Name: İlköğretim Kültür Hipokampal Nöronlar Yoğun çekirdekli veziküller Canlı Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Öğrenin, geniş alan floresan mikroskobisi kullanarak kültürlenmiş hipokampal nöronlarda yoğun çekirdekli veziküllerin canlı görüntülenmesi yöntemini. Bu protokol organel dinamiklerini incelemek için uyarlanabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Harald Hutter ve Helena Decker Biz bu yazının dikkatli bir okuma için teşekkür ederiz. Biz de kendi teknik uzmanlık için Leica Microsystems Reg Sidhu teşekkür ederim. Bu araştırma, Ulusal Bilimler ve Mühendislik Konseyi, Kanada Ödülü # 327.100-06, Bilim ve Simon Fraser Üniversitesi Tıp Fakültesi tarafından desteklenmiştir.

Bölüm 1: Lipofectamine 2000 (Invitrogen) kullanarak nöronların Transfeksiyon Ekipman set-up: Sıçan veya fare hipokampal nöronlar Kaech ve Banker, 2006 göre kültür [4]. Transfections için kullanılan tipik bir hücre yoğunluğu 250.000 cells/6-cm yemektir. Gerekli reaktifleri ve ekipman 50 mM kynurenic asit, düzenli bir masa üstü tüp tutucu, bir benchtop soğutucu (en iyi Lipofectamine reaktif soğuk tutmak için), Lipofectamine reaktif, MEM, mikrofuge&#39;de tüpler, micropipetters, ve steril forseps. Prosedür: <ol><li> Her bir Transfeksiyonu etiket için iki adet 1,5 ml tüpler; transfeksiyon reaktif içeren bir plazmid DNA içeren bir. Aşağıdaki inkubasyon oda sıcaklığında devam edebilirsiniz. <ol><li> Bir tüp içinde 100 mcL MEM ile 1,0 mikrogram plazmid DNA birleştirin (herhangi bir tür takviyeleri olmadan; MEM dengelenmiş pH sıcaklık olmak zorunda değildir). </li><li> 6.0, diğer 1.5 ml tüp 100 mcL MEM mcL Lipofectamine birleştirin. <ol><li> DNA oranı, bu gibi durumlarda yarı yarıya olacak: çift transfections için ayarlamalar Lipofectamine bile gereklidir. Lipofectamine oranı: DNA üreticinin önerisi içinde devam etmektedir. En iyi ifade etmek için her plazmid için 0.5-1.0 mg test etmek için en iyisidir. </li><li> Lipofectamine reaktif raf ömrünü korumak için, mümkün olduğu kadar kısa bir süre için buzdolabında kaldırılmış olmalıdır ve kullanılmadığı zaman bir benchtop soğutucu yerleştirilir. Toplam süre buzdolabında en az tutulmalıdır. </li></ol></li></ol></li><li> Tüpler oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin. </li><li> DNA-MEM çözüm lipid tüp içine aktarın ve hafifçe sonra oda sıcaklığında 30 dakika inkübe, pipet ile karıştırın. </li><li> 25 dakika sonra, saygısız lamelleri önce, kültürlü nöronların çanak excitoxic hasarı en aza indirmek için 50 mM kynurenic asit 60 mcL ekleyin. <ol><li> Ayak tarafı dikkatlice çevirin lamelleri steril forseps kullanarak ve üst üste kalmaz düzenlemek. Lamel nöron kaplı yüzey veya çanak glia kaplı yüzey kazımak için dikkatli olun. </li></ol></li><li> Orta yaklaşık 0,5 mL 6 cm çanak alın ve yavaşça tüp DNA ile karıştırın, orta yüzeye eşit damlama çanak geri DNA çözümü transfer. </li><li> Girdap, ancak tek bir yöne doğru hafifçe ileri geri çanak kaydırın, sonra durdurmak ve DNA Lipofectamine kompleksleri eşit dağıtmak için dik yönde tekrarlayın. Doku kültürü inkübatör (37 ° C,% 5 CO 2) 90 dakika inkübe edin. </li><li> Birbirlerini kalmaz çevir lamelleri ayak tarafı aşağı ve düzenleyebilirsiniz. Ifadesi 48 saat tipik bir gecede, istenilen zaman için devam etmek için izin verin. </li></ol> Bölüm 2: kültürlü hipokampal nöronlar GFP etiketli yoğun çekirdekli veziküller Canlı görüntüleme Ekipman set-up: <ol><li> Görüntüleme canlı hücrelerin bir CCD kamera ile donatılmış bir floresan mikroskop gerektirir; Leica değişken, floresan lamba ile donatılmış bir Leica DMI 6000B inverted mikroskop kullanıyoruz. Ayrıca, sıcaklık kontrolörü ve objektif bir ısıtıcı ile bir görüntüleme odası gereklidir. Warner Instruments RC-21BR (kat. # TC324B) bir platform ısıtıcı ek olarak 18 mm lamel güncellenmiştir (kat. # PH2) ve sıcaklık kontrolörü kullanın. Odasının açık portlar, odasının sipariş eklenebilir bir değişiklik içeriyor. Son derece objektif bir ısıtıcı lamel sıcaklığını korumak ve sıcaklık dalgalanmaları nedeniyle odak değişiklikleri en aza indirmek için tavsiye edilir. Görüntüler Metamorph (Moleküler Cihazlar) yazılımını kullanarak satın alma &#39;akış&#39; modunda açılan dahil olmak üzere bir Hamamatsu Orca-ER ile elde edilir. Not-Biz tüm mikroskop içine iklim odasında kullanmayın. Bu ek pahalı ve burada açıklanan kısa vadeli görüntüleme için gerekli değildir. </li><li> Diğer ekipman ve reaktifler taze hazırlanmış canlı görüntüleme orta (1X ile Hanks Ca 2 + ve Mg 2 +% 0.6, Glikoz, ve 10mM Hepes), ek 18 mm cam lamelleri, steril forseps, non-steril forseps, Kimwipes, vakum gres ve gres uygulamak için bir şırınga (iğne olmadan, ya da değiştirilmiş geniş çaplı bir iğne ile). </li></ol> Prosedür: <ol><li> (1X ile Hanks Ca 2 + ve Mg 2 +% 0.6, Glikoz, ve 10mM Hepes) taze canlı görüntüleme ortamı hazırlayın . Kullanılmadığı zaman genellikle 4 ° C&#39;de bir zaman ve mağaza 50mls hazırlar. Bir defada en fazla bir hafta için yeterli hazırlamak için en iyisidir. Yaklaşık 5-10 ml nöron çanak başına kullanılır. </li><li> , Mikroskop, fotoğraf makinesi, floresan lamba, ve görüntü elde etme yazılımı başlatın. Ayrıca oda platformu ve objektif ısıtıcıları açın. </li><li> Hayal hazırlayıng kamara. <ol><li> Warner odası lamelleri montaj için bir teflon eklemek içerir. Kolaylığı için kalıcı bir kalem ile insert &quot;top&quot; manipülasyon, etiket bir tarafında. </li><li> &quot;Top&quot; etiketli odasının yan tarafındaki deliği çevreleyen oluk yağ halkası uygulayın. Odasına girin ve gözlemlenebilir alanı azaltmak fazla kullanmaktan kaçının. </li><li> Forseps kullanarak, &quot;top&quot; yan odanın bir temiz, kullanılmamış 18 cm lamel eklemek odasının gömme oluk içinde sıkı bir mühür oluşturmak için kenarlarından lamel hafif basınç uygulayın. </li><li> Odasının ters çevirin ve odasının ters (alt) tarafında oluk yağ benzer bir halka uygulamak. </li><li> 50 mL tüp, ideal oda sahibi bir kapak kadar hazırlanan oda alt tarafına yerleştirin. </li><li> Odasına görüntüleme orta 750 mcL ekleyin. Bu aşırı miktarda, ancak yağ üzerine dökülüp orta önlemek ve aşırı hücre kaplı lamel uygulandığında sıkışmış olması kabarcıkları önlemeye yardımcı olur. </li><li> Kadar gerekli doku kültürü inkübatörde hazırlanan odasına koruyun. Görüntüleme orta buharlaşması ve kompozisyon değişecek gibi uzun süreli inkubasyon ~ 1 saat kaçınılmalıdır. </li></ol></li><li> , Nihai kamara montaj ve canlı hücre görüntüleme gerçekleştirin. <ol><li> Doku kültürü kaputu inkübatör hazırlanan odası ve bir tabak transfekte lamelleri taşıyın. </li><li> Son odasına montaj hücreleri, orta ve 37 ° C sürekli dalmış kalmasını sağlamak için hızlı bir şekilde yapılmalıdır. </li><li> Steril forseps kullanarak, dikkatle transfekte çanağı bir lamel kaldırmak, besi uzak çizmek Kimwipe lamel kenarına dokunun. </li><li> Hazırlanan odasının üzerine lamel nöron tarafı aşağı yerleştirin. Lamel bir tarafında ilk yağ dokunun ve yakalama kabarcıkları olmadan düz lamel getirmek için kenarlarında basınç uygulayın. Aşırı görüntüleme ortamı beklendiği gibi dökülebilir. </li><li> Fazla görüntüleme ortamı silin, ancak pozisyon lamelleri slayt dikkatli olun. </li><li> Önceden ısıtılmış bir platform ısıtıcı odanın hareket ettirin ve bir yerde oda sıkın. </li><li> Odanın sahneye aktarın. </li><li> Photobleaching ve photoxicity azaltmak için, lamba, yoğunluk transfekte hücreleri bulmak için gerekli minimum tutar ayarlayın. </li><li> Düşük bir büyütme yağ objektif (40X) ile ilgi bir hücre bulun. Maksimal lamel kapsama sağlamak ve sağa çalışma aşağı gereksiz görüntü satın almalar, lamel örneğin, sol üst, tarama ve engellemek için planlı bir arama deseni ayrılmamak için faydalıdır. </li><li> İstediğiniz bir alanda bulunan edildikten sonra yüksek bir büyütme yağlı objektif (60-100x) açın. </li><li> &quot;Stream satın alma&quot; ya da görüntüleme yazılımı karşılaştırılabilir fonksiyonu floresan etiketli protein dinamiklerinin bir video kaydetmek için kullanın. </li><li> Daha sonra analiz ve sunum için bir faz görüntü ve eşlik eden başka herhangi bir görüntü (örneğin Çözünür GFP) ele alalım. </li><li> Lamel daha keşfetmek ve sonraki video kayıt önce tüm görüntüleri kaydedin. </li><li> Genellikle bir lamel 3-5 videos başarılı kabul edilir. Fototoksisite ve genel hücre sağlığı taşıma hasarlı hücreleri azalır olarak akılda tutulmalıdır. Hücre sağlık faz mikroskopi kullanılarak gözlem ile takip edilebilir. Genelde kayıtları lamel başına yaklaşık 30 dakika süreyle yapılır. </li></ol></li></ol> Bölüm 3: Temsilcisi Sonuçlar: Canlı hücre görüntüleme gözlemler tipik görünümü (Şekil 1A) alanı içinde floresan etiketli organeller hareket video (görüntü &quot;yığınları&quot; olarak da bilinir) oluşur. Her video refakat genellikle protein ekspresyonu ve / veya sağlık hücre hücre gövdesi, seviye ile ilgili görüş alanının yönünü göstermektedir görüntüleri destekliyoruz. Ulaşım Videolar kymographs (Şekil 1B) dönüşümü ile kantitatif analiz tabi tutulabilir. Kymographs her zaman noktası kymograph bir sütun tarafından temsil edilmektedir satırı tarar juxtaposing parçacık hareketi gösteren görüntüler. Şekil 2, ters yönde hareket eden iki parçacığın bir kymograph nasıl temsil göstermektedir. Kymographs daha fazla analiz parçacık akısı, hız, çalışma süresi, ters, ve sabit parçacıklar hakkında bilgi sağlayabilir. <img src="/files/ftp_upload/1144/fig1.jpg" alt="" /> Şekil 1. Temsilcisi Canlı Hücre Görüntüleme Gözlemler mCherry-etiketli Doku plazminojen aktivatörü (TPA) ve ulaşım bir video (A) Seçilmiş kareleri. Bireysel parçacıklar anterograd hareket (yeşil oklar) ve retrograd (kırmızı oklar) yönden gösterilir. (B) gösteren Kymographs TPA-mCherry hareketiakson. Çapraz çizgiler hücre gövdesi (pozitif eğim) veya (negatif eğim) doğru hareket organelleri temsil ederken kymographs Yatay çizgiler, sabit nesneleri temsil eder. Uzun yeşil ve kırmızı oklar (A) parçacıklara karşılık gelen çalışan göstermektedir. Mikrotübül depolymerizing reaktifi nocodazole nedeniyle ulaşım değişiklikler, aynı zamanda bir kymograph ile gösterilmiştir. Çapraz çizgiler yokluğunda hareket organelleri azalma dikkat edin.

<ol><li>Kulic, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microtubule+movement+in+bidirectional+organelle+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">The role of microtubule movement in bidirectional organelle transport.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (29), 10011-10016 (2008).</li>
<li>Jacobson, C., Schnapp, B., Banker, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+change+in+the+selective+translocation+of+the+Kinesin-1+motor+domain+marks+the+initial+specification+of+the+axon%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">A change in the selective translocation of the Kinesin-1 motor domain marks the initial specification of the axon.</a> Neuron. 49 (6), 797-804 (2006).</li>
<li>Barkus, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+an+Axonal+Kinesin-3+Motor+for+Fast+Anterograde+Vesicle+Transport+that+Facilitates+Retrograde+Transport+of+Neuropeptides%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of an Axonal Kinesin-3 Motor for Fast Anterograde Vesicle Transport that Facilitates Retrograde Transport of Neuropeptides.</a> Mol Biol Cell. 19 (1), 274-283 (2008).</li>
<li>Kaech, S., Banker, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+hippocampal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Culturing hippocampal neurons.</a> Nat Protoc. 1 (5), 2406-2415 (2006).</li>
</ol>

Canlı hücre görüntüleme kültürlü nöronlarda organel taşıma doğrudan gözlem için zor, ama güçlü bir tekniktir. Güçlükleri kültür komplikasyonlar nedeniyle yoksul nöron sağlığı ile prosedür yukarı çıkabilir. Bu nedenle, hücre sağlığı (örnekler için bkz. Ref. 4) büyüme ortamında doku kültürü ışık mikroskobu kullanılarak lamelleri gözlemleyerek transfeksiyon öncesi ve sonrası değerlendirilmelidir. Aktarılması süreci nöron içeren görüntüleme odasına lamelleri hücrelere stresli olabilir, böylece lamelleri işlenirken özen önem...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/details.php?ID=1144">Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons</a>. There was an error in the author's name. The author name was corrected to include a middle initial as follows:

David M. Kwinter, Michael A. Silverman

instead of:

David Kwinter, Michael Silverman.

A correction to author names has been made for article Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons.

Erratum: Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons.

<table><tbody><tr><td>Earle tuzları ve L-glutamin içeren MEM-Eagle</td><td>Reaktif</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>10-010-CV</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>11668-027</td><td>Transfeksiyon reaktifi</td></tr><tr><td>Ca2+ ve Mg2+ içeren 10X Hanks</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14185-052</td><td>Canlı görüntüleme besiyeri</td></tr><tr><td>1M HEPES</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15630-130</td><td>Canlı görüntüleme besiyeri</td></tr></tbody></table>

İlköğretim kültür hipokampal nöronlar yoğun çekirdekli veziküller canlı görüntüleme

Live Imaging of Dense-core Vesicles in Primary Cultured Hippocampal Neurons

Gözlem ve dinamik hücresel süreçleri karakterize, statik görüntüler elde edilemez hücresel aktivite ile ilgili önemli bilgiler verebilmesidir. Vital floresan probları, özellikle yeşil floresan proteininin (GFP), özel hücre içi bölmeleri ve hücresel yapılar etiket yeteneği kaynaklanan hücre biyolojisi alanında devrim yarattı. Örneğin, GFP (ve spektral çeşitleri) kimeralar canlı görüntüleme, organizma ve hücre tipleri [1-3] çok sayıda hücre iskeletinin, organel taşıma ve membran dinamikleri dinamik bir analizi için izin verdiler. Canlı görüntüleme yaygın olmasına rağmen, bu yaklaşım, özellikle de primer kültürlerinde nöronlar hala birçok teknik zorluklar teşkil etmektedir. Karşılaşacağı zorluklardan birinin, post-mitotik nöronlar GFP etiketli proteinlerin bir deyimdir; diğer photobleaching ve genel hücre sağlığı korumak, fototoksisite en aza indirirken, floresan görüntü yakalama yeteneğidir. Burada ise tamamen kutuplaşmış nöron görüntüleme için idealdir, nispeten düşük transfeksiyon oranı (~% 0.5) veren bir lipid tabanlı transfeksiyon yöntemi tanımlayan bir protokol sağlar. Anterograd v. retrograd yönlülük, ulaşım, yani tek bir akson ve dendritler onaylamak için hücre gövdesi yönlendirme olarak karakterize edilebilir böylece düşük transfeksiyon oranı çok önemlidir. Nöronlar ifade görüntüleme GFP Bizim yaklaşımımız, bir CCD kamera, görüntü yakalama yazılımı, ve ısıtılmış bir görüntüleme odası ile donatılmış bir standart geniş alan floresan mikroskop dayanmaktadır. Biz, herhangi bir özel optik veya floresan ışık kaynağı dışında uyarma gereksinimleri olmadan, örneğin, yoğun çekirdekli veziküller, mitokondri, büyüme konileri, aktin organellere veya yapıların geniş bir yelpazede görüntülü var. Ayrıca, spektral-farklı floresan ile işaretlenmiş proteinler, örneğin, GFP ve proteinler dsRed etiketli, ortak taşıma veya diğer koordineli hücresel olayları karakterize etmek için aynı anda yakın görüntülenmiştir olabilir. Burada açıklanan görüntüleme yaklaşım görüntüleme uygulamaları çeşitli için esnek ve nispeten daha az maliyetli bir laboratuvar tarafından kabul edilebilir bir mikroskop kullanılabilir sağladı.

Organel ticareti dinamiklerini inceleyerek canlı hücre görüntüleme özellikle yardımcı programı. Burada geniş alan floresan mikroskobu kullanarak kültürlü nöronların yoğun çekirdekli veziküller canlı görüntüleme için bir protokol. Bu protokol, esnek ve diğer organeller gibi mitokondri gibi görüntü adapte edilebilir, endosomes ve peroksizomlara.

İlköğretim Kültür Hipokampal Nöronlar Yoğun çekirdekli veziküller Canlı Görüntüleme

Dinamik hücresel süreçlerin gözlemlenmesi ve karakterize edilmesi, statik görüntülerden elde edilemeyecek olan hücresel aktivite hakkında önemli bilgiler sağlayabilir.

