Name: Yetişkin Zebra balığı İç Kulak Duyu Epiteli Brüt ve Güzel Diseksiyon ( Danio rerio) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-08T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Öğrenin yetişkin Danio rerio iç kulak duyu epiteli brüt ve ince diseksiyon tekniklerini. Bu yöntem saç hücresi rejenerasyonu ve gelişimsel biyoloji araştırmalarında kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, Ulusal İnsan Genomu Araştırma Enstitüsü, Ulusal Sağlık Enstitüleri İntramural Araştırma Programı tarafından desteklenmiştir.

Bölüm 1: doku hazırlanması <ol><li> Yetişkin zebrafish Euthanize (Etil 3-aminobenzoate methanesulfonate tuz,% 0.03) MS-222 tamponlu. </li><li> Balık başını kesmek. Alt çene kesilmiş, ventral yüzü diseksiyon pad üzerinde kafa yerleştirin ve böcek iğneli doku hareketsiz. Kafatası ventral yumuşak doku çıkarın ve bir diseksiyon mikroskobu altında ince cımbız bir çift ile kafatası kapsül ventral kısmı açık çatlamak. </li><li> 4 ° C gecede paraformaldehid balık kafası (% 4) sabitleyin. </li><li> Her seferinde 3 kez, 5 dakika (Fosfat 1X, Tuzlu Tamponlu) PBS içinde sabit balık kafası durulayın. </li></ol> Bölüm 2: iç kulak Brüt diseksiyon <ol><li> Ventral yüzü yukarı diseksiyon pad üzerinde balık kafası yerleştirin. Böcek iğneli hareketsiz. Tüm aşağıdaki adımları diseksiyon mikroskobu altında yürütülmektedir. </li><li> Ince cımbız, bir çift ile, kafatası kemiğinin iç kulağın üzerine çıkarın ve sonra iç kulak dokular dikkatle çekin: saccules, lagenae ve utricles. Kesecik ve lagena birbirine sıkıca birbirine eklemek ve böylece çekin kesecik (Kesecik ve lagena anterior), diseksiyon sırasında diğer ucunu organları koparılmış olması çok muhtemeldir. </li><li> PBS (1X) iç kulak dokuları koyun. Daha fazla ince diseksiyon gerekiyorsa, PBS (1X) ile doku 2-3 kez yıkayın ve diğer deneyler, örneğin cryosections için kullanılabilir. </li></ol> Bölüm 3: iç kulak duyu epitel Güzel diseksiyon <ol><li> PBS (1X) bir damla temiz bir cam slayt üzerinde ince diseksiyon yapılmalıdır. </li><li> Utricular otolit kesecik iki çift ince cımbız ile çıkarın ve eğer istenirse, ince cımbız bir çift ve bir iğne bıçağı ile keserek olmayan duyu epitel doku ve epitel innervasyon. </li><li> Sakküler ve lagenar epitel ayıran tüm Kesecik mümkün olduğunca sağlam tutmak için çalışırken önce lagenar otolit çıkarın. PBS ventral yüzü yukarı açılan doku yerleştirin. Iğne Kesecik ve lagena arasında dikkatli bir şekilde kesmek için bıçak kullanın. Eğer istenirse, aşırı olmayan duyu epitel doku ve ince cımbız ve iğne bıçağı ile innvervation kesin. </li></ol> Bölüm 4: duyu epitel saç hücrelerinin Floresan boyama <ol><li> PBT (1XPBS ve% 1 Triton X-100) ile 3 kez, 5 dakika, her zaman için duyusal epitelde durulayın. </li><li> Ile epitel inkübe fluophore Phalloidin (örneğin Alexa Un 488 Phalloidin, 1:1,000 seyreltme) etiketli oda sıcaklığında 30 dakika. </li><li> 3 kez, 10 dakika her zaman için PBT duyusal epitelde durulayın. </li><li> Epitelde orta montaj bir slayt üzerine monte edin ve lekeli doku uygun dalga boyu filtreler ile floresan mikroskop altında kontrol edin. </li><li> Başarılı diseksiyon ve boyama sonra, sağlam, güçlü bir saç hücresi paket boyası ile epitel (Şekil 1) mikroskop altında görülebilir. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1211/fig1.png" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Sakküler duyu epitel Saç hücreleri Alexa Un 488 Phalloidin (Yeşil) ile boyandı. Doku örneği yazıda da belirtildiği gibi disseke ve boyandı. Birçok resim, farklı pozisyonlarda örnek alınan ve Adobe Photoshop 7.0 ile birlikte kiremitli. Ölçek çubuğu = 150μm.

