Name: Proteaz Aktivitesi belirleme Proteaz Floresan Algılama Kit kullanın (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-04T16:40:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Öğrenin, Proteaz Floresan Algılama Kiti ile FITC işaretli kazein substratı kullanarak florometrik proteaz aktivitesi ölçümü yapmayı. Bu hassas yöntem, biyolojik örneklerde düşük düzeyde proteaz kontaminasyonunun tespiti için kalite kontrol laboratuvarlarında uygulanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Hazırlık Talimatı Kuluçka Tampon, Assay Tampon ve 0.6 N TCA Çözüm kullanıma hazır çözümler olarak sağlanmaktadır. FITC Kazein Yüzey tekrarlanan donma-çözülme döngüleri önlemek için vardıklarında küçük birimlere kısım FITC Kazein Yüzey tavsiye edilir. FITC Kazein Yüzey tekrarlanan donma-çözülme döngüsüne maruz kalırsa, arka planda hafif bir artış hassasiyet düşürücü, böylece meydana gelecektir. Alikotları, -20 ° C'de saklanan ve ışıktan korunmalıdır. Her bir örnek, boş, ya da kontrol reaksiyon FITC Kazein Yüzey 20 ul gerektirir. Freeze / Çözülme yanı sıra kuvvetli karıştırma veya sallayarak FITC, okuma ve daha az substrat proteaz bölünme için kullanılabilir hale gelmesine neden yüksek bir arka plan ile sonuçlanan Kazein ayrı neden olabilir. Floresein izotiyosiyanat (FITC) Kontrol Çözüm Testi Tampon FITC kontrolü, uygun konsantrasyonda sulandırılmış olabilir. Bu çözüm, taze ve ışıktan korunmalıdır. Final tripsin Kontrol Çözümü - 1 mM HCl 100 ul tripsin, Proteaz Kontrolü (Ürün Kodu T 6567) flakon. Tripsin çözülmüş olduğundan emin olmak için kısa bir süre karıştırın. Kuluçka Tampon 900 ul ekleyin ve iyice karıştırın. Alternatif olarak, eğer tahlil için istenen diğer tamponlar kullanılabilir. Tripsin son çalışma konsantrasyonu 20 mcg / ml. Tripsin Kontrol Çözüm hazırlamak için hazır olduğunuzda, bir kısım Kuluçka Buffer (9 parça tampon 1 yarı asitlendirilmiş tripsin) doğru miktarda asidik tripsin çözüm birleştirir. Tripsin asidik koşullar altında saklanması tripsin istikrarı artırır. Tripsin kontrol çözümü ısıya duyarlı ve düşük konsantrasyonlarda sabit değildir. Hazırlanan bu çözümler depolama ve istikrarı için kit teknik bülten gözden geçirin. Prosedür <ol><li> Bir kerede tüm kontrolleri, boşlukları ve numuneleri hazırlamak için en kolayıdır. Her bir test örneği için, bir mikrosantrifüj tüp 20 ul Kuluçka Buffer, 20 ul FITC Kazein Yüzey ve test örneği 10 ul ekleyin. Yüksek proteaz aktivitesi test örnekleri, örnek seyreltme gerekebilir. </li><li> Bir mikrosantrifüj tüp 20 Kuluçka Tampon, 20 ul FITC Kazein Yüzey ve kontrol örneği 10 ul ul ekleyerek uygun kontrol örneklerinde (Kontrol Örnekler) hazırlayın. </li><li> Bir mikrosantrifüj tüp 20 Kuluçka Tampon, 20 ul FITC Kazein Yüzey ve ultra saf su 10 ul ul ekleyerek boş bir örnek hazırlayın. </li><li> Her bir tüp ve inkübe 37 ° C'de 60 dakika süreyle karanlıkta yavaşça karıştırınız. Türbülansı yüksek floresan arka plan neden olabilir, çok güçlü bir şekilde karıştırın ve testin duyarlılığını azaltmak için dikkatli olun. Not: İnkübasyon süresi duyarlılığını artırmak için 24 saate kadar uzatılabilir. Yüksek floresan arka önde gelen, 24 saat FITC-Kazein düşmeye başlayabilir aşmayacak şekilde dikkatli olun. </li><li> Inkübasyondan sonra her mikrosantrifüj tüpe 0,6 N Trikloroasetik Asit Çözeltisi 150 ul ekleyin. TCA çok aşındırıcı ve uygun koruyucu ekipman giyerek ele alınmalıdır. </li><li> 37 ° hafifçe