Name: İnsan Embriyonik Kök Hücre (ES) yayılması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 52 s
Description: Öğrenin, insan embriyonik kök hücrelerini H1 ve H9 hücre hatları kullanarak kollajenaz tekniğiyle kültürde nasıl sürdüreceğinizi ve genişleteceğinizi. Bu yöntem, kök hücre araştırmalarında güvenilir sonuçlar elde etmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+midbrain+dopaminergic+neurons+from+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Induction of midbrain dopaminergic neurons from ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Neuron. 28, 31-40 (2000).</li>
<li>Perrier, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+midbrain+dopamine+neurons+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Derivation of midbrain dopamine neurons from human embryonic stem cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 12543-12548 (2004).</li>
<li>Pruszak, J., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human embryonic stem cells into dopaminergic neurons.</a> , John Wiley and Sons. (2007).</li>
<li>Pruszak, J., Sonntag, K. C., Aung, M. H., Sanchez-Pernaute, R., Isacson, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+and+methods+for+cell+sorting+of+human+embryonic+stem+cell-derived+neural+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Markers and methods for cell sorting of human embryonic stem cell-derived neural cell populations.</a> Stem Cells. 25, 2257-2268 (2007).</li>
<li>Sonntag, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+yield+of+neuroepithelial+precursors+and+midbrain-like+dopaminergic+neurons+from+human+embryonic+stem+cells+using+the+bone+morphogenic+protein+antagonist+noggin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enhanced yield of neuroepithelial precursors and midbrain-like dopaminergic neurons from human embryonic stem cells using the bone morphogenic protein antagonist noggin.</a> Stem Cells. 25, 411-418 (2007).</li>
<li>Kawasaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+dopaminergic+neurons+and+pigmented+epithelia+from+primate+ES+cells+by+stromal+cell-derived+inducing+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Generation of dopaminergic neurons and pigmented epithelia from primate ES cells by stromal cell-derived inducing activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 1580-1585 (2002).</li>
<li>Ko, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+neural+precursors+as+a+continuous%2C+stable%2C+and+on-demand+source+for+human+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived neural precursors as a continuous, stable, and on-demand source for human dopamine neurons.</a> J Neurochem. 103, 1417-1429 (2007).</li>
<li>Hong, S., Kang, U. J., Isacson, O., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+precursors+derived+from+human+embryonic+stem+cells+maintain+long-term+proliferation+without+losing+the+potential+to+differentiate+into+all+three+neural+lineages%2C+including+dopaminergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neural precursors derived from human embryonic stem cells maintain long-term proliferation without losing the potential to differentiate into all three neural lineages, including dopaminergic neurons.</a> J Neurochem. , (2007).</li>
<li>Zhang, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+subtype+specification+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neural subtype specification from embryonic stem cells.</a> Brain Pathol. 16, 132-142 (2006).</li>
<li>Pankratz, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+neural+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+via+an+obligated+primitive+anterior+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Directed neural differentiation of human embryonic stem cells via an obligated primitive anterior stage.</a> Stem Cells. 25, 1511-1520 (2007).</li>
<li>Lazzari, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+derivation+of+neural+rosettes+from+cloned+bovine+blastocysts%3A+a+model+of+early+neurulation+events+and+neural+crest+specification+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Direct derivation of neural rosettes from cloned bovine blastocysts: a model of early neurulation events and neural crest specification in vitro.</a> Stem Cells. 24, 2514-2521 (2006).</li>
<li>Pomp, O., Brokhman, I., Ben-Dor, I., Reubinoff, B., Goldstein, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+peripheral+sensory+and+sympathetic+neurons+and+neural+crest+cells+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Generation of peripheral sensory and sympathetic neurons and neural crest cells from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 23, 923-930 (2005).</li>
</ol>

