Name: Gen Fonksiyon Analiz Zebra balığı Embriyolar Mikroenjeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 18 s
Description: Öğrenin zebrafish embriyolarına bir hücre evresinde mikroenjeksiyon tekniği ile gen ekspresyonunu manipüle etme yöntemini. Bu teknik gelişimsel biyolojide gen fonksiyonu çalışmaları için temel bir araçtır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz kendi teknik yardım için Mably laboratuar ve Narie Storer üyeleri kabul ve Amerikan Kalp Derneği (NCRP Scientist Kalkınma Hibe 0635363N) ve Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü finansman için (Hibe SCCOR RFA HL02-027).

Bölüm 1: Yumurta üretim ve toplama <ol><li> Enjeksiyon için önceki gece yerde bölücüler ile üreme tankları, balık kurdu. Istenirse toplam yumurta üretimi artırmak için balık, bir erkek iki kadın oranı ayarlanmış olabilir. </li><li> Ertesi sabah, oda ışıkları sonra, açmak birkaç tankları bölücüler çekin ve bozulmamış çiftleşme süresi yaklaşık 20 dakika izin verir. </li><li> Bir süzgeç kullanarak, üreme kafesleri yumurtaları toplamak ve yumurta su ile durulayın. Yumurta, yumurta su ile bir Petri kabı içine dökün ve bir transfer pipeti ile döllenmemiş yumurta ve enkaz kaldırmak. Balık, enjeksiyon için yumurta ilave tur üretmek için büyük tanklarda yeniden bir araya olabilir. Onlara tek bir hücre aşamasına geçmek izin vermeden üretilen yumurta maksimum numaraları için izin yumurta toplama zamanı ayarlayın. </li><li> 100mm bir Petri kabı ters kapağı bir mikroskop lamı yerleştirin. Tek bir sütun oluşturan slayt kenarına yumurta hattına bir transfer pipet kullanın. Yumurta ters tarafına karşı Kimwipe basarak slayt fazla yumurta su çıkarın. (Şekil 1A) </li></ol> Bölüm 2: İğne yükleme, çekme, ve hazırlık <ol><li> Mikropipet çektirmesi ile aptalca macun rampalar üzerinden atarak, 150mm Petri kabındaki iki iğne ve mağaza içine kılcal bir 1.0mm OD cam çekin. İğneler önceden çekilmiş olabilir. </li><li> Microloader pipet kullanarak enjeksiyon malzemesinin 3 mcL Backload iğne. Kalan az veya hiç kabarcık kalmayana dek bolus iğne ucu doğru sallayın. </li><li> Hava kaynağı ve mikroenjektör açın. Mikroenjektör iğne takın ve konut içinde sıkı bir mühür sigorta. Mikromanipülatör geniş bir yelpazede hareket ve uyum sağlamak için uygun bir pozisyonda olup olmadığını kontrol edin. Mikroskop görüş sahneden yüksek düzlem, ve ucu ince bölgeye odaklanmak içine iğne ucu getirin. Iğne delmek koryon ve yumurta sarısı kadar dar ama hala tutarlı bir boncuk boyutu sunma yeteneğine sahip yaprakları bir noktada iğne çimdik, keskin forseps bir çift kullanın. Mikrometre üzerinde mineral yağ Bir damla her enjeksiyon hacmini hesaplamak için kullanılabilir. Yağ enjekte edildiğinde, enjeksiyon malzemesinin 500 0.1 mm çapında bir boncuk pL (Şekil 1B) içerir; 500 pL veya 1nL enjeksiyon birimleri genellikle kullanılır. Ayak pedalına basınız ve iğne kırparak ve gerektiği gibi enjeksiyon basıncı ayarlayarak boncuk büyüklüğündeki LCD ekran. İdeal enjeksiyon hacimleri, yumurta hacminin yaklaşık% 10 dolduracaktır. Iğne ucu kaliteli enjeksiyon kolaylığı ve sonuçların kalite ve tutarlılık çok önemlidir. </li></ol> Bölüm 3: Enjeksiyon <ol><li> Embriyoların dört hücreli aşamasında geçmiş gelişmiş değil. Olun İdeal olarak, embriyolar tek hücreli aşamada olmalıdır. </li><li> Elinin tersiyle çanak tutan, iğne yumurta sütun doğru indirin. </li><li> Pierce yüzey koryon ve yolk kesesi herhangi bir ezilme veya yırtılma izlerken tek bir düzgün bir vuruş sarısı girin. Yumurta sarısı (şekil 1C) içine enjeksiyon malzemesi enjekte edilir. Hava kabarcıkları enjekte ya da embriyo için ölümcül olabilir sarısı germe kaçının. Satır