Name: Kompleman tükenmesi Özel Hücre Populasyonlarının tükenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 17 s
Description: Öğrenin, T hücre izolasyonu için kompleman tükenmesi tekniğini kullanarak immün hücre popülasyonlarını nasıl saflaştıracağınızı. Bu yöntem monoklonal antikorlar ve tavşan komplemanı ile %95-100 arası hedef hücre eliminasyonu sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Sreemanti Basu Şekil 1 için veri sağlamak için teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma NIH hibe AI069358 ve BloodCenter Araştırma Vakfı tarafından kısmen desteklenmiştir.

A. Tavşan Kompleman <ol><li> Stok tavşan tamamlayıcı oda sıcaklığında çözülmüş ve daha sonra 0.5 ve / veya 1 ml hacimleri içine aliquoted ve uzun süreli depolama için -20-80 ° C arasında dondurulup olmalıdır. </li><li> Kompleman Her şey optimal çalışma konsantrasyonunu belirlemek için titre edilmelidir. Tipik olarak, bir seyreltme 1:10-01:20 en uygunudur. </li><li> Tavşan tamamlayıcı hücrelerin nihai kullanımına ilişkin bağlı olarak her zaman, önce satışa presterilized değil, tamamlayıcı aliquoted zaman sterilize filtrelenmiş ve hücrelerin yanı sıra önce dondurulmuş ya da olmalıdır. </li></ol> B. Antikor Seçimi <ol><li> Tüm antikorlar böylece antikorlar ilk etkinliği test edilmelidir, kompleman aktivasyon etkili. </li><li> Fare ve sıçan mAb de kompleman aktivasyon etkilidir. </li><li> IgM antikorlar genellikle IgG takip kompleman kaynaklı hücre parçalama kullanmak için en verimli. Kompleman aktivasyonu için en iyi IgG isotypes türler arasında değişir. </li><li> Her antikor, 10 7 hücre / ml bir hücre yoğunluğu optimal kullanımı için titre edilmelidir . </li></ol> C. Temel Protokolü <ol><li> 5 başlangıç ​​hücre popülasyonu ayarlayın orta içeren ısı inaktive FCS x 10 7 hücre / ml. Hücrelerin son hacmi iki kez başlangıç ​​hacmi olacak. Tükenmesi sayısal böylece bazı hücreler kaydetmeyi unutmayın. </li><li> Her antikor hücre süspansiyonu uygun önceden belirlenmiş bir konsantrasyon veya seyreltme eklenmelidir. Hücreleri de tersine çevirerek karıştırın. </li><li> Gerekli tamamlayıcı miktarını hesaplayın. Oda sıcaklığında tamamlayıcı stok çözülme. Kompleman steril değilse, düşük protein bağlama şırınga ucu filtre kullanılarak sterilize edin. Şırıngaya kompleman ek olarak önce orta birkaç ml ekleyin ve hücreleri ve antikor içeren tüp içine doğrudan filtre. </li><li> Tüpünde son hacim hücreleri 1 x 10 7 hücre / ml olacak şekilde ayarlayın. </li><li> Karıştırma, her 15 dakikada bir, bir saat süreyle 37 ° C&#39;de hücreleri inkübe edin. </li><li> Hücrelerin Santrifüj ve supernatant atın. </li><li> Orta iki kez yıkayın. Hücre enkaz polistiren tüplerin yan sopa. Ölü hücreleri ve enkaz hücre süzgeç veya yoğunluk gradiyenti santrifüj kullanılarak ortadan kaldırılabilir. </li><li> Hücre saflık tükenmesi öncesi ve sonrasında faiz hücre popülasyonu karşılaştırarak kontrol edin. Flow sitometri ve immünohistokimya hücre saflık belirlenmesinde iki yöntem vardır. </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar Sonra bir tur sonra tamamlayıcı, hücre tükenmesi aktive yüksek verimli bir mAb kullanırken% 95 daha fazladır. Bu, Şekil 1&#39;de flow sitometri ile TCRβ ifade (eBioscience, San Diego, CA) tarafından tespit edilen% 32.2 αβ T hücreleri oluşur fare dalak ile başlayan gösterilmiştir. Biz T hücreleri kullanarak mAb Thy1 özel, tüm T hücreleri tarafından ifade edilen bir protein, ancak diğer lökosit tükenmiş. Kullanılan antikor Y-19 IgG2c 2 sıçan. Açıklanan prosedürü izleyerek, TCRβ nüfusun% 1.56,% 95 daha fazla azalma azaldı. <img src="/files/ftp_upload/1487/1487fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Thy1, tükenmesi + kompleman aktivasyonu ile dalak T hücreleri Toplam fare dalak, dalak ve eritrosit lizis homojenizasyon elde edildi . Anti-thy1 ve önceden belirlenmiş konsantrasyonlarda bebek tavşan tamamlayıcı son hücre konsantrasyonu 1 x 10 7 hücre / ml olduğu gibi dalak tek bir hücre süspansiyonu eklendi. 37 az 1 saat inkübasyondan sonra ° C, hücreler iki kez yıkanır ve hücre canlılığı tripan mavi dışlama tarafından değerlendirilir. Tükenmesi verimliliği tükenmesi önce (sol panel) ve tükenmesi (sağ panel) sonra TCRβ + hücrelerin yüzdesi karşılaştırarak flow sitometri ile değerlendirildi. Yatay çubuk pozitif boyanma gösterir ve bar yukarıdaki sayı pozitif bir yüzde.

