Name: Fare Sinir Doku Hücre Tek Cezalar Üretimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-07T19:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Öğrenin fare sinir dokusundan tek hücre süspansiyonu üretme yöntemini. gentleMACS Dissociator kullanarak hücre canlılığını ve yüzey proteinlerini koruyarak nörobilim araştırmaları için güvenilir sonuçlar elde edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Steril koşullar altında çalışmak için, bir laminer akış kaputun içindeki tüm adımları gerçekleştirmek için tavsiye edilir. 1. Malzemeler <ul><li> Sinir Doku Ayrılma Kit (P) (Bileşenleri: Çözüm 1,2, 3 ve 4, Depolama Buffer) </li><li> Pre-Ayırma Filtreler </li><li> (Isteğe bağlı) Miyelin Kaldırma Boncuk </li><li> Beta-mercaptoethanol </li><li> gentleMACS Dissociator </li><li> C Tüpler </li><li> MACSmix Tüp Rotator </li><li> HBSS (w / o) </li><li> HBSS (w) </li></ul><ol><li> Protokol başlamadan önce aşağıdaki çözümleri hazırlayın: <ol><li> Kalsiyum katyonları olmadan Hanks 'Tamponlu Tuz Çözeltisi Ca 2 + ve Mg 2 + (HBSS (w / o) </li><li> HBSS, standart, yani Ca 2 + ve Mg 2 + (HBSS (w) </li></ol></li><li> Sonraki uygulamalarda ilgi antijen epitop bağlı, ya Papain-Sinir Doku Ayrılma Kit (P) veya tripsin tabanlı Sinir Doku Ayrılma Kiti (T) kullanın. </li><li> Sinir Doku Ayrılma Kit aşağıdaki çözümleri hazırlayın: <ol><li> Çözüm 2: 0,067 mM beta-mercaptoethanol eklemek </li><li> Çözüm 4: 0.7 ml Depolama Buffer (kit) toz çözülür, yavaşça karıştırmayın (vorteks) </li><li> Enzim Mix 1: C Boru ve 10-15 dakika boyunca inkübe pipetlenir 1.9 mL Çözüm 2 ve 50 ul Çözüm 1 (her iki kit) 37 ° C. Bu, beyin dokusu, 400 mg ayırmak yeterli olacaktır. </li></ol></li></ol> 2. Sinir doku Dissociating <ol><li> 1 ml HBSS (w / o) içeren bir tüp içinde beyin dokusu tartılır </li><li> Önceden ısıtılmış Enzim Mix 1 1950 mcL içeren C Tüp içine fare beyin aktarın. (NOT: Bu protokol ≤ 400 mg için yazılmıştır, ama çözüm hacimleri beyin dokusu 1600 mg C Tüp başına kadar ölçeklendirilebilir) </li><li> C Tüp gentleMACS Dissociator üzerine yerleştirin ve programı "m_brain_01" çalıştırın. </li><li> 37 15 dakika dönüş (MACSmix Tüp Rotator kullanarak 4 rpm) ile inkübe ° C. </li><li> C Tüp gentleMACS Dissociator üzerine yerleştirin ve programı "m_brain_02" çalıştırın. </li><li> Ayrışma adım sırasında 20 Çözüm 3 ve Çözüm 4 10 ul ul yavaşça karıştırılarak doku başına 400 mg Enzim Mix 2 30 ul hazırlar. </li><li> Enzim Mix 2 septum mühürlü bir kap ile C Tüp ekleyin ve karıştırın olmadan hafifçe karıştırın. </li><li> 37 ° C Tüp 10 dakika dönme ° C bir kuluçka inkübe edin. </li><li> C Tüp gentleMACS Dissociator üzerine yerleştirin ve programı "m_brain_03" çalıştırın. </li><li> 37 ° C Tüp 10 dakika dönme ° C bir kuluçka inkübe edin. </li><li> Borunun alt kısmında örnek toplamak için kısaca santrifüjleyin. </li></ol> 3. Süzme <ol><li> Bir filtre yeterince büyük ilgi hücrelere geçmesine izin seçin. Örneğin, Purkinje hücreleri, 30 mikron filtre geçmek için çok büyük, ama Prominin-1 + hücreler. </li><li> Hücreleri çıkarmak için bir suitable1000 ul pipet kullanın septum mühürlü bir kap aracılığıyla C Tüp formu ve 15 ml toplama tüpü Pre-Ayırma Filtre uygulamak. (NOT: daha büyük örneklem büyüklüğü 50 ml toplama tüpünün kullanımı için). </li><li> 10 ml HBSS (w) ile filtre yıkayın. </li><li> RT 10 dakika boyunca 300 xg'de süzülür hücreleri Santrifüj. </li><li> Sonraki uygulamalar için orta ya da seçim tampon supernatent süspanse edin. </li><li> Miyelin enkaz kaldırmak için, Miyelin Kaldırma Boncuk kullanın. </li></ol> 4. Temsilci Sonuç: Lütfen Rakamlar 1-3 bak <img src="/files/ftp_upload/1267/Fig_1.png" alt="Şekil 1"> Şekil. 1 gentleMACS Dissociator ile beyin ayrılma akım sitometri analizi gösterdiği gibi,% 97 canlı hücreleri sonuçlandı. <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig2.png" alt="şekil 2"> Şekil. (2) neurosphere oluşumu Işık mikroskop resim manyetik hücre sıralama sonra 7 gün sonra MACS olarak ekimi kullanarak ® Anti-Prominin-1 mikro NeuroMedium MACS Ek B27 PLUS ile desteklenebilir. Hücreler CD1 fare beyin Sinir Doku Ayrılma Kit (P) (P3) hazırlanmıştır. <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig4.jpg" alt="Şekil 3.5"> Şekil. Tek hücre süspansiyonları 3 Miyelin enkaz hücre izolasyonu önemli ölçüde bozar ve Miyelin Kaldırma Boncuk miyelin enkaz kaldırma verimliliği hücre ayırımlar artar . Anti-Prominin-1 mikro kullanarak MACS Ayrımları için P22 fare beyin Sinir Doku Ayrılma Kit (P) kullanarak ayrışmış oldu. Tek hücre süspansiyonu hücreleri doğrudan ayrılması için kullanılır, ya da Miyelin Kaldırma Boncuk kullanarak tükenmesi miyelin sunuldu. Miyelin çıkarmadan ve örnekleri ayırma karşılaştırma saflık önceki miyelin kaldırılması ile örnekler için daha yüksek olduğunu göstermektedir.

<ol><li>Hardt, O., Scholz, C., Küsters, D., Yanagawa, Y., Pennartz, S., Cremer, H., Bosio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+analysis+defines+differences+between+region-specific+GABAergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gene expression analysis defines differences between region-specific GABAergic neurons.</a> Mol Cell Neurosci. 39, 418-428 (2008).</li>
<li>Lee, J. K., McCoy, M. K., Harms, A. S., Ruhn, K. A., Gold, S. J., Tansey, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulator+of+G-protein+signaling+10+promotes+dopaminergic+neuron+survival+via+regulation+of+the+microglial+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regulator of G-protein signaling 10 promotes dopaminergic neuron survival via regulation of the microglial inflammatory response.</a> J Neurosci. 28, 8517-8528 (2008).</li>
<li>Környei, Z., Gócza, E., Rühl, R., Orsolits, B., Vörös, E., Szabó, B., Vágovits, B., Madarász, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astroglia-derived+retinoic+acid+is+a+key+factor+in+glia-induced+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Astroglia-derived retinoic acid is a key factor in glia-induced neurogenesis.</a> FASEB J. 21, 2496-2509 (2007).</li>
<li>Meylan, F., Davidson, T. S., Kahle, E., Kinder, M., Acharya, K., Jankovic, D., Bundoc, V., Hodges, M., Shevach, E. M., Keane-Myers, A., Wang, E. C., Siegel, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+TNF-family+receptor+DR3+is+essential+for+diverse+T+cell-mediated+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The TNF-family receptor DR3 is essential for diverse T cell-mediated inflammatory diseases.</a> Immunity. 29, 79-89 (2008).</li>
<li>Skog, J., Würdinger, T., van Rijn, S., Meijer, D. H., Gainche, L., Sena-Esteves, M., Curry, W. T. Jr, Carter, B. S., Krichevsky, A. M., Breakefield, X. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+microvesicles+transport+RNA+and+proteins+that+promote+tumour+growth+and+provide+diagnostic+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma microvesicles transport RNA and proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers.</a> Nat Cell Biol. 10, 1470-1476 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar Miltenyi Biotec GmbH, Almanya çalışanları.

GentleMACS Dissociator kapalı bir sistem içerisinde nöral dokuların tek hücre süspansiyonları standardize hazırlık kolaylaştırır. Sinir Doku Ayrılma Kitleri immunostainings ve immunomagnetic hücre ayırma 1-5 gibi başka uygulamalar için gerekli antijen epitoplar korumak için optimize edilmiştir. Bu protokolde, biz% 97 canlı hücreler verimli gentleMACS Dissociator ve Sinir Doku Ayrılma Kit (P) kullanarak fare beyin nazik enzimatik ayrılma göstermektedir. 5x10 6 ve konakçı doku yaşına bağlı olarak 1x10 7 hücreleri arasındaki, sinir doku verimi 100 mg . Hedef Prominin-1 + hücreler Anti-Prominin-1 mikro kullanılarak izole edilmiş ve daha sonra kültürün içine alınmıştır. Protokol, farelerin&gt; P7 türetilen sinir dokusu ile çalışırken Miyelin Kaldırma Boncuk ek kullanımı ile daha da etkili olduğu gösterilmiştir.

<table><tbody><tr><td>C Tüpleri</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Başlangıç Seti</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/de/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSmix&amp;#8482; Tüp Rotatörü</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-090-753</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tüp_Rotatörü.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Nöral Doku Disosyasyon Kiti (P)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-092-628</td><td>&lt;a href=&quot;Neural Tissue Dissociation Kits (Sinir Dokusu Disosyasyon Kitleri)

Miltenyi Biotec tarafından sunulan Sinir Dokusu Disosyasyon Kitleri, beyin ve omurilikten yüksek verimli, canlı ve tek hücreli süspansiyonların hazırlanması için geliştirilmiştir. Bu kitler, farklı türlerden ve doku bölgelerinden gelen sinir dokularının, hücre bütünlüğü ve protein ekspresyonu korunarak hızlı ve standart bir şekilde disose edilmesi için optimize edilmiştir.

Kitlerin temel özellikleri şunlardır:
- Yüksek hücre verimi ve canlılığı
- Minimaliz edilmiş inkübasyon süreleri
- Standardize edilmiş protokoller
- Geniş bir tür yelpazesine uyumluluk

Bu kitler, özellikle şu uygulamalar için uygundur:
- Akış sitometrisi (flow cytometry)
- Hücre ayırma (cell sorting)
- Tek hücre RNA dizileme (single-cell RNA sequencing)
- Hücre kültürü ve fonksiyonel analizler

Sistem, doku parçalamayı kolaylaştıran ve hücreler arasındaki bağlantıları nazikçe koparan özel enzim karışımları ve yardımcı solüsyonlar içerir. Bu sayede, mekanik stres minimize edilerek hücrelerin doğal durumları korunur.&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Ayırma Öncesi Filtreler</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-041-407</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Anti-Prominin-1 Mikroboncuklar</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-092-333</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/tr/PG_654_524_Anti_Prominin_1_MicroBeads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_654_524_Anti_Prominin_1_MicroBeads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Anti-Prominin-1-APC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-092-335</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_525_Anti_Prominin_1.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_525_Anti_Prominin_1.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Miyelin Giderme Boncukları</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-094-544</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_688_Myelin_Removal_Beads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_688_Myelin_Removal_Beads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Art 1000 Reach Pipet Uçları </td><td>Moleküler BioProducts</td><td>Sipariş no. 2079</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&lt;/a&gt;&lt;br/&gt;&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&quot;&gt;ART (Artifakt Temizleme)

Artifakt Temizleme (ART), EEG verilerini analiz ederken karşılaşılan ve analiz sonuçlarını olumsuz etkileyebilecek biyolojik ve çevresel gürültülerin (artifaktların) sistematik olarak tespit edilmesi ve kaldırılması için geliştirilmiş gelişmiş bir yazılım modülüdür.

ART, özellikle aşağıdaki artifakt türlerini etkili bir şekilde yönetir:
* Göz kırpma ve göz hareketleri
* Kas aktiviteleri (EMG)
* Elektrot kaymaları ve temas sorunları
* Diğer çevresel gürültüler

Bu modül, verilerin bilimsel bütünlüğünü koruyarak, sinyal-gürültü oranını artırmak ve daha güvenilir sonuçlar elde etmek amacıyla tasarlanmıştır. ART, kullanıcı dostu bir arayüz üzerinden kolayca uygulanabilir ve standart EEG analiz iş akışlarına entegre edilebilir.&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Sinir Dokusu Disosyasyon Kiti (T)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-093-231</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Sinvirsel_Doku_Disosyasyon_Kitleri.aspx&quot;&gt;Sinyral Doku Dissosiyasyon Kitleri&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Propidyum İyodür Çözeltisi</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>Sipariş no. 130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

fare sinir doku hücre tek cezalar Üretimi

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Sinir sistemi içinde, yüzlerce nöronal ve glial hücre tipleri tarif edilmiştir. , Beyin ya da omurilik her belirli bir hücre tipi, hücre yüzey molekülleri ya da moleküler belirleyiciler, tespit ve karakterize edilebilecek bir repertuara sahiptir. Şu anda, sağlam hücre tanımlama ve ayırma teknolojileri aynı karakteristik yüzey proteini hücre ölüm ve yıkım sınırlayan tek hücreli preparatlar elde edilecek gerektirir. Tripsin veya papain tabanlı disosiasyon kitleri ile birlikte kullanılan antijen epitoplar korunması ve hücre kaybını sınırlandırarak gentleMACS Dissociator, etkin ve beyin dokusu hafifçe ayrılabilir. Tek hücre süspansiyonları Standardize hazırlık C Tüpler ve optimize edilmiş, önceden belirlenmiş gentleMACS Programları kullanılarak elde edilir. Bir kere üretilen tek hücre süspansiyonları, sinir atalarıdır tanımlamak veya Miyelin Kaldırma Boncuk kullanarak daha saflaştırılmış Anti-Prominin-1 mikro, gibi monoklonal konjugatları ile tedavi edilebilir.

Belirli doku tiplerinin hücreleri Dissociating doku aggitation için belirli parametreler uygulanabilir kültürlenebilen hücrelerinin yüksek ses elde etmek için gereklidir. Miltenyi gentleMACS Dissociator basit, pratik bir protokol ile bu görevi en iyi hale getirir. Bu yayında, nerual doku bu cihazların kullanımı açıklanmıştır.

Fare Sinir Doku Hücre Tek Cezalar Üretimi

Sinir sistemi içerisinde yüzlerce nöronal ve glial hücre tipi tanımlanmıştır. Beyin veya omurilikteki her bir spesifik hücre tipi ...

Sinir sistemi içerisinde yüzlerce nöronal glial hücre tipi tanımlanmıştır. Beyin veya spinal korddaki her bir spesifik hücre tipi, kendisinin tanımlanmasını ve karakterize edilmesini sağlayan bir hücre yüzey molekülü veya moleküler belirleyici repertuvarına sahiptir.Günümüzde, sağlam hücre tanımlama ve ayırma teknolojileri, hücre ölümünü ve karakteristik yüzey proteinlerinin yıkımını aynı anda sınırlarken tek hücre hazırlıklarının oluşturulmasını gerektirmektedir. Gentle max associator, tripsin veya pepsin tabanlı disosiyasyon kitleri ile kombine edildiğinde, hücre kaybını sınırlayıp antijen epitoplarını koruyarak beyin dokusunu etkili ve nazik bir şekilde disosiye edebilir. Oluşturulan tek hücre süspansiyonları, nöral progenitörleri tanımlayan anti-prominin-1 microbeads gibi monoklonal konjugatlar ile işlenebilir veya miyelin uzaklaştırma boncukları kullanılarak daha fazla saflaştırılabilir.Merhaba, benim adım Sandra PeNAT. Almanya'nın baggage Gabert şehrindeki Mil Biotech'te nörobilim ürünleri proje yöneticisiyim. Bugün size, Genix Dissociator kullanarak fare beyin dokusundan tek hücreli süspansiyonun nasıl hazırlanacağını göstereceğim.Genix dis associator, çeşitli doku türlerini kapalı ve steril bir ortamda disosiye edebilen bir cihazdır; böylece zahmetli olan manuel mekanik disosiyasyon ihtiyacını ortadan kaldırır. Öyleyse başlayalım. Sonraki uygulamalarda ilgilenilen antijen epitopuna bağlı olarak, ya papain tabanlı nöral doku disosiyasyon kitini ya da tripsin tabanlı nöral doku disosiyasyon kitini kullanın.Bugünkü deney için, anti prominent one mikroboncuklarını kullanarak belirgin pozitif hücreleri izole etmek istediğimizden neuro tissue dissociation kit P'yi tercih ediyoruz. Prominent one ne pepane'ye ne de tripsine duyarlıdır ve böyle bir durumda neuro tissue dissociation kit P daha iyi bir seçimdir. Protokol başlatılmadan önce, bu kit için gereken reaktifler ve solüsyonlar hazırlanmalıdır.Kalsiyum ve magnezyum iyonları içermeyen Hank's dengeli tuz çözeltisi (HBSS), kalsiyum ve magnezyum iyonlu HBSS ve beta-mercaptoethanol stoklarınızı hazır bulundurun. Öncelikle çözelti iki, çözelti dört ve ardından enzim karışımı bir'i hazırlayarak başlayın. İlk olarak, çözelti iki'ye nihai konsantrasyonu 0.067 millimolar olacak şekilde beta-mercaptoethanol ekleyin.Çözelti, dört santigrat derece sıcaklıkta saklandığında bir aya kadar stabil kalır. Ardından, liyofilize tozu ve "solution.Four" etiketli flakonu çözün. Bunun için 0,7 mililitre saklama tamponu kullanarak nazikçe karıştırın ve vortekslemeden.Şimdi, 1900 µL çözelti iki ve 50 µL çözelti biri bir C tüpüne pipetleyerek enzim karışımı bir'i hazırlayın. Bu miktar, 400 mg dokuyu disosiye etmek için yeterli çözeltidir; dolayısıyla daha fazla doku disosiye edilecekse, ek enzim karışımı bir hazırlayın. Bir C tüpünde maksimum 1600 mg beyin dokusu işlenebilir.C tüpündeki bir numaralı enzim karışımı daha sonra 37 °C'de 10 ila 15 dakika boyunca inkübe edilir. Disosiyasyona başlamak için tüpe kalsiyum ve magnezyum iyonları içermeyen bir mililitre HBSS pipetleyin. Tüpü bir terazi üzerine yerleştirin, beyin dokusunu ekleyin ve kütlesini kaydedin.Bu P dört fare beyni yaklaşık 0.2 gram ağırlığındadır. Erişkin bir beyin yaklaşık 0.4 gram ağırlığında olacaktır; 400 miligramın altındaki tüm doku örnekleri için bugün kullanacağımız solüsyon hacimleri yeterlidir.Dokunuz 400 miligramdan daha ağırsa, tüm reaktif hacimlerini buna göre artırın; tek bir C tüpünde 1600 miligram dokuya kadar işlem yapılabilir. Fare beynini, 1.950 mikrolitre önceden ısıtılmış enzim içeren hazırlanan C tüpüne aktarın. Karıştırın ve kapağı sıkıca kapatın.Şimdi C tüpünü, kapağı aşağıya gelecek şekilde gen max associator üzerine yerleştirin ve dokunun stator alanında olduğundan emin olun. MCO brain O one programını seçin ve programı çalıştırın. Bu, disosiasyon sırasında çalıştıracağınız üç programın ilkidir; program sona erdiğinde.C tüpünü çıkarın ve örneği 37 °C'de, yavaş ve sürekli rotasyon altında 15 dakika inkübe edin. Max mix tüp rotatörü kullanırken, cihazın çalışma modu dört RPM'ye karşılık gelmelidir. İlk inkübasyonun ardından, tüpü tekrar disosyasyon cihazına ters şekilde yerleştirin ve M brain O2 programını çalıştırın. Bir sonraki asosyasyon sırasında, 20 µL çözelti üç ve 10 µL çözelti dört ekleyerek, 400 mg doku başına 30 µL enzim karışımı iki hazırlayın.İkinci karıştırıcı döngüsü sona erdiğinde, kapağın merkezindeki septumla mühürlenmiş açıklıktan doğrudan C tüpüne 30 µL enzim karışımı iki ekleyin. Sterilitenin sağlanması için C tüpünü nazikçe ters çevirerek karıştırın ve vortekslemeden kaçının. Ardından C tüpünü tekrar max mix tüp rotatoruna yerleştirin ve örneği 37 °C'de, 4 RPM karıştırma ile 10 dakika boyunca inkübe edin.Ardından CTU, üçüncü ve son kez gentle max dis associator cihazına yerleştirilir ve M brain oh three programı çalıştırılır. Üçüncü program tamamlandığında, C tüpleri rotatora yerleştirilir ve 37 °C'de 10 dakika daha inkübe edilir. Şimdi, hücreleri tüpün dibinde toplamak için örneği kısa süreliğine santrifüjleyin.Şimdi hücreleri filtrelemeye hazırız. İlgilendiğiniz hücre tipinin boyutuna göre bir hücre süzgeci seçin. Toplamak istediğiniz hücreler, kinji hücreleri gibi çapı 30 µm'den büyükse, gözenek boyutu bu çaptaki hücre gövdelerinin geçebileceği kadar büyük olmalıdır.Belirgin tek pozitif hücreler için 30 µm'lik bir filtre uygun olacaktır. Ayrıştırılmış dokuyu, C tüpü kapağındaki septum sızdırmaz açıklıktan geçebilen 1000 µL'lik pipet uçlarını kullanarak C tüpünden çıkarın. Hücre süspansiyonunu, 15 mL'lik bir toplama tüpü üzerine yerleştirilmiş pres ayırma filtresine uygulayın.Daha büyük örnek boyutları için 50 mililitrelik tüpler gerekebilir. Hücre süspansiyonunun filtreden geçmesine izin verin. Ardından filtreyi, kalsiyum ve magnezyum iyonları içeren 10 mililitre HBSS çözeltisi ekleyerek yıkayın.400 miligramdan fazla doku miktarlarıyla çalışırken, filtrenin yıkanması için kalsiyum ve magnezyum iyonları içeren 30 mililitreye kadar HBSS kullanın. Şimdi, hücreleri toplama tüpünde oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 300 Gs'de santrifüj ederek çöktürün, süpernatantı tamamen aspire edin ve hücre peletini tercih ettiğiniz tampon veya ortamda yeniden süspanse edin. Bu aşamada, hücre izolasyonunu ve antikor boyamasını engelleyebileceği için varsa miyelin kalıntılarını uzaklaştırmayı seçebilirsiniz.Miyelin kalıntılarını uzaklaştırmak için miyelin giderme boncuklarının kullanılmasını öneririz. Aksi takdirde, hücreler ileri uygulamalar için hazırdır. Propidyum iyodür boyamasına dayalı bu nokta grafiği, bu videoda oluşturulan süspansiyona benzer şekilde, ev fare burkulması kaynaklı tek hücreli süspansiyonda bulunan hücrelerin %97'sinin canlı olduğunu göstermektedir.Bu hücreler, nöronal progenitörler elde etmek için anti-prominin mikroboncukları kullanılarak daha fazla saflaştırılabilir; bunlar, B 27 plus ile desteklenmiş max neuro ortamında kültüre edildiğinde, bu nokta grafiklerinde görüldüğü üzere nörosferler oluşturabilirler. Süspansiyonların miyelin uzaklaştırma boncukları ile işlenmesinin faydası gözlemlenmektedir. Tek hücre süspansiyonundan miyelin tüketimini takiben max ayrıştırma ile, prominin 1 eksprese eden nöronal progenitörlerin anlamlı derecede daha yüksek bir yüzdesi elde edilir.Genix disosiasyon ve nöral doku disosiasyon kiti kullanarak fare beyin dokusundan tek hücre süspansiyonunun nasıl hazırlanacağını size gösterdim. Bu prosedürü uygularken, seçilen nöral doku disosiasyon kitine (T veya P) uygun tüm çözeltilerin uygun şekilde hazırlanması önemlidir. Lütfen NDK uygulama notuna veya veri sayfasına başvurun. Bu yöntem kullanılarak, embriyonik doku kesitleri veya tüm beyin, steril koşullar altında, zaman tasarrufu sağlayan ve standartlaştırılmış bir şekilde işlenebilir.İzlediğiniz için teşekkür eder, deneylerinizde başarılar dileriz.

generation-of-single-cell-suspensions-from-mouse-neural-tissue

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video embriyonik farelerin gelişmekte olan korteks neuroprecursors izolasyonu için kullanılan yöntem açıklanır. , Embriyoların rahim kaldırarak, kortikal doku diseksiyon, ve sindirerek izole serebral korteks prosedür gösterilmiştir.

Fare Nöral Kök Hücre Öncüleri Kültür

Atılır insan fetal kortikal doku sinir kök hücrelerin izolasyonu ve kültürü üzerinde basit ve güvenilir bir yöntem açıklanmıştır. Bilinen insan nörolojik bozukluklar türetilen Kültürler farmakolojik etkinliğini değerlendirmek için bir platform sağlamak gibi, hücresel ve moleküler patolojik süreçleri karakterizasyonu için kullanılabilir.

Atılan İnsan Fetal Kortikal Doku Sinir Kök Hücre Üretimi

Bu video, doğum sonrası fare beyinciğinden kök hücreleri izole etmek ve bunları nöral hücrelere ayırmak için bir yöntemi göstermektedir. İzole edilmiş hücre süspansiyonundan elde edilen kök hücreler, antikor kaplı manyetik boncuklar kullanılarak saflaştırılır ve nöroküreler oluşturmak üzere kültürlenir. Nörosferler daha sonra nöral hücreler oluşturmak için bir farklılaşma ortamında tutulur.

Doğum Sonrası Fare Beyinciğinden Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Nöral Hücrelere Farklılaşması

Bu video, otomatik mekanik ayrışma ve enzimatik sindirime yardımcı olmak için bir enzim karışımının bir kombinasyonunu kullanarak fare beyin hipokampusundan oldukça canlı bir tek hücreli süspansiyon elde etmek için bir protokolü göstermektedir.

Fare Hipokampal Dokusundan Tek Hücreli Süspansiyon Elde Edilmesi

Video, bir murin beyin dokusundan tek hücreli bir bağışıklık hücresi süspansiyonunun hazırlanmasını göstermektedir. Hücreleri beyin dokusundan serbest bırakmak için enzimatik sindirimi ve ardından tek hücreli süspansiyonu elde etmek için bağışıklık hücrelerini yoğunluklarına göre izole etmek için yoğunluk gradyanlı santrifüjlemeyi içerir.

Murin Beyin Dokusundan Tek Hücreli Bağışıklık Hücrelerinin Süspansiyonunun Hazırlanması

Burada subventricular bölgesi ve bireysel yetişkin farelerin kıvrımlarının gelen yapışkan tek katman veya neurospheres ya gibi, sinir öncü hücre kültürlerinin eş zamanlı üretimi için ayrıntılı bir protokol açıklar.

Bir Fare, İki Kültür: İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kültür Bireysel Farelerde iki Nörojenik Bölgeler&#39;den Kök Hücre

Erişkin nöral kök hücrelerin (aNSC'ler) genişletilmesi için kültür sistemlerinin kurulması, aNSC'lerin tedavi için incelenmesine ve uygulanmasına olanak sağlar. Subkallozal bölge (SCZ) son zamanlarda yetişkin farelerde yeni bir nöroblast oluşturan bölge olarak kabul edilmiştir. Burada, SCZ-aNSC'lerin izolasyonu, genişletilmesi ve farklılaştırılması için yöntemler açıklanmaktadır.

Fare Subcallosal Zone İzolasyon ve Yetişkin Nöral Kök Hücre Kültürü

Burada, E13 fare embriyo ganglionic itibar bir roman mikrocerrahi teknik nöral kök hücrelerin izolasyonu için tanıtmak.

Yalıtım ve kültür embriyonik fare nöral kök hücrelerin

Burada, erişkin murin subventriküler bölgesinden izole edilen genişletilmiş nöral kök hücrelerde (NSC'ler) gen iletim verimliliğini artırmak için tasarlanmış bir nükleofeksiyon sistemini açıklıyoruz. Bulgular, bu yöntemin NSC'lerde gen bozulmasını önemli ölçüde iyileştirdiğini, geleneksel transfeksiyon protokollerinin etkinliğini aştığını ve hücre sağkalım oranını artırdığını göstermektedir.

Erişkin Murin Subventriküler Bölgesinden Nöral Kök Hücrelerin İzolasyonu, Genişlemesi ve Nükleofeksiyonu

Beyin bozukluklarına karşı bağışıklık tepkisini araştırmak için yaygın bir yaklaşım, bağışıklık hücrelerindeki değişiklikleri analiz etmektir. Burada, murin beyin dokusu ve kafatası kemik iliğinden bağışıklık hücrelerini izole etmek için iki basit ve etkili protokol sağlanmıştır.

Fare Beyninden ve Kafatasından İmmün Hücrelerin İzole Edilmesi

Öğrenin fare sinir dokusundan tek hücre süspansiyonu üretme yöntemini. gentleMACS Dissociator kullanarak hücre canlılığını ve yüzey proteinlerini koruyarak nörobilim araştırmaları için güvenilir sonuçlar elde edin.

Fare Sinir Doku Hücre Tek Cezalar Üretimi

Daha fazla video keşfet