aşağı, bir pipet kullanarak tutarlı bir boncuk büyüklüğü ve sürdürmek için gerekli basınç ayarı, döllenmemiş bir görünüm veya enjeksiyon işlemi sırasında tahrip yumurta çıkarın. </li><li> Yumurta bir sütun tamamladıktan sonra, temiz bir petri kabı içine enjekte edilen yumurta taşımak için yumuşak bir yumurta su akışı kullanın. Gerektiği kadar tekrarlayın. Bir kontrol gibi çeşitli uninjected embriyolar tutun. Gün birinin sonunda, ölü embriyolar kaldırmak ve enjekte edilen embriyoların sayısı kaydedin. Periyodik olarak enfeksiyon olasılığını azaltmak için çanak yumurta su değiştirin. </li></ol> Bölüm 4: Temsilcilik sonuç Enjekte ediliyor bağlı olarak, embriyolar kendi uninjected kardeşlerine göre daha düşük bir oranda hayatta kalabilirler. Neyse ki, bunlardan çok sayıda enjekte etmek kolaydır, bu nadiren bir sorun. Morphants biraz gecikmeli gelişim sergilemek için normaldir. Mikroenjeksiyon sonuçlarını göstermek için, biz, Cam protein Heart (HEG) düzeyleri işlemek için bu protokol kullanılır. HEG normal kalp gelişimi için gerekli bir transmembran proteindir. Onun yokluğunda, embriyolar dev girişi yolları ve odaları 1 kalpleri gelişir. Biz 500 mcM bir konsantrasyonda HEG heg_e3i3_egfr1 ve heg_e4i4_egfr2 karşı daha önce tanımlanmamış iki morpholinos enjekte etti. 2 gün yazılan gübreleme, uninjected kardeş kontrolleri (Şekil 2A ve B) beklenen normal görünür. Heg_e3i3_egfr1 ile enjekte Embriyolar beyin ödemi (Şekil 2C). Bu morphants en kalbini morfolojisi değişmiş olmasına rağmen, kendi odalarına normal büyüklükte (Şekil 2B). Embriyolar enjekteheg_e4i4_egfr2 sergi değişken kalp kusurları. Diğerleri büyük girişinin yolları ve orta derecede genişlemiş kulakçıklar (Şekil 2E ve F), bazıları normal görünür. Önceden 1 rapor HEG mutant, büyük ölçüde genişlemiş içeakımın ve atrium (Şekil 2G ve H). Ayrıca, tam uzunlukta cDNA HEG transkripsiyonu 400 ng / mcL mRNA wild tip embriyolar enjekte edildi . (Şekil 3A ve B) uninjected kontrolleri normalde geliştirirken, embriyolar ana gövde eksen, baş ve gövde nekrozu, ve orta hat defektleri (Şekil 3C kısaltılması, mRNA fenotiplerinin wild tip görünüm şiddetli Siklopi değişen bir spektrum sergi HEG ile enjekte ve D). <img src="/files/ftp_upload/1115/Figure%201%20FINAL.png" alt="" /> Şekil 1 enjekte edilir. Embriyolar bir Petri kabındaki bir mikroskop lamı (A) karşı dizilmiştir. Enjeksiyon hacmi bir mikrometre yerleştirilen madeni yağ içine enjekte edilerek belirlenir. , Yaygın olarak kullanılan 500 pL, bir enjeksiyon hacmi 0,1 mm (B) bir çapa sahiptir. Hemen enjeksiyondan sonra, morfolino veya mRNA sarısı (C) noktasal bir nokta olarak görünür. <img src="/files/ftp_upload/1115/Figure%202%20FINAL.png" alt="" /> Şekil 2 2 gün yazılan gübreleme, uninjected embriyoların brüt kusurları (A) veya kalp fenotip (B) vardır. Morfolino heg_e3i3_egfr1 enjekte Embriyolar beyin ödemi (C, ok) ama normal boyutlu kalp boşluklarının (D) var. Morfolino heg_e4i4_egfr2 enjekte Bazı embriyolar genişlemiş girişi yolları ve kulakçıklar (E, F) var. HEG mutantlar ölçüde genişlemiş girişi yolları ve kulakçıklar (G, H) var. (A), (C), (E) ve (G) 4x DIC görüntüler; (B), (D), (F) ve (H), 20x DIC görüntü. = atrium, = içeakımın. <img src="/files/ftp_upload/1115/Figure%203%20FINAL.png" alt="" /> Şekil 3, 24 saat yazılan gübreleme, embriyolar (B) arasında bir nöral tüp hiçbir nekroz veya orta hat defektleri (A) ve açıkça tanımlanmış iki gözleri ile uzun, düz bir vücuda sahip uninjected. HEG mRNA enjekte Bazı embriyolar, aksine, kısaltılmış bir vücut ekseni, nekroz, misshaped Somitlerin (C) ve siklops (D) sergilerler. (A) ve (C) 4x DIC görüntüler; (B) ve (D) 20x DIC görüntülerdir.