karıştırın ve inkübe ° C de 30 dakika süreyle karanlıkta. </li><li> 10.000 x g. az 10 dakika süreyle tüpleri Santrifüj Süpernatant asit çözünür, FITC etiketli parçaları içeren ve floresan ölçümü için kullanılır. </li></ol> Floresan Ölçümler Bu yöntemler ölçekli veya aşağı enstrümantasyon mevcut şartlara göre olabilir. Uygun kontrol örnekleri ile hazırlanan standart eğri karşılaştırma için, her bir test örneği değeri (FLUtest) boş bir örneği (FLUblank) floresan okuma çıkarın. Hendekler <ol><li> Pipet 10 süpernatant (adım 7) ve uygun bir küvet içine Testi Tampon 1 ml ul ve hafifçe karıştırın. Not: süpernatant ve Analiz Tampon çözüm floresan ölçüm önce 24 saate kadar 2-8 ° C'de karanlıkta saklanabilir. </li><li> 485 nm eksitasyon ile floresan kaydetme ve izleme emisyon dalga boyu 535 nm. </li></ol> Multiwell Tabaklar <ol><li> Pipet 10 ul supernatant (adım 7) ve uygun bir tüp veya şişenin içine Testi Tampon 1 ml ve hafifçe karıştırın Not: süpernatant ve Analiz Tampon çözüm, 2-8 ° C'de karanlıkta saklanabilir floresan ölçüm 24 saat önce için. </li><li> Siyah 96 plaka iyi 200 ul aktarın. 485 nm eksitasyon ile floresan kaydetme ve izleme emisyon dalga boyu 535 nm. Veya </li></ol><ol><li> Pipet süpernatantı 2 ul (adım 7) ve Test B 200 ulsiyah 96 plaka bir kuyuya uffer. Not: süpernatant ve Analiz Tampon çözüm floresan ölçüm önce 24 saate kadar 2-8 ° C'de karanlıkta saklanabilir. </li><li> 485 nm eksitasyon ile floresan kaydetme ve izleme emisyon dalga boyu 535 nm. </li></ol> Kontrol Örnekleri Tripsin Kontrol Çözüm tahlil saptama sınırı belirlemek, ya da genel bir standart eğri oluşturmak için, düzgün gerçekleştirirken onaylamak için kullanılabilir. Farklı, özel bir proteaz testi için, uygun inkübasyon tamponunda proteaz içeren bir kontrol solüsyonu hazırlamak için tavsiye edilir. Testin algılama limiti, boş bir örneği ile elde edilen değerin üzerinde önemli bir floresan okuma üretir proteaz miktarı. Algılama sınırı enstrümantasyon hassasiyetine bağlı olarak değişir. Tripsin Kontrol Çözüm Seri dilüsyonları kontrol çözümleri oluşturmak için kullanılan olabilir. Boş bir örneği ile elde edilen değerin% 120 okuma eşit olarak anlamlı kabul edildi. Rutin, tripsin 5 ng algılama sınırı Bu işlem ile elde edildi. Her deney en az bir 5 ng tripsin kontrolü ile çalıştırmak olması tavsiye edilir. 0.5 mg / ml 'lik bir konsantrasyon ile tripsin kontrol çözümü tayininde tripsin istenen 5 ng neden olacaktır. Tripsin Kontrol Çözümü (20 mg / ml) 0.5 mg / ml kontrol çözümü, yani bir parçası Kuluçka Tampon 39 parça tripsin Kontrol Çözüm sonuçları 40 kat seyreltme. <img src="/files/ftp_upload/1514/figure1.jpg" alt="Şekil 1"> Şekil 1 (tripsin Faaliyet Standart Eğrisi): tripsin Kontrol Çözümü (20 mg / ml) (bkz. Şekil 1) seri dilüsyonları yaparak standart bir eğri oluşturmak için kullanılır. Her bir kontrol örneği floresan okuma boş örnek floresan okuma (FLUblank) her kontrol örneği (FLUcontrol) değeri çıkarılarak giderilmiştir. 0.15 mcg / ml (1.5 ng) 2.5 mg / ml (25 ng) arasında değişen bu seti ve kontrol örnekleri kullanarak tripsin (Ürün Kodu T 6567) için tipik bir standart eğri. Bu eğri açıklanan prosedürü izleyerek, adım 4 için 30 dakikalık bir inkübasyon süresi oluşturulmuştur. Multiwell plaka Floresan ölçümleri yapıldı. Floresein izotiyosiyanat mümkün alet kalibrasyon kontrolü (uygun üreticinin talimatlarına bakınız) veya FITC sinyal doğrusallık aralığı belirlenmesi sağlanır.

