Name: Gen tabancası Transfeksiyon Hipokampal Nöronlar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: Öğrenin, gen tabancası transfeksiyonu için hipokampal nöronları izole etme yöntemini. Bu protokol, temiz kesici kullanarak beyin dokusundan hassas hipokampus çıkarımını gösterir ve sinirbilim araştırmalarında tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

gen tabancası transfeksiyon hipokampal nöronlar

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

Gen tabancası Transfeksiyon Hipokampal Nöronlar

Merhaba, ben Kma. Brown Üniversitesi'ndeki Case Lab'da çalışıyorum. Dilimleyici aşamasını %70 etanol ile temizleyin. Plaka ekini altıya yerleştirin.Besiyerli kuyucuk plakasına yerleştirin ve 37 °C'de inkube edin; tüm beyni cımbızla orta beyin ve dördüncü ventrikül arasından tutun. Bir taraftaki hipokampusu izole edin, ardından diğer taraftaki hipokampusu izole edin. Hipokampusları bir damla PBS üzerine yerleştirin.PBS'yi aspire edin ve doku dilimleyiciyi kullanarak sagital kesitler alın. Dilimleyicileri PBS ile yıkayarak bir kaba aktarma işlemini tekrarlayın; kesitleri PBS ve besiyeri ekleyip nazikçe aspire ederek yıkayın. Kesitleri cımbız yardımıyla ayırın.Kesitleri PBS ve besiyeri ile yıkayın. Kesitleri tekrar plakaya aktarın ve yerleştirin. Kesitlerdeki besiyerini cımbız yardımıyla aspire ederek boşaltın.Gen tabancası hortumunu helyum tüpüne bağlayın. Namluyu gen tabancasına takın. Şarjörü mermilerle doldurun.Şarjörü Jing tabancasına yerleştirin. Helyum tankı atış basıncını ayarlayın. Bölümlerin üzerine EGFP kaplı boncukları püskürtün.Ve şimdi.

gene-gun-transfection-of-hippocampal-neurons

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz DNA kaplı altın mermi hazırlanması için bir metodu tanımlar ve biolistically kültürlü hipokampal dilim nöronlar transfect gibi mermi kullanımını göstermek.

Gen Tabancası İşaretleri ve Dilim Kültür Nöronlar Biyolistik Transfeksiyon hazırlanması

Organel ticareti dinamiklerini inceleyerek canlı hücre görüntüleme özellikle yardımcı programı. Burada geniş alan floresan mikroskobu kullanarak kültürlü nöronların yoğun çekirdekli veziküller canlı görüntüleme için bir protokol. Bu protokol, esnek ve diğer organeller gibi mitokondri gibi görüntü adapte edilebilir, endosomes ve peroksizomlara.

İlköğretim Kültür Hipokampal Nöronlar Yoğun çekirdekli veziküller Canlı Görüntüleme

Bu protokol, elektroporasyon ve kültür fare ve kortikal hipokampal nöronlar aracılığıyla transfect incelemek için gerekli adımları özetliyor. Kısa vadeli kültürleri, uzun vadeli kültürler sinaptogenez ve dendritik omurga analiz çalışmaları için kullanılabilir akson akıbet ve rehberlik çalışmaları için kullanılıyor olabilir.

Embriyonik Fare Hipokampal ve Kortikal nöronlar primer Nucleofection ve Kültür

Kaynak: Keener, D. G., et al. Fare Hipokampal Uyarıcı ve Sınıfa Özgü İnhibitör Nöronların Farklı Organotipik Dilim Kültüründe Tek Hücreli Elektroporasyon. J. Vis. Uzm. (2020).Bu video, fare hipokampal dilim kültürleri içindeki nöronlara plazmit DNA'yı sokmak için tek hücreli elektroporasyon sürecini göstermektedir. Prosedür, nöronal zarı geçici olarak geçirgen geçirgen hale getirmek ve gen transferini kolaylaştırmak için hassas pipet konumlandırma, basınç ayarlamaları ve elektroporasyon...