<ol><li>Mably, J. D., Mohideen, M. P. K., Burns, C. G., Chen, J., Fishman, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((heart+of+glass+regulates+the+concentric+growth+of+the+heart+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Biol%22%5BJournal%5D)">heart of glass regulates the concentric growth of the heart in zebrafish.</a> Curr. Biol. 13, 2138-2147 (2003).</li>
</ol>

Zebrafish modeli sisteminin güçlü yanlarından biri belirli gen ürünleri veya mikroenjeksiyon embriyo elimine edilebilir olan kolaylığı. Yayg belirli bir protein eksprese için mRNA kodlama, 1-hücreli aşamada yumurta sarısı içerisine enjekte edilir. RNA, embriyonun sonraki gelişimi sırasında, organizma boyunca dağıtılan ve tercüme edilmiştir. Tersine, belirli bir proteinin ortadan kaldırmak için, morpholinos kullanılır. Morpholinos, özel RNA&#39;lar antisens tamamlayıcılık tasarlanmış sentetik oligonükleotidlerdir. MRNA&#39;ların gibi, morpholinos 1-hücreli aşamada sarısı içine enjekte edilir. İçinde de embriyo çeviri önlenmesi, hedef RNA&#39;lar bağlanır. Her morfolino veya mRNA için yapılması gereken ana değişiklik enjekte malzeme konsantrasyonu. Morfolino veya mRNA ya da çok yüksek bir konsantrasyon, non-spesifik bir toksisiteye neden olabilir; her morfolino non-spesifik kusurları neden olmadan etkili bir gen faaliyetlerinde yıkmak optimal konsantrasyonu, genellikle, 200 mcM ve 500 mcM arasında morfolino konsantrasyonları belirlemek için deneysel olarak test edilmelidir. Iğne açılması kesin büyüklüğü önemli değildir. Iğnelerin, enjeksiyon basıncı ve enjeksiyon zaman aralığında, doğru ses bolus üretmek için ayarlanabilir. Morpholinos bir protein içindeki domain fonksiyonel diseksiyon da dahil olmak üzere birçok uygulama var. Özel ekzon-intron kavşaklar hedef için tasarlanmış, morpholinos orada meydana gelen ekleme önlemek. Biz iki morpholinos etkilerini araştırdık HEG pre-mRNA bağlama ekzon-intron kavşaklar. Morfolino heg_e3i3_egfr1 olgun transkript içine ekzon 3 içeren ekleme makine önlenmesi, ekzon 3 ve intron 3 arasında birleşme bağlar. Morfolino heg_e4i4_egfr2 benzer ekzon 4 kaldırır. Ekzon 3 ve 4. EGF gibi tekrarlar içeren etki alanı kodlamak. Bazı embriyolar heg_e4i4_egfr2 orta Fenokopisi mutant enjekte kalp gelişiminde ekzon 4 HEG rolünü anlamak için daha fazla deneyler gerekli olacaktır. Hayret, heg_e3i3_egfr1 enjekte embriyolarının beyin ödemi, HEG mutantlar görülen bir özellik değil. Bu Zigotik mutantlar etkilenmemiş olacaktır anne transkript bağlamak için morpholinos yeteneğine bağlı olabilir.

