileşik Verme Tekniği

Burada, geliştirmek için sistematik bir yaklaşım sunmak fizyolojik, ilgili duyarlı ve...

Br.rerio kullanarak Morbid İnsan Genomu İn Vivo Modelleme

Bu yazıda, morfolino antisens oligonükleotidler kullanılarak yetişkin zebrabalıkları telencephalon ventriküler hücrelerde gen ifadesinin manipülasyonu için bir yöntem ortaya koymaktadır. Biz, yetişkin omurgalı beynin fonksiyonel çalışmalar için kullanılan bir hızlı ve verimli protokolü olarak bu yöntem sunuyoruz.

Morfolino Oligonükleotidler bir Cerebroventricular Mikroenjeksiyon kullanarak Yetişkin Zebra balığı Beyin Gen İfade Mikromanipülasyon

Bu tür gen-spesifik morpholinos intraventriküler enjeksiyonları kullanarak doku rejenerasyonu gibi gelişme ve fizyolojik homeostasis sonraki aşamalarında gen fonksiyonunu değerlendirmek için zebrabalıkları için uyarlanabilir ters genetik bir yöntem.

Zebra balığı Larva Çoklu Zor-hedef dokular geçiştirilmesi için Kardiyak Ventriküler Injection kullanarak Genetik Morfolino Yaklaşım ters

Bu video, Nijole Jasinskiene Dang humması için vektörler transgenik Aedes aegypti sivrisinek, üretmek için kullanılan yöntem gösteriyor. Doğru, mikroenjeksiyon iğneler hazırlanması embriyolar dessicating ve mikroenjeksiyon teknikleri gösterilmektedir.

Transgenik Sivrisinekler Edinme A. aegypti Embriyolar Mikroenjeksiyon

Burada, uzun vadeli görüntüleme, iki foton görüntüleme ve doku hasarı teknikleri ve zaman atlamalı konfokal görüntüleme zebrafish embriyolar montaj için bir yöntem açıklanmaktadır.

İki foton axotomy ve zaman atlamalı konfokal görüntüleme canlı zebrafish embriyolar

Öğrenin, zebrafish embriyolarına mRNA ve morfolino mikroenjeksiyonu tekniğini. Bu yöntem gen aşırı ifadesi ve gen susturma çalışmaları için güvenilir bir araçtır.

Zebra balığı Embriyolar mRNA ve morfolino Antisens Oligonükleotidler Mikroenjeksiyon.

Daha fazla video keşfet