<ol><li>Janeway, C., Travers, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Immune+System+in+Health+and+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Immunobiology%22%5BJournal%5D)">The Immune System in Health and Disease.</a> Immunobiology. , Current Biology Limited; Garland Pub. Inc. London; San Francisco; New York. (1994).</li>
<li>Jones, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+activities+of+antibodies+against+brain-associated+T+cell+antigens+II.+Stimulation+of+T+cell-induced+B+cell+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Functional activities of antibodies against brain-associated T cell antigens II. Stimulation of T cell-induced B cell proliferation.</a> Eur J Immunol. 12, 30-37 (1982).</li>
</ol>

Hücre popülasyonlarının arıtma işlevlerin çalışması için gerekli olan ortak bir işlemdir. Burada antijen-spesifik antikorlar ve kompleman tükenmesi kullanarak hücre popülasyonlarının tüketen bir hızlı ve etkili bir yöntemdir. Kompleman aktive antikor soyundan bir marker varsa, herhangi bir hücre popülasyonunun tükenmesine elde edilebilir. Burada Thy1 için mAb spesifik T hücrelerinin tükenmesi gösterdi, protein, aslında tüm T hücre popülasyonlarının dile getirdi. Biz,% 95 αβ T hücreleri üzerinde tükenmiş ve geri kalan splenositlerin% 68% 98 artmıştır. Bu düzeyde hücre saflık FACS ve manyetik boncuk ayrılması da dahil olmak üzere diğer arıtma stratejilerine benzer. Kompleman tükenmesi başlangıç ​​hücre popülasyonu elde bir kez 1.5 saat yapılabilir hızlı bir tekniktir. Tamamlayıcı tükenmesi diğer bir avantajı, pahalı ekipman ve reaktifler gerektirmez, çünkü herhangi bir laboratuvar tekniği gerçekleştirebilirsiniz. Gerekli ekipman sadece büyük parçalarını, bir su banyosu ve bir santrifüj. Tavşan tamamlayıcı makul bir maliyetle çeşitli satıcılardan satın alınabilir (reaktiflerin tabloya bakınız) ve birçok mAb ATTC alınan ve maliyetleri kontrol etmek için yörede yetiştirilen olabilir. Buna karşılık, FACS altı rakamlar ve pahalı floresan etiketli mAb mal olacak hücre sıralama kapasitesine sahip bir akış sitometresinin gerektirir. Manyetik boncuk ayrılması orta fiyatlı, ama pahalıya mal olabilir bir mıknatıs ve manyetik boncuk, satın gerektirir. Buna ek olarak, bazı manyetik boncuk ayırma stratejileri de sütun satın alınmasını gerektirebilir. Ana engel hücre tükenmesi için tamamlayıcı kullanımı için gerekli olan antijen özgüllüğü mAb aktive kompleman durumu. Insan, fare ve sıçan antikorlar tüm düzeltmek için tamamlayıcı kapasitesi olmasına rağmen, bazı isotypes diğerlerinden daha iyidir. Her üç türün IgM tamamlayıcı tespit son derece etkili olmasına rağmen IgG isotypes değişir. Böylece her mAb ilk etkinliğini belirlemek için bir pilot çalışmada test edilmelidir. Yüksek verimli değildir antikorlar için, iki tur tamamlayıcı tükenmesi kalan hücre popülasyonlarının canlılığı etkilemeden yapılabilir. Maliyet tasarrufu gibi, antikorlar optimal etkinliği için titre edilmelidir. Buna ek olarak, kullanılan antikorların arıtılmış olması gerekmez. Arındırmak için zor IgM antikorlar, özellikle uygun olduğu gibi etkin bir şekilde Hibridoma süpernatantlar ve asit sıvısı iş. Antikorlar gibi, tamamlayıcı bir pilot çalışmada titre şarttır. Konsantrasyonu çok yüksek hedefli olmayan hücre popülasyonlarının canlılığı kaybına neden olacaktır. Ayrıca önemli inkübasyon süresi 60 dakikayı aşmayacak şekilde. Protokolde, antikor ve kompleman birlikte co-kuluçkaya yatmaktadır. Bununla birlikte, hücrelerin antikor ile 15-30 dakika etiketli ve kompleman eklenmeden önce yıkanmış olabilir. Bu stratejiyi kullanarak, yama ve kapaklama veya reseptör içselleştirilmesi, bazı proteinler oluşur, hücre yüzeyinde hücre antijen kaybını önlemek için buz üzerinde antikor inkubasyon gerçekleştirmek için emin olun. Yüksek verimli olmasına rağmen, diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında tükenmesi tamamlamak için büyük dezavantajı olumlu seçimi için kullanılan olamaz. Böylece hücre alt popülasyonlar elde etmek zordur. Örneğin, en iyi FACS tarafından yapılabilir foliküler B hücreleri, marjinal zon B hücreleri arındırmak için zor olurdu. Bu durumda, kompleman aktivasyonu sıralanmış olan hücrelerin sayısını azaltmak için T hücreleri tüketmek için kullanılabilir. Bu strateji, tasarruf hangi sıralama zamanı azaltmak ve hücrelerin daha az sert olurdu. Özel hücre popülasyonlarının arıtma ortak bir gereklilik olduğu için bir dizi strateji geliştirilmiştir olmuştur. Tamamlayıcı tükenmesi stratejinin ana avantajları ekonomiklik, teknik kolaylık ve zaman tasarrufu.