<ol><li>Twining, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescein+Isothiocyanate-Labeled+Casein+Assay+for+Proteolytic+Enzymes%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Fluorescein Isothiocyanate-Labeled Casein Assay for Proteolytic Enzymes.</a> Anal. Biochem. 143, 30-34 (1984).</li>
</ol>

Yazar, bu yazıda kullanılan reaktifler ve araçları üreten Sigma Aldrich bir çalışanı.

Biz sadece biyolojik bir örnek proteaz aktivitesi tespit etmek için Proteaz Floresan Algılama Kit kullanarak bir örnek tahlil göstermiştir. Bu kit, çok çeşitli fizyolojik uygulamalarda bulundu proteazlar tespit etmek için optimize edilmiştir. Serin, sistein, metalli ve aspartik proteazlar tespiti için uygundur, ancak yapılan değişiklikler bazı spesifik proteazlar algılamak için gerekli olabilir.

<table><tbody><tr><td>&lt;a href=&quot;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=en&amp;amp;N4=PF0100%7CSIGMA&amp;amp;N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&amp;amp;F=SPEC&amp;amp;cm_sp=affiliate-_-Jove-_-12346">Proteaz Floresan Tespit Kiti&lt;/a&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PF0100</td><td></td></tr><tr><td>&lt;a href=&quot;http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?lang=en&amp;amp;N4=H1758%7CSIGMA&amp;amp;N5=SEARCH_CONCAT_PNO%7CBRAND_KEY&amp;amp;F=SPEC&amp;amp;cm_sp=affiliate-_-Jove-_-12347">Hidroklorik Asit&lt;/a&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758</td><td></td></tr></tbody></table>

proteaz aktivitesi belirleme proteaz floresan algılama kit kullanın

Use of the Protease Fluorescent Detection Kit to Determine Protease Activity

Proteaz Floresan Algılama Seti sağlamaktadır hazır proteaz aktivitesi varlığını tespit için kullanımı reaktifler. Bu basit bir tahlil proteaz aktivitesi tespit etmek için kazeinin, substrat olarak floresein izotiyosiyanat (FITC) ile etiketlenmiş kullanır. Proteaz aktivitesi asidik koşullar altında çökelek değil küçük parçaları, içine FITC etiketli kazein substrat bölünme ile sonuçlanır. Proteaz örnek ve yüzey inkübasyondan sonra, reaksiyon trikloroasetik asit (TCA) eklenmesi ile asitlendirilmiş. Bu karışım daha sonra bir pelet ve çözelti içinde kalan küçük, asit çözünür parçaları oluşturan sindirilmemiş substratı ile santrifüj edilir. Süpernatant nötralize edilir ve FITC etiketli parçaları floresan ölçülür. Açıklanan kiti prosedür yaklaşık 0.5 mg / ml (tripsin 5 ng tahlil eklenen) bir konsantrasyon tripsin proteaz kontrol algılar. Bu duyarlılık, daha uzun bir kuluçka süresi, 24 saate kadar artırılabilir. Mikrosantrifüj tüpler tahlil yapılır ve prosedürleri Küvet veya multiwell plakaları kullanarak floresan tespiti için verilmektedir.

Proteaz Floresan Algılama Kit Florimetri kullanarak proteaz aktivitesi ölçümü için tasarlanmıştır. Ayrıca eser miktarda proteaz kontaminasyon tespiti için uygundur. Yöntem FITC etiketli kazein substrat özel bir formülasyon proteolitik hydroysis dayanmaktadır.

Proteaz Aktivitesi belirleme Proteaz Floresan Algılama Kit kullanın

Proteaz Floresan Tespit Kiti, proteaz aktivitesinin varlığını tespit etmek için kullanıma hazır reaktifler sağlar. ... tespit etmeye yönelik bu basit analiz...

