Name: Karyotipik İnsan Embriyonik Kök Hücreleri kromozom Yayılı Hazırlık (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-09-04T11:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 42 s
Description: Öğrenin, insan embriyonik kök hücrelerinde kromozom yayılı hazırlama yöntemini ve karyotipleme tekniğini. Genetik bütünlüğü izlemek için bu protokol, kök hücre araştırmalarında ve terapötik uygulamalarda kritik öneme sahiptir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

EKİPMAN <ul><li> Doku kültürü inkübatör, 37 ° C,% 5 CO 2 </li><li> Santrifüj </li><li> Set micropipettors (100 100μL) </li><li> Su banyosu, 37 ° C </li><li> Su banyosu, 90 ° C buhar su kaynağı olarak </li><li> Faz kontrast mikroskobu </li></ul> İLK ADIM Colcemid ile hücrelerin tedavisi Bu prosedürde,% 20 nakavt serum replasmanı (KSR, Gibco) ve 8ng/mL, ile desteklenmiş, mitomisin C (Sigma) ile inaktive ve DMEM/F12 (Invitrogen) muhafaza fare embriyonik fibroblastlar (MEF) üzerine kültür H9 hESC hattı fibroblast büyüme faktörü (FGF-2, Ar-Ge). Metafaz yayılır, çok sayıda elde etmek için, birçok bölünen hücreleri vardır yüksek mitotik indeksi ile kültürlerin kullanılması tavsiye edilir. <ol><li> Inkübatör kültür şişesi alın ve laminer akış, son bir 0,1 mg / ml konsantrasyonda Colcemid eklemek. </li><li> Inkübatör balon dönün ve 3 saat bekleyin inhibitörü, kromozomlar yoğunlaşmış ve mikroskop altında kolayca görüntülenebilmekte metafaz, mitoz tutuklama neden olabilir. </li></ol> Hücrelerin Tespit <ol start="3"><li> Orta çıkarın ve hücrelerin yüzeyini kaplayan tripsin / EDTA% 0.05 &#39;yeterli eklemek. Hücreleri oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin ve sonra serum içeren kültür ortamı ekleyerek veya sadece hücreler serum ekleyerek ya enzim inaktive etmek için izin verin. NOT: iyi metafaz yayılır elde etmek için tek bir hücre süspansiyonu elde edilir emin yapmak için çok önemlidir. </li><li> 15 ml santrifüj tüpüne ve 5 dakika boyunca 122 g santrifüj hücrelere aktarın. </li><li> 200 ml hakkında bırakarak süpernatantı atın ve hafifçe videoda gösterildiği gibi tüp, dokunarak pelet tekrar süspansiyon haline getirin. Hücrelerin iyi ayrışmış, bu nedenle çözüm kümeleri görselleştirmek emin olun. </li><li> Sonra 5 ml hipotonik çözüm (KCl 75mm) 37 önceden ısıtılmış ° C, yavaş yavaş, aşağıdaki açıklamayı olduğu gibi tüp duvar eklemeniz gerekecektir İlk tüp invert hipotonik bir çözüm hemen sonra hücrelerin bir arada kalan 2 ml ekleyin ve 37 sıcak tutmak ° C 15 dakika boyunca yatay konumda, 3 ml ekleyin. NOT: Bu noktada hipotonik çözüm hücresel birimde bir artışa neden ve kromozomlar ayıklayabilir yardımcı olacaktır. Inkübasyon süresi, iyi bir kromozom elde etmek için önemlidir. Zamanlaması çok uzun ise, hücre zarı, çok erken ve kromozomlar kaybolur patlayabilir. Eğer çok kısa olursa, hücre zarı bozabilir çünkü kromozom yayılır elde etmek zor olabilir. </li><li> Fiksatif solüsyonu (metanol / asetik asit buzul 03:01) 3 damla ekleyin, 5 dakika ara vermeden 122 g hücreleri ve santrifüj fiksatif çözüm karıştırmak için tüp nazikçe çevirin. NOT: fiksatif solüsyon taze yapılmalıdır. NOT: malzeme kaybını önleyerek, hücrelerin yıpratma önlemek için ara vermeden santrifüj kullanmak önemlidir. </li><li> 200 ml hakkında bırakarak süpernatantı atın ve yavaşça tüpün alt dokunarak pelet tekrar süspansiyon haline getirin. NOT: Yine, hücrelerin iyi ayrışmış, bu nedenle çözüm kümeleri görselleştirmek emin olun. </li><li> Tüp döndürmek ederken, yavaş yavaş, fiksatif çözüm tüp duvar ilk 3 mL ekleyin. Hücrelerin karışımı, ve daha sonra tüp duvar hücreleri aşağı çekmek için 2 mL fiksatif çözüm daha eklemek için yatay pozisyonda Tüpü ters çevirin. 