Bu protokol, biz bize duyu epitel hücre ve hücre içi eğitim için doku örneği hazırlamak için yetişkin zebrafish, iç kulak duyu epiteli, kaba ve ince diseksiyon nitelendirdi. Başarılı bir diseksiyon, ilk adım, fiksasyon yürütmek için çok önemlidir. Eski çözüm diseksiyonu sırasında ele sert dokuların altında fiksasyon neden olacaktır, çünkü her zaman taze hazırlanmış paraformaldehid çözüm emin olun. Ancak, diseksiyonu sonra immün / histolojik boyama sonuçları ile müdahale edecektir, çünkü, çok...

<table><tbody><tr><td>MS222 (Etil 3-aminobenzoat metansülfonat tuzu)</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5040</td><td></td></tr><tr><td>PBS (Fosfat tamponlu salin, 10X)</td><td>Reaktif</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>46-013-CM</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-6148</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 falloidin</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>A12379</td><td></td></tr><tr><td>DAPI içeren VECTASHIELD Sert Set Kapatma Ortamı</td><td>Reaktif</td><td>Vector Laboratories</td><td>H-1500</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>Mikroskop</td><td>Nikon Instruments</td><td>SMZ1000</td><td></td></tr><tr><td>Böcek iğneleri</td><td>Araç</td><td>Fine Science Tools</td><td>26000-40</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Araç</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5880</td><td></td></tr><tr><td>Pens</td><td>Araç</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5045</td><td></td></tr><tr><td>İğne uçlu bıçak</td><td>Araç</td><td>Sharpoint</td><td>78-6810</td><td></td></tr><tr><td>Floresan mikroskop</td><td>Mikroskop</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td>Axiovert 200M</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon pedi</td><td>Araç</td><td>eNasco</td><td>SB07840M</td><td></td></tr><tr><td>Zebrafish</td><td>Hayvan</td><td>Çeşitli</td><td>n/a</td><td></td></tr></tbody></table>

yetişkin zebra balığı İç kulak duyu epiteli brüt ve güzel diseksiyon ( danio rerio)

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Nörosensoryel epitel iç kulak, işitme ve denge fonksiyonları için önemli yapılardır. Bu nedenle, esas olarak iki tip hücre oluşan epitel, hücresel ve moleküler özelliklerini anlamak için önemlidir: saç hücreleri (HCS) ve destekleyen hücrelerin (SC&#39;ler). Burada epitelyal yapılar çok incelenen bütün omurgalıların korunmuş çünkü yetişkin zebrafish sadece iç kulak duyu epitel çalışmak için seçer, ancak aynı zamanda yetişkin zebrafish HCS, memelilerde doğumdan kısa bir süre sonra kaybetmek bir yeteneği yeniden mümkün çünkü. Biz yetişkin zebrafish iç kulak HC kaybının bir sonucu olarak insan İşitme / denge açıklarının klinik tedavisi için yararlı olabilir yetişkin omurgalılarda iç kulak HC rejenerasyon mekanizmalarının çalışması için bir model sistem olarak kullanabilirsiniz. Burada yetişkin zebrafish iç kulak duyu epitel kaba ve ince diseksiyonları nasıl göstermektedir. Brüt diseksiyonu, iç kulak çevresindeki dokuları temizler ve doku kesitlerinde, bize duyu epitel ayrıntılı yapısını incelemek için olanak hazırlamak için yararlı olur. Her bir epitel ince diseksiyon olmayan duyusal-epitel dokuların temizler ve bütün montaj epitel örnekleri kolayca tüm epitel heterojenite incelemek için bize sağlar.

Yetişkin zebrafish iç kulak duyu epitel yetişkin omurgalıların saç hücre yenilenmesini mekanizmaları anlamak için iyi bir model sistem. Bu protokol, hücresel ve hücre içi düzeyde yenileyici olaylar çalışmak için doku örnekleri elde edebilirsiniz epitel ince diseksiyon, göstermektedir.

Yetişkin Zebra balığı İç Kulak Duyu Epiteli Brüt ve Güzel Diseksiyon ( Danio rerio)

İç kulaktaki nörosensör epiteller, işitme ve denge fonksiyonları için kritik yapılardır. Bu nedenle, ...'yı anlamak önemlidir.

Zebrafish'lerin iç kulağında; utrikulus, sakülüs ve lagena olmak üzere kese benzeri üç çift uç organ bulunur. Utrikulus en anterior konumda yer alırken, sakülüs ve lagena birbirine sıkıca bağlıdır ve utrikulusa göre posterior konumda yer alırlar. Kaba diseksiyondan sonra sakülüs ve lagena bağlı kalır ve sonraki ince diseksiyonda her bir uç organda taş benzeri yapıda olan otolit kolayca görülebilir. Sakülüs ve lagena, ventral taraftan kesilerek birbirinden ayrılır.Otolitler çıkarılır ve her üç uç organdan da duyusal epitel dokularını elde etmek için duyusal olmayan epitel dokular budanır. Merhaba, ben Ulusal İnsan Genom Araştırmaları Enstitüsü'nün gelişimsel genomik bölümündeki Sean Burgess Laboratuvarı'ndan Jean Leon. Bugün size, yetişkin zebra balığından iç kulak duyusal epitellerinin hassas ve kaba diseksiyonu için uygulanan bir prosedürü göstereceğiz.Laboratuvarımızda iç kulak duyusal epitellerindeki gen ekspresyonunu incelemek için bu işlemi kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım. Diseksiyona başlamak için, yetişkin zebra balığını tamponlanmış MS 222 %0,03 ile ötanize edin, balığın başını kesin ve ardından alt çeneyi kesin.Ardından, başı ventral tarafı yukarı gelecek şekilde diseksiy

gross-fine-dissection-inner-ear-sensory-epithelia-adult-zebrafish

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol, yetişkin zebrafish organların tanımlanması ve diseksiyon için bir prosedür açıklanmıştır.

Yetişkin Zebra balığı Organları diseksiyonu

Bu makalede, retina pigment epitel birini üç gün postfertilization embriyolar bağlı olan ve olmayan zebrafish retina microdissect bir yaklaşım açıklanmıştır.

Zebra balığı Embriyonik Göz Dokular, Mikrodisseksiyon

Birden fazla gelişim evreleri zebrafish kalp diseksiyonu ve izolasyon için açık, standart bir yöntem açıklanmıştır. Annotation ve miktar teknikler de tartışılmaktadır.

Larvaların Kalp Diseksiyon, Çocuk ve Yetişkin Zebra balığı, Danio rerio</em

Bu videonun amacı yetişkin zebrafish iç kulak organları sağlıklı, bozulmamış saç hücreleri elde etmek ve daha sonra kendi voltaj kapılı kanallar biyofiziksel özelliklerini karakterize yönelik yama klemp çalışmaları için bunları kullanarak prosedürleri göstermektir.

İç Kulak Saç Hücreleri Patch Clamp Kayıtlar İzole Zebrafish gelen

Bu videoda, kortikal lens morfolojisini ve lens sütürlerinin yapısal bütünlüğünü analiz etmek için yetişkin ve larva zebra balığı lenslerini incelemek için geliştirilen protokol açıklanmaktadır.

