Name: Beyin Ağ Geçidi: Primate Göz Diseksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-27T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 37 s
Description: Öğrenin primat retina diseksiyonu yöntemini, insan retinasının gelişimi ve yaşlanması üzerine çalışmalar için. Bu teknik, retinal yapıların korunarak incelenmesini sağlar ve insan retinal hastalıklarının anlaşılmasına katkıda bulunur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, teknik destek için Ikiel Ptito teşekkür etmek istiyorum. Frank Ervin, Roberta Palmour ve St Kitts bulunan Davranış Bilimleri Vakfı Laboratuar, Batı Hint Adaları, personel primat çalışmaları devam eden destek için minnettarız.

Bölüm 1: Ön-işleme doku <ol><li> Doku paraformaldehid, glutaraldehid, ya da formalin ile perfüze edilmelidir. Bu, genellikle diğer organlarda hasat için kullanılan standart transcardial perfüzyon yoluyla elde edilebilir. Bu kısa bir süre sonra gözleri sadece mercek altında fiksatif enjekte ve fiksatif saklanan kurban bu tavsiye edilir. </li><li> Bu çalışmada bu konuda derin sodyum pentobarbital (25 mg / kg, iv), aşırı dozda ötenazi ketamin hidroklorür (10 mg / kg, im), sedasyon ve tamamen exsanguinated kadar 0.1 M PBS ile transcardially perfüze. Bu 5 dakika (~ 1 litre) PBS içinde% 4 paraformaldehid çözümü ile takip edilmektedir. </li></ol> Bölüm 2: yörünge boşluğuna göz küresinin Kaldırma <ol><li> Göz küresi daha kolay erişim için öncelikle beyin kaldırmak için tavsiye edilir. Ince duvarlı yörünge kemik, beyin kaldırıldıktan sonra kolayca görülür. Yavaş yavaş yörüngesinin duvar budamak için kemik rongeurs kullanın. Kesip bir neşter ile göz kaslarının ve bağ doku, göz küresi kaldırmak. Dikkatlice optik sinir kesilmiş, bu elektronik mikroskop çalışmaları kullanılabilir. Göz küresi orbita boşluğu şimdi serbest olmalıdır. </li></ol> Bölüm 3: Göz yuvası retina parçalara ayır <ol><li> Göz kurumasını retina tutmak için PBS ile bir Petri kabı içine yerleştirin. Diseksiyon mikroskobu veya masa büyüteç ışık standı bir zorunluluk değil diseksiyonu yararlıdır, ancak monte edilebilir. Kornea düzeyinde bir çift yaylı makas ora serrata korneanın çevresine sklerasına yakından keserek çıkarın ve forseps ile objektif kaldırmak. </li><li> Sklerasına retina kaldırmak için bir fırça, forseps, ve yaylı makas kullanın. Bu, sklerasına retinanın ayrılması ve daha sonra makasla kesme sklerasına ile yapılır. Bir küçük artışlarla şekilde zarar verebilir ya da retina dokusunun yırtılmasına bu süreci yürütmesi gerekir. Sklerasına kolayca çok dikkatli bir şekilde optik sinir çevresinde sklerasına kesmek kalan optik sinir ayrılmış değildir. </li><li> Bu noktada retina kavisli şekli muhafaza ve örnekleme için basık olması gerekiyor. Retina düzleştirme önce, jöle tutarlılığı olan vitreus mizah, bir yumru çıkarılabilir. Retinanın bir slayt üzerine düzleştirmek için, bir neşter bıçak ile birkaç radyal kesim olun. Rezidüel vitreus mizah artık sıradan bir filtre kağıdı ve bir fırça ile temizlenebilir. Vitreus mizah çıkarırken nazik olmak şarttır retina ganglion hücre tabakası bu noktada maruz kalmaktadır. Optik sinir, optik disk bağlıysa, müthiş bir neşter bıçak ve bir çift yaylı makas kullanılarak retina, optik sinir çıkarın. Bu artık bir düz montaj retina (Şekil 1) ve makula, optik disk / temporal ventral yönde karanlık bir yama olarak anlaşılması gerekir. </li></ol> Bölüm 4: Örnekleme <ol><li> Retina örnekleme için bir dizi seçenek vardır. Burada flatmount hazırlanması ve isodentric örnekleme anlatacağız. Için her iki yöntem de slayt uzak fiber optik tabakası ile retina flatmount. Niyeti flatmount hazırlık retina ganglion hücre tabakası incelemek için ise, ya da pigmente epitel kaldırmak veya çamaşır suyu gereklidir. Pigmente epitel bu katman kaldırmak için hafif bir fırça kullanabilirsiniz kaldırmak için, bu fotoreseptör tabaka zarar eğilimindedir. Kasar, potasyum permanganat çözeltisi (% 0,25) 1 saat süreyle retina iliklerine distile su ile yıkama ve 5 dakika oksalik asit (% 5) takas içerir. 2 </li><li> Niyeti retina boyunca her katman hücre dağılımı ve morfolojisi incelemek için ise, o zaman retinanın izometrik örnekleme öneririz. Retinanın bir slayt flatmounted ve PBS ile nemli tutulmalıdır. Izometrik örnekleme için optik disk burun (Şekil 1), temporal, üst ve alt yönde eşit uzaklıkta doku küçük bir parça kesti. Bu hazırlık olarak çamaşır suyu, pigmente epitel için gerekli değildir. Bu parçalar, araştırma sorusu bağlı olarak bir Kriyostat, vibratome, ya da ultramicrotome ile koronal planda kesitli olabilir. Kriyostat kesit için, adet geceleme% 30 sakaroz cryoprotected olmalıdır ve kuru buz üzerinde bir montaj orta bağlamında donmuş. Alternatif olarak, numuneler agar gömülü ve bir vibratome üzerine dilimlenmiş olabilir. Kriyostat ve vibratome hazırlıkları güvenilir 4 m. kadar ince kesitler verecektir Ince bölümleri gerekiyorsa (örneğin elektron mikroskobu hazırlanması için), ultramicrotome örnekleri hazırlamak için gereklidir. Bunu yapmak için, bölümleri fumehood altında 1 saat osmium tetroksit sonrası sabit olmalıdır. Bu kademeli etanol serisi dehidratasyon (50, 70, 95, 95, 100,% 100) ve% 100 propilen oksit tarafından takip edilmektedir. Dokusonra EPON (Embed-812 gömme kiti) yerleştirilmiştir. </li></ol> Bölüm 5: Temsilcilik Sonuçları: Laboratuvarımızda, rutin cryosectioned retinae (Şekil 2) immünhistokimya gerçekleştirin. Bu durumda biz primat retinada kannabinoid reseptörleri (CB1) isodensity ilgilendi. Ayrıca prenatal etanol maruz kalma primat görsel sistem üzerindeki etkilerini incelemek. Bu amaçla, biz, makula ve periferik retinada hücre yoğunluğu ve tabaka kalınlığı ilgi. Bunu başarmak için, biz bir ultramicrotome 700nm, EPON dilim retinanın adet embed ve% 1 toluidin mavi (Şekil 3) ile leke. <img src="/files/ftp_upload/1261/fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 Flatmount Retina Radyal keser retina düzleştirmek için kullanılır. <img src="/files/ftp_upload/1261/fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2 immün. Cryosection periferik retinanın retina ganglion hücrelerinin ağırlıklı olarak iç ve dış nükleer tabaka halinde bazı etiketleme ile etiketlenir CB1 immunohistokimyasal . Bu bölümün kalınlığı 14 m ve lekeli slayt. RG - retina ganglion tabakası; IP iç pleksiform tabakası; - iç nükleer tabaka; OP - dış pleksiform tabaka; ON - dış nükleer tabaka. <img src="/files/ftp_upload/1261/fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> EPON gömülü ve 700nm bir ultramicrotrome dilimlenmis fovea ile Şekil 3 Fovea Bölüm. Fotoreseptör tabakada (PR) bölümleri hizalamak için kullanılır oldu. Fotoreseptörlerin tüm ölçüde koronal planda uygun bir açı gösteren tespit edilebilir dikkat edin. Yoğunluk ölçümleri, 300 m, 500 m, 800 m ve fovea çukurun Bioquant Görüntüleme sistemini kullanarak merkezinden alınmıştır. RG - retina ganglion tabakası; IP iç pleksiform tabakası; - iç nükleer tabaka; OP - dış pleksiform tabaka; ON - dış nükleer tabaka; ölçekli bar = 50 m

<ol><li>Hendrickson, A., Kupfer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+histogenesis+of+the+fovea+in+the+macaque+monkey%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The histogenesis of the fovea in the macaque monkey.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 15, 746-756 (1976).</li>
<li>Herbin, M., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+and+distribution+of+retinal+ganglion+cells+in+the+St.+Kitts+green+monkey+%28Cercopithecus+aethiops+sabeus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Size and distribution of retinal ganglion cells in the St. Kitts green monkey (Cercopithecus aethiops sabeus).</a> J Comp Neurol. 383, 459-472 (1997).</li>
<li>Stone, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStone%2C+J+%22The+Wholemount+Handbook%22">The Wholemount Handbook</a>. , Maitland Publishing Pty. Ltd. Sydney. (1981).</li>
<li>Herbin, M., Boire, D., Theoret, H., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transneuronal+degeneration+of+retinal+ganglion+cells+in+early+hemispherectomized+monkeys%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Transneuronal degeneration of retinal ganglion cells in early hemispherectomized monkeys.</a> Neuroreport. 10, 1447-1452 (1999).</li>
<li>Krebs, W., Krebs, I. Primate Retina and Choroid Atlas of Fine Structure in Man and Monkey. , Springer-Verlag. New York. (1991).</li>
<li>Pow, D., Sullivan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+kinesis%2C+neurite+sprouting+and+abnormal+axonal+projections+of+cone+photoreceptors+in+the+aged+and+AMD-afflicted+human+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Nuclear kinesis, neurite sprouting and abnormal axonal projections of cone photoreceptors in the aged and AMD-afflicted human retina.</a> Exp Eye Res. 84, 850-857 (2007).</li>
</ol>

Bir wholemount olarak retina ganglion hücre tabakası ve retina kan damarları 3 endotel hücreleri ya topografya ve mekansal dağılımı analizi için hazırlanması sağlar. Primat retina periferinde hücre yoğunluğu Niceleme kolayca gerçekleştirilir. Ancak, Perifoveal ve fovea bölgelerde, ganglion hücre tabakası çok katmanlı istiflenmesi kantifikasyon tıkar. Bu potansiyel önyargı aşmak için, fovea ve Perifoveal bölge koronal düzlemde 2,4 yarı ince kesitler elde etmek için bir ultramicrotome kullanarak, who...

<table><tbody><tr><td>Skalpel</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td></td></tr><tr><td>Skalpel uçları</td><td>Fine Science Tools</td><td>10011-00</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı makas</td><td>Fine Science Tools</td><td>15020-15</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-11</td><td>Herhangi bir cerrahi makas yeterlidir</td></tr><tr><td>Rongörler</td><td>Fine Science Tools</td><td>16121-14</td><td></td></tr><tr><td>Pens</td><td>Fine Science Tools</td><td>11027-12</td><td></td></tr><tr><td>Filtre kağıdı</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-924-150</td><td></td></tr><tr><td>Deve veya Samur tüyü fırça</td><td>Herhangi bir tedarikçi</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

beyin ağ geçidi: primate göz diseksiyon

The Gateway to the Brain: Dissecting the Primate Eye

Insanlarda görme sistemi dünya için ağ geçidi olarak kabul edilir ve duyusal, algısal ve bilişsel süreçler bolluğu belli başlı bir rol oynar. Görme kalitesi, yaşam kalitesini bağlı olduğunu bu nedenle şaşırtıcı değildir. Retinitis pigmentosa ve maküler dejenerasyon gibi görsel bozukluklar, görme bozuklukları nedenleri çevreleyen yaygın klinik ve temel araştırma rağmen, birçok formları etkili tedaviler yoksundur. Insan olmayan primatlar göz gelişimi, insanların en yakın genel özellikleri var. Sadece benzer bir vasküler anatomi, ancak diğer memeliler arasında, primatlar temporal retinada yüksek görme keskinliği, fovea uzmanlaşmış bir bölgede eşsiz bir özelliği var?<sup&gt; 1</sup&gt;. Burada genel bir retina histoloji, immünhistokimya, lazer yakalama mikrodiseksiyon yanı sıra ışık ve elektron mikroskobu için doku sağlamak için primat retina diseksiyon tekniği açıklar. Translasyonel bir model olarak insan dışı primat genişletilmiş kullanımı, umudumuzu daha iyi anlaşılmasına retina, görme bozuklukları etkilenen bireylerin yaşam kalitesi üzerinde olumsuz etkilerini azaltıcı veya geri yönelik etkili yaklaşımlar içgörüler sağlayacaktır.

Insan dışı primat gelişimi ve yaşlanma anlamak için önemli bir translasyonel türüdür. Primat retinanın anatomik organizasyonu, insanlarda normal ve patolojik durumları önemli bilgiler verebilir.

Beyin Ağ Geçidi: Primate Göz Diseksiyon

İnsanlardaki görsel sistem, dünyaya açılan kapı olarak kabul edilir ve çok sayıdaki duyusal, algısal ve bilişsel sürecin merkezinde temel bir rol oynar...

Bu prosedür, iyi kanlanmış bir maymun başı ile başlar. Beyin çıkarıldıktan sonra göz küreleri çıkartılır ve bağlanır. Ardından dokular temizlenir; kornea lensi, sklera ve vitreöz humor dikkatlice çıkarılarak retina serbest bırakılır.Retina bir lam üzerine düz bir şekilde yerleştirilir ve geri kalan vitreus mizaç temizlenir. Ardından Iso Dentrix örnekleri alınır ve kriyokorunmaya tabi tutulur. Merhaba, ben Montreal Üniversitesi Optometri Okulu'ndaki Görsel Nörobilimler Laboratuvarı'ndan Dr. Mark Burke.Merhaba, ben de Montreal Üniversitesi Optometri Okulu Görsel Nörobilimler Laboratuvarı'ndan Dr. Shaheen Zur. Merhaba, ben Montreal Üniversitesi Optometri Okulu Görsel Nörobilim Laboratuvarı direktörü Dr. Tito. Bugün size insan dışı bir primat retinasının diseksiyon prosedürünü göstereceğiz.Laboratuvarımızda bu prosedürü, normal gelişimdeki ve gelişimsel müdahalelere yanıt olarak retinal organizasyonun çeşitli yönlerini incelemek için kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım. Bu protokole, daha önceden perfüzyonunu yaptığınız primat başı ile başlayın.Paraformaldehit gibi bir fiksatif kullanılarak, burada diseke edilecek retina bir vervet maymunundan alınır. Gözün korunmasını sağlamak için lensi

the-gateway-to-the-brain-dissecting-the-primate-eye

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Insan dışı primat beynin normal işleme anlamak için önemli bir translasyonel türüdür. Primat beynin anatomik organizasyonu, insanlarda normal ve patolojik durumları önemli bilgiler sağlayabilir.

Sigara insan Stereotaksik Uzay Primate Beyin Diseksiyon

Bir fare göz diseksiyon resmi bir gösteri, retinal pigment epitel bir bütün montaj.

Retina pigment epiteli Tüm Mount Fare Göz Diseksiyon

Bu video sunumu önbeyin işlevini destekleyen en önemli iki derece vasküler yapıların hasat yöntemi gösterir. Onlar ilişkili meninksler (MAV) ve serebral kan akımı ve beyin omurilik sıvısı (BOS) homeostazı için gerekli olan koroid pleksus ile birlikte serebral yüzeyi (yüzeysel) damar vardır.

Rat Beyin gelen Serebral Yüzey damarları ve İlişkili Beyin zarları ve Diseksiyon ve Koroid Pleksus bir Görsel Açıklama

Bu video, yetişkin Drosophila beyninin nasıl inceleneceğini ve izole edileceğini açıklar – aksi takdirde kütikül, göz ve trakeal doku tarafından gizlenen organı görselleştirmek için gerekli bir prosedür. Örnek protokol, Drosophila nörobiyolojisinde immün boyama ve görüntüleme yöntemleri için kullanılabilecek yüksek kaliteli preparatları veren ayrıntılı bir gösterimi göstermektedir.

Drosophila Erişkin Beyin Diseksiyonu: Sinek Nörobiyolojisinde Bir Yöntem

Bu videoda, göz-beyin kompleksinin Drosophila pupae'den nasıl disekatlanacağı ve izole edileceği anlatılmaktadır. Öne çıkan protokol, örneğin immün boyama ve diğer gen ekspresyonu deneyleri ile uyumlu, yüksek kaliteli doku veren prosedürü göstermektedir.

Sinek Pupalarından Göz-Beyin Kompleksinin Diseksiyonu: Retina Dokusunu İzole Etmek İçin Bir Yöntem

Ayrıca enüklüeasyon denilen gözlerin kaldırılması, geri dönüşümsüz kısmi (monoküler) veya tam (binoküler) görme kaybına neden olduğundan memeli görme sistemi boyunca görsel, çapraz modal ve gelişimsel plastisite yönlerini incelemek için yararlı bir strateji sağlar. Burada vivo enükleasyonuna gerçekleştirmek için son derece tekrarlanabilir ve basit bir yaklaşım açıklar.

A Çok Reproducible ve Kolay Yöntem gerçekleştir In Vivo Göz Enükleasyon

Bu kağıt ve öğretim videonun amacı ortaya çıkarmak ve daha sonraki makroskopik ve histolojik analiz için uygun bozulmamış bir halde, domuz beyin ve hipofiz bezi otopsi nasıl kaldırılacağı tanımlamaktır.

Histolojik Analiz Domuz MSS Pozlama: Decapitation, Kafatası Açılış İçin El Kitabı ve Beyin Kaldırma

Yüz ifadeleri görsel iletişim mimetic kasları tarafından üretilen bir modu vardır. Burada, ters diseksiyon ve DiceCT tam olarak görselleştirmek ve mimetic kasları değerlendirmek için yeni teknikleri için protokolleri mevcut. Bu kombine teknikleri fonksiyonel yönleri belirlemek için mimetic kas morfolojik ve fizyolojik yönlerini inceleyebilirsiniz.

Diseksiyon ve DiceCT gizli ortaya başka veri evrim primat yüz ve ters

Bu protokol, 3 aylık bir Danimarka Landrace domuzu üzerinde yüksek hızlı bir pnömatik matkap kullanılarak bir kraniektomi yapılmasını açıklar. Erişim frontal kemikten yapılır ve ventral dura mater ve altta yatan serebral hemisferleri ortaya çıkarır. Bu prosedür, domuz beyninin büyük bir bölümüne erişim sağlar.

Yüksek Hızlı Pnömatik Matkap Kraniektomi ile Domuz Beynine Erişim

Neoplastik olmayan globların kapsamlı bir şekilde brütleştirilmesi ve standardize edilmiş kesitleri, yüksek kaliteli tekrarlanabilir histopatolojik kesitler elde etmek için önemlidir. Yetişkin ve fetal neoplastik olmayan kürelerin standartlaştırılmış bir brütleştirilmesi için yönergeler burada verilmiştir. Duruma dayalı karar verme kriterleri de dahil olmak üzere, küre kesiti için farklı seçenekler gösterilmiş ve tartışılmıştır.

Fetal Gözler de dahil olmak üzere neoplastik olmayan kürelerin iğrençleştirilmesi

Retina, laminer yapısı boyunca karmaşık uzamsal organizasyon sergiler. Modern mekansal transkriptomik ve dizileme teknikleri, 20 μm kalınlığında doku kesitleri &lt; gerektirir ve bu da retinal araştırma uygulanabilirliklerini sınırlar. Bu taze dondurulmuş kriyoseksiyon yöntemi, düzlemsel uzamsal ilişkileri korurken fare retinasının ince yüz kesitlerini üretir ve laminalar arasında kapsamlı moleküler haritalama sağlar.

En yüz Yüksek Boyutlu Mekansal Moleküler Analiz için Fare Retinasının Kriyoseksiyonu

Öğrenin primat retina diseksiyonu yöntemini, insan retinasının gelişimi ve yaşlanması üzerine çalışmalar için. Bu teknik, retinal yapıların korunarak incelenmesini sağlar ve insan retinal hastalıklarının anlaşılmasına katkıda bulunur.

Beyin Ağ Geçidi: Primate Göz Diseksiyon

Daha fazla video keşfet