4 ° C gecede Stok. NOT: sabit hücreler, 4 ay için sabitleştirici çözüm saklanabilir ° C Kendi şişmiş durumda hücrelerini koruyarak yanı sıra, fiksatif çözüm lipitleri ve denatüre proteinlerin ortadan kaldırır. Bu olaylar sonucunda, kromozom kolayca yayılmasını, hücre zarının kırılgan yapmak ve. </li></ol> CAM KAYDIRAKLARI TEMİZLİK Kromozom yayılır slaytlarınız düzgün bir şekilde temizlenir veya bazı çekirdeklerin kaybedebilirsiniz ve aynı zamanda metafaz ki emin olun başlamadan önce. Eğer herhangi bir hibridizasyon tekniği 9 denemek istiyorsanız bu adımı yanı sıra önemlidir . <ol><li> Yeri oda sıcaklığında en az 3 saat 6M HCl içeren bir beher slaytlar. </li><li> Bu süreden sonra, 10 dakika boyunca çalışan musluk suyu slaytlar yıkayın. </li><li> Slaytları distile su ile çalkalayın ve oda sıcaklığında kurumaya bırakın. </li><li> Şimdi slaytlar% 96 etanol içinde saklanan ve kullanmak için bir havsız hemen önce kurutulmuş olabilir. </li></ol> NOT: situ hibridizasyon yöntemleri için, slaytlar, en fazla 2 gün boyunca% 96 etanol içine saklanabilir olamaz İkinci adım Çamaşır hücreler <ol start="10"><li> Ertesi gün, 5 dakika ara vermeden 122 g hücreler santrifüj. </li><li> D200 ml bırakarak süpernatant iscard. Nazikçe tüp dönerken tüp tüp duvar sonra yavaş yavaş taze fiksatif solüsyonu 5 ml (metanol / asetik asit buzul 03:01) eklemek Flicking pelletini tekrar. Bu yıkama üç yıkama olmak üzere toplam 2 kez daha adımı yineleyin. NOT: fiksatif solüsyon taze yapılmalıdır. </li></ol> Slaytlar hazırlanması <ol start="12"><li> (Bkz. Şekil 1) hücre pelletini homojenize ve slaytlar hücrelerin yeterli bir yoğunluk elde etmek için çözüm son santrifüj aşamada yeterli miktarda bırakın. </li><li> 20-30 mcL hücre süspansiyonu, temiz ve kuru bir slayt yüzeye çok yakın ve paralel hareket pipet üzerine ekleyin. Fiksatif çözüm buharlaşır gibi, slayt yüzeyi grenli olur. </li><li> Hemen havaya uçurmak hücrelerin neden 30 saniye süreyle sıcak su, buhar (90 °) içine, slayt maruz yüzü yukarı. NOT: Şu anda, asetik asit konsantrasyonu artmış ile sonuçlanan, metanol, fiksatif çözüm buharlaşır, su ile birlikte yayılan kromozom uyarır. </li><li> Açabildiği gibi, hücre dağılımı (bkz. Şekil 1) iyi olup olmadığını kontrol etmek için bir faz kontrast mikroskobu bakın. </li><li> Şimdi slaytlar G-bantlama (Giemsa), FISH, SKY veya CGH gibi yaklaşımlar sitogenetik kromozom seti kontrol etmek için kullanılmaya hazır. </li></ol> ÖNEMLİ İPUÇLARI Nasıl tercih analiz edilmesi için yeterli bir metafaz Yuvarlak ve izole metafaz (Şekil 2B) seçmek, iki veya daha fazla kromozom kazanç birlikte karışık veya başlattı kromozom tarafından oluşturulan kromozom kaybı yayılır yanlış anöploidiler dikkate kaçınmak olabilir. Yani, bazı kromozom (Şekil 2A ve 2B) tarafından gizli olabilir çünkü çekirdekleri yakın metafaz seçerek kaçının. Ayrıca, yuvarlak metafaz bakmak ve herhangi bir kromozom metafaz (Şekil 2C) ayrılmış olduğundan emin olun. Besleyici hücreleri ve hESC karyotip G-bantlama ve SKY analizi için, besleyici hücreler bölünerek devlet (mitomisin C veya ışınlama ile inaktif) altında değildir ve metafaz nüfusunun parçası olmayacaktır çünkü besleyici hücreler hESC kültür varlığı, sonuçları ile müdahale değildir. Ancak,, interfaz çekirdekleri FISH tekniğinin uygulanması için, besleyici hücrelerin koloniler FISH analizi için trypsinization önce elle hasat hESC nüfus ayırmak için tercih edilir. <img border="0" src="/files/ftp_upload/1512/1512fig1tmb.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1: slayt uygun hücre yoğunluğu nasıl biliyoruz. 10x objektif faz kontrast mikroskop görüntülerini. (A) hücre yoğunluğu çok yüksek. Ok çok yakın çekirdekleri yayılır metafaz işaret etmektedir. (B) iyi bir hücre yoğunluğu ile bir slayt. Çevreler, çekirdekleri veya diğer metafaz izole metafaz yayılır göstermektedir. Lütfen Şekil 1&#39;de bir büyük halini görmek için <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1512/1512fig1.jpg">buraya tıklayınız</a> . <img border="0" src="/files/ftp_upload/1512/1512fig2tmb.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2: Nasıl analiz edilmesi için yeterli bir metafaz seçin. Kromozomlar DAPI ve 100x objektif bir floresan mikroskobu ile elde edilen görüntüler ile boyandı. (A) (B) çekirdekleri yakın metafaz kaçının (oklarla gösterilen) (C) ve mevcut kromozom ayrılmış (daire) yuvarlak değil metafaz. (D) yuvarlak metafaz analiz edilmesi için iyi bir metafaz. Lütfen Şekil 2&#39;de büyük halini görmek için <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1512/1512fig2.jpg">buraya tıklayın</a> .