Bu protokol, inkübasyon tamponu, FXI kazein çözeltisi ve ilgilenilen proteazı içeren numunenin bir mikro santrifüj tüpüne eklenmesiyle başlar; ardından karışım nazikçe karıştırılır ve karanlıkta 37 °C'de 60 dakika boyunca inkübe edilir. İnkübasyon süresinin sonunda proteolitik reaksiyonu durdurmak için TCA çözeltisi ekleyin, nazikçe karıştırın ve tekrar karanlıkta 37 °C'de 30 dakika boyunca inkübe edin. Bu adım, reaksiyona girmeyen substratın çökelmesini sağlayacaktır.Numuneyi 10.000 Gs'de 10 dakika boyunca santrifüjleyin. Asit çözünür FXI işaretli fragmanları içeren süpernatantı uzaklaştırın. Süpernatantı bir tüpe veya çok kuyucuklu plakaya aktarın, analiz tamponu ile seyreltin ve numuneyi bir florimetre ile okuyun.Merhaba, ben Carrie Cup Vineyard; Missouri, St. Louis'teki Sigma Aldridge DeKalb tesisinde görev yapan bir bilim insanıyım. Bugün sizlere florometrik proteaz aktivitesi tayini prosedürünü göstereceğim. Bu prosedürü, düşük proteaz aktivitesini belirlemek için kalite kontrol laboratuvarımızda kullanıyoruz.Hadi başlayalım. Bu prosedür için inkübasyon tamponu, assay tamponu ve 0,6 normal trikloroasetik asit veya TCA çözeltisi, kullanıma hazır çözeltiler olarak sağlanmıştır. Cain etiketli fite çözeltisini daha küçük hacimlerde alikotlayın ve -20 °C'de saklayın. Kehribar rengi flakonlar kullanarak veya şeffaf tüpleri folyoya sararak ışıktan koruduğunuzdan emin olun.Fitik asit substratını alıkoymak, tekrarlanan dondurma-çözme döngüleri ihtiyacını minimize eder; tekrarlanan dondurma-çözme döngüleri veya fitik asidin şiddetli şekilde çalkalanması veya karıştırılması, fitik asidin ayrışmasına yol açarak daha yüksek arka plan gürültüsüne neden olabilir. Florimetreyi kalibre ederken veya fit sinyali için doğrusal aralığı belirlerken, fit kontrol çözeltisini hazırlayın. Çözeltiyi, uygun konsantrasyona getirmek için assay tamponu ile yeniden çözerek taze olarak hazırlayın.Hazır olduğunda, çözeltiyi ışıktan koruyun. Son olarak, liyofilize tripsin şişesine 100 µL 1 mM hidroklorik asit ekleyerek ve tripsinin tamamen çözündüğünden emin olmak için kısa bir süre karıştırarak tripsin proteaz kontrolünü hazırlayın. Tripsinin asidik koşullar altında saklanması stabilitesini artırır.Tripsin kontrol solüsyonunun sıcaklığa duyarlı olduğunu ve düşük konsantrasyonlarda stabil olmadığını unutmayın. Ardından, analiz boyunca kullanılacak test örnekleri, kontrol ve boş örnekleri içeren tüm analiz örneklerini hazırlamaya başlayın. Her bir test örneğini ışıktan koruyun.Bir mikrosantrifüj tüpünde 20 µL inkübasyon tamponu, 20 µL fit c kian substratı ve 10 µL test örneğini birleştirin. Örnek karanlıkta inkübe edildiği sürece şeffaf bir mikrosantrifüj tüpü kullanılabilir. Ayrıca, yüksek proteaz aktivitesine sahip test örneklerinin seyreltilmesi gerekeceğini unutmayın.Tripsin kontrol örneği, analizinin düzgün çalıştığını belirlemek, saptama sınırını tespit etmek veya genel bir standart eğrisi oluşturmak için pozitif kontrol olarak kullanılır; tripsin kontrolünü hazırlamak için, bir birim asitlendirilmiş tripsini dokuz birim inkübasyon tamponu veya test örnekleri için kullanılan tamponla birleştirin ve iyice karıştırın. Tripsinin nihai çalışma konsantrasyonu 20 µg/mL'dir. Farklı bir spesifik proteaz kullanılacaksa, kontrol çözeltisi bu spesifik proteaz ve uygun bir tampon ile hazırlanmalıdır.Bir mikrosantrifüj tüpünde 20 µL inkübasyon tamponu, 20 µL fz cain substratı ve 10 µL tripsin kontrolünü birleştirerek kontrol örneğini hazırlamaya devam edin. Her analizle birlikte en az bir adet 5 ng tripsin kontrol örneğinin çalıştırılması veya seri dilüsyon kullanılması önerilir. Son örnek, bir mikrosantrifüj tüpünde 20 µL inkübasyon tamponu, 20 µL Fitz Caine substratı ve 10 µL ultra saf suyun birleştirilmesiyle hazırlanan boş örnektir (blank).Üç tip örnek hazırlandıktan sonra, her tüpü nazikçe karıştırın ve 37 °C'de karanlıkta 60 dakika boyunca inkübe edin. Aşırı türbülans yüksek floresan arka planına neden olabileceği ve assay hassasiyetini azaltabileceği için çok şiddetli karıştırmamaya dikkat edin. Hassasiyeti artırmak için 24 saate kadar inkübasyon yapılabilir, ancak FXI kazein degrade olmaya başlayabileceği için daha uzun süreli inkübasyonlar önerilmez.İnkübasyon tamamlandığında yüksek floresan arka planına yol açmamak için, her bir mikro santrifüj tüpüne 150 µL TCA çözeltisi eklemek üzere uygun koruyucu ekipman kullanın. TCA ile inkübasyon sırasında, tüpte çökelmiş, sindirilmemiş ve çözünmeyen kazein olan beyaz bir pus gözