Name: Fare Meme Epitel Hücreleri lactogenic Farklılaşma sırasında Mammospheres formu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-06T16:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 51 s
Description: Öğrenin, fare meme epitel hücrelerinde HC11 hücre hattı kullanarak laktogenik farklılaşmayı nasıl tetikleyeceğinizi ve mammosphere oluşumunu nasıl değerlendireceğinizi. Bu yöntem, meme bezinde hücre farklılaşmasının düzenlenmesini incelemek için güvenilir bir in vitro model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Congressionally Yönetmen Tıbbi Araştırma Fonu hibe (DAMD17-01-0264) ML Cutler ve ML Cutler Amerika Birleşik Devletleri Askeri Kanser Enstitüsü Fonları çalışmaları destekledi.

<ol><li> HC11 hücreleri RPMI 1640 orta ve% 10 fetal sığır serumu, 5μg/ml İnsülin, 10 mM HEPES, yetkinlik kurmak için 10 ng epidermal büyüme faktörü (EGF) ile desteklenmiş 6 gün izdiham büyüdü. </li><li> Hücreler PBS ile yıkanır ve 24 saat için EGF olmadan büyüme ortamı muhafaza edildi. </li><li> Lactogenic farklılaşma ikna etmek için hücre farklılaşması medya, yani RPMI deksametazon (10 -6 M), insülin (5 mg / ml) ve prolaktin (5 mg / ml) olarak DIP atıfta inkübe edildi. </li><li> Belirtilen kez post-DIP Ayrıca, mammospheres fotoğrafları çekildi ve bir dijital fotoğraf makinesi ile Olympus IX71 mikroskop kullanılarak faz kontrast mikroskobu ile numaralandırılan. </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar: Düşük güç büyütme, normal meme epitel hücre mono tabakaları ve birden fazla mammospheres yanı sıra, tek bir mammosphere yüksek güç büyütme, sırasıyla, Şekil 1&#39;de gösterilmiştir. <img src="/files/ftp_upload/1265/1265fig1.jpg" alt="" /> Şekil 1. Mammospheres (a) Normal meme epitel hücre mono tabakaları konfluent hücrelerinin düz bir tabaka olarak görüntülenmesi gerekir. (B) DIP stimülasyon 3-5 gün sonra birden fazla mammospheres görünür. Fotoğraf 5 gün DIP Ayrıca yazılan. (C) DIP Ayrıca yazılan 5 gün mammospheres içeren tek bir alanda Yükseköğretim büyütme.

<ol><li>Blatchford, D. R., Hendry, K. A., Turner, M. D., Burgoyne, R. D., Wilde, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vectorial+secretion+by+constitutive+and+regulated+secretory+pathways+in+mammary+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Epithelial+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Vectorial secretion by constitutive and regulated secretory pathways in mammary epithelial cells.</a> Epithelial Cell Biol. 4, 8-16 (1995).</li>
<li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucocorticoid+induced+expression+of+connective+tissue+growth+factor+contributes+to+lactogenic+differentiation+of+mouse+mammary+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Glucocorticoid induced expression of connective tissue growth factor contributes to lactogenic differentiation of mouse mammary epithelial cells.</a> J Cell Physiol. 214, 38-46 (2008).</li>
</ol>

Amacıyla bu tekniğin başarılı olmak ve en iyi kalite, epitel hücreleri lactogenic hormonları ile indüklenen önce izdiham muhafaza edilmelidir. Ölçülmesi zor kılan pek çok mammospheres vardır durumlar olabilir. Böylece, kantitatif amaçlar için mammospheres sayısı sayılacak bir zaman noktasında mammospheres fotoğraflamak için en iyisidir. Meme epitel hücrelerinin lactogenic farklılaşma derecesini belirlemek için kullanılan çeşitli moleküler belirteçlerin bulunmasına rağmen, 2D kültür yetiştiri...

<table><tbody><tr><td>RPMI</td><td>Invitrogen</td><td>21870076</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Quality Biological, Inc.</td><td>118089060</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td></td></tr><tr><td>İnsülin</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>12585-014</td><td></td></tr><tr><td>Deksametazon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1756</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Olympus Corporation</td><td>IX71</td><td></td></tr><tr><td>Dijital Kamera</td><td>QImaging</td><td>Retiga 2000RV Fast 1394</td><td></td></tr></tbody></table>

fare meme epitel hücreleri lactogenic farklılaşma sırasında mammospheres formu

Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

Fare meme epitel hücre kültürlerinde lactogenic farklılaşma derecesini belirlemek için yaygın olarak kullanılan fenotipik önlem mammospheres olarak anılacaktır kubbe şeklinde hücre yapılarının oluşması.<sup&gt; 1</sup&gt;. HC11 hücre hattı meme lactogenic farklılaşma hem yönetmelik çalışması için bir model sistem olarak istihdam edilmektedir.<em&gt; In vitro</em&gt; Ve<em&gt; In vivo</em<sup&gt; 2</sup&gt;. HC11 hücreleri lactogenic hormonları ile tedaviye yanıt olarak ayırt etmek ve süt proteinleri sentezlerler. Izdiham HC11 fare meme epitel hücreleri büyüme, lactogenic farklılaşma, deksametazon, insülin ve prolaktin lactogenic hormonlar da dahil olmak üzere bir kombinasyonun eklenmesi ile indüklenen olarak DIP anılacaktır. HC11 hücreleri ayırt etmek için uyarılan 120 saat farklılaşma indüksiyon ve numaralandırılan oldu her kültürün ortaya çıktı mammospheres kez fotoğraflandı. Bireysel mammospheres boyutu farklılaşma derecesi ile ilişkilidir ve bu görüntüleri ayırt hücrelerinin tasvir edilmiştir.

HC11 lactogenic farklılaşma mammospheres olarak anılacaktır kubbeli yapıların oluşumu ile karakterize edilebilir. Yapılar, faz kontrast mikroskobu ile numaralandırılan lactogenic farklılaşma niceleme yardımcı olabilir.

Fare Meme Epitel Hücreleri lactogenic Farklılaşma sırasında Mammospheres formu

Fare meme epitel hücresi kültürlerinde laktojenik farklılaşma derecesini belirlemek için yaygın olarak kullanılan fenotipik bir ölçüt, ... oluşumudur.

Merhaba, ben Uniform Services University of the Health Sciences Patoloji Bölümü'nde Dr. Mary Lou Cutler'ın laboratuvarından Bethany Morrison. Bugün size HC 11 fare meme epitel hücrelerinden mammosfer geliştirme prosedürünü göstereceğiz. Laboratuvarımızda laktodiferansiyasyonu incelemek için bu prosedürü kullanıyoruz.Öyleyse başlayalım. Bu protokole başlamak için, HC 11 hücreleri yetkinliği sağlamak amacıyla %10 fetal calf serum, 5 µg/mL insülin, 10 µM Heiss ve 10 ng/mL epidermal büyüme faktörü (EGF) ile desteklenmiş RPMI 1640 besiyerinde altı gün boyunca konfluense ulaşana kadar büyütülür.Bu hücreler, doku kültürü kabininde genik farklılaşmanın düzenlenmesini incelemek amacıyla Nancy Hines ve Bernard Groner'ın laboratuvarları tarafından kapsamlı bir şekilde kullanılmıştır. Hücreler daha sonra PBS ile yıkanır ve EGF içermeyen büyüme ortamında 24 saat boyunca tutulur. Bu inkübasyonu takiben, inkübasyon sonrası lakto farklılaşmasını indüklemek amacıyla hücreler; dekzametazon, insülin ve prolaktin ile desteklenmiş RPMI'dan oluşan farklılaşma ortamında inkübe edilir.Diferansiyasyon ortamında, mamo kürelerini fotoğraflamak ve saymak için dijital kameralı bir Olympus IX 71 mikroskobu kullanılır. Faz kontrast mikroskobu ile mamo küreleri, indüksiyondan sonraki 120 saat boyunca defalarca fotoğraflanır ve sayılır. Bu görüntü, normal bir hücrenin düşük büyütmeli görüntüsünü göstermektedir.Epitel hücre monotabaka hücreleri, genik hormonlarla stimülasyondan yaklaşık üç gün öncesine kadar konfluens durumunda tutulmalıdır. Burada, indüksiyondan üç gün sonra düşük büyütmede oluşan yeni mammosferler görülmektedir. Bunlar, epitel hücreleri boyunca rastgele dağılmış küçük kubbe benzeri yapılar olarak belirmeye başlarlar.Yine düşük büyütmede. Burada, indüksiyondan beş gün sonra gelişmiş çok sayıda mammosfer görülmektedir. Mammosferler hem boyut hem de sayıca büyümeye devam etmiştir; yüksek büyütmede, mammosferin kabarcık veya kubbe benzeri özelliği net bir şekilde görülebilmektedir.Genik farklılaşma belirteçleri olarak kullanılan mammosferlerin oluşması için meme epitel hücrelerinin nasıl indüklendiğini size göstermiş olduk. Bu prosedürü uygularken, indüksiyon öncesinde hücrelerin konfluens düzeyini korumanın önemli olduğunu unutmayın; çünkü bu süre zarfında hücreler, genik hormonlara tam olarak yanıt verebilmek için etkileşime girmeleri gereken matriks proteinleri üretirler. Ayrıca, EGF'nin farklılaşma sürecini inhibe etmesi nedeniyle, işlemden önce medyumdan EGF'nin uzaklaştırılması gerektiğini hatırlamak önemlidir.İşte böyle. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

mouse-mammary-epithelial-cells-form-mammospheres-during-lactogenic

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu yöntem, farelerde meme bezi gelişimi ve işlevi incelemek ve değerlendirmek anlatılmaktadır. Eksize meme bezleri süt ejeksiyon bir oksitosin tabanlı miyoepitelyal hücre daralma tahlil kullanılarak değerlendirilmiştir ise bütün montaj kullanarak geliştirme derecesi değerlendirilir.

Fare Modeller Meme Bezi Geliştirme ve Fonksiyon Değerlendirme

Basit bir metodu ile ilişkili epitel hücreleri üzerindeki doku fibroblastlann etkileri analiz etmek için tarif edilmiştir. Bu yöntem, üç boyutlu bir doku kültürü kombinasyonu 3D izole sonra hücrelerin analizi kolaylaştırabilir. Tekniği tümör hücreleri üzerindeki tümör-stroma etkileri ile ilişkili sistematik çalışma izin veren, habis potansiyeli değişen hücreleri için de geçerlidir.

Üç boyutlu Karışık-hücre Sfero Co-kültürden Meme Epitel Hücrelerinin İzolasyonu

Bu videoda, meme kanseri hücre hatlarından kanser kök hücrelerinin izole edilmesi anlatılmaktadır. Bu kanser kök hücrelerini, kendini yenilemeyi değerlendirmek ve küre oluşturma verimliliğini hesaplamak için birincil mamosferler oluşturmak üzere kültüre ediyoruz ve farklı tohumlama yoğunlukları arasında karşılaştırmaya izin veriyoruz.

Birincil Mamosferlerin Üretimi: Hücre Potansiyelini Belirlemek İçin Bir Teknik

Sağlam doku organoids kullanılarak primer hücre kültürü çok hücresel in vivo mikroortam taklit eden bir model sistemi sağlar. Biz enzimatik doku hasarı olmadan, morfoloji farklılaşmış karışık hücre kültürü soyları ve sergiler yaşatan bir serum serbest birincil meme epitel doku kültürü modeli geliştirmiştir. Meme organoids&gt; 6 ay için geçerli kalır.

Enzimatik olmayan, Mammospheres spontan Üretimi için Ön-invaziv Meme Lezyonların Serum serbest Doku Kültürü

Yüzen mamosfer tahlilleri, süspansiyon koşullarında hayatta kalan ve farelere implante edildiğinde gelişmiş tümör oluşumu gösteren kök benzeri meme kanseri hücrelerinin alt kümesini araştırabilir.  Bu protokol, kök ile ilişkili transkripsiyonel manzaranın analizini kolaylaştırırken, in vivo tümörijenez için bir vekil olan küre oluşturma yeteneğinin uygun bir in vitro ölçümünü sağlar.

İnsan Göğüs Kanseri dokuları ve hücre hatlarından gelen Mammosphere Oluşumu Testi

Bu makalede açıklanan dolaylı immünfloresan protokol algılama ve fare meme bezinde proteinlerin yerelleştirme verir. Tam bir yöntem olup, meme bezi örnekleri hazırlamak için floresan mikroskobu ile görüntü, doku kesitlerinde immunhistokimya gerçekleştirmek için ve görüntüleri yeniden verilir.

Fare Meme Bezinin Dondurulmuş Bölümler Dolaylı İmmünofloresan

Bu protokol, adherent / mezenkimal meme epitel hücrelerinden ekstraselüler veziküller (EV) / ekzozomların arıtılması, nicelendirilmesi ve karakterize edilmesine yönelik yöntemleri ve meme bezi oluşturma yeteneğini luminal meme epitel hücrelerine aktarmak için kullanmayı açıklamaktadır. Gövde benzeri meme epitel hücrelerinden türetilmiş EVs / eksozomlar, bu hücre özelliğini EV'leri / eksosomları emen hücrelere aktarabilir.

Membran Bazal Epitelyal Hücreler ile Membran Luminal Hücreler Arasındaki Meme Bezi Oluşturma Yeteneğinin Ekstraselüler Vesiküller / Ekzozomlar Yoluyla Transferi

Biz iki meme epitel hatları, HC11 ve EpH4 farklılaşma indüksiyon teknikleri açıklayın. Her ikisi de süt proteinleri üretmek için fetal buzağı serumu, insülin ve prolaktin gerektirirken, EpH4 hücreleri üç boyutlu kültürde mammospheres içine tam olarak ayırt edebilirsiniz. Bu tamamlayıcı modeller farklılaşma ve neoplazi sinyal iletimi çalışmaları için yararlıdır.

Fare Meme Epitel HC11 ve EpH4 Hücrelerinin Farklılaşması

Burada, in vitro mammosphere öz-yenileme nicel tahsin sonuçlarının uygulanması ve yorumlanması açıklanmaktadır.

Murine Mammosphere Kültürlerde Kendini Yenileme Nin Niceliği

Meme bezi, dış miyoepitelyal ve iç luminal epitel hücrelerinden oluşan çift katmanlı bir yapıdır. Sunulan diferansiyel trippsinizasyon kullanarak organoidler hazırlamak için bir protokoldür. Bu verimli yöntem araştırmacılar ayrı ayrı meme bezi formu ve fonksiyonu rollerini ile ilgili soruları keşfetmek için bu iki hücre türleri işlemek için izin verir.

Diferansiyel Tripsinizasyon a göre Mozaik Meme Organoidlerinin Üretimi

Bu protokol, tümör olmayan meme epitel hücrelerinde Apoptoz İnhibörü 5 (Api5) tarafından indüklenen kanser kök noktasını incelemek için mamosfer oluşum testinin oluşturulma yöntemini açıklar. Birincil nesil mamutsferlerden toplanan lizatlar, kök hücre benzeri özelliklerin indüksiyonunu değerlendirmek amacıyla farklı kök belirteçleri için analiz edilir.

Mamokür Testi, tümör olmayan meme epitel hücre hatlarında Api5 kaynaklı kök konumunu ortaya koydu

Öğrenin, fare meme epitel hücrelerinde HC11 hücre hattı kullanarak laktogenik farklılaşmayı nasıl tetikleyeceğinizi ve mammosphere oluşumunu nasıl değerlendireceğinizi. Bu yöntem, meme bezinde hücre farklılaşmasının düzenlenmesini incelemek için güvenilir bir in vitro model sunar.

Fare Meme Epitel Hücreleri lactogenic Farklılaşma sırasında Mammospheres formu

Daha fazla video keşfet