<ol><li>Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282 (5391), 1145-1145 (1998).</li>
<li>Draper, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recurrent+gain+of+chromosomes+17q+and+12+in+cultured+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Recurrent gain of chromosomes 17q and 12 in cultured human embryonic stem cells.</a> Nat Biotechnol. 22 (1), 53-53 (2004).</li>
<li>Maitra, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+alterations+in+cultured+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Genomic alterations in cultured human embryonic stem cells.</a> Nat Genet. 37 (10), 1099-1099 (2005).</li>
<li>Mitalipova, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preserving+the+genetic+integrity+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Preserving the genetic integrity of human embryonic stem cells.</a> Nat Biotechnol. 23 (1), 19-19 (2005).</li>
<li>Buzzard, J. J., Gough, N. M., Crook, J. M., Colman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Karyotype+of+human+ES+cells+during+extended+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Karyotype of human ES cells during extended culture.</a> Nat Biotechnol. 22 (4), 381-381 (2004).</li>
<li>Caisander, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chromosomal+integrity+maintained+in+five+human+embryonic+stem+cell+lines+after+prolonged+in+vitro+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosome+Res%22%5BJournal%5D)">Chromosomal integrity maintained in five human embryonic stem cell lines after prolonged in vitro culture.</a> Chromosome Res. 14 (2), 131-131 (2006).</li>
<li>Imreh, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+culture+conditions+favoring+selection+of+chromosomal+abnormalities+in+human+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">In vitro culture conditions favoring selection of chromosomal abnormalities in human ES cells.</a> J Cell Biochem. 99 (2), 508-508 (2006).</li>
<li>Robin-Wesselschmidt, J. L. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRobin-Wesselschmidt%2C+JL+%22Human+Stem+Cell+Manual%22">Human Stem Cell Manual</a>. Loring, J. F., Robin-Wesselschmidt, J. L., Robin-Wesselschmidt, S. chwartz , Elsevier's Science & Technology Rights. California. 59-59 (2007).</li>
<li>Rooney, D. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRooney%2C+DE+%22Human+Cytogenetics%22">Human Cytogenetics</a>. , Third Edition, Oxford University Press. (2001).</li>
<li>Heslop-Harrison, P., Schwarzacher, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHeslop-Harrison%2C+P+%22Practical+in+situ+hybridization%22">Practical in situ hybridization</a>. Heslop-Harrison, P., Schwarzacher, T. , BIOS Scientific Publishers. Oxford. 51-51 (2000).</li>
</ol>