<table><tbody><tr><td>3-4 haftalık yavru tavşan komplemanı</td><td>Pel-Freez Biologicals</td><td>31061-3</td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu</td><td>Çeşitli</td><td>çeşitli</td><td>37 &amp;#x00B0;C'ye ayarlanmış bir inkübatör de kullanılabilir.</td></tr></tbody></table>

kompleman tükenmesi Özel hücre populasyonlarının tükenmesi

Depletion of Specific Cell Populations by Complement Depletion

Bağışıklık hücre popülasyonlarının arıtma genellikle kendilerine özgü işlevleri araştırmak için gereklidir. , Yüksek saflıkta hücre popülasyonlarının izolasyonu, özellikle real-time PCR ve mikroarray analizi gibi moleküler yaklaşımlar gerektirir. Yaygın olarak kullanılan arıtma stratejileri floresan aktive edilmiş hücre sıralama (FACS), manyetik boncuk ayırma ve tamamlayacak tükenmesi içerir. Üç strateji, kompleman tükenmesi, hızlı, ucuz, hücreler ve yüksek bir hücre verimi nazik olmanın avantajları sunmaktadır. Kompleman sistemini aktive edildiğinde, hücre ölümü ile sonuçlanan hücre yüzeyinde gözenek oluşturan bir zar-saldırı kompleksinin oluşumu sonuçlanan bir proteolitik kaskad başlatmak plazma proteinlerine çok sayıda oluşur.<sup&gt; 1</sup&gt;. IgM ve IgG antikorları tarafından klasik yolu aktive olur ve ilk bakterilerin öldürülmesi için bir mekanizma olarak tarif edilmiştir. Nesil ile monoklonal antikorlar (mAb), kompleman kaskadını antijene spesifik bir şekilde herhangi bir hücreyi nüfus lyse kullanılabilir. Kompleman kaskadı hücreleri tükenmesi tamamlayıcı sabitleme antijen-spesifik antikorların ve başlangıç ​​hücre popülasyonu tavşan tamamlayıcı eklenmesi ile elde edilir. Hücreler 37 ° C ve parçalanan hücreler, daha sonra iki tur yıkama kaldırılır, bir saat süreyle inkübe edilir. Kompleman fiksasyon için yüksek verimlilik ile MAb genellikle hedeflenen hücre popülasyonunun% 95-100 tüketir. Hedeflenen hücre popülasyonu için arıtma stratejisine bağlı olarak, tamamlayıcı tükenmesi hücre arıtma için ya da, daha sonra, bir sonraki yöntemi ile saflaştırılmış olabilir hücre popülasyonlarının da zenginleşmesi için kullanılabilir.