İnsan embriyonik kök hücre (es) yayılması

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

İnsan Embriyonik Kök Hücre (ES) yayılması

Evet, ben Lauren Deon. MGH'deki İnsan Amgen kök hücre ko-tesisinden sorumluyum. Evet, ben Lauren, MGH'deki İnsan AM kök hücre ko-tesisinden sorumluyum.George De Lab'da doktora sonrası araştırmacı olduğum dönemden beri, yaklaşık dört yıldır insan Amgen kök hücreleri ile çalışıyorum. Şu an, her ikisi de Y hücrelerinden türetilmiş olan H1 ve H9 şeklinde iki hücre hattına sahibiz. Bu hücreleri kültürde genişletme veya sürdürme yöntemimiz, yani en azından bu hücreleri bölme şeklimiz, kollagenase kullanmaktır.Bu nedenle genellikle hücreleri ektikten sonraki ilk birkaç pasajda, koloni seçme tekniğini kullanırım. Böylece mikroskop altında hangi kolonilerin sağlıklı, farklılaşmış ve düzgün şekilli olduğunu kontrol edebilirim; yalnızca bu kolonileri toplayıp birkaç parçaya ayırarak taze bir flaska aktarırım. Farklılaşmış görünmeyen kolonileri ise olduğu gibi bırakırım.Hücreleri pasajlamanın diğer yolu tripsin kullanmaktır. Ancak ben burada bu tekniği kullanmıyorum. İnsan kök hücreleri tekilleşmeyi veya yalnız kalmayı sevmedikleri için kolajenazın biraz daha güvenli olduğunu düşünüyorum.Dolayısıyla, tripsin kullanırken, örneğin diğer hücre tipleri veya insan kök hücreleri için kullandığımız gibi üç ila dört dakika boyunca biraz fazla süre kullanırsanız, hücreler tekilleşir ve çoğunun ya ölür ya da farklılaşır veya alt kata tutunamazlar. Bu nedenle temel nokta, hücreleri kümeler halinde tutmanızdır; flask içinde tek başına kalmalarını istemezsiniz.Kollajenaz kullanmanın avantajı, hücreleri plantlar halinde tutmaktır. Chipsy kullanımıyla ise, g opsonizasyonunun bu çok sert sürecinden sağ çıkacak hücreleri seçmiş olursunuz. Bu hücreler genellikle oldukça yüksek proliferatif kapasiteye sahiptir.Böylece hücrelerinizi bu tripsin işlemine adapte edebilirsiniz. Buradaki sorun, hücrelerin farklı davranışlar sergilemesi ve çok daha hızlı bölünmeleridir. Bir diğer risk ise, bu çok yüksek bölünme süreci nedeniyle bazı kromozomal anomalilerin ortaya çıkabilme ihtimalidir.Yani, ization işleminin çoğu proliferatif hücre için kültürdeki hücrelerin seçilmesine neden olabileceğini söylüyorsunuz. Doğru. Diğer hücrelere göre muhtemelen daha yüksek hayatta kalma oranları ve daha aktif bir yapı. Dolayısıyla proliferasyondan sonra, temel olarak tripsinle yapılan proliferasyon sonrası kültür, birkaç pasajdan sonra bu farklı özelliklere sahip farklı bir kültüre dönüşüyor.Bu nedenle, tamamen aynı olup olmadıklarını belirlemek zordur. Eğer testi, alışılagelmiş testi yaparsanız, örneğin OC4, nano1 60 SC4 C, C3 gibi uç farklılaşmış hücrelerin düzenli markerlarını kontrol ederseniz, tüm bu moleküller hâlâ eksprese ediliyor olabilir. Eğer TER oluşumu gerçekleştirirseniz, bu hücreler hâlâ farklılaşabilir ve normal hücreler gibi oluşabilirler.Karyotype'a baktığınızda bazı anomaliler görebilirsiniz ancak karyotype hala normal olabilir. Selektif avantaj, sadece karyotype yaparak göremediğiniz bir mutasyondan kaynaklanıyor olabilir. Bu nedenle, çok daha hızlı büyümeleri durumun tek başına biraz daha kötü olduğunu düşündürür.Ve eğer bu hücreleri bir noktada transplantasyon için kullanmak istiyorsak, kesinlikle bu tip hücreleri kullanmazdım. Tamam. Peki, hücre pasajları için bu tekniğin kullanılmasındaki temel teknik sorunların neler olduğunu bana anlatmak ister misiniz? Yani S kullanımındaki sorunları, evet.Sadece biraz daha uzun sürüyor ve ayrıca hücreler o kadar hızlı çoğalmadığı için, deney yapabilecek kadar yüksek sayıda hücre elde etmek çok daha uzun zaman alıyor. Bu yüzden, daha az pratik olduğunu söyleyebilirim. Deneyinizin amaçları hakkında bana birkaç kelimeyle bilgi vermek ister misiniz?CS hücreleri nasıl kullanılır? Tamam, buradaki ana projem, insan AB kök hücrelerinden endotel hücreleri elde etmek. Buradaki temel fikir ise kan üretebilmek.Doku biyomühendisliği laboratuvarlarıyla yoğun bir şekilde çalışıyoruz ve hedeflerinden biri in vitro doku üretmek. Ancak bunun önündeki sınırlamalardan biri, bu dokuların içinden geçen kan damarlarının eksikliğidir. Eğer bu dokuya endotel hücreleri getirebilir veya yerleştirebilirsek, dokunun daha iyi büyümesini sağlayabiliriz.Endotel hücreleri için soğuk kan veya basınçlı kan gibi bilinen az sayıda hücre kaynağı vardır, ancak insan kulakları gibi başka bir hücre kaynağına sahip olmak ilgi çekici olacaktır. Buradaki avantaj, insan kulaklarının neredeyse sonsuz şekilde genişletilebilmesi nedeniyle bu hücreleri modifiye edebilmeniz, bazı indüklenebilir sistemler kurabilmeniz ve bunu kullanabilmenizdir. Böylece nihai ürününüzde, yani bu durumdaki materyal hücrelerinizde bunu kullanabilirsiniz.

propagation-of-human-embryonic-stem-es-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Insan embriyonik kök hücrelerin kendi kendini yenilemek ve vücudun tüm hücre tipleri içine ayırt yeteneği ve geliştirme ve hastalık temel sorulara yanıt için bir araştırma aracı olarak hem tıbbi uygulamalar için çok ümit vericidir. Burada, embriyoların iç hücre kütlesinden immunosurgical izolasyonu ile insan embriyonik kök hücrelerin derivasyon için bir özlü, adım adım protokolü sağlar.