Yazarların beyan edeceği herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Kromozom yayılır hazırlık, G-bantlama ve BALIK, SKY ve CGH gibi daha sofistike teknikler olarak rutin teknikleri ile embriyonik kök hücrelerin genetik bir durum başarılı bir analiz için önemli bir adım. Bu prosedür, hücre döngüsü uzunluğu bağlıdır colcemid kuluçka döneminde değişen birçok hücre tipleri için uygulanabilir. (EB) embriyoid organları için bu süre 6 saate kadar ise embriyonik kök hücre kolonileri için, biz 3 saat bekleyin. , Tek bir hücre çözümü elde ...

<table><tbody><tr><td>15 ml santrifüj tüpü</td><td>Techno Plastic Products</td><td>91015</td><td></td></tr><tr><td>Colcemid Karyo MAX</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15212-012</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Isofar</td><td>721</td><td></td></tr><tr><td>Glasyal asetik asit</td><td>Isofar</td><td>100</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Isofar</td><td>208</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Klorür (KCl)</td><td>Merck &amp;amp; Co., Inc.</td><td>104.931.000</td><td></td></tr><tr><td>Lam</td><td>Bioslide</td><td>7105-1</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4799</td><td></td></tr></tbody></table>

karyotipik İnsan embriyonik kök hücreleri kromozom yayılı hazırlık

Chromosomal Spread Preparation of Human Embryonic Stem Cells for Karyotyping

Insan embriyonik kök hücreleri (hESC) istikrarlı bir diploid karyotip 1 sunmak için gösterilmiş olsa da, pek çok çalışmada, kültür koşullarına bağlı olarak bütün ek veya kromozom parçaları gibi kromozomal anomaliler elde eğilimli hale bildirmişlerdir. Gerçekten de, enzimatik veya kimyasal disosiasyon 2,3,4 kullanıldığında Pasajlanması için koloniler manuel diseksiyon istikrarlı bir karyotip 5 korur, uzun vadeli kültür sırasında karyotipik değişiklikler gözlenir. Bunun yanı sıra, besleyici hücrelerin ortadan kaldırılması gibi çevre değişiklikleri de hESC 3,6 genetik bütünlüğünü tehlikeye görünüyor. Kromozomal bozukluklar önemli dikkate alınarak hESC embriyogenez çalışmaları ve uyuşturucu testi için gerekli bir araç olarak, in vitro genetik bütünlüğü hESC karakterizasyonu hücresel fizyoloji etkileyebilir. Ayrıca, gelecekte tedavi amaçlı kromozomal değişiklikler sık ​​karsinogenez ilişkili olarak gerçek bir endişe vardır. Burada G-bantlama, FISH, SKY veya CGH teknikleri 7,8 kromozom sonraki analiz için yüksek kalitede kromozom yayılır elde etmek için basit ve kullanışlı bir yöntem gösteriyor . Translokasyonlar ve anöploidiler görünümünü izlemek için rutin kromozomal durumu 5 pasajların aralıklarla kontrol etmenizi öneririz Priscila Britto ve Rafaela Sartore kağıt üzerinde eşit olarak katkıda bulundu.