Kendi arıtma genellikle gerekli bağışıklık hücre popülasyonlarının fonksiyonunu etkili bir şekilde incelenmesi. Kompleman tükenmesi, izolasyonu için yüksek saflıkta bağışıklık hücre popülasyonlarının hızlı ve ucuz bir tekniktir.

Kompleman tükenmesi Özel Hücre Populasyonlarının tükenmesi

Bağışıklık hücresi popülasyonlarının saflaştırılması, genellikle bu hücrelerin kendine özgü fonksiyonlarını incelemek için gereklidir. Özellikle, ... gibi moleküler yaklaşımlar

Kompleman tüketimi, immün hücre popülasyonlarını saflaştırmak için hızlı, etkili ve düşük maliyetli bir yöntemdir. Kompleman tüketimi, spesifik bir hücre tipini hedefleyen monoklonal IGM veya IgG antikorlarının bir hücre popülasyonuna eklenmesiyle başlar. Bu örnekte, tüketim için T-hücrelerini hedefleyeceğiz.Ardından, proteolitik bir kaskadı başlatarak T-hücresi ölümüne yol açan kompleman sistemi eklenir. Hücre popülasyonu daha sonra ölü hücreleri ve kalıntıları temizlemek için santrifüjle yıkanır ve filtrelenir. Bu komplemanla tüketme yöntemi tipik olarak hedeflenen hücre popülasyonunun %95 ile 100'ünün elimine edilmesiyle sonuçlanır.Merhaba, ben Bonnie Dittle. Milwaukee'de bulunan Wisconsin Kan Merkezi'nin Kan Araştırma Enstitüsü'nde araştırmacıyım. Bugün size, spesifik hücre popülasyonlarının uzaklaştırılması için hızlı ve ekonomik bir yöntem olan kompleman boşaltma tekniğini göstereceğim.Laboratuvarımızda bu tekniği, hücre aktivasyonu ve protein ekspresyon analizi dahil olmak üzere birçok biyolojik analizde kullanmak üzere immün hücre popülasyonlarını yüksek derecede zenginleştirmek için kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım. Deneye başlamadan önce, tavşan komplemaninden 0,5 veya bir mililitrelik alikotlar hazırlayın ve bunları -20 veya -80 derecelik dondurucuda saklayın.Komplemanın 1/10 ile 1/20 arasındaki optimal bir dilüsyona titre edildiğinden emin olun. Bu prosedür için rutin olarak kullandığımız mükemmel bir ticari kompleman kaynağı Pereze Biologicals'dir; fare ve tavşan monoklonal antikorları genellikle kompleman aktivasyonunda etkilidir, ancak tüm antikorlar uygun olmayacaktır. Kompleman kaynaklı hücre lizizi için genellikle IgM antikorları en yüksek verimliliğe sahiptir.IgG antikorları ikinci en etkili olanlardır ve çoğu monoklonal antikor IgG olduğu için tipik olarak bunlar kullanılır; her antikor, ampirik olarak belirlenen mililitrede 10⁷ hücrelik bir hücre yoğunluğunda optimal kullanım için titre edilir. Çoğu antikor 0,1 ile 10 µg/mL aralığında kullanılır. Splenik T-hücrelerinin deplesyonu için TH1'e özgü bir monoklonal antikor kullanıyoruz.Kompleman tüketimine başlamak için, başlangıç hücre popülasyonu mililitre başına 2x10⁷ hücre olacak şekilde hücreleri %5 ısı ile inaktive edilmiş fetal sığır serumu içeren hücre kültürü besiyerinde