Fare Hipokampal Dilim Kültürlerinde Tek Hücreli Elektroporasyon Yoluyla Gen İfadesi

Kaynak: Denaxa, M., el al., Kemogenetik Olarak Tasarlanmış Kortikal İnternöron Progenitörlerinin Erken Doğum Sonrası Fare Beyinlerine Nakli. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, ilgilenilen geni taşıyan bir plazmit vektörünün embriyonik bir beyin dilimindeki internöron progenitörlerine enjekte edilmesi ve ardından plazmit girişi ve gen ekspresyonu için elektroporasyon prosedürünü göstermektedir. Bu modifiye edilmiş progenitörler daha sonra beyin bozukluklarını tedavi etmek için kullanılabilir.

Fare Kortikal İnternöron Progenitörlerinde Agaroz Gömülü Elektroporasyon Destekli Gen Transferi

Kalsiyum fosfat çökeltme kültürlenmiş hücrelerin transfeksiyonu için uygun ve ekonomik bir yöntemdir. Optimizasyonu ile, primer nöronlar gibi sert-transfect hücreleri üzerinde bu yöntemi kullanmak mümkündür. Burada astroglial hücreleri ile kültürlenmiş hipokampal nöronlar kalsiyum fosfat transfeksiyonu için, detaylı bir protokol açıklar.

Primer hipokampal nöronlar kalsiyum fosfat transfeksiyonu

Organotipik beyin dilimi preparatlarındaki son gelişmeler, bunların biyoteknolojik uygulamalar için kullanılmasına izin vermiştir. Organotipik dilimler, fonksiyonel sinaptik bağlantılar da dahil olmak üzere in vivo biyolojinin yerel yapısal özelliklerini korur. Burada, bu dilimleri etiketlemek ve genetik olarak manipüle etmek için bölgesel seçici bir biyolistik dağıtım yöntemi sunuyoruz.

Regioseçici Biolistik Modifiye Gen Tabancası kullanarak Organotipik Beyin Dilimleri Hedefleme

Sunulan işte kültür için değiştirilmiş silindir tüp yöntemi ve hassas photoetched coverslips üzerinde yeniden konumlandırma ile birçok hafta boyunca zaman zaman yüksek çözünürlüklü görüntüleme kemirgen beynin dilimler. Nöronal canlılığı ve dilim Morfoloji korunur. Sağlanan virüsler hücre tipi için belirli ifade kullanarak bu tamamen kapalı sistem uygulamaları.

Tam yerelleştirilmiş ve tekrarlayan aralıklı görüntüleme sırasında beyin dilimler halinde kapalı bir sistemi uzun vadeli kültürü için değiştirilmiş Roller tüp yöntemi

Burada sunulan, çeşitli in vitro hipokampal dilim kültürü çağlarında hem uyarıcı hem de inhibitör nöronlarda genler sağlayabilen tek hücreli elektroporasyon için bir protokoldür. Yaklaşımımız, hücre-otonom ve hücreler arası fonksiyonları incelemek için kullanılabilecek tek tek hücrelerdeki genlerin kesin ve verimli bir şekilde ifade edilmesini sağlar.

Fare Hipokampal Uyarıcı ve Sınıfa Özgü inhibitör Nöronların Farklı Organotipik Dilim Kültürü boyunca Tek Hücreli Elektroporasyon

Bu teknik, bir insan onkogen kodlama çoğaltma kusurlu retroviral stokları hazırlamak için etkin bir şekilde gösteriyor ve daha sonra fare modeli myeloproliferatif hastalığı indüksiyonu için kullanılır.

293T hücreleri geçici Transfeksiyon Çoğaltma-Arızalı Retrovirus Üretimi

Öğrenin, gen tabancası transfeksiyonu için hipokampal nöronları izole etme yöntemini. Bu protokol, temiz kesici kullanarak beyin dokusundan hassas hipokampus çıkarımını gösterir ve sinirbilim araştırmalarında tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

Gen tabancası Transfeksiyon Hipokampal Nöronlar

Daha fazla video keşfet