Karyotipleme genetik değişiklikler tespit etmek için yaygın olarak kullanılan basit ve kullanışlı bir bir tekniktir. Burada bakımı, kültür bu hücrelerin kromozom durum izleme için insan embriyonik kök hücrelerin kromozom yayılmış hazırlık için adım protokol tarafından bir adım açıklanmaktadır.

Karyotipik İnsan Embriyonik Kök Hücreleri kromozom Yayılı Hazırlık

İnsan embriyonik kök hücrelerinin (hESC) stabil bir diploid karyotip sergilediği gösterilmiş olsa da birçok çalışma, kültür koşullarına bağlı olarak...

Giriş. Merhaba. Brezilya'daki Federal Universidade de Faja Biyometrik Bilimler Enstitüsü'nden geliyoruz. Bu videoda, olası kromozom değişikliklerini tespit etmek amacıyla insan embriyonik kök hücrelerinin kromozom yayılımlarını hazırlayacağız. İnsan embriyonik kök hücrelerinin stabil bir karyotip sergilediği gösterilmiş olsa da, birçok çalışma kültür koşullarına bağlı olarak kromozomların tamamının veya kısımlarının eklenmesi gibi kromozom anomalileri kazanmaya meyilli olduklarını bildirmiştir.HASS'nin in vitro genetik bütünlüğünün karakterizasyonu, temel bir araç ve embriyogenez çalışmaları ile ilaç testleri göz önüne alındığında kritik öneme sahiptir. Ayrıca, gelecekteki terapötik öneriler için, karsinogenez ile sıklıkla ilişkili olduğu için kromozomal değişiklikler gerçek bir endişe kaynağıdır. Öyleyse başlayalım.Hücrelerin ate ile tedavisi. Bu prosedürde, bunu kullanıyoruz. Sekiz ila dokuz adet, %20 fetal bovine serum yerine koyucu ve 80 ila 9 g/mL fibroblast büyüme faktörü ile desteklenmiş F 12 içerisinde kültüre edilmiştir. İnkübatörden kültür balonunu çıkararak başlayın ve laminer akışlı bir kabin altında, nihai konsantrasyonu 0.1 µg/mL olacak şekilde coit ekleyin.Ortama Coi

chromosomal-spread-preparation-human-embryonic-stem-cells-for

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

ESC farklılaşması, hücre türüne özgü yapısı değişiklikleri ve kromatin bileşimi ile çakışmaktadır. Bu değişikliklerin tespiti stemcellness ve hücre farklılaşması tanımlamak mekanizmaları içine değerli bilgiler sağlar. Kromatin immunoprecipitation (ChIP) kök hücre farklılaşması altında yatan moleküler mekanizmaları incelemek için değerli bir yöntem temsil eder.

İnsan Embriyonik Kök Hücre Kromatin Immunoprecipitation

Mikro-disseke eksplantlar tekniği, iskelet kas kök hücre kaynağı olarak çocuk, yetişkin ya da embriyonik kasları proliferatif iskelet kas hücreleri izole için sağlam ve güvenilir bir yöntemdir. Benzersiz, bu hücrelerin klonal in vivo nakli için kullanılan iskelet kas kök hücre hatları üretmek için türetilmiştir.

Yetişkin ve Embriyonik İskelet, Kas Microexplant Kültür ve İskelet Kası Kök Hücre İzolasyonu

Spektral Karyotipik (SKY), genomik ve kromozomal sapmaları belirlemek için gelişmiş bir sitogenetik bir yöntemdir. Bu teknik, bütün kromozomlar sınıflamasına izin verir, kromozom boyayan problar yararlanır. SKY da polikistik böbrek hastalığı dahil olmak üzere çeşitli hastalıklar, farelerde ve insanlarda kompleks kromozom anomalileri ve ayrımcılığın kusurları tespit edebilir.