Göz Lensi Diseksiyonu: Zebra Balığı Lens Morfolojisini Gözlemlemek İçin Bir Teknik

Nörolojik ve non-nörolojik hastalıkların çok zebra balığı model yetişkin balık ziyade embriyo / larva incelenir için, erişkin zebrabalıkları hastalık modellerinde uygulanabilen bir nicel yan hat rejeneratif deneyi geliştirilmiştir. Deney 1) neuromast ve 2) tek tek saç hücre düzeyde çözünürlüğü dahil.

Yetişkin Zebra balığı Lateral Hat Rejenerasyon için bir Deneyi

Büyük ölçekli 2D elektron mikroskobu (EM) veya nanotomi, nano ölçekli çözünürlüklü EM'nin doku çapında uygulamasıdır. Burada, zebra balığı larva beynini sağlıkta ve non-invaziv beyin hasarı üzerine araştırmak için uygulanan nanotomi için evrensel bir yöntemi açıklıyoruz.

Sağlıklı ve Yaralı Zebra balığı Beyin büyük ölçekli Tarama Transmisyon Elektron Mikroskobu (Nanotomy)

Burada, larva Zebra balığı ışık çatışmaya electroretinogram tepkiler ölçüm kolaylaştırır bir iletişim kuralı mevcut. Bir roman koni şeklindeki sünger-uç elektrot larva Zebra balığı electroretinogram ERG güvenilir sonuçlar ve daha düşük maliyet ile elde etmek için daha kolay kullanılmasını görsel geliştirme çalışma yapmak yardımcı olabilir.

Larva A roman koni şeklindeki sünger-uç elektrot kullanarak Zebra balığı Electroretinogram kayıt

Lazer ablasyon biyolojik sistemlerde rejenerasyon eğitimi için yaygın olarak uygulanan bir teknolojidir. Sunulan protokol, lazer ablasyon için standart bir lazer tarama konfokal mikroskobu ve zebrabalığı lateral hattında ki internöromast hücrelerinin yenilenmesinin daha sonra zaman atlamalı görüntülemesini açıklar.

Zebrabalığı İnternöromast Hücrelerinde Konfokal Mikroskop Tabanlı Lazer Ablasyon ve Rejenerasyon Tonu

Yetişkin zebra balıklarında mekanik bir beyin hasarı modeli, yüksek rejeneratif kapasitelerini düzenleyen moleküler mekanizmaları araştırmak için tanımlanmıştır. Yöntem, floresan immünoboyama kullanarak rejeneratif yanıtları değerlendirmek için birden fazla küçük balık türünün optik tektumunda bir bıçak yarası yaralanması oluşturmayı açıklar.

Rejeneratif Kapasitenin Karşılaştırmalı Analizi için Zebra Balığı ve Medaka Kullanan Yetişkin Optik Tektumunun Bıçak Yarası Yaralanma Modeli

Makale, retinal girdinin optik tektum büyümesini ve gelişimini nasıl etkilediğini araştırmaya yönelik ilk adım olarak canlı zebra balığı larvalarından gözlerin cerrahi olarak nasıl çıkarılacağını açıklamaktadır. Ek olarak, makale larva anesteziizasyonu, fiksasyon ve beyin diseksiyonu, ardından immünohistokimya ve konfokal görüntüleme hakkında bilgi vermektedir.

Görsel Sistemin Innervasyona Bağlı Büyümesini ve Gelişimini İncelemek için Canlı Zebra Balığı Larvalarında Göz Çıkarılması

Öğrenin yetişkin Danio rerio iç kulak duyu epiteli brüt ve ince diseksiyon tekniklerini. Bu yöntem saç hücresi rejenerasyonu ve gelişimsel biyoloji araştırmalarında kullanılır.

Yetişkin Zebra balığı İç Kulak Duyu Epiteli Brüt ve Güzel Diseksiyon ( Danio rerio)

Daha fazla video keşfet