Canlı hücre görüntüleme, organel trafiğinin dinamikleri incelenirken özellikle yararlıdır. Bu video, kültürlenmiş hipokampal nöronlarda yoğun çekirdekli veziküllerin görüntülenmesinde kullanılan bir prosedürü vurgulayacaktır. Transfeksiyon kompleksleri, ilk olarak D-N-A-M-E-M besiyeri ve lipectomy transfeksiyon reajeninin karıştırılmasıyla elde edilir.Hipokampal nöronlar, glial bir monotabakaya bakan ters çevrilmiş lameller üzerinde kültüre edildiğinden, bu lamellerin transfeksiyon reaktifiyle temas etmesi için ters çevrilmeleri gerekir. GFP etiketli yoğun çekirdekli veziküler proteinlerin ekspresyonu için yeterli süre beklendikten sonra, bir görüntüleme odası oluşturulur. Kültürlenmiş nöronlardaki yoğun çekirdekli ICAL'ların görüntülemesi, geniş alan floresan mikroskopisi kullanılarak gerçekleştirilebilir.Bu protokol esnektir ve mitokondri, endozom ve peroksizom gibi diğer organellerin görüntülenmesi için uyarlanabilir. Merhaba, ben Michael Silverman; Simon Fraser Üniversitesi'ndeki hücresel nörobilim laboratuvarıma hoş geldiniz. Bizler, sinir hücrelerinde organellerin nasıl hareket ettiğiyle ilgileniyoruz.Bu soruyu ele almak için, kültürlenmiş hipokampal nöronlardaki membranlı or

live-imaging-dense-core-vesicles-primary-cultured-hippocampal

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Diseksiyon ve bireyin beyin bölgesi hücrelerinin büyüme, hücresel ve fizyolojik parametrelere soruşturma kolaylaştırır. Biz nöron zenginleştirilmiş serum serbest bir ortamda kültürler üretir primer hücre kültür için bir metodu tanımlar.

P0 Yenidoğan Ratlarda Hipokampal Nöronlar İlköğretim Kültür

Bu video, nöronal veziküllerin hareketlerini görselleştirmek için belirli floresan proteinlerle nasıl etiketlendiğini gösterir. İlk olarak, bir floresan proteini kodlayan bir plazmit, bir transfeksiyon ajanı ile inkübe edilir ve daha sonra bir nöron kültürüne sokulur. Daha sonra, veziküllerin hareketini izlemek için nöronların görüntüleri elde edilir ve analiz edilir.

Floresan Görüntüleme Kullanılarak Nöronlardaki Vezikül Motilitelerinin Görselleştirilmesi

Kaynak: Villarreal, S., et. al., Kültürlenmiş Hipokampal Nöronlarda Sinaptik Vezikül Endositozunun Ölçülmesi. (2017)Bu video, yaban turpu peroksidaz etiketlemesi ve elektron mikroskobu yoluyla kültürlenmiş hipokampal nöronlarda sinaptik vezikül endositozunun analizini göstermektedir.

Fare Hipokampal Nöronlarında Sinaptik Vezikül Endositozunun Transmisyon Elektron Mikroskobik Görüntülenmesi 

Kaynak: Calvo-Rodríguez,  et al. Yaşlı hipokampal nöronlarda hücre altı Ca2+. J. Vis. Uzm. (2015).  Bu video, kısa ve uzun süreli sıçan hipokampal kültürlerinde sitozolik kalsiyum seviyelerini ölçmek için floresan görüntülemenin kullanımını göstermektedir. Genç ve yaşlı nöronları karşılaştırarak, yaşlı nöronlarda artan L tipi voltaj kapılı kalsiyum kanal yoğunluğunun ve uzun süreli aktivasyonun, nöronal yaşlanmanın ayırt edici bir özelliği olan kalsiyum aşırı yüklenmesine nasıl yol açtığını...

Kısa Süreli ve Uzun Süreli Sıçan Hipokampal Kültürlerinde İn Vitro Kalsiyum Görüntüleme

Biz fotoaktive yerelleştirme mikroskobu (PALM)-tabanlı sabit, kültürlü nöronlar kesecikler çalışmaları nasıl uygulanacağını açıklar. Bizim protokol anahtar bileşenleri süper çözünürlüklü mikroskopi sistemi ile seyrek örneklenmiş ham görüntüleri toplamak ve bir süper-çözünürlük görüntü üretmek için ham görüntüleri işlerken photoconvertible kimeralar ile etiketleme veziküller içerir.

Nöronal Yoğun çekirdekli Keseciklerinde süper çözünürlüklü Görüntüleme

Primer hipokampal nöronların düşük yoğunluklu kültürleri, nörotrofik faktörleri sağlamak ve uzun ömürlülüğü sürdürmek için genellikle glia besleyici tabakaya ihtiyaç duyar. Burada, spesifik nöronal-otonom mekanizmaların araştırılmasını kolaylaştıran yüksek yoğunluklu bir nöronal besleyici tabakanın varlığında cam lameller üzerinde ultra düşük yoğunluklu nöronları kültürlemek için basitleştirilmiş bir yöntemi açıklıyoruz.

Ultra Düşük Yoğunluk için Basitleştirilmiş Bir Yöntem, Uzun Vadeli İlköğretim Hipokampal Nöron Kültürü

Bu makalede, bir glial tek tabakalı üzerinde ters cam lamelleri büyüyen düşük yoğunluklu birincil hipokampal nöronlar kültürleme için protokol açıklar. nöron ve glial tabakalar parafin mumu ile ayrılır. Bu yöntem ile yetiştirilen nöronlar yüksek çözünürlüklü optik görüntüleme ve işlevsel tahliller için uygundur.

Düşük Yoğunluk İlköğretim Hipokampal Nöron Kültürü

Sinaptik vezikül endositoz sinaptik vezikül protein ile erimiş pHluorin ışık mikroskobu ve elektron mikroskobu vezikül Alım tarafından algılanır.

Sinaptik vezikül endositoz kültürlü Hipokampal nöronlar içinde ölçme

Burada, dev bir ankyrin-G'nin yokluğu nedeniyle önceden monte edilmiş AIS'den yoksun hipokampal nöronların akson başlangıç segmentlerinin (AIS) montajını ve yapısını nicel olarak incelemek için bir protokol tanımladık.

Axon İlk Segmentlerinin Montajını İncelemek için Birincil Kültürlü Hipokampal Nöronların Kullanımı

Bu protokol, primer nöronal kültürlerde protein ko-lokalizasyonunu incelemek için süper çözünürlüklü mikroskopinin nasıl yapılacağını göstermektedir.

Primer Nöronlarda Proteinlerin ve Sinaptik Belirteçlerin Eş Lokalizasyonunun İncelenmesinde Süper Çözünürlüklü Görüntüleme

Burada, aksonal taşıma üzerindeki patolojik protein kaynaklı etkileri analiz etmek ve bu etkilere aracılık eden mekanik yolları belirlemek için primer hipokampal kemirgen nöronlarının transfeksiyonunun canlı hücre konfokal görüntüleme ile nasıl birleştirileceğini gösteriyoruz.

Primer hipokampal nöronlarda patolojik proteinlerin aksonal taşıma üzerindeki etkilerini ölçmek için canlı hücre görüntülemenin kullanılması

Öğrenin, geniş alan floresan mikroskobisi kullanarak kültürlenmiş hipokampal nöronlarda yoğun çekirdekli veziküllerin canlı görüntülenmesi yöntemini. Bu protokol organel dinamiklerini incelemek için uyarlanabilir.

İlköğretim Kültür Hipokampal Nöronlar Yoğun çekirdekli veziküller Canlı Görüntüleme

Daha fazla video keşfet