Immunosurgery İnsan Embriyonik Kök Hücreleri türetilmesi

ESC farklılaşması, hücre türüne özgü yapısı değişiklikleri ve kromatin bileşimi ile çakışmaktadır. Bu değişikliklerin tespiti stemcellness ve hücre farklılaşması tanımlamak mekanizmaları içine değerli bilgiler sağlar. Kromatin immunoprecipitation (ChIP) kök hücre farklılaşması altında yatan moleküler mekanizmaları incelemek için değerli bir yöntem temsil eder.

İnsan Embriyonik Kök Hücre Kromatin Immunoprecipitation

Bu video, besleyici, hücre koşullarda ve ne kadar besleyici sürekli geçit hESC hücre koşulları, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) büyümesini nasıl koruyacağınızı gösteriyor. HESC, Onay pluripotency immünofloresan mikroskobu ile besleyici, hücre koşullarda yetiştirilen da gösterilmiştir. 3 Bölüm...

Matrigel MEFS Matrigel 3: Matrigel üzerine gelen Pasajlanması hESC

Belirli hücrelerin içine hESC Yönetmen farklılaşma, rejeneratif tıp alanında büyük ilgi yarattı. Biz belirlemek için bir özlü, adım-adım...

Teratom Oluşumu İnsan Embriyonik Kök Hücre Kader Haritalama

Genetik modifikasyon alanında son gelişmelere rağmen, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) aktarılmasının kaprisli bir süreç olmaya devam etmektedir. Bildiğimiz kadarıyla, insan kaynaklı pluripotent kök hücreler (iPSCs) transfekte etmek için sistematik ve etkili bir yöntem bildirilmemiştir. Burada, biz verimli transfekte ve insan iPSCs nucleofect sağlam protokoller açıklanmaktadır.

İnsan İsteyerek Pluripotent Kök Hücreler transfekte ve Nucleofecting

Biz insan nöronal atalarıdır ve sinir onarımı için gelişmekte olan MSS nöronal hücre tipleri büyük bir arz türetme sağlayan küçük moleküller ile tanımlanan koşullar altında tutulan pluripotent insan embriyonik kök hücreleri doğrudan neuroblasts indüksiyonu için bir protokol kurduk.

Küçük Molekül İndüksiyon Pluripotent İnsan Embriyonik Kök Hücreleri İnsan Nöronal atalarıdır ve Nöronlar Verimli türetilmesi

Tek hücre gen sentezleme tahlili kök hücre heterojeniteler anlamak için gereklidir.

Kantitatif RT-PCR ile Bireysel İnsan Embriyonik Kök Hücreleri profilleme

Muhabir hücre çizgileri, görselleştirmek etiket ve heterojen popülasyonlar ilgi hücreleri izole etmek için bir araç sunmaktadır. Bununla birlikte, hedef gen, insan embriyonik kök hücreleri alışılmış homolog rekombinasyon kullanılarak son derece verimsizdir. Bu yazıda, çinko-parmak nukleaz gelişmiş homolog rekombinasyon kullanarak EGFP ile CNS Ortabeyin özel transkripsiyon faktörü PITX3 odağı hedefleme açıklar.

İnsan Embriyonik Kök Hücreleri Hedefleme Çinko parmak Nükleazlar Geliştirilmiş Gen

Burada sunulan insan embriyonik kök hücrelerinin tek hücreli kültür ve nöral progenitor hücrelere sonraki farklılaşma için bir protokoldür. Protokol basit, sağlam, ölçeklenebilir ve ilaç tarama ve rejeneratif tıp uygulamaları için uygundur.

İnsan Embriyonik Kök Hücrelerinin Tek Hücre Kültürünü Kullanarak Etkin Nöral Farklılaşma

Burada bizim laboratuvar tonlar insan embriyonik kök hücre hatları donuyor nasıl göstermektedir.

Donma İnsan ES Hücreler

Öğrenin, insan embriyonik kök hücrelerini H1 ve H9 hücre hatları kullanarak kollajenaz tekniğiyle kültürde nasıl sürdüreceğinizi ve genişleteceğinizi. Bu yöntem, kök hücre araştırmalarında güvenilir sonuçlar elde etmeyi sağlar.

İnsan Embriyonik Kök Hücre (ES) yayılması

Daha fazla video keşfet