Name: Zebra balığı Beyin Ventrikül Enjeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-04-06T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: Öğrenin, zebra balığı embriyolarında beyin ventriküllerini görselleştirmek için floresan boya enjeksiyonu yöntemini. Bu teknik, nöroepitel morfolojisini ve beyin gelişimini canlı görüntülemede araştırmacılara güvenilir bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, laboratuvar bu tekniği geliştirdi Laura Anne Lowery teşekkür etmek istiyorum. HS NIHMH70926 tarafından desteklenmektedir. Jennifer Gutzman CSBi / Merck, doktora sonrası burs tarafından desteklenmiştir.

Protokol Bölüm 1: mikroenjeksiyon için hazırlık <ol><li> Sutter Aletleri iğne çektirmenin kullanarak kılcal iğneler çekerek enjeksiyon için hazırlayın. </li><li> (Teksas Kırmızı Dextran&#39;ın gibi) floresan boya ile iğne doldurun. </li><li> Iğne mikromanipülatör ve mikroenjeksiyon cihazları monte edin. </li><li> Eğimli bir ipucu oluşturmak için uygun büyüklükte iğne bir açıyla kesin. </li><li> Damla boyutu ölçün ve petrol enjeksiyon başına 1-2nl arasında olduğunu kontrol edin. </li></ol> Bölüm 2: embriyoların hazırlanması <ol><li> Embriyoların ilgi aşamasında daha 30 dakika önce enjekte edilir. Örneğin, 24 saat sonra döllenme (hpf) ventriküllerin çalışma, 23.5 hpf embriyolar enjekte edilir. Sahne Kimmel ve ark göre, embriyolar. (4). </li><li> Stereomikroskop altında, forseps kullanarak embriyoların dikkatle koryon çıkarın. </li><li> % 1 agaroz ile kaplı plastik tabak, plastik 1-200 ul pipet ucu ile agaroz delik karıştırmak. Forseps kullanarak deliklerden agaroz fişler dikkatlice çıkarın. </li><li> Agaroz delikli çanak içine embriyolar embriyo medya aktarın. </li><li> Medya ekle tricaine Westerfield (5) göre yapılan embriyoların uyutmak ve deneme sırasında hareket etmesini önlemek için. </li><li> Deliğin içine embriyo kuyruk hafifçe aşağı gelecek şekilde yerleştirin ve böylece enjeksiyon cihazı embriyonun arka tarafında yönlendirmek bu. </li></ol> Bölüm 3: beyin ventrikül enjekte <ol><li> Beyin ventrikül enjekte etmek, iğne ucu, aynı alanda yüksek güç embriyo olarak böylece mikromanipülasyon kurulum düzenliyoruz. </li><li> Dikkatlice aşağıdaki beyin dokusu vurmadan r0/r1 hingepoint sadece arka Beyin ince roofplate iğne koymak. </li><li> Enjekte ventriküller tamamen doldurmak için yeterli boya. Embriyo aşamasına bağlı olarak, ventrikül boşluğu doldurmak için çeşitli enjeksiyonlar sürebilir. </li></ol> Bölüm 4: Görüntüleme <ol><li> Kullanarak, temiz bir% 1 agaroz kaplı çanak çanak yeni delikler karıştırmak, fişlerin kaldırmak ve embriyoların uyutmak ve hareket etmesini önlemek için tricaine ekleyin. </li><li> Ventrikül enjekte embriyo kuyruk, dorsal bir görüntü için delik ve konuma yerleştirin. </li><li> Iletilen ışık kullanarak bir resim çekin. </li><li> EMBRİYO VEYA MİKROSKOBU HAREKET çok kritik. </li><li> Mikroskop ayarları değiştirin ve floresan ışığı ile bir görüntü almak. </li><li> Iletilen ışık ve floresan ışığı ile yanal görüntüleri çekmek için embriyo konumlandırın. </li><li> Photoshop görüntü işleme için TIFF dosyaları olarak kaydedin. </li></ol> Bölüm 5: Görüntü İşleme <ol><li> Photoshop görüntüleri işlemek için, iletilen ışık ve floresan ışığı görüntüleri, aynı pozisyonda alınan aynı embriyo açın. Tüm ayarları her bir resim için aynı olduğundan emin olun. </li><li> Floresan görüntü iletilen ışık görüntü üzerine sürükleyin ve onları tam olarak hizaya. </li><li> Floresan görüntü seçildiğinde, &quot;Resim&quot;, &quot;Ayarlamalar, seçme&quot; ve ardından &quot;rengini değiştirme&quot; ve beyaz siyah arka plan değiştirmek. </li><li> Floresan görüntüler tekdüze renkli görünüyor kadar sağ &quot;rengini değiştirin&quot; penceresinde &quot;bulanıklık&quot; faktörü ayarlamak. </li><li> &quot;Katmanlar&quot; penceresinde, bindirme görüntüleri izlemek için &quot;Multiply&quot; seçeneğini seçin. Ventrikül alan görüntü tam olarak iletilen ışık görüntü uyumlu olmalıdır. </li><li> Bu dosya ve herhangi bir diğer görüntüler için tekrar kaydedin. </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar / Sonuç Yanlış enjeksiyon görüntülerin bir örnek EH içinde gösterilmiştir Uygun ventrikül enjeksiyon görüntüleri, 1 panelleri AD Şekil gösterilmektedir. Uygun enjeksiyonları, keskin kenarları olmayan diffüz boya var. Iğne çok uzak ventrikül içine yerleştirilir ve beyin dokusu vurur altında olduğunda oluşur yanlış enjeksiyon, ventrikül alanı dışında görünür boya ve yumurta sarısında neden olabilir. <img src="/files/ftp_upload/1218/1218figure1.png" alt="Şekil 1" width="600" height="742" /> Şekil 1. 25 hpf vahşi tip embriyoların ventrikül enjeksiyonları Doğru enjeksiyon yöntemi (AD) ve (EH) yanlış enjeksiyon yöntemi örnek olarak gösterilmiştir. (A, E) Dorsal aydınlık görüntüleri (B, F) ve floresan ve aydınlık görüntülerin gösterildiği hem doğru ve yanlış enjeksiyon yöntemleri için kaplama (C, G) ilgili floresan görüntüler. Oklar, yanlış bir ventrikül enjeksiyon (&quot;Sorun Giderme&quot; bölümüne bakın) nedeniyle beyin ventrikül mekanın ötesinde boya gitti bölgelerde gösterir. Anterior tüm resimlerin sol. Sorun Giderme: <table border="1"><tbody><tr style="font-weight:bold; font-size:16px;"><td> Sorun </td&gt; <td> Neden </td><td> Çare </td></tr><tr><td> Iğne ile embriyo Ezici. </td><td> Iğne çok künt veya ucu çok büyük. </td><td> Yeni bir iğne ile başlayın ve bu kadar geri bozmazlar. Konik sizin iğne gibi keskin bir şırınga iğnesi yapmak. </td></tr><tr><td> Boya (bkz. Şekil 1E-H), embriyo ve yumurta sarısı boyunca. </td><td> İğne doku geçti ve ventrikül boşluk kalmadı. </td><td> Iğne yeteri kadar keskin olmayabilir, ponksiyon hızını kontrol etmek mümkün değildir. </td></tr><tr><td> Boya önbeyin çok zayıf ya da değildir. </td><td> Enjeksiyon için yeterince yüksek bir basınç kullanmayın, ya da iğne kadar boya enjekte edildiğinde önbeyin ulaşmak için yeterli ön değildi. </td><td> Enjeksiyon basıncı artırın ya da enjeksiyon sırasında iğne biraz daha ön yerleştirin. Daha ayrıntılı önbeyin gerekli ise orta beyin arka beyin sınır boyunca iğne koyabilirsiniz. Ayrıca, sadece ileri görüntüleme önce diffüz boya için biraz bekleyebilir. </td></tr><tr><td> Fluoresan görüntüler Photoshop renk değişiminden sonra kenarlarında koyu. </td><td> Renk değiştirme penceresinde &quot;bulanıklık&quot; ayarını değiştirmek için unuttum. </td><td> &quot;Bulanık&quot; renk değiştirme penceresi doğru şekilde hareket ettirin. </td></tr><tr><td> Iğne Beyin roofplate değil. </td><td> Iğne düzgün kesilmiş değildir. </td><td> Yeni bir iğne olun. Enjeksiyon yapıyoruz, mat gibi çeşitli iğneler gerekebilir. </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Gutzman, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Formation+of+the+zebrafish+midbrain-hindbrain+boundary+constriction+requires+laminin-dependent+basal+constriction%5BTitle%5D)+AND+%22Mech.+Dev%22%5BJournal%5D)">Formation of the zebrafish midbrain-hindbrain boundary constriction requires laminin-dependent basal constriction.</a> Mech. Dev. 125, 974-983 (2008).</li>
<li>Lowery, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+Classification+of+Zebrafish+Brain+Morphology+Mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Anat.+Rec.+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Characterization and Classification of Zebrafish Brain Morphology Mutants.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 292, 94-106 (2009).</li>
<li>Lowery, L. A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead%2Fatp1a1a.1+gene+products%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li>
<li>Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li>
<li>Westerfield, M. The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish. , University of Oregon Press. (1995).</li>
</ol>

Bu video floresan boya (Texas-Kırmızı Dextran) Zebra balığı beyin ventriküller gelişmekte içine enjekte etmek için nasıl gösterilmektedir. Bu yöntem beynin ventrikül alanı çevreleyen neuroepithelium aksine görselleştirmek için kullanılan ve ventrikül alanı şekline yanı sıra çevredeki beyin dokusu şeklini belirlemek için son derece yararlı. Bu zaman içinde canlı embriyo beyin ventrikül oluşumu ve beyin morfolojilerinden süreci daha iyi anlamak için bize izin verir. Bu teknik, beyin ventrikül oluşumu kusurları okuyan ve i...

<table><tbody><tr><td>Penset</td><td>Araç</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Kılcal Tüpler (iğneler)</td><td>Araçlar</td><td>Frederick Haer and Co.</td><td>30-30-1</td><td></td></tr><tr><td>Agaroz Kaplı Kaplar</td><td>Araçlar</td><td>Agaroz (Seakem GTG; Lonza) Plakaları (Corning)</td><td>Agaroz (50027) Kaplar (430166)</td><td>Enjekte ettiğiniz embriyo evresine bağlı olarak, kaptaki agarozun derinliğini yaklaşık 2-3 mm olacak şekilde ayarlayın.</td></tr><tr><td>Diseksiyon Mikroskobu</td><td>Mikroskop</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Floresan özellikli ve görüntü yakalama yazılımlı mikroskop kamerası</td><td>Araçlar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1-200 &amp;mu; pipet uçları</td><td>Araçlar</td><td>USA Scientific, Inc.</td><td>1111-0806</td><td>Bunlar, agarozdaki delikleri açmak ve embriyoların tam olarak yerleşmesini sağlamak için ideal boyuttadır.</td></tr><tr><td>Photoshop</td><td>Görüntü Analizi</td><td>Adobe</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Embriyo Loop'u</td><td>Araçlar</td><td></td><td></td><td>Bunları, cam pipet ve saç veya misina kullanarak kendiniz hazırlayıp balmumu ile mühürleyin.</td></tr><tr><td>Mikroenjektör</td><td>Araçlar</td><td>Harvard Apparatus</td><td>PL1-100</td><td></td></tr><tr><td>İğne Çıkarıcı</td><td>Araçlar</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td></td><td>Ayarlar (Isı 785, Çekme 70, Hız 40, Süre 70).</td></tr><tr><td>Mikromanipülatör</td><td>Araçlar</td><td>Narishige International</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Floresan boya Texas-Red Dekstran 70.000MW</td><td>Reaktif</td><td>Molecular Probes, Life Technologies</td><td>D1830</td><td>İstenildiği takdirde diğer molekül ağırlıkları da mevcuttur.</td></tr><tr><td>Trikain (3-aminobenzoik asit etil ester)</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-5040</td><td></td></tr><tr><td>Embriyo Medyaları</td><td>Reaktif</td><td></td><td></td><td>Westerfield'e göre (5)</td></tr></tbody></table>

zebra balığı beyin ventrikül enjeksiyon

Zebrafish Brain Ventricle Injection

Uygun embriyonik beyin gelişimi sırasında beyin ventrikül oluşumu normal beyin fonksiyonu için gereklidir. Beyin ventriküller, beyin omurilik sıvısı ile dolu, beynin içinde son derece korunmuş boşluklar vardır. Zebra balığı olarak, nöral tüp oluşumu sonrası, beyin ventrikül oluşumu ile sonuçlanan bir sıvı ile doldurur neuroepithelium daralması ve kıvrımlarının bir dizi uğrar. Ventrikül oluşum süreci, aynı zamanda meydana gelen nöroepitelyal şekil değişiklikleri anlamak için, beyin dokusu ile karşılaştırıldığında ventrikül alanı görselleştirmek için bir yol gerekiyordu. Ancak, şeffaf zebrafish embriyoların doğası zor ventrikül uzaydan gelen doku ayırt etmek için yapar. Bu nedenle, ventrikül alan floresan boya ile doldurulmuş ve aydınlık ve floresan mikroskobu ile görüntülü bir beyin ventrikül enjeksiyon tekniği geliştirdi. Aydınlık ve floresan görüntüler daha sonra işlenmiş ve Photoshop bindirilmiş. Bu teknik, aydınlık görüntü neuroepithelium şekline göre, floresan boya ile ventrikül alanı görünüm için sağlar. Zebrafish Beyin ventrikül enjeksiyon erken larva aşamalardan 18 saat sonra döllenme ile istihdam edilebilirler. Biz yanı sıra beyin morfolojilerinden mutantlar (1-3) karakterize beyin ventrikül oluşumu ve morfolojilerinden çalışmalarımız yoğun bu tekniği kullanmıştır.

Nöral tüp oluşumu sonra neuroepithelium daraltır ve tüp embriyonik beyin ventriküller oluşturmak için embriyonik beyin omurilik sıvısı (eCSF) ile doldurur katlanabilir. Biz daha iyi, canlı embriyo nöroepitelyal şekli aksine sıvı dolu boşluk görselleştirmek için bu ventrikül enjeksiyon tekniği geliştirdi.

Zebra balığı Beyin Ventrikül Enjeksiyon

Embriyonik beyin gelişimi sırasında beyin ventriküllerinin düzgün oluşumu, normal beyin fonksiyonu için gereklidir. Beyin ventrikülleri, yüksek düzeyde korunmuş...

Bu prosedür, zebra balığı embriyolarının evrelemesi ile başlar. Embriyolar ilgili evreye ulaştığında, koriondan çıkarılırlar. Ardından, embriyoları sabitlemek için aros kaplı bir kapta pipet ucuyla delikler oluşturulur ve embriyolar kuyrukları aşağı gelecek şekilde bu deliklere nazikçe yerleştirilir.Embriyolar yerleştirildikten sonra, arka beyin yoluyla embriyonun ventrikül boşluğuna dikkatlice floresan boya enjekte edilir. Ventrikül enjeksiyonunun ardından embriyolar görüntülenir ve veriler Photoshop kullanılarak işlenir. Merhaba, ben Massachusetts, Cambridge'deki MIT'de bulunan Whitehead Biyomedikal Araştırmalar Enstitüsü'ndeki Dr. Hazel Sieve'in laboratuvarından Jennifer Gutman.Bugün size zebrafish beyin ventrikül enjeksiyonu prosedürünü göstereceğiz. Bu prosedürü, canlı zebrafishlerde beyin ventrikül oluşumunu ve nöroepitelyal morfojenezi incelemek için laboratuvarımızda kullanıyoruz. Şeffaf zebrafish embriyolarının doğası gereği, beyin ventrikül şeklini karakterize etmek zor olabilir.Bu teknik, sıvıyla dolu alanı çevreleyen dokudan ayırmak ve beyin ventrikül oluşum kusurları olabilecek mutant embriyoları karakterize etmek için yararlı ve basit bir yöntemdir. Öyleyse başlayalım. Zebrafish beyin ventrikülüne enjeksiyon hazırlığı için öncelikle enjeksiyon iğnelerini yaparak başlıyoruz.Kılcal iğneleri çekmek için bir Sutter cihazının iğne poları kullanılır. Ardından kılcal iğne, Texas red dekstrin gibi floresan bir boya ile doldurulur. Sonrasında, doldurulmuş iğne mikroenjeksiyon düzeneğindeki bir mikromanipülatöre monte edilir.İğneyi açılı bir şekilde uygun boyutta kesin. Bevel uç oluşturmak için, iğnenin damlatma boyutunu ölçün ve yağda enjeksiyon başına bir ila iki nanolitre arasında olduğundan emin olun. Bu prosedür aşamasına başlamak için, Kimmel'a göre tüm embriyolar, ilgi duyulan aşamadan 30 dakika önce enjekte edilmelidir.Örneğin, döllenmeden 24 saat sonra ventrikülleri incelemek için embriyolara döllenmeden 23,5 saat sonra enjeksiyon yapın. İlgilenilen aşamadaki embriyo stereo mikroskobun altına yerleştirilir ve koriyon, forseps kullanılarak embriyodan dikkatlice uzaklaştırılır. Ardından, %1 agar ile kaplanmış plastik bir kap kullanılarak embriyolar için bir agar tabağı hazırlanır; agar üzerindeki delikler, plastik bir 200 µL pipet ucu ile açılır.Aros tıkaçlarını deliklerden forseps kullanarak dikkatlice çıkarın. Embriyoyu ve embriyo ortamını delikli aros kabına aktarın. Embriyoyu anesteze etmek ve hareketini önlemek için ortama trica ekleyin.Deney sırasında, embriyoyu kuyruğu aşağı gelecek şekilde nazikçe deliğe yerleştirin ve enjeksiyon aparatının embriyonun posterior tarafında olacağı şekilde yönlendirin. Embriyo, agar tabağına doğru şekilde yerleştirilip yönlendirildiğine göre, beyin ventrikül enjeksiyonuna hazırız. İlk olarak, mikro-manipülasyon düzeneğini, iğne ucunun yüksek büyütmede embriyo ile aynı görüş alanında olacağı şekilde ayarlayın.İğneyi, altındaki beyin dokusuna zarar vermeden, arka beynin ince tavan plakası üzerinden R0 R1 menteşe noktasının hemen arkasına dikkatlice yerleştirin ve ventrikülleri tamamen dolduracak kadar boya enjekte edin. Embriyonun evresine bağlı olarak, ventrikül boşluğunu doldurmak için birkaç enjeksiyon gerekebilir. Embriyoya enjeksiyon yapılıp görüntüleme aşamasına gelindiğinde, embriyo için yeni bir agaroz kap hazırlanır.Temiz bir %1aros kaplı kap kullanarak, kapta delikler açın ve tıkaçları çıkarın. Embriyoyu kaba aktarın ve embriyoyu anestezi altına almak ve hareketini önlemek için trica ekleyin. Ventrikül enjeksiyonu yapılmış embriyonun kuyruğunu, dorsal görüntüleme için uygun pozisyonda olacak şekilde deliğe yerleştirin.Embriyo artık görüntüleme için hazırdır. Geçirgen ışık kullanarak bir görüntü alın. Embriyoyu veya mikroskobu hareket ettirmemek kritik öneme sahiptir.Ardından, mikroskop ayarlarını değiştirin ve floresan ışıkla bir görüntü alın. Embriyoyu, hem transmisyon ışığı hem de floresan ışıkla lateral görüntüler almak için yeniden konumlandırın. Tüm görüntüleri, Photoshop'ta görüntü işleme yapmak üzere dosya olarak kaydedin.Görüntüleri Photoshop'ta işlemek için, aynı embriyodan aynı konumda çekilmiş transmisyon ışığı ve floresan ışığı görüntülerini açın. Tüm ayarların aynı olduğundan emin olun. Her görüntü için, floresan görüntüsünü transmisyon ışığı görüntüsünün üzerine sürükleyin ve floresan görüntü seçiliyken bunları tam olarak hizalayın. Görüntü ayarlamalarını (image adjustments) seçin, ardından renk değiştirme (replace color) seçeneği ile siyah arka planı beyaza dönüştürün.Renk değiştirme penceresinde, floresan görüntü renk bakımından homojen görünene kadar bulanıklık faktörünü sağa doğru ayarlayın. Katmanlar penceresinden "multiply" (çarpma) seçeneğini seçin. Üst üste bindirilmiş görüntüleri görüntülemek için, ventrikül boşluğu görüntünüz ile iletim ışığı görüntüsü tam olarak eşleşmelidir.Bu dosyayı kaydedin ve diğer tüm görüntüler için işlemi tekrarlayın. Ventrikül enjeksiyonu doğru şekilde gerçekleştirildiyse, burada 25 saatlik post-fertilizasyon dönemine ait görüntülerde gösterildiği gibi, diffüz olmayan boyada keskin kenarlar görülmelidir; panel A parlak alan görüntüsünü, panel B floresan görüntüsünü ve panel C ise üst üste bindirilmiş (overlay) görüntüyü göstermektedir.Bindirme görüntüsünün yan görünümü Panel D'de gösterilmiştir. Öte yandan, ventrikül enjeksiyonu sırasında iğne çok derin yerleştirilirse, ventrikül boşluğunun altındaki beyin dokusuna girer ve hatalı bir enjeksiyona yol açar. Bu durum, burada gösterildiği gibi, boyanın ventrikül boşluğunun dışında ve vitellusta görünmesiyle sonuçlanır. Panel E, parlak alan görüntüsünü göstermektedir.Panel F floresan görüntüyü ve panel G üst üste bindirilmiş görüntüyü göstermektedir. Üst üste bindirilmiş görüntünün yan görünümü panel H'de gösterilmiştir. Oklar, boyanın beyin ventrikül boşluğunun ötesine geçtiği bölgeleri belirtmektedir. Bu videoda, gelişmekte olan zebrafish beyin ventriküllerine floresan boyanın nasıl enjekte edileceğini gösterdik.Bu yöntem, beyin ventrikül boşluğunu çevreleyen nöroepitelyumla kontrast oluşturacak şekilde görselleştirmek için kullanılır ve ventrikül boşluğunun şeklinin yanı verilen çevre beyin dokusunun şeklinin belirlenmesinde son derece faydalıdır. Bu teknik, canlı embriyoda beyin ventrikül oluşumu ve beyin morfogenezi sürecinin zaman içindeki gelişimini daha iyi anlamamızı sağlar. Beyin ventrikül oluşum bozukluklarını incelemek ve beyin morfogenezi mutantlarının ilk karakterizasyonunu yapmak için mükemmel bir araçtır.İşte böyle. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu videoda, biz gelişmekte olan omurgalı beyin konfokal mikroskobu ile tek bir hücre çözünürlükte canlı zebrafish embriyolar analiz edildiği bir yöntem gösteriyor. Bu, tek hücreli zebrafish embriyo enjekte ve daha sonra gelişmekte olan beyin montaj ve görüntü hangi yöntemi içerir.

Konfokal Mikroskop Zebra balığı Embriyonik Beyin Görüntüleme Canlı

Biz beyin omurilik sıvısı (BOS) toplamak ve embriyonik zebrafish beynin ventriküler sistemde BOS yoksun bir sistem oluşturmak için bir yöntem mevcut. Bu embriyonik beyin gelişimi sırasında BOS kompozisyonu ve onun ihtiyacının daha fazla inceleme için izin verir.

Zebra balığı Embriyonik Beyin Ventrikül Manuel Drenaj

Bu videoda, yetişkin zebra balıklarında ependimomglial hücrelere DNA verilmesi için bir teknik olan in vivo elektroporasyon açıklanmaktadır.

In vivo (İn canlı) Elektroporasyon: Zebra Balığını Nakletmek İçin Bölgeye Özgü Bir Yöntem

Bu video, yetişkin bir zebra balığından beynin mikrodiseksiyon tekniğini anlatıyor. Bu yöntem, daha fazla çalışılabilecek tüm beyin kaynaklı nötrosferlerin elde edilmesine yardımcı olur.

Zebra Balığı Beyin Diseksiyonu: Balık Nörobiyolojisi Tekniği

Video, nöroinflamasyonu indüklemek için zebra balığı larvalarının beyinlerine lipopolisakkaritlerin (LPS) mikroenjeksiyonunu göstermektedir. Larvalar agaroz kaplı bir tabağa yerleştirilir, iğne beyin ventriküllerine yerleştirilir ve LPS enjekte edilir. Enjekte edilen LPS, nöroinflamasyona yol açan bir bağışıklık tepkisini tetikler.

Lipopolisakkarit Enjeksiyonu ile Zebra Balığı Larvalarında Nöroinflamasyonun İndüklenmesi

Bu video, Alzheimer hastalığında görülen nöronal hasarı taklit ederek amiloid toksisitesi oluşturmak için yetişkin zebra balıklarının ön beynine monomerik amiloid peptitlerin enjekte edilmesi prosedürünü...

Amiloid Peptit Enjeksiyonu ile Zebra Balığı Beyninde Alzheimer Hastalığı Modeli Oluşturulması

Bu yazıda, morfolino antisens oligonükleotidler kullanılarak yetişkin zebrabalıkları telencephalon ventriküler hücrelerde gen ifadesinin manipülasyonu için bir yöntem ortaya koymaktadır. Biz, yetişkin omurgalı beynin fonksiyonel çalışmalar için kullanılan bir hızlı ve verimli protokolü olarak bu yöntem sunuyoruz.

Morfolino Oligonükleotidler bir Cerebroventricular Mikroenjeksiyon kullanarak Yetişkin Zebra balığı Beyin Gen İfade Mikromanipülasyon

Larva Zebrafish serebrovasküler gelişme görüntüleme açıklanmıştır. 3D görüntüleme kolaylaştırmak ve kimyasal tedaviler kullanarak serebrovasküler gelişimini değiştirme teknikleri de verilmektedir.

Görüntüleme ve Embriyonik Zebra balığı Serebrovasküler Yapıların 3D İmar

Bu yöntem, Yetişkin zebrafisinin toraks içine 0.5 − 3 μL solüsyonun enjekte edilmesine dayanır. Prosedür verimli organ zarar vermeden zebra balığı kalbin yakınlığı içine protein ve kimyasal bileşikler sunar. Yaklaşım, kalp çeşitli dokularda eksojen faktörlerin etkilerini test etmek için uygundur.

Yetişkin zebrafish kalp çalışması için intratorasik enjeksiyon

Bu protokol, yetişkin zebra balıklarının ventral diensefalonda (Dn) nörotoksik 6-hidroksidopamin (6-OHDA) ile intraserebroventriküler (ICV) enjeksiyonunu ve bir video izleme yazılımı kullanılarak analizin eşlik ettiği açık tank testi kullanılarak yüzme davranışı postlezyonunun bozulmasının ve daha sonra iyileşmesinin değerlendirilmesini açıklamaktadır.

6-Hidroksidopamin Kaynaklı Yetişkin Zebra Balığı Bazlı Parkinson Hastalığı Modelinin Lokomotor Değerlendirmesi

Bu protokol, ortaya çıkan nöroinflamatuar yanıtı ve nörotoksisiteyi incelemek için bir zebra balığı larva modelinde beyin ventriküler bölgesine lipopolisakkaritin mikroenjeksiyonunu göstermektedir.

Nöroinflamasyon ve Nörotoksisiteyi Değerlendirmek için Larva Zebra Balıklarına Lipopolisakkaritin Beyin Ventriküler Mikroenjeksiyonları

Öğrenin, zebra balığı embriyolarında beyin ventriküllerini görselleştirmek için floresan boya enjeksiyonu yöntemini. Bu teknik, nöroepitel morfolojisini ve beyin gelişimini canlı görüntülemede araştırmacılara güvenilir bir yaklaşım sunar.

Zebra balığı Beyin Ventrikül Enjeksiyon

Daha fazla video keşfet