Name: Bireysel Az hücreler baskın Sitoloji Numune Cell Block Hazırlama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Öğrenin Shidham yöntemiyle az hücreli sitoloji örneklerinden hücre bloğu hazırlamayı. AV işaretleyici ve HistoGel kullanarak immün profil analizi ve özel boyamalar için hücre yoğunluğunu artırın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar AV kalemi ile hücre blok kesme bölümünde gösteren Chris Chartrand, HT (ASCP) teşekkür ederim.

Giriş: Bu HistoGelTM (Thermo Scientific) (HG) kullanarak sıvı bazlı sitoloji (LBC) örnek hücre blok hazırlanması için Shidham yöntemi anlatan bir video. Gibi rastgele diğer yaklaşımlara göre, bu protokolün iki kritik özellikleri tek tek dağılmış gevşek hücreleri (1-5) ile nispeten hiposellüler örneklerinden hücre bloklarının hazırlanması için. <ol><li> Bu protokol, hücrelerin hücre blok kesme yüzeyine paralel düzlemi boyunca konsantre için gerekli adımları içerir. </li><li> Ayrıca, aşağıdaki amaçlarla iki hizmet AV-işaretleyici (Şekil 1b), bir deniz feneri gibi koyu dahil içerir: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Hücrelerin yoğunlaştığı hangi düzeyde görselleştirmek için. Koyu renkli işaret kesme sırasında maruz kaldığında ilgi hücreler ile hücre bloğu alanı histotechnologist tarafından görüntülendi olabilir. Bu yetenek izlemek için hücrelerin en düzeyi ile kesme ya da örnek hücrelerinin yüksek konsantrasyon seviyesine çok yüzeysel kesim önleyecektir. </li><li> Farklı slaytlar seri hücre blok bölümünde konumlandırıcı referans noktası olarak hizmet etmek. Bu referans noktası SCIP yaklaşım (6,7) ile bir koordinat immünoreaktivite desen değerlendirilmesi için hücrelerin özellikle hücre ya da gruplar bulmasına yardımcı olmak için bir işaret olarak görür. </li></ol></li></ol> PROTOKOL (Şekil 2) Numunenin hazırlanması. <ol><li> Düz bir alt cam tüp (15mm çap x 45mm) (Şekil 2.1 üzerinden 2.4) artık LBC servikal sitoloji örnek aktarın. Daha büyük bir plastik taşıyıcı tüp (28 x 85mm) ve santrifüj cam tüp içine yerleştirin. Taşıyıcı tüp cam altındaki tüp çıkarın ve süpernatantı dökün. </li><li> Cam tüp daha sonra kapatılmış (bir sonraki adımda ısıtma su dökülmesini önlemek için) ve daha büyük bir düz dipli taşıyıcı plastik tüp içine yerleştirilir </li><li> Cam tüp içeren taşıyıcı plastik tüp daha sonra, şapkalı bir santrifüj yerleştirilir (hücreler, düz cam tüp alt dik düşmek, böylece döner bardak ve sabit açılı bardak), ve 1805 G (3000 rpms döndü. rotor yarıçapı-17cm) beş dakika (Şekil 2.5). </li><li> Sonra santrifüj tüpleri dikey olarak kaldırılır ve küçük cam tüp hücreleri ile tortulaşmış pelet bozmadan daha büyük taşıyıcı plastik tüp forseps ile kaldırılır. </li><li> Numune ile cam tüp kapağını açıp ve süpernatantı tortu hücreler altta düz bir tabaka (Şekil 2.6) rahatsız etmemek için özen dökülür. </li></ol> İçerme ve jel ek referans koordinat AV-işaretleyici <ol><li> Karanlık bir işaret AV-işaretleyici (yaklaşık 2 mm X 2 mm boyutlarında, düz, koyu renkli, sectionable malzeme parçası, su yüzüne) (Şekil 3), cam tüp tabelasını (Şekil 2.7) eklenir. </li><li> 10 saniye boyunca orta güçte mikrodalga eriterek HG bir kısım Liquefy. </li><li> 0.5 ml erimiş HG hızlı bir tortu ile tüp karışımı ekleyin ve (HG katılaşabilme başlamak için izin vermeden hızlı bir şekilde bir sonraki adıma geçin) (Şekil 2.8) recap. </li><li> Yaklaşık 2.5 ml ılık (45 ° C) su taşıyıcı plastik tüp (Şekil 2.9). </li><li> Küçük kapaklı cam tüp ılık su ile plastik tüp içine yerleştirilir. (Bu adım, sonraki adımlarda katılaşabilme HG tutmak için gerekli) (Şekil 2.9). </li><li> Taşıyıcı plastik tüp santrifüj yerleştirilir (hücreler, düz cam tüp alt dik düşmek, böylece döner bardak ve sabit açılı bardak) ve beş 1805 G (3000 rpms, rotor yarıçapı-17cm) bükülmüş dakika. Bu santrifüj adımın amacı, AV-işaretleyici itmek ve son parafin hücre bloğu (Şekil 1d) kesim yüzeyi daha yakın bir tabaka haline hücrelerin konsantre. </li><li> Bu tüpler daha sonra, alt kısmında örnek hücreleri ile tortulaşmış ince bir tabaka rahatsız etmemek için özen santrifüj yavaşça ve dikey kaldırılır. </li><li> Büyük plastik boru kapağını açtı ve küçük cam tüp örnek hücrelerinin tortu tabakası bozmadan bir forseps ile dikey olarak kaldırılır. </li><li> Küçük bir cam tüp, dikey pozisyonda, serin ve HG (Şekil 2.11) katılaşmaya 15 dakika boyunca buzdolabında. </li></ol> Son işlem için jel ile örnek bir düğme olarak hücre blok çıkarılması <ol><li> Şırınga (Şekil 2.12) ile 23 gauge iğne ile% 10 formalin squirting tarafından, alt tortu / konsantre örnek tabakası ile katılaşmış HG disk, düz dipli cam tüp yerinden. </li><li> Örnek (Şekil 2.12) katılaşmış HG diskin çevresindeki tüpün kenarı boyunca iğne yerleştirilir. </li><li> Needlformalin şırınga yoluyla yavaş yavaş itilir e tüpün kenarı boyunca döndürülür. Bu sonuç, koyu renkli işaret AV-marker ve düz cam tüp altında (Şekil 2.12) konsantre numune ile birlikte HG düğmesine ayrılması. </li><li> Hücre bloğu (örnek hücreleri ile jel düğmesi) etiketli bir kaset yerleştirilir ve parafin hücre bloklarının (Şekil 2.13) hazırlamak için doku işleme için sunulur. </li></ol> Gömülmesi ve numunenin kesme <ol><li> Disk aşağı kesim yüzeyi gibi karanlık işaret işaretleyici tarafında (Şekil 1) parafine gömülü. </li><li> Bir işaret açık ve net bir şekilde görünür olduğu gibi blok koyu renkli AV-işaretleyici kadar kesitli. </li><li> Üç dört mikron bölümleri numune tek tek dağılmış hücreleri en içermelidir bu düzeyde kesilir. </li><li> Bölümler daha fazla boyama, immünhistokimyasal boyama ya da belirtildiği gibi diğer testler için cam slayt üzerinde toplanır. Bölümler montaj için kullanılacak slayt türü de dahil olmak üzere bu testleri için protokolleri farklılık gösterebilir. Genellikle immün kaplı slaytlar immün adımları sırasında kayan ve slaytlar bölümlerini kaybı önlemek için kullanılır. </li></ol> (Alfabetik sırayla) kullanılan kısaltmalar: CISH, in-situ hibridizasyon testleri kromojenik; FISH, Floresan in situ hibridizasyon testleri; FFPE, formalin ile fikse parafine gömülmüş; ince iğne aspirasyon biyopsisi, ince iğne aspirasyon, HG, HistoGel ™ (Thermo Scientific); LBC, sıvı bazlı sitoloji; PCR Polimeraz zincir reaksiyonu; <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. hücre blok yapı Shidham protokol tarafından hazırlanmış. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2 Shidham protokol LBC örnek hücre blok hazırlamak için farklı adımlar özeti. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3 muz soyma AV-marker hazırlanması. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig4.jpg" alt="Şekil 4" /> Şekil 4 ve AV-işaretleyici ve bölümlerin hücre bloklarının karşılaştırılması. <img src="/files/ftp_upload/1316/1382fig5.jpg" alt="Şekil 5" /> Şekil 5 AV-damgalı olan ve olmayan hücre blok bölümleri hücresellik karşılaştırılması.

<ol><li>Shidham, V. B., Epple, J. Chapter 14, Appendix I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShidham%2C+VB+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. Forthcoming.</li>
<li>Varsegi, G., D'Amore, K., Shidham, V. p16INK4a Immunocytochemistry as an Adjunct to Cervical Cytology - Potential Reflex Testing on Specially Prepared Cellblocks from Residual Liquid Based Cytology (LBC) Specimens. Modern Pathology 22: 98th Annual Meeting of United States and Canadian Academy of Pathology. 2009 Mar 7-13, Boston, Ma, , Abstract 424 97a-97a (2009).</li>
<li>Nigro, K., Tynski, Z., Wasman, J., Abdul-Karim, F., Wang, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+cell+block+preparation+methods+for+nongynecologic+ThinPrep+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Diagn+Cytopathol%22%5BJournal%5D)">Comparison of cell block preparation methods for nongynecologic ThinPrep specimens.</a> Diagn Cytopathol. 35, 640-643 (2007).</li>
<li>Saleh, H. A., Hammoud, J., Zakaria, R., Khan, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Thin-Prep+and+cell+block+preparation+for+the+evaluation+of+Thyroid+epithelial+lesions+on+fine+needle+aspiration+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22CytoJournal%22%5BJournal%5D)">Comparison of Thin-Prep and cell block preparation for the evaluation of Thyroid epithelial lesions on fine needle aspiration biopsy.</a> CytoJournal. 5, 3-3 (2008).</li>
<li>Kyroudi, A., Paefthimiou, M., Symiakaki, H., Mentzelopoulou, P., Voulgaris, Z., Karakitsos, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increasing+diagnostic+accuracy+with+a+cell+block+preparation+from+thin-layer+endometrial+cytology%3A+a+feasibility+study%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cytol%22%5BJournal%5D)">Increasing diagnostic accuracy with a cell block preparation from thin-layer endometrial cytology: a feasibility study.</a> Acta Cytol. 50, 63-69 (2006).</li>
<li>Atkinson, B. F. Chapter 5: Immunocytochemistry of effusion fluids: introduction to SCIP approach (Chapter 5. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAtkinson%2C+BF+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. (2007).</li>
<li>Shidham, V. B. Chapter 15, Appendix II: Immunocytochemistry of effusions processing and commonly used immunomarkers. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShidham%2C+VB+%22Cytopathologic+Diagnosis+of+Serous+Fluids%22">Cytopathologic Diagnosis of Serous Fluids</a>. Shidham, V. B., Atkinson, B. F. , Elsevier. (2007).</li>
</ol>

Hücre blokları çeşitli sitolojisinde (1) değerlendirilmesi için değerli bir araç. En önemlisi, örnek mimari detaylara ek olarak, hücre bloklarının gibi immünsitokimya gibi yardımcı çalışmalar, kromojenik / floresan in-situ hibridizasyon testleri (FISH / CISH) ve in-situ PCR değerlendirilmesi için izin verir. Hücre blok hazırlanması için çeşitli yöntemler açıklanmıştır. Ancak, bunların çoğu nispeten birçok hücreleri içeren ve doku FNA aspiratlarda gibi microfragments ve seröz efüzyonlar (1,3,4,5) gibi bazı sıvılar ile non-jinekolojik sitoloji örnekleri için uygundur. Hücre bloklarının öncelikle immünositokimyasal değerlendirilmesi için bir fırsat sağladığı için, onların işleme tercihen formalin ile fikse parafine gömülü (FFPE) dokuları ile benzer olmalıdır. Sonuçta hücre blok bölümden immünositokimyasal değerlendirmesinden sonra elde edilen sonuçlar bu FFPE doku kesitlerinde ağırlıklı yayınlanan literatür ile karşılaştırıldı. Protokol herhangi bir değişikliğin potansiyel uzlaşma ve farklı fiksatif ve diğer rutin FFPE için kullanılan daha reaktif dizileri ile işlenmiş hücre bloklarının elde edilen sonuçların geçerliliğini geçersiz. Bazı ticari teknikleri, diğer fiksatif-reaktif maruz maruz kalma bir protokol ile işleme dezavantajı olabilir. Hücre blok hazırlanması, tortu ve doku parçaları önemli bir miktarı ile örnekler için çeşitli yöntemler mevcuttur. Prensip olarak, konsantre sedimanlar bazı jel veya pıhtılaşma prensibi tarafından desteklenmektedir. Manevra düğmesine sonra cerrahi patoloji örneklerinde / biyopsileri gibi işlendikten sonra parafine gömüldü. Kullanılan jeller, jelatin, agar, fibrinojen / plazma trombin ve diğer ticari jeller gibi HG içerir. Konsantrasyon yöntemleri, çeşitli tipte membran boyunca hücreler santrifüj tarafından tortu basit peletleme konsantrasyonu değişir. Örnekler şunlardır: Milipore, collodin (Celloidin) torba veya cam slayt (1) sitoloji smear hücreleri kazıma. Ayrıca jeller agar ve jelatin farklı kombinasyonları deneyerek çeşitli değerlendirildi. Kombinasyonların hiçbiri, katılaşmış jel kolayca manevra diski tek parça halinde numune gömülü hücreler elde etmek için bir firma yeterince tutarlılık elde etti. HG uygun tutarlılık gösterdi ve tecrübemizi HG hücre blok bölümlerde immün sonuç mükemmel olmuştur. Yukarıda da belirtildiği gibi servikovajinal sitoloji için Sıvı bazlı sitoloji (LBC) örnekleri Jinekolojik olmayan örneklerin daha az hücresel. Jinekolojik LBC örneklerin yanı sıra, ağırlıklı olarak bireysel servikovajinal mukoza dağınık eksfolyatif yüzeysel hücreler içeriyor. Bu nedenle, hücre bloğu bölümleri içinde uygun hücresellik özel bir yaklaşım olmadan elde edilebilir. Bu tek başına blok hücresel bileşenleri dağınık olarak bölüm kesim sırasında histotechnologist görülen olması değil. Hücrelerin bölümlerde görünen başlatmak hangi düzeyi ya çoğu hücremizde düzeyini geçmiş kesim tarafından ya da değil, takdir olarak değil edebilir ve atlanabilir örnek hücreleri (Şekil 4) ile en yüksek konsantrasyon seviyesine yeterince derin kesme. Shidham protokol HG, orta ve geleneksel laboratuvar ekipmanları (2) (Şekil 2) gömme olarak kullanarak bu konuların her iki adres. Bu protokol, iki önemli özellikleri (Şekil 1) Aşağıdaki içerir: <ol><li> Konsantrasyon ve hücre bloğu (Şekil 5) kesim yüzeyine paralel ve bitişik dar bir düzlemde tek tek dağılmış hücreleri uyum. </li><li> Tabelasını olarak bir deniz feneri gibi koyu AV-işaretleyici dahil edilmesi. Bu aşağıdaki özelliklere ulaşmak için kritik öneme sahiptir: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Belirlenmesi ve hücreleri hücre blokta yoğunlaştığı hangi düzeyde izlenmesi koyu renkli tabelasını hücre bloğu içinde tek tek dağılmış hücreleri (Şekil 4) yer olması bekleniyor hangi maruziyet düzeyi vurgulamaktadır. Engeller (seviye geçmiş en hücreleri ile kesme) veya hücre bloğu kırarak (örnek hücrelerinin yüksek konsantrasyon seviyesine yeterince derin kesme) ve en yüksek konsantrasyon ile ilgili hücre bloğunda seviyesinden bölümlerin seçimine izin kesmesini hücre. </li><li> Bölümlerde koyu renkli tabelasını da aynı hücrelerden farklı slaytlar hücre bloğu (Şekil 4) farklı seri bölümlerde araştırma ve tanımlamak için bir referans noktası olarak hizmet vermektedir. Yorumlanması ve SCIP yaklaşımı özellikle hücrelerin immunoprofile aynı hücrelerin farklı bölümler (6,7) takip koordinat özelliklerini değerlendirirken Bu kritik. </li></ol></li></ol> Rağmen our protokolü standardize edilmiş ve sıvı bazlı servikal sitoloji örnekleri için bildirilen, aynı zamanda efüzyon sıvılar, ince iğne aspirasyon biyopsisi, manşonlarla, kist içeriği vs gibi diğer birçok Jinekolojik olmayan örneklerin yanı sıra tanısal verimi artırmak için kullanılan olabilir AV marker geliştirilmiş kolaylaştırmak Bu örneklerin hücre blok bölümden immünohistokimyasal değerlendirme sırasında SCIP yaklaşım uygulama. Gömme orta ilgili adımları uygun değişiklikleri ile diğer reaktifler tarafından değiştirilebilir. HG, oda sıcaklığında (1) Trombin tarafından jel plazma (Fibrinojen) tarafından değiştirilebilir.

bireysel az hücreler baskın sitoloji numune cell block hazırlama

Cell Block Preparation from Cytology Specimen with Predominance of Individually Scattered Cells

Bu video için Shidham tek tek dağılmış hücreleri ve küçük hücre grupları içeren sıvı bazlı servikovajinal sitolojisinde hücre bloklarının hazırlanması yöntemi göstermektedir. Bu teknik, geleneksel laboratuvar ekipmanları ile HistoGel (Thermo Scientific) kullanır. Hücre blok bölümlerinin kullanımı, non-jinekolojik sitoloji değerlendirme için değerli bir yardımcı araçtır. Lezyonun mimarisi de dahil olmak üzere ek morfolojik örnek ayrıntılı çalışma sitopatolog sağlar. En önemlisi, in-situ hibridizasyon testleri (FISH / CISH) ve in-situ polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) gibi immünsitokimya gibi yan çalışmaların değerlendirilmesi için izin verir. Geleneksel hücre blok hazırlama teknikleri, genellikle vücut sıvısı efüzyonlar ve ince iğne aspirasyon biyopsileri, çoğunlukla jinekolojik olmayan sitolojisinde uygulanır olmuştur. Sıvı bazlı servikovajinal örneklerinde birçok bireysel dağınık hücreleri ile bunların non-jinekolojik bir muadillerine göre nispeten daha az hücresel. Bu nedenle, hücre blok kesimleri içinde yeterli hücresellik başarmak zordur. Buna ek olarak, blok kesit histotechnologist hücrelerin en yüksek konsantrasyon hangi düzeyde görselleştirmek. Bu nedenle, uygun seviyeye bölümlerde test için cam slaytlar aktarılacak seçilebilir hangi izlemek için zordur. Sonuç olarak, ya geçmişte kesme veya yeterince derin kesim tarafından ilgi hücreler ile hücre bloğu alanı, cevapsız olabilir. Shidham yöntemi için geçerli protokol, bu sorunları giderir. Bu protokol standart ve jinekolojik sıvı bazlı sitoloji örneklerinde için rapor olmasına rağmen, efüzyon sıvılar için hücre blok bölümlerde tanı malzeme kalitesi, ince iğne aspirasyon biyopsisi, manşonlarla, kist içeriği vb gibi Jinekolojik olmayan örneklerin de uygulanabilir olabilir.

Tek tek dağılmış hücreleri ve küçük hücre grupları içeren sitolojisinde AV-işaretleyici ile hücre bloklarının hazırlanması için Shidham yöntemi.

Bireysel Az hücreler baskın Sitoloji Numune Cell Block Hazırlama

Bu video, tek tek ... içeren sıvı tabanlı servikovajinal sitoloji örneklerinden hücre bloklarının hazırlanması için Shidham yöntemini göstermektedir.

Hücre bloğu hazırlığı, konsantre örnek hücrelerinin daha büyük bir tüp içinde tutulan düz tabanlı bir cam tüpe aktarılmasıyla başlar. AV belirteci ve erimiş HistoGel eklenmeden önce, hücreler santrifüjle tabana çöktürülür. Taşıyıcı cam tüpe ılık su eklenmesi, HistoGel'in sıvı formda kalmasını sağlar.Ardından yapılan bir santrifüj işlemi, AV işaretleyicisini jelin içinden iterek hücreleri hücre bloğunun kesme yüzeyine yakın bir tabakada yoğunlaştırır. Katılaştıktan sonra, jel düğmesi çıkarılabilir ve parafin gömme işlemi için hazırlanabilir. Merhaba, ben Milwaukee, Wisconsin'deki Medical College of Wisconsin Patoloji Bölümü sitoloji biriminden Dr. George Varszegi.Ben de Medical College of Wisconsin Milwaukee, Patoloji Bölümü Sitopatoloji kısmından Dr. Vsam. Bugün sizlere, ağırlıklı olarak tekil şekilde dağılmış hücrelerin bulunduğu sitoloji preparatlarından hücre blokları hazırlama prosedürünü göstermek istiyoruz. Bu prosedürü, hücre bloğu kesitlerindeki bu tekil dağılımlı hücrelerin immün profilini incelemek ve ayrıca bu kesitler üzerinde özel boyamaların değerlendirmesini yapmak için kullanıyoruz.Hadi başlayalım. Bu prosedüre başlamak için, tercihen konsantre edilmiş numuneden yaklaşık 0.5 milliliters miktarını, 15 millimeter çapında ve 45 millimeters uzunluğunda düz tabanlı bir cam tüpe aktarın. Ardından, cam tüpü geniş, düz tabanlı plastik bir taşıyıcı tüpün içine yerleştirin ve oda sıcaklığında beş dakika boyunca 1800 Gs hızında santrifüjleyin.Santrifüjasyonun ardından, düz tabanlı cam tüpü plastik taşıyıcı tüpten çıkarın ve süpernatantı dökün. Bu sırada tabandaki hücre sedimentinin düz katmanını bozmamaya dikkat edin. Hücrelere işaretleyici olarak karanlık bir beacon Johnny Vena veya AV markörü eklenir.Hücreler gömüldükten sonra, bir AV markörü, hücrelerin parafin blok içindeki yoğunlaştığı seviyeyi belirlemeye yarar. Özel bir pipet kullanarak, daha önce hazırlanmış olan düz yüzeyli AV markör küpünü tüpteki hücrelere ekleyin. Şimdi jel ekleme işlemine başlayın; bir miktar histo jel veya HG'yi, orta güçte 10 saniye boyunca mikrodalga fırında eriterek sıvı hale getirin veya üreticinin talimatlarını izleyin.Çöktürülmüş hücreleri içeren tüpe 0.5 milliliters erimiş HG ekleyin. Hızlıca karıştırın ve tüpün kapağını kapatın. Hemen ardından, taşıyıcı plastik tüpe 45 degrees Celsius sıcaklıkta yaklaşık iki buçuk milliliters ılık su ekleme işlemine geçin.Ardından hücreleri, AV markörü ve HistoGel içeren CAPAs tüpünü yerleştirin. Hızlı çalışmak ve ılık su kullanmak, sonraki adımlar sırasında jelin katılaşmasını önler. Daha sonra, AV markörünü jelin içinden geçirmek ve hücreleri, nihai parafin gömülü hücre bloğunun kesme yüzeyine daha yakın olacak bir tabakada toplamak için santrifüjleyin.Hücrelerin cam tüpün düz tabanına dik olarak yoğunlaşmasını sağlamak için sabit açılı kaplar yerine dönebilir kaplar kullanın ve oda sıcaklığında beş dakika boyunca 1800 Gs hızında santrifüjleyin. Santrifüj işlemi tamamlandığında, tüpleri, tabandaki ince hücre sediment tabakasını bozmamaya dikkat ederek santrifüjden nazikçe ve dikey olarak çıkarın. Pens kullanarak, örnek hücrelerin sediment tabakasını bozmadan küçük cam tüpü dikey olarak çıkarın.Son olarak, jelin soğuması ve katılaşması için küçük cam tüpü 15 dakika boyunca dikey konumda soğutun. 15 dakikanın sonunda, alt kısmında konsantre örnek tabakasıyla birlikte koyu renkli AV marker'ın bulunduğu katılaşmış HG diskini yerinden çıkarmak için hücreleri içeren jeli cam tüpten çıkarın. Bunun için %10 formin ile doldurulmuş bir şırıngaya takılı 23 gauge iğne kullanın.İşleme, iğneyi tüpün kenarı boyunca, katılaşmış HG diskinin çevresinden yerleştirerek başlayın. İğneyi tüpün kenarı boyunca döndürmeye devam ederken, aynı zamanda Formin çözeltisini şırınga aracılığıyla yavaşça itin. HG butonunun cam tüpün düz tabanından ayrılışını gözlemleyin.Koyu renkli beacon AV belirteci ve konsantre örneği içeren ayrılmış jel butonu, hücre bloğu olarak adlandırılır; hücre bloğu etiketli bir kasede yerleştirilerek parafin gömülü hücre blokları hazırlamak amacıyla doku işleme sürecine gönderilir. Hüre bloğu gömüldükten sonra, örneğin kesim işlemine geçilir; parafine gömülü hücre bloğunun diskini kesmeye başlamak için parafin gömülü hücre bloğu mikrotoma monte edilir ve parafin bloğunun yüzeyini düzeltmek ve koyu renkli AV belirteci ortaya çıkıp net bir şekilde görünene kadar hücre bloğu diskini açığa çıkarmak için kaba kesim yapılır. Koyu renkli AV belirteci açığa çıktığında, üç ila dört mikron kalınlığında kesitler alınır.Bu kesitler, orijinal örnekten elde edilen konsantre hücreleri içermektedir. Daha sonra yapılacak boyama ve mikroskopi işlemleri için her kesiti bir lam üzerine toplayın. Burada, düşük büyütmede, örneğe eklenen bir AV mürekkeple işaretli muz kabuğu markörünün, H ve E boyalı bu kesitlerdeki hücresellik üzerindeki etkisini görüyoruz.Soldaki görüntüde, bu markörün hücreselliği iyi olan seviyeyi elde etmek için kesit kesme derinliğinin izlenmesine olanak sağladığı görülebilir. AV markörü ayrıca farklı hücrelerin yönlendirilmesine, özellikle de diğer cam lamlar üzerindeki farklı seri kesitlerde takip edilecek kesitlerin belirlenmesine imkan tanır. Markör olmasaydı, kesme derinliği izlenemezdi.Doku örnekleri, hücreselliğin düşük olduğu bir kesit düzleminden toplanmıştır. Örneklerde mevcut olan hücresellik derecesi, yüksek büyütmede daha belirgindir; AV markörü mevcut olduğunda kesim derinliği kolayca izlenebilir ve düşük hücreselliğe sahip örnekler elde etmekten kolayca kaçınılabilir. Size, gevşek şekilde dağılmış fragmanlar ve hücreler içeren spesimenden hücre bloğu hazırlama yöntemini göstermiş olduk.Hücre bloğunun işlenmesi sırasında eklediğimiz koyu renkli AV markörü, hücre konsantrasyonunun en yüksek olduğu kesitleri seçmemize yardımcı olur. Ayrıca, bu kesitlerin lamlar üzerine doğru şekilde yerleştirilmesini sağlar. Kesme yüzeyi olan flood pla alt cam tüpü boyunca hücreler hizalanırken, HistoGel'in erimiş durumda olması önemlidir.Ancak, bu prosedür uygun modifikasyonlarla trombin ve fibrinojen gibi soğuk yöntemler de dahil olmak üzere diğer yöntemler için uyarlanabilir. İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler, prosedürlerinizde başarılar dileriz.Teşekkür ederiz.

cell-block-preparation-from-cytology-specimen-with-predominance

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol, küçük hücreli dışı akciğer kanserinden (NSCLC) doku ve sitoloji örneklerini korumak için kullanılan formalinle sabitlenmiş parafine gömülü tümör örneklerinin hazırlanmasını...

Formalinle Sabitlenmiş Parafine Gömülü Tümör Örneklerinin Hazırlanması: Küçük Hücreli Dışı Akciğer Kanserinden (KHDAK) Doku ve Sitoloji Örneklerini Koruma Protokolü

Bu video, lösemik hücrelerden hücresel ve nükleer fraksiyonlar oluşturmak için bir yöntem olan lösemik hücrelerden hücre altı fraksiyonların hazırlanmasını açıklar. Nükleer ve sitoplazmik fraksiyonlar, daha fazla aşağı akış analizi için kullanılabilir.

Lösemik Hücrelerden Hücre Altı Fraksiyonların Hazırlanması: Lösemik Hücrelerden Hücresel ve Nükleer Fraksiyonlar Üretmek İçin Bir Yöntem

Kromozomlar gibi lenfositler ya da deri fibroblast gibi canlı hücrelerden izole edilir ve insan ya da fare gibi organizmalardan elde edilebilir. Bu kromozom preparatları ayrıca rutin G-bantlama ve bu in situ hibridizasyon (FISH) floresan, karşılaştırmalı genomik hibridizasyon (CGH), ve spektral karyotip (SKY) gibi moleküler sitogenetik işlemler için kullanılabilir.

Kültür Hücrelerinin itibaren Kromozom Hazırlık

Endoserviksten lenfositleri ve monositleri toplamak için sitobrush örneklemesinin kullanılması, kadın genital sistem bağışıklığının analizi için örnekler sağlayan minimal invaziv bir tekniktir. Bu protokolde, akım sitometri testleri için sitobrush örneklerinin toplanmasını ve immün hücre izolasyonunu tarif ediyoruz.

Toplama, İzolasyon, ve İnsan endoservikal Akışı Sitometrik Analizi

Kanser kök benzeri hücrelerin tümör nüksü ve tedavilere dirençteki rolünü anlamak son on yılda büyük ilgi gören bir konu haline gelmiştir. Bu makale, baş ve boyun skuamöz karsinom hücre hatlarından (HNSCC) kanser kök benzeri hücrelerin alt popülasyonunun izolasyonunu ve karakterizasyonunu açıklamaktadır.

Bir Baş-Boyun Skuamöz Hücre Karsinomu subpopülasyonu olması Kök Hücre Özellikleri İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Burada, transmisyon elektron mikroskobu (TEM) analizi için düşük hücre sayılı numunelerin hazırlanmasına yönelik bir protokol sunuyoruz.

TEM analizi için düşük Hücre sayısı ile örnek hazırlanması için alternatif bir yaklaşım

Bu iletişim kuralı birincil Akut lenfoblastik lösemi hücreleri farklı hücre döngüsü aşamalar halinde ayırmak için santrifüj elutriation açıklar.

Birincil Akut lenfoblastik lösemi hücreleri hazırlanmasında farklı hücre döngüsü aşamaları santrifüj Elutriation tarafından

Morfolojik bilgi aynı zamanda gerekli olduğunda şu anda, immünfloresan sabit hücreleri üzerinde boyama seçim protein ifade düzeyleri tespiti için yöntemidir. Burada sunulan bu protokolü parafin gömülü hücre bloklar immunocytochemistry alternatif bir yöntem sağlar.

Immunocytochemistry hücre parafin gömülü bloklar tarafından kültürlü hücrelerdeki Protein ifade düzeyinin belirlenmesi

Bu fraksiyonasyon protokolü, araştırmacıların sitoplazmik, nükleer, mitokondriyal ve membran proteinlerini memeli hücrelerinden izole etmelerini sağlayacaktır. Son iki hücre altı fraksiyon, izopiknik yoğunluk gradyanı ile daha da saflaştırılır.

U937 Hücrelerinin İzopiknik Yoğunluk Degrade Saflaştırması ile Hücre Fraksiyonasyonu

Tek hücreli/tek çekirdekli transkriptomiklerin ve multi-omiklerin başarısı büyük ölçüde hücrelerin/çekirdeklerin kalitesine bağlıdır. Bu nedenle, hücrelerin/çekirdeklerin dokudan izole edilmesi ve saflaştırılması yüksek düzeyde standartlaştırılmalıdır. Bu protokol, aşağı akış tek çekirdekli multiom testi için beyin ve kemik iliğinden çekirdeklerin hazırlanmasını açıklar.

Tek Çekirdekli Multiom Tahlilleri için Yüksek Kaliteli Beyin ve Kemik İliği Çekirdeği Hazırlığı

Protokol, doku ayrışma koşulları, tek hücreli süspansiyonların dondurularak saklanması ve izole çekirdeklerin değerlendirilmesi dahil olmak üzere 10x Genomik platformunu kullanarak çoklu dizileme için katı tümör örneklerinden çekirdeklerin izolasyonuna güvenilir ve optimize edilmiş bir yaklaşım sağlar.

Çoklu Dizileme için Taze ve Dondurulmuş Katı Tümör Örneklerinden Optimize Edilmiş Çekirdek İzolasyonu

Öğrenin Shidham yöntemiyle az hücreli sitoloji örneklerinden hücre bloğu hazırlamayı. AV işaretleyici ve HistoGel kullanarak immün profil analizi ve özel boyamalar için hücre yoğunluğunu artırın.

Bireysel Az hücreler baskın Sitoloji Numune Cell Block Hazırlama

Daha fazla video keşfet