Polikistik Böbrek Hastalığı Olan İnsanlar ve Fareler kromozom anomalileri Eğitim Spektral Karyotipik

Kromozomlar gibi lenfositler ya da deri fibroblast gibi canlı hücrelerden izole edilir ve insan ya da fare gibi organizmalardan elde edilebilir. Bu kromozom preparatları ayrıca rutin G-bantlama ve bu in situ hibridizasyon (FISH) floresan, karşılaştırmalı genomik hibridizasyon (CGH), ve spektral karyotip (SKY) gibi moleküler sitogenetik işlemler için kullanılabilir.

Kültür Hücrelerinin itibaren Kromozom Hazırlık

Tek hücre gen sentezleme tahlili kök hücre heterojeniteler anlamak için gereklidir.

Kantitatif RT-PCR ile Bireysel İnsan Embriyonik Kök Hücreleri profilleme

Muhabir hücre çizgileri, görselleştirmek etiket ve heterojen popülasyonlar ilgi hücreleri izole etmek için bir araç sunmaktadır. Bununla birlikte, hedef gen, insan embriyonik kök hücreleri alışılmış homolog rekombinasyon kullanılarak son derece verimsizdir. Bu yazıda, çinko-parmak nukleaz gelişmiş homolog rekombinasyon kullanarak EGFP ile CNS Ortabeyin özel transkripsiyon faktörü PITX3 odağı hedefleme açıklar.

İnsan Embriyonik Kök Hücreleri Hedefleme Çinko parmak Nükleazlar Geliştirilmiş Gen

Poliploid hücrelerin kromozomal kararsızlığını analiz etmek için proliferatif poliploid hücreler gerekli olsa da, transforme olmamış insan hücrelerinden bu tür hücreler oluşturmak kolay değildir. Bu rapor, normal insan fibroblastlarından diploid popülasyondan arınmış proliferatif tetraploid hücreler oluşturmak için nispeten basit prosedürleri tanımlamaktadır.

Transforme İnsan Fibroblastlar gelen Proliferatif Tetraploid Hücreleri kurulması

Mayoz hangi gamet DNA ikileşmesi bir turu ve kromozom ayrışma birbirini izleyen iki tur üzerinden kurulan gelişimsel işlemidir. Memeli mayoz segregasyonun kromozom yayılır hazırlamak için bir teknik kullanarak incelenebilir. Burada, yüzey-yayılım çekirdeği fare spermatocytes üzerinden hazırlama yöntemi göstermektedir.

Fare Spermatocytes segregasyonun kromozom hazırlanması yayılır

Bu protokol, topolojik olarak ilişkili alanların (TAD'ler) sınırları ve düzenleyici ve diğer DNA dizisi elemanları arasındaki uzun menzilli kromatin etkileşimleri de dahil olmak üzere, mega tabanlı boyutlu hedeflenen genomik bölgelerin 3D organizasyonunu yüksek çözünürlükte karakterize etmek için kullanılan Capture Hi-C yöntemini açıklar.

Yüksek Çözünürlüklü 3D Kromatin Organizasyonunun Capture Hi-C ile Deşifre Edilmesi

Genom içindeki lokus kopya sayısını ve konumunu görsel olarak tespit eden bir DNA-FISH metafaz yayılım protokolü rapor ediyoruz. Bu yaklaşım, özellikle ekstrakromozomal DNA içeren ve homojen boyama bölgeleri içeren kanser hücre hatlarında amplifikasyon durumlarının tek hücre çözünürlükünü sağlar.

DNA-FISH Metafazı, İnsan Kanser Hücre Hatlarında Homojen Boyalı Bölgelerden Ekstrakromozomal DNA'yı Ayırt Etmek İçin Yayılır

Öğrenin, insan embriyonik kök hücrelerinde kromozom yayılı hazırlama yöntemini ve karyotipleme tekniğini. Genetik bütünlüğü izlemek için bu protokol, kök hücre araştırmalarında ve terapötik uygulamalarda kritik öneme sahiptir.

Karyotipik İnsan Embriyonik Kök Hücreleri kromozom Yayılı Hazırlık

Daha fazla video keşfet