seyreltin. Örneğin, 5x10⁷ hücre 2,5 mililitre besiyerinde seyreltilmelidir. Bu hücre hacmi, nihai hacmin yarısıdır ve dolayısıyla tüketim sırasında kullanılan mililitre başına 1x10⁷ hücrelik hücre konsantrasyonunun iki katıdır.Bu aşamada, deney sonunda tüketimin miktarlaştırılabilmesi için 10⁶ hücreye kadar saklayın. Ayrıca, gerekli miktardaki komplemeni oda sıcaklığında çözdürün. Pereze Biologicals tavşan komplemeni kullanarak 5×10⁷ hücre için 1/15'lik bir dilüsyonun uygun olduğunu belirledik; 1,5 mL dondurulmuş Eloqua yeterlidir.Şimdi hücre süspansiyonuna uygun miktarda antikor ekleyin ve karıştırın. Komplemanı sterilize etmek için düşük protein bağlayan bir şırınga ucu filtresi kullanın. Şırıngayı bir ila iki mililitre besiyeri ile doldurun.5x10⁷ hücreye kompleman eklemeden önce, 1/15 seyreltme için 340 mL komplemana ihtiyaç duyacağız. Ardından komplemanı, hücre ve antikor içeren tüpe doğrudan filtreleyin. Şimdi, tüpteki hücrelerin konsantrasyonu 1x10⁷ hücre/mL olacak şekilde nihai hacmi ayarlayın.Ardından, hücreleri bir benmari içinde 37 °C'de bir saat boyunca inkübe edin. Hücreleri her 15 dakikada bir hafifçe ters çevirerek karıştırmayı unutmayın. İnkübasyonun ardından, hücreleri canlılığı etkilemeyecek bir hızda santrifüjleyin.Ardından tekrar steril kabine dönüp süpernatantı atın. Sonrasında, hücreleri 10 mililitre besiyeri ile iki kez yıkayın. Hücre döküntülerinin toplandığını ve bir kısmının polistiren tüplerin kenarlarına yapıştığını gözlemleyin.Son yıkamadan sonra, hücreleri 70 mikronluk steril bir naylon hücre süzgecinden geçirin. Son olarak, tükenme akışından önceki ve sonraki ilgili hücre popülasyonlarını karşılaştırarak hücre saflığını kontrol edin.Sitozometri ve immünohistokimya, deneyler öncesinde hücre saflığını belirlemek için tercih edilen yöntemlerdir. Komplemanı aktive etmede yüksek verimliliğe sahip bir monoklonal antikor kullanıldığında, ilk kompleman tüketim aşaması hücreleri %95'ten fazla oranında tüketir. Bir örnek olarak, bir fare pleosit hücresi preparasyonundaki alfa beta T hücrelerinin yüzdesini ölçmek için akış sitometrisi kullandığımızda, tüm T hücreleri tarafından eksprese edilen ancak diğer lökositler tarafından eksprese edilmeyen anti five one ile kompleman tüketimi sonrası hücrelerin %32,2 oranında alfa beta T hücresi içerdiğini tespit ettik. TCR beta popülasyonu, %1,56'lık bir final konsantrasyona düşerek %95 oranında azalmıştır.Kompleman tüketimi yoluyla, antijene özgü antikorlar kullanarak belirli hücre popülasyonlarını azaltmanın hızlı ve etkili bir yöntemini göstermiş oldum. Bu prosedürü uygularken, başlamadan önce her bir antikorun etkinliğini test etmeyi ve pilot bir deneyde kompleman miktarınızı titre etmeyi unutmayın. Hepsi bu kadar.İzlediğiniz için teşekkür eder, deneylerinizde başarılar dileriz.

depletion-of-specific-cell-populations-by-complement-depletion

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Makrofajlar homeostasis merkezi bir rol oynar ve birçok dokularda patoloji. Burada sunulan protokol makrofajlar tüketen için kullanılan yöntemleri...

Farelerde Makrofajlar tükenmesi ve Sulandırma

Burada, kırmızı kan hücrelerine karşı antikorlar tarafından neden olunan kompleman aktivasyon ölçmek için iki tahlil tarif eder. Mevcut deneylerde üzerinde en büyük avantajı, nicel ve kolay yorumlamak doğasıdır.

Kırmızı kan hücreleri üzerinde antikor kaynaklı kompleman aktivasyon sayısal tespiti için Yöntemler

Topluluk oluşturan hücreler katil yapay antijen üretimi için sunulmuştur, KaAPC insan antijen-spesifik T hücrelerinin in vitro tüketimi ve bir antijene T hücre aracılı bağışıklık hastalıklarının tedavisi için selüler immünoterapi için alternatif bir çözüm için etkin bir araç Kalan bağışıklık sistemini ödün vermeden özel biçim.

Etkin Killer yapay antijen sunan hücreler (KaAPC) İn Vitro İnsan Antijen-spesifik T hücrelerinin tükenmesi

Microglia, çeşitli hücre dışı otonom mekanizmalarla kültürdeki nöronları ve diğer gliaları etkileyebilir. Burada, primer nöronal kültürlerden mikroglia'yı seçici olarak tüketmek için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, mikroglial-nöronal etkileşimlerin rolünü aydınlatma potansiyeline sahiptir ve nöroinflamasyonun ayırt edici bir özellik olduğu nörodejeneratif durumlar için çıkarımlar vardır.

Beyindeki granü hücre kültürlerinden mikroglia zayıflatılması, L-lösin metil ester

Insan tümör ksenograftlarının vaskülarize ve in vivo olarak büyüme aşamasında, fare kökenli hücreleri tarafından filtre edilemeyen bulunmaktadır. aşağı analizi sırasında bu kirletici hücrelerinin neden olduğu önyargı aşmak için, biz manyetik hücre sıralama tarafından tüm fare hücrelerinin kapsamlı tükenmesi için izin veren bir yöntem geliştirdi.

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

Biz nasıl tanımlanmasını ve yalıtılmasını miyeloid ataları fare kemik iliği bir manyetik kombinasyonu ve floresan (MAC'ler ve FACS) sıralama kullanarak üzerinden 6 alt kümelerini göstermek. Bu iletişim kuralı vitro kültürü deneyleri (methylcellulose ya da sıvı kültürleri), in vivo evlat edinen transfer deneyler ve RNA/protein analizleri için kullanılabilir.

Kimlik ve yalıtım Oligopotent ve Lineage için kabul edilen miyeloid ataları fare kemik iliği dan

Burada, sitotoksisik T lenfosit (CTL) yanıt olarak bir model tümör antijeni için immundominance muayene sağlayan bir akış sitometri tabanlı in vivo öldürme tahlil tarif. Biz bu zarif tahlil mekanik çalışmalar için ve ilaç etkinliği test için istihdam olabilir nasıl örnekler sunuyoruz.

Tümör-spesifik CD8+ T hücre tepkiler Immunodominance çalışması Için In vivo sitotoksisite assays terzilik

Bu protokol, lökofilter türevi CD34+ hematopoetik progenitörlerin elde edilmesi ve bunların kültür ortamında trombositleri serbest bırakabilen proplatelet taşıyan megakaryositlere in vitro farklılaşması ve olgunlaşması ile ilgili tüm adımları ayrıntılı olarak açıklar. Bu prosedür, megakaryopoezleri kontrol eden hücresel ve moleküler mekanizmaların derinlemesine analizi için yararlıdır.

Megakaryosit Farklılaşması ve Trombosit Oluşumunu İncelemek için Hücre Kaynağı Olarak Leukodepletion Filtreleri-Türetilmiş CD34+ Hücreler

Burada, tek hücre düzeyinde hücre öldürmeyi incelemek için bir T hücresini ve bir kanser hedef hücresini kapsülleyen çift emülsiyon damlacıkları oluşturmak için bir yöntem açıklıyoruz. Bu yöntem, büyük bir T hücresi popülasyonu içinde hem sitotoksik moleküllerin hem de hedef hücre apoptozunun ikili miktar tayinine izin verir.

Kimerik Antijen Reseptörü T hücrelerini Tek Hücre Düzeyinde Değerlendirmek için Damlacık Bazlı Sitotoksisite Testi

Burada, insan CD59 / intermedilysin hücre ablasyon aracı kullanılarak rejenerasyonlarını incelemek için renal makrofajların seçici ablasyonu için bir protokol bildirilmiştir. Bu yöntem aynı zamanda böbrek, karaciğer ve yağ dokusundaki diğer hücre popülasyonlarının işlevini ve yenilenmesini incelemek için de geçerlidir.

İnsan CD59 / Intermedilysin Hücre Ablasyon Aracı Kullanılarak Renal Makrofajların Hızlı Tükenmesi

Öğrenin, T hücre izolasyonu için kompleman tükenmesi tekniğini kullanarak immün hücre popülasyonlarını nasıl saflaştıracağınızı. Bu yöntem monoklonal antikorlar ve tavşan komplemanı ile %95-100 arası hedef hücre eliminasyonu sağlar.

Kompleman tükenmesi Özel Hücre Populasyonlarının tükenmesi

Daha fazla video keşfet