<table><tbody><tr><td>Mikroenjektör</td><td>Araç</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PLI 100</td><td></td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td>Araç</td><td>Narishige International</td><td>MN 153</td><td></td></tr><tr><td>İğne Çekici</td><td>Araç</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P 97</td><td></td></tr><tr><td>Cam Kılcallar</td><td>Araç</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>TW100 F6</td><td></td></tr><tr><td>Mikro-yükleyici Pipetler</td><td>Araç</td><td>Eppendorf</td><td>5242956.003</td><td></td></tr><tr><td>İğne Tutucu</td><td>Araç</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>MPH310</td><td></td></tr></tbody></table>

gen fonksiyon analiz zebra balığı embriyolar mikroenjeksiyon

Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function

Eğitim zebrafish avantajlarından biri embriyo protein düzeyleri manipüle kolaylığı ve hız. Antisens tamamlayıcılık hedef RNA&#39;lar sentetik oligonükleotidlerdir Morpholinos, belirli bir gen ürünü ifade azaltmak için embriyo eklenebilir. Tersine, bir gen ürünü işleme mRNA düzeylerini artırmak için embriyo olabilir. Bir embriyo ya da mRNA veya morfolino eklemek için araç mikroenjeksiyon. Mikroenjeksiyon saatte embriyo yüzlerce enjeksiyon için izin, verimli ve hızlı. Bu video mikroenjeksiyon yer alan tüm adımları gösterir. Kısaca, yumurta atılmaktadır sonra hemen toplanır ve bir Petri kabındaki bir mikroskop lamı karşı dizilmiş. Daha sonra ince uçlu bir iğne, enjeksiyon malzemesi yüklü bir mikroenjektör ve bir hava kaynağına bağlı olduğu ve mikroenjektör kontrolleri arzu edilen bir enjeksiyon hacmi üretmek için ayarlanabilir. Son olarak, iğne embriyonun yumurta sarısı içine dalmış ve morfolino veya mRNA atılır.

Bu video morfolino veya mRNA sonraki gelişimi sırasında spesifik gen ürünlerinin seviyesini azaltmak veya artırmak için tek hücreli aşamada zebrafish embriyoların nasıl enjekte edilebilir gösterir.

Gen Fonksiyon Analiz Zebra balığı Embriyolar Mikroenjeksiyon

Zebrafish çalışmalarıyla ilgili avantajlardan biri, embriyodaki protein seviyelerinin manipülasyonunun kolaylığı ve hızıdır. Sentetik olan morfolinolar...

Erkek ve dişi zebra balıkları, döllenmiş yumurtaların kolayca toplanabilmesi için tabana düştükleri bir üretim kafesinde çiftleştirilir. Ardından yumurtalar, bir Petri kabı içerisinde mikroskop lamına hizalanır. Daha sonra, dolu olan enjeksiyon iğnesi kesilir ve enjeksiyon ayarları, mikrometre ile ölçüldüğünde enjeksiyon bolusu istenen boyutta olacak şekilde düzenlenir.Son olarak, yumurtalar sırayla tek tek enjekte edilir. Merhaba, ben Boston Çocuk Hastanesi Kardiyoloji Bölümü'ndeki John MA Laboratuvarı'ndan Jonathan Rosen. Ben de VY laboratuvarından Michael Sweeney.Bugün, mRNA veya morfolinonun zebrafish embriyolarına nasıl enjekte edileceğini göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu prosedürü, belirli gen ürünlerinin nakavt (knockdown) veya aşırı ekspresyonunun etkilerini incelemek için kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım.Başlangıç olarak, toplam yumurta üretimini artırmak için enjeksiyondan önceki gece balıkları ve çiftleşme tanklarını bölmeler yerleştirilmiş şekilde hazırlamamız gerekecektir. İstenirse balıklar, iki dişi bir erkek oranında yerleştirilebilir. Ertesi sabah oda ışıkları açıldıktan sonra, birkaç tanktaki bölmeleri çıkarın ve yaklaşık 20 dakika boyunca rahatsız edilmeden çiftleşmelerine izin verin. Bir süzgeç kullanarak yumurtaları çiftleşme kafeslerinden toplayın ve bir Petri kabına dökmeden önce yumurta suyu ile durulayın.Yumurta suyu ile balıklar, enjeksiyon için ek yumurta serileri üretmek amacıyla daha büyük tanklarda yeniden gruplandırılabilir. Yumurta toplama zamanlamasını, yumurtaların tek hücreli evreyi geçmesine izin vermeden maksimum sayıda üretilecek şekilde ayarlayın. Son olarak, bir mikroskop lamını 100 milimetrelik bir Petri kabının ters çevrilmiş kapağına yerleştirin.Yumurtaları bir transfer pipeti kullanarak lamın kenarına tek bir sütun oluşturacak şekilde hizalayın ve ardından yumurtaların karşı tarafındaki kenara bir Kim wipe bastırarak lamdaki fazla yumurta suyunu alın. Ardından, bir mikropipet çekicisi (micro pipette puller) kullanarak mikroenjeksiyon iğnelerini hazırlayacağız. Bir milimetre dış çapa sahip cam bir kapileri iki iğne olacak şekilde çekeceğiz ve bu iğneleri 150 milimetrelik bir Petri kabında saklayacağız. İğneler, silikon hamur (silly putty) rampaların üzerine yerleştirilerek önceden çekilebilir.Şu ayarları kullanıyoruz. Isı 6, kutup 60, hız 80. Bir mikro yükleyici pipet kullanarak, iğnenin geniş ucuna üç µL enjeksiyon materyali yükleyin.Birkaç kabarcık kalana veya hiç kabarcık kalmayana kadar bolusu iğne ucuna doğru sallayın. Ardından, hava kaynağını ve mikro enjektörü açacağız. İğneyi mikro enjektöre yerleştirin ve yuva içerisinde sızdırmaz bir şekilde oturduğundan emin olun.Mikromanipülatörün, geniş bir hareket ve ayar aralığına izin verecek uygun bir konumda olduğunu kontrol edin. İğne ucunu mikroskobun görüş alanına getirin. Sahnenin yukarısına kaldırın ve ucun en ince bölgesine odaklayın.İğnenin, korion ve vitellusu delecek kadar dar kalmasını ancak yine de tutarlı bir damlacık boyutu iletebilmesini sağlayacak bir noktadan, bir çift keskin pens yardımıyla koparın. Her enjeksiyonun hacmini hesaplamak için, bir mikrometre üzerine bir damla mineral yağ yerleştirin, iğneyi yağın içine sokun ve yağın içine bir damlacık çözelti enjekte etmek için ayak pedalına basın. İğneyi kırparken ve gerektiğinde enjeksiyon basıncını ayarlarken, yağ içine enjekte edilen damlacığın boyutunu izleyin.0,1 milimetre çapındaki bir boncuk, 500 pikolitre enjeksiyon materyali içerir. Genellikle 500 pikolitre veya bir nanolitrelik enjeksiyon hacimleri kullanılır. İdeal enjeksiyon hacimleri, yumurta hacminin yaklaşık %10'unu dolduracaktır.İğne ucunun kalitesi, hem enjeksiyon kolaylığı hem de sonuçların kalitesi ve tutarlılığı açısından kritik öneme sahiptir. Şimdi enjeksiyon prosedürünü başlatmak için enjeksiyon yapma zamanı geldi. Embriyoların dört hücre aşamasını geçmediğinden emin olun.İdeal olarak, embriyo tek hücreli evrede olmalıdır. Ardından, iğneyi yumurta sütununa doğru indirin, korion yüzeyini delin ve izlerken tek bir pürüzsüz hareketle sarıya girin. Vitellüs kesesinde herhangi bir ezilme veya yırtılma olması durumunda, enjeksiyon materyalini sarıya enjekte edin.Hava kabarcığı enjekte etmekten kaçının ve işlem sırasında görünür şekilde zarar gören embriyolara dikkat edin. Tutarlı bir damlacık boyutunu korumak için gerekirse basıncı ayarlayın ve bir pipet ucu kullanarak döllenmemiş görünen veya enjeksiyon işlemi sırasında tahrip olan yumurtaları uzaklaştırın. Bir yumurta sütununu tamamladıktan sonra, enjekte edilen yumurtaları temiz bir Petri kabına taşımak için yumurta suyundan oluşan hafif bir akış kullanın ve gerektiği kadar tekrarlayın.Kontrol grubu olarak birkaç tane enjeksiyon yapılmamış embriyoyu saklayın. İlk günün ilerleyen saatlerinde ölü embriyoları uzaklaştırın ve enjekte edilen embriyoların sayısını kaydedin. Enfeksiyon riskini azaltmak için kapta bulunan yumurta suyunu periyodik olarak değiştirin.Enjekte edilen maddeye bağlı olarak, embriyoların hayatta kalma oranının enjekte edilmemiş kardeşlerine göre daha düşük olabileceğini unutmayın. Neyse ki, çok sayıda embriyoyu enjekte etmek kolaydır, bu nedenle bu durum nadiren sorun teşkil eder. Şimdi, hem morfo enjeksiyonunun hem de mRNA'nın bazı temsili sonuçlarını göstereceğiz.Döllenmeden 48 saat sonraki enjekte edilmemiş kontrol grubu, beklendiği gibi normal görünmektedir. Ancak, iki EEG benzeri tekrarın ilkini içeren HG izoformlarını baskılayan morpho HG E three i three eeg FFR one enjekte edilen embriyolarda beyin ödemi görülmektedir; heart glass mRNA enjeksiyonu da döllenmeden 24 saat sonra belirgin bir fenotip oluşturmuştur.Enjeksiyon yapılmamış kontrol gruplarının başları normal görünüyordu. Buna karşılık, M NNA enjekte edilen embriyoların bazılarında opia görüldü. Tek hücreli evre sırasında morfolin veya mRNA enjeksiyonunun, sonraki gelişim aşamalarında belirli genlerin ekspresyonunu nasıl artırabileceğini veya azaltabileceğini göstermiş olduk. Bu prosedür uygulanırken, bunun da hatırlanması önemlidir.mRNA'nın veya morpho'nun yüksek konsantrasyonu, morpho içeren embriyolarda spesifik olmayan letaliteye neden olabilir. Her birinin ampirik olarak test edilmesi gerekir, ancak tipik olarak 200 ile 500 micromolar arasındaki konsantrasyonlar, genel letaliteye yol açmadan gen aktivitesini spesifik olarak düşürür. Hepsi bu kadar.İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

microinjection-of-zebrafish-embryos-to-analyze-gene-function

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Mikroenjeksiyon döllenmiş zebrafish embriyolar içine yabancı maddeler tanıtmak için bir köklü ve etkili bir yöntemdir. Burada, mRNA aşırı ekspresyonu gerçekleştirmek için sağlam bir mikroenjeksiyon tekniği ve morfolino oligonükleotid gen devirme çalışmaları zebrafish göstermektedir.

Zebra balığı Embriyolar mRNA ve morfolino Antisens Oligonükleotidler Mikroenjeksiyon.

Bu videoda, biz gelişmekte olan omurgalı beyin konfokal mikroskobu ile tek bir hücre çözünürlükte canlı zebrafish embriyolar analiz edildiği bir yöntem gösteriyor. Bu, tek hücreli zebrafish embriyo enjekte ve daha sonra gelişmekte olan beyin montaj ve görüntü hangi yöntemi içerir.

Konfokal Mikroskop Zebra balığı Embriyonik Beyin Görüntüleme Canlı

Erken embriyo şekli morfogenetik süreçleri anlamanın anahtarı, yüksek çözünürlükte görüntü hücrelerinin yeteneği. Biz burada tüm zebrafish embriyolar membran hedefli Yeşil Floresan Protein hücrelerin tek hücreler veya küçük kümeler etiketleme için kullanılan bir tekniktir açıklar.

Zebra balığı Beyin Etiketleme ve Görüntüleme Hücreleri

Dying hücreler komşu hücrelerle birlikte daralma bariyer fonksiyonunu bozmadan epitel dokuların ekstrüde. Gelişmekte zebrafish optik netlik epitel yaşam ekstrüzyon görselleştirmek için mükemmel bir sistem sağlar. Burada hücresel çözünürlükte larva zebrafish epidermisin neden ve görüntü ekstrüzyon yöntemleri açıklanmaktadır.

Gelişmekte olan Zebra balığı Epidermis Hücre Ekstrüzyon Canlı Görüntüleme

Bu videoda, bileşikleri Zebra balığı yumurta sarısı kesesine vermek için bir Embriyo mikroenjeksiyon tekniği açıklanmaktadır.

Embriyo Mikroenjeksiyonu: Zebra Balığı Sarısı İçine Bir Bileşik Verme Tekniği

Bu yazıda, morfolino antisens oligonükleotidler kullanılarak yetişkin zebrabalıkları telencephalon ventriküler hücrelerde gen ifadesinin manipülasyonu için bir yöntem ortaya koymaktadır. Biz, yetişkin omurgalı beynin fonksiyonel çalışmalar için kullanılan bir hızlı ve verimli protokolü olarak bu yöntem sunuyoruz.

Morfolino Oligonükleotidler bir Cerebroventricular Mikroenjeksiyon kullanarak Yetişkin Zebra balığı Beyin Gen İfade Mikromanipülasyon

Zebra balığı, küçük tropikal balık, omurgalı geliştirme ve hastalık sırasında gen fonksiyonu çalışmak için popüler bir model haline gelmiştir. Hedef genlerin uzaysal ve zamansal ifade ile tespit...

Yüksek Çözünürlüklü Tüm Dağı<em&gt; Yerinde</emGen İfade ve Fonksiyon Eğitim için Zebra balığı Embriyolar içinde&gt; Hibridizasyon

Zebra balığı, genetik ve gelişimsel çalışmalar için mükemmel bir model sistemdir. Boncuk implantasyonu, lokal hücresel ortamlarda değişiklikler yaparak gelişimsel mekanizmaları sorgulamak için kullanılabilecek değerli bir doku manipülasyon tekniğidir. Bu protokol, zebra balığı embriyosunda mikroboncuk implantasyonunun nasıl gerçekleştirileceğini açıklar.

Zebra balığı Embriyo microbead İmplantasyonu

RASopatiler, RAS-MAPK yolağı hiperaktivasyonunun neden olduğu multisistemik genetik sendromlardır. Doğrulanmayı bekleyen potansiyel olarak patojenik varyantlar sürekli olarak ortaya çıkarken, zayıf klinik öncesi kanıtlar tedaviyi sınırlar. Burada, genç muhabir zebra balığında canlı FRET görüntüleme ile RASopati ile ilişkili ERK aktivasyon seviyelerini ve embriyogenez sırasındaki farmakolojik modülasyonunu test etmek ve çapraz doğrulamak için in vivo protokolümüzü açıklıyoruz.

Canlı FRET mikroskobu ve immünofloresan ile erken zebra balığı Noonan sendromu modellerinde ERK aktivite modülasyonunu değerlendirmek için etkili bir protokol

Bu video, Nijole Jasinskiene Dang humması için vektörler transgenik Aedes aegypti sivrisinek, üretmek için kullanılan yöntem gösteriyor. Doğru, mikroenjeksiyon iğneler hazırlanması embriyolar dessicating ve mikroenjeksiyon teknikleri gösterilmektedir.

Transgenik Sivrisinekler Edinme A. aegypti Embriyolar Mikroenjeksiyon

Öğrenin zebrafish embriyolarına bir hücre evresinde mikroenjeksiyon tekniği ile gen ekspresyonunu manipüle etme yöntemini. Bu teknik gelişimsel biyolojide gen fonksiyonu çalışmaları için temel bir araçtır.

Gen Fonksiyon Analiz Zebra balığı Embriyolar Mikroenjeksiyon

Daha fazla video keşfet