Name: Sigara insan Primate Beyin Stereology: sayar ne bilmek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-14T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 25 s
Description: Öğrenin, insan primat beyninde nöron sayımı için tarafsız stereoloji yöntemini. Optik dissektör ve stereotaksik atlas kullanarak hücre popülasyonlarını hassas şekilde tahmin edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Ikiel Ptito onun devam eden teknik destek için teşekkür etmek istiyorum. MP NSERC hibe.

Bölüm 1: Ön-işleme doku Burke ve ark göre yapılmalıdır. (2009) 5 <ol><li> Kısaca, doku paraformaldehid, glutaraldehid, ya da formalin ile perfüze olması gerekir. Bu, genellikle diğer organlarda hasat için kullanılan standart transcardial perfüzyon yoluyla elde edilebilir. Bu çalışmada bu konuda derin sodyum pentobarbital (25 mg / kg, iv), aşırı dozda ötenazi ketamin hidroklorür (10 mg / kg, im), sedasyon ve tamamen exsanguinated kadar 0.1 M PBS ile transcardially perfüze. Bu 5 dakika (~ 1 litre) PBS içinde% 4 paraformaldehid çözümü ile takip edilmektedir. Doku paraformaldeyhde, gluteraldehid, ya da formalin ile perfüze edilmelidir. Beyin stereotaxically bloke kafatası çıkarıldı, tartılır olmalıdır, hacmi belirlenir, cryoprotected ve 5 donmuş. </li></ol> Bölüm 2: doku Sistematik Örnekleme, Burke ve ark. (2009) 6. <ol><li> Bu örnekte vervet beynin frontal lob üzerinde duruldu. Referans alan, merkez sulkus sol hemisfer ön direğe kortikal doku içerecek şekilde tanımlanmıştır. Bizim amaçlarımız için seri 50μm az kesitli korteks boyunca 1 / 10 bölümleri kuruldu. Bir tam serisi cresyl menekşe (seri # 1) ile boyandı. Seri 2 bölümden yarısı altın klorür miyelin vahiy ve asetilkolin esteraz için diğer yarısı boyanmış (belirli subkortikal alanları tarif) ile boyandı, böylece ayrıldı. Tüm diğer serileri, bizim uzun vadeli araştırma planlarının parçası olarak antijen muhafaza banked edildi. </li></ol> Bölüm 3: Stereology (ayrıntılı bilgi için bakınız, Mouton 2002) 4 <ol><li> Hücre sayıları toplam tahmini (N) aşağıdaki denklemle hesaplanır: N = ssf -1 x asf -1 x tsf -1 x Σ Q - Sayılır ilgi nesnelerin toplam sayısı kalınlık örnekleme fraksiyonu (doku ölçülen kalınlığı disektör yüksekliği bölünmüş olduğu), ve Σ Q ssf bölümde örnekleme fraksiyonu, ASF alanında örnekleme fraksiyonu, tsf. disektör içinde. Bu protokolün sonraki bölüm ssf, asf, tsf ve Σ S nasıl belirleneceği göstermektedir. </li><li> Bölüm Örnekleme Kesir (bilgisayar tabanlı) <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Tüm referans alan, ventral posterior ve dorsal anterior tanımlanmış olmalıdır. Bu örnekte, frontal lob ilgilenmişlerdir ve merkezi sulkus (posterior) ve lateral sulcus (ventral), frontal kutup (ön) ucundan bölge olarak tanımlanmış ve insula hariç. </li><li> Frontal lob bu konu için toplam 760 bölümden sistematik cresyl menekşe 76 boyandı toplanmıştır. Hedef referans alan boyunca 10 bölüm olduğu için 1 / 6 cresyl mor boyanan kesitler 1 / 60 ile ilgili bir bölüm Örnek Kesir önde gelen örneklenerek elde edilmiştir. Biz rastgele bir ilk 6 cresyl mor boyanan kesitler ile başlayan ve sistematik olarak bundan sonra 1 / 6 örneklenmiş. Seçilen konu (Şekil 2) toplam 13 bölümden örneklendi. </li></ol></li><li> Alan Örnek Kesir (bilgisayar tabanlı) <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Bir pilot çalışma, yaklaşık 100-300 disectors referans alan örnek, optimum ızgara boyutu, Alan Örnekleme Kesir gösterecektir. Frontal lob içinde, 2500 mm 2 ızgara boyutu 254 disectors (Şekil 2) bu konu için ortalama vermiştir. Bu durumda 0-5 sayılır nesneleri, nöronlar hakkında disektör boyutu arasında boyun eğmek zorundadır. </li></ol></li><li> Kalınlığı Örnek Kesir (bilgisayar tabanlı) <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Her disektör yerde, doku yüksekliği ölçülür ve bu yükseklikte bir kısmını örneklenir, bu kalınlık örnekleme fraksiyonu olarak bilinir. Ölçülen kalınlığını belirlemek için, ilk hücrenin, son nesne, odak sadece görünene kadar yedekleme bölümüne, yani üst biraz sonra, odak noktası haline gelene kadar z-düzlemi ile odak. Hücrelerin zar zor dışarı odak kadar dokusunun alt belirlemek için, z-düzlemi ile odaklanır. </li><li> Z-düzlemi ile yoğunlaşırken, hücreler her derinlikte boyanmış olmalıdır; yoksa, bu bölümleri yeniden boyanmış olmalıdır, bu durumda, doku, leke ya da düzgün olmayan dehidratasyon tamamlanmamış bir penetrasyon gösterebilir. Bu önlem, nispeten kalın bir doku bölümleri ile immunoprobes penetrasyonu gerektirir ile immunohistokimyasal doku için özellikle önemlidir. Bu nedenle, immunohistokimyasal boyanan doku hafifçe bazofilik bir leke (örneğin, cresyl menekşe, hema zıt olmalıdırtoxylin) bölümün üst ve alt sırasına göre doğru belirlemek ve antikor penetrasyon onaylamak için. Bu çalışmada bölümleri 50μm bir mikrotom ayarda dilimlenmiş. Tüm doku işlemleri tamamlandıktan sonra, ölçülen doku kalınlığı, yaklaşık% 65 ortalama daralma ile, 17.9μm (Şekil 2) ortalama. Bu sonuçlar, rutin histolojik hazırlık 7 için işlenmiş doku için tipik büzülme temsil ettiğini unutmayın . </li><li> Tipik bir çalışma için varsayılan disektör yüksekliği 10μm. Disektör yüksekliği ve ölçülen kesit kalınlığı arasındaki fark, koruma yüksekliği, biyolojik özellikleri yok sayılır doku hacmi. Bir bekçi yüksekliği kullanımı (örneğin, kaybolan kapakları) kesit yüzeyleri, doku hasarı önler. </li></ol></li><li> Nesnelerin toplam sayısı, Σ Q - <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Önyargı tanıma hataları önlemek için, standart bir tanım ilgi özellikle biyolojik özelliği olduğunu zorunludur. Bu durumda, biz nöronlar sayma ilgilenmişlerdir. Bu nedenle, bir nöron, glial hücreleri genellikle görünür nükleol ve sitoplazma yoksun ise, görünür bir merkezi bir konuma nükleolus ve açıkça tanımlanmış sitoplazma olarak tanımlandı. Bu konu 457 nöronlar sayıldı. </li></ol></li></ol> Bölüm 4: Stereologer - Bilgisayarlı Stereology Sistemi (Stereology Kaynak Merkezi, Chester, MD) <ol><li> Stereologer Sistemi kullanıcı bir adım-adım moda, gerekli bilgileri doldurmak ister . &quot;Çalışma Bilgileri&quot; bölümünde çalışmanın parametreleri oluşturulmuştur. Bir referans alan çalışma için tanımlanmış olmalıdır, ses parametre (referans alanı Cavalieri tahmincisi seçili olmalıdır) seçili olmalıdır. Nesne hacmi de ilgi nesnelerin nüfus sayısı ağırlıklı hacmini tahmin etmek için seçilmiş olabilir. Örneğin, sadece referans alan hacmi seçildi. Her nesne için, numarayı seçin ve bu durumda Nöronlar, faiz özelliğini tanımlamak. </li><li> Vaka Başlatma: Bu bölümde örnekleme bilgi kurulmuştur. Slab örnekleme aralığı (doku ayrı plaka ince ayrıntısına kadar dilimlenmiş ve her bölümde sırayla yerleştirilir, daha sonra burada 1 girin) girin. Referans alan (bu durumda 760) üzerinden alınan bölümlerin toplam sayısını girin. Sonra bölümde örnekleme aralığı (Bu durumda 59) girin. Sistem daha sonra numune alınacak (bu durumda 13) bölümlerinin sayısını hesaplar. </li><li> Probe Parametreler: Bu bölümde, ızgara ve disektör boyutunu tanımlar. Hacmi için düzenleme menüsü altında, ızgara aralığı tanımlamak için 2.5x-10x düşük bir büyütme kullanabilirsiniz. Nesne büyütme 100x (NA 1.3 veya 1.4) yapılmalıdır. Çerçeve alanı, disektör boyutunu Bu durumda biz% 50 Ekran kullandı. Çerçeve yüksekliği disektör kalınlığı; burada 10μm olarak belirlenmiştir. Çerçeve aralığı, ızgara boyutu. Pilot çalışmada 150-200 kare arasında 2500μm verim göreceli olarak büyük bir referans alanı üzerinden sistematik bir düzgün bir şekilde yerleştirilen bulundu. Daha küçük alanlar için, küçük bir ızgara boyutu kullanılmalıdır. Bir pilot çalışma, her bir çalışma için optik prob parametreleri belirleyecektir. </li><li> Çalışma parametreleri kurulmuş olup, örnekleme yoluyla doku geçebilirsiniz. Programı ilk bölümünde örnek isteyecektir Adım 1: program bölümünde referans uzayı izlemek için düşük büyütme altında, kullanıcı isteyecektir. Sistem daha sonra daha sonra bu noktaları referans alanı içinde kalan doğrular prob parametreleri ve kullanıcı dayalı bölümü üzerinde bir tablo koyacaktır. Bir nokta referans alanı içinde değilse sadece noktaya tıklayın ve hacmin içine hesaplanır olmayacaktır Adım 2: sistemi çerçevesinde aralığı parametreleri dayalı referans alan üzerine yeni bir ızgara koyacaktır. Doğrulayın kavşakları referans alanı içinde yer almaktadır Adım 3: Ardından sistem, kullanıcının yüksek büyütme amacı geçmek ve ilk disektör üzere sahneye taşımak isteyecektir Adım 4: Bu noktada sistemin kullanıcı tanımlamak için ister bölümün üst ve alt sisteminin z ekseni Adım 5 örnekleme alanı ayarlar: Kullanıcı daha sonra z-düzlemi ile disektör içinde düşen her nesne üzerine tıklayın. Kırmızı çizgiler veya disektör alt dokunmatik Nesneler sayılmayacaktır. Her nesne sayılır sonra, bir sonraki tıklatın. Aşama bir sonraki disektör ve 4 ve 5 tekrarlanacaktır adımları hareket edecektir. Disectors bölüm için tüm sistem bir sonraki probed sıralı bölümü eklemek için kullanıcı istemi, sayılmıştır. Sıralı tüm bölümleri kadar 1-5 adımlarını tekrar olacakörneklenmiş oldu. Sistem daha sonra, asf, ssf, tsf ve Σ Q hesaplamaları sağlayacaktır . Bu parametreler göre, sistemi, referans hacmi tahmini K oluşturmak ve CE tahmini sayısı ve hacim olacak. Aynı zamanda daha verimli hale öneriler verecektir ya da azaltmak için CE (Şekil 2). </li></ol> Bölüm 5: Temsilcilik Sonuçları: Hakkında tarafsız stereology bir referans alanı içinde hücre popülasyonlarının verimli ve güvenilir tahminler sağlar. Her biri sistematik örnekleme ve tanımlanmış bir referans alanı güveniyor stereolojik sistemleri, bilgisayar tabanlı bir dizi vardır. 2 yaşındaki vervets serebral korteks toplam nöronal nüfusu 0,042 ortalama CE ile 828 milyon (Şekil 3) üzerinde olduğu tahmin etmek BioQuant Yaşam Bilimleri sistemi kullandık. Biz sonradan tahmin Stereologer sistemi kullanılmaktadır kortikal nöronların yaklaşık yarısı sayısı 8 frontal lob hesapları. <img src="/files/ftp_upload/1262/1262fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 Bilgisayar tabanlı Stereology Sistemleri. Stereology sistemlerinin temel set-up (xyz) motorlu bir sahne ile aynı, bir mikroskop, bir sahne denetleyicisi, video kamera, bilgisayar ve yazılım. Sonuçta seçilen sistemin verimliliği, ihtiyaç ve maliyet analizi dayalı olmalıdır. <div style="border:1px #000000 solid"><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> ÇALIŞMA BİLGİLER </td></tr><tr><td> Çalışma Adı </td><td> Frontal Korteks </td></tr><tr><td> Baş Araştırmacı </td><td> MB </td></tr><tr><td> Tür </td><td> AG </td></tr><tr><td> Referans Uzay Frontal </td><td> Cortex </td></tr><tr><td colspan="2"> Notlar </td></tr><tr><td colspan="2"> VAKA BİLGİ </td></tr><tr><td> Veri Toplayıcı </td><td> MB </td></tr><tr><td> Tarih </td><td> Çarşamba, 30 Nisan 2008 </td></tr><tr><td> Grup </td><td> Kontrol </td></tr><tr><td> Konu </td><td> Ø26 </td></tr><tr><td colspan="2"> Notlar </td></tr><tr><td colspan="2"> ÖRNEKLEME ÖZELLİKLERİ </td></tr><tr><td> Döşeme Örnekleme Aralığı </td><td> 1 </td></tr><tr><td> Bölümler Sayısı </td><td> 760 </td></tr><tr><td> Bölüm Örnekleme Aralığı </td><td> 59 </td></tr><tr><td> Başlangıç ​​Bölüm </td><td> 2 </td></tr><tr><td colspan="2"> FRAKSIYONLARI </td></tr><tr><td> ASF </td><td> 0,0002 </td></tr><tr><td> SlabSF </td><td> 1,0000 </td></tr><tr><td> SSF </td><td> 0,0169 </td></tr><tr><td> TSF </td><td> 0,5587 </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="6"> SONUÇLAR ÖZET </td></tr><tr><td> Parametre </td><td> Sonda </td><td> Isim </td><td> Sonuç </td><td> CE </td><td> SD </td></tr><tr><td> Kalınlık </td><td> --- </td><td> --- </td><td> 17,8996 μ </td><td> --- </td><td> --- </td></tr><tr><td> Numara </td><td> Disektör </td><td> nöron </td><td> 243833769.1473 </td><td> 0,0474 </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Hacim </td><td> Cavalieri Noktası Grid </td><td> hacim </td><td> 1719769397954.1284 μ ^ 3 </td><td> 0,0078 </td><td> N / A </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> ÖNERİLER </td></tr><tr><td> Sonda </td><td> Nesne sayısı (nöron) </td></tr><tr><td> CE </td><td> 0,0474 </td></tr><tr><td> Öneriler </td><td> CE kabul edilebilir. </td></tr></tbody></table&gt; <table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> İzlenen Disectors Sayısı Çok Yüksek, disektör Aralığı artırın. </td></tr><tr><td> Sonda </td><td> Bölge Hacmi (hacmi) </td></tr><tr><td> CE </td><td> 0,0078 </td></tr><tr><td> Öneriler </td><td> CE kabul edilebilir. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="3"> BÖLÜM SONUÇLAR </td></tr><tr><td> Bölüm </td><td> nöron nöron NumCorners NumObjects </td><td> hacmi RegPoints </td></tr><tr><td> 1. 40 </td><td> 48 </td><td> 34 </td></tr><tr><td> 2. 26 </td><td> 52 </td><td> 44 </td></tr><tr><td> 3. 29 </td><td> 56 </td><td> 48 </td></tr><tr><td> 4. 39 </td><td> 100 </td><td> 83 </td></tr><tr><td> 5. 49 </td><td> 112 </td><td> 83 </td></tr><tr><td> 6. 53 </td><td> 156 </td><td> 120 </td></tr><tr><td> 7. 65 </td><td> 128 </td><td> 106 </td></tr><tr><td> 8. 45 </td><td> 108 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 9 - 52 </td><td> 100 </td><td> 77 </td></tr><tr><td> 10 26 </td><td> 64 </td><td> 60 </td></tr><tr><td> 11. 21 </td><td> 44 </td><td> 44 </td></tr><tr><td> 12. 11 </td><td> 36 </td><td> 32 </td></tr><tr><td> 13. 1 </td><td> 12 </td><td> 6 </td></tr></tbody></table></div> Şekil 2 Stereologer Sistemi ile Elde Edilen Fontal Lob Sonuçları frontal lob, stereolojik sürecinin uzun parçası sistematik örnekleme ve kesit. Topoğrafya, hacim ve nöronal satışta her konu hakkında bir gün içinde tamamlanmıştır. Sol hemisfer örnekleri alındı ​​ve bu sayı her iki yarımkürede için yaklaşık bir tahmin metin iki katına çıkar. <img src="/files/ftp_upload/1262/1262fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3 Cortex Nöronal Nüfus Tahmini BioQuant ile elde edildi. BioQuant sistemi, hücre sayımı öncesinde tam bir topografya gerektirir . İşte 13 bölümden ortalama örneklendi. Kortikal topografya ve sonraki hacmi tahmini, her konu için 15-20 saat arasında sürmüştür. Topoğrafya 2.5x objektif altında yapıldı ve sayım 100x immersiyon yağı hedefi (NA 1.3) kullanılarak yapıldı. 100. Her bölümde ortalama 180 disectors örneklenmiş ile sol hemisfer boyunca seçildi. Nöronal sayma topografyası tamamlandıktan sonra yaklaşık bir gün sürmüştür. Sol hemisfer örnekleri alındı ​​ve bu sayı her iki yarımkürede için yaklaşık bir tahmin metin iki katına çıkar.

<ol><li>West, M., Slomianka, L., Gundersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+the+subdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator%5BTitle%5D)+AND+%22Aat+Rec%22%5BJournal%5D)">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> Aat Rec. 231, 482-497 (1991).</li>
<li>Saper, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Any+way+you+cut+it%3A+a+new+journal+policy+for+the+use+of+unbiased+counting+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Any way you cut it: a new journal policy for the use of unbiased counting methods.</a> J Comp Neurol. 364, 5-5 (1996).</li>
<li>Sterio, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unbiased+estimation+of+number+and+sizes+of+arbitrary+particles+using+the+disector%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">The unbiased estimation of number and sizes of arbitrary particles using the disector.</a> J Microsc. 134, 127-136 (1984).</li>
<li>Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMouton%2C+PR+%22Principles+and+Practices+of+Unbiased+Stereology%22">Principles and Practices of Unbiased Stereology</a>. , The Johns Hopkins University Press. Baltimore. (2002).</li>
<li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+the+non-human+primate+brain+in+stereotaxic+space%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissecting the non-human primate brain in stereotaxic space.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
<li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+banking%3A+Making+the+most+of+your+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Brain banking: Making the most of your research.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
<li>Manaye, K. F., Wang, P., O'Neil, J., Huafu, S., Tizabi, Y., Thompson, N., Ottinger, M. A., Ingram, D. K., Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathological+Quantification+Of+Dtg+APP%2FPS1%3A+Neuroimaging%2C+Stereology%2C+And+Biochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22AGE%22%5BJournal%5D)">Neuropathological Quantification Of Dtg APP/PS1: Neuroimaging, Stereology, And Biochemistry.</a> AGE. 29, 87-96 (2009).</li>
<li>Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+reduction+in+frontal+cortex+of+primates+after+prenatal+alcohol+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure.</a> Neuroreport. 20, 13-17 (2009).</li>
<li>Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Batch+immunostaining+for+large-scale+protein+detection+in+the+whole+monkey+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
</ol>

Primat beyin hakkında tarafsız stereology diğer biyolojik örneklerin benzer. Bununla birlikte, 50μm az dilimlenmiş vervet maymun tek bir yarımkürede 1200&#39;den fazla bölüm verir primat beynin büyüklüğü göz önüne alındığında, dikkatli bir işleme planı önerilir. Öncelikle stereotaxically 1cm blokları, blok ve konular arasındaki bölümün standart bir düzlemde sağlar bloklar arasında kısmi bölümleri en aza indirir ve yönetilebilir büyüklükte bloklar 5 sağlar beynin engelleme tavsiye ederiz . Stereology için çok ...

<table><tbody><tr><td>Stereologer</td><td>Stereology Resource Center (Chester, MD)</td><td>www.disector.com</td><td></td></tr><tr><td>Stereology Tool-Kit Stereologer sistemi</td><td>BioQuant Life Sciences (Nashville, TN)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>StereoInvestigator</td><td>MBF Bioscience</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sigara insan primate beyin | stereology: sayar ne bilmek

Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain

Insan dışı primat normal insan beyninin fonksiyonu ve hastalık süreçleri anlamak için önemli bir translasyonel türüdür. Hakkında tarafsız stereology, doku bölümlerde biyolojik nesnelerin ölçümü için state-of-the-art olarak kabul edilen yöntem<sup&gt; 2</sup&gt; Memeli beyindeki biyolojik özellikleri için güvenilir yapısal veri oluşturur<sup&gt; 3</sup&gt;. Bu yaklaşımın anahtar bileşenleri tarafsız içinde hücre sayıları ve boyutu, lif ve kılcal uzunlukları, yüzey alanları, bölgesel hacimleri ve mekansal dağılımları, biyolojik nesnelerin ölçümü ile birlikte anatomik olarak tanımlanmış yapılar (referans alanlarda), (sistematik-random) örnekleme referans alan<sup&gt; 4</sup&gt;. Önceki yöntemlerine göre bu stereolojik yaklaşımlar avantajları arasında hatalı varsayımlar ve doğrulanabilir olmayan modeller kaynaklanan sistematik (non-random) hata bilinen tüm kaynakları kaçınma. Bu çalışmada, bilgisayarlı stereology (vervet maymun beynin frontal korteks nöronal toplam nüfusun tahmin etmek için biyolojik bir başvuru belgeleri<em&gt; Chlorocebus aethiops sabeus</em&gt;), Iki piyasada bulunan stereology programları, BioQuant Yaşam Bilimleri ve Stereologer (Şekil 1) yardımı ile. Kontrast ve hem de BioQuant sonuçların karşılaştırılması ve ek olarak<em&gt; Stereologer</em&gt; Sistemleri, bu çalışma için ayrıntılı bir protokol sağlar<em&gt; Stereologer</em&gt; Sistem.

Primat beynin anatomik organizasyonu, insanlarda normal ve patolojik durumları önemli bilgiler sağlayabilir. Hakkında tarafsız stereology, doğru ve etkin bir biçimde, belirli bir referans alanı toplam nöron numarası (veya başka bir hücre tipi) tahmin etmek için bir yöntemdir<sup&gt; 1</sup&gt;.

Sigara insan Primate Beyin | Stereology: sayar ne bilmek

İnsan dışı primatlar, insan beyninin normal işleyişini ve hastalık süreçlerini anlamak için önemli bir translasyonel türdür. Tarafsız...

Bu prosedür, referans alanın tanımlanmasıyla başlar. İlgilenilen bölgenin sınırlarını belirlemede bir stereotaksik atlas faydalı olabilir. Ardından, lamları düzenleyin ve kesit örnekleme sıklığını belirleyin.Örnekleme yapılacak ilk kesiti mikroskoba yerleştirin ve örnekleme parametrelerini doldurun. Teolog sisteminde, referans alanının üzerine bir ızgara yerleştirilecek ve her kesişim noktasında bir optik dissektörden örnek alınacaktır. Her kesitteki tüm optik dissektörlerin örneklemesi tamamlandığında, stereo sistem çalışma sonuçlarını sağlayacaktır.Merhaba, ben Montreal Üniversitesi Optometri Fakültesi, Görsel Nörobilimler Laboratuvarı'ndan Dr. Mark Burke. Merhaba, ben de yine Montreal Üniversitesi Optometri Fakültesi, Görsel Nörobilimler Laboratuvarı'ndan Dr. Shaheen Zur. Merhaba, ben Montreal Üniversitesi Optometri Fakültesi, Görsel Nörobilim Laboratuvarı direktörü Dr. Morris Petto.Bugün size, insan dışı primatlarda tarafsız radyoloji gerçekleştirme prosedürünü göstereceğiz. Laboratuvarımızda çeşitli beyin bölgelerindeki toplam nöronal popülasyonları tahmin etmek için bu prosedürü kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım.Bu protokole, daha önce perfüzyonu yapılmış bir beyin ile başlayı

knowing-what-counts-unbiased-stereology-in-the-non-human-primate-brain

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Insan dışı primat beynin normal işleme anlamak için önemli bir translasyonel türüdür. Primat beynin anatomik organizasyonu, insanlarda normal ve patolojik durumları önemli bilgiler sağlayabilir.

Sigara insan Stereotaksik Uzay Primate Beyin Diseksiyon

Beyin bankacılık ve biyolojik materyalin sistematik örnekleme tarafsız stereology temelini sağlar ve olası veri her numune elde edilen en üst düzeye çıkarır.

Beyin Bankacılık: Araştırma Örneklerinin En iyi şekilde

Kaynak: Olesen, M. V.,  et al. Elektrokonvülsif Tedavinin Bir Sıçan Modelinde Hücre Sayılarını Tahmin Etmek için Optik Fraksiyonlayıcı Tekniği. J. Vis. Uzm.  (2017).  Video, beyin dokusunda yeni üretilen nöronları ölçme tekniğini göstermektedir. Bromodeoksiüridin (BrdU) işaretli nöronları içeren hipokampal doku dilimleri, immünohistokimya kullanılarak boyandı ve daha sonra optik fraksiyonatör tekniği kullanılarak doku kalınlığı boyunca ölçüldü.

Sıçan Beyin Dokusunda Yeni Üretilen Nöronların Optik Fraksiyonatör Tekniği Kullanılarak Ölçülmesi

Organize beyin kesme prosedürleri kesin nöropatolojik tanıları ile belirli nöropsikiyatrik olayları ilişkilendirmek için gereklidir. Beyin kesimler çeşitli klinik-akademik beklenmedik göre farklı yapılır. Bu protokol, insan beyni patolojilerinde hemisferik farklılıkların araştırılması ve mevcut ve gelecekteki biomoleküler / beyin teknikleri en üst düzeye çıkarmak için bir simetrik bihemispheric beyin kesme prosedürü anlatılmaktadır.

İnsanlardaki Sağlıklı ve Patolojik Beyin Koşulları Eğitim için Kesme Simetrik Bihemispheric Postmortem Beyin

Bu protokol değiştirilmiş kuduz virüsü floresan işaretlerini ifade ve bağımsız, tarafsız küme farklı nöronal alt sınıfları arasında morfolojik metrik kapsamlı karakterizasyonu olanak analizleri ile retrograd enfeksiyonu takiben etiketli seçici nöronal popülasyonlarının büyük ölçekli rekonstrüksiyon açıklar.

Morfolojik Ölçümler dayanarak büyük ölçekli yeniden düzenlemesi ve Bağımsız, Unbiased Kümelenme Seçici Populasyonlarında Nöronlar Sınıflandıran

Burada, elektrokonvülsif uyarımı takiben sıçan hipokampusunda, yeni nöronların oluşumunu ve canlılığını ölçmek için kullanılan bir optik fraktatör olan stereolojik bir yöntemi sunuyoruz. Doğru şekilde uygulandığında, stereolojik yöntemlerin duyarlılığı ve verimliliği, sabit ve önceden belirlenmiş bir hassaslıkla doğru tahminler sağlar.

Elektrokonvülsif Terapi Sıçan Modelinde Hücre Sayılarını Tahmin Etmek İçin Optik Fraksiyonlama Tekniği

Bu eser dopaminerjik nöron hücre sayıları tarafsız stereological tahmini için adım adım bir protokol fare gözlemliyorum standart mikroskobu kullanýlýyor (Yani, bir ışık mikroskobu, bir motorlu nesne tablo (x, y, z nigra içinde sunar. uçak) ve kamuya açık yazılım dijital görüntü analizi için.

Optik Fractionator ve standart mikroskobu ekipmanlar kullanarak fare gözlemliyorum Nigra dopaminerjik nöron sayısının stereological tahmin

Aşağıda özetlenen yöntem, üç boyutlu (3D) baskı yöntemleri ve MR Veri çıkarma nın yeni bir kombinasyonunu kullanarak insan dışı primat (NHP) nöroşirürji sinin hazırlanması için kapsamlı bir protokol sağlamayı amaçlamaktadır.

İnsan olmayan Primatlarda Nöroşirürji Planlaması için MRI Tabanlı Araç Kutusu

Bu protokol, iDISCO + kullanarak bozulmamış fare beyinlerinin manyetik rezonans görüntüleme, temizleme ve immünoetiketleme yöntemlerini açıklar, ardından ışık tabakası mikroskobu kullanılarak görüntülemenin ayrıntılı bir açıklaması ve NuMorph kullanılarak aşağı akış analizleri yapılır.

Tüm Beyin Tek Hücreli Görüntüleme ve MRG, Doku Temizleme ve Işık Tabakası Mikroskobu Kullanarak Bozulmamış Yenidoğan Fare Beyinlerinin Analizi

Seri iki fotonlu tomografi (STPT) görüntüleme, iki fotonlu görüntülemeyi otomatik evre kontrolü ve mikrotom dilimleme ile birleştirerek bir doku kütlesini üç boyutlu şeklinde görüntülemek için kullanılan bir tekniktir. Burada, marmoset beyinlerinin yapısal özelliklerini daha iyi anlamaları için bunu uygulamak için bir protokol açıklıyoruz.

Nöroanatomik Analizler için Tüm Marmoset Beyninin Seri İki Fotonlu Tomografisi

Modern sinirbilimler, laboratuvar kemirgenleri ve insanlar dahil olmak üzere birçok tür arasındaki farkları keşfetmelidir. Ancak büyük beyinli memeliler söz konusu olduğunda teknik zorluklar ortaya çıkar. Bu yaklaşım, çok farklı memelilerde nöronal popülasyonların türler arası varyasyonlarını ele alır ve evrimsel kalıpların ortaya çıkarılması için haritalanacak benzer sonuçlar sunar.

Farklı Memeli Beyinlerinde Nicel Hücre Sayımı Çalışmaları İçin Karşılaştırmalı Yaklaşım

Öğrenin, insan primat beyninde nöron sayımı için tarafsız stereoloji yöntemini. Optik dissektör ve stereotaksik atlas kullanarak hücre popülasyonlarını hassas şekilde tahmin edin.

Sigara insan Primate Beyin | Stereology: sayar ne bilmek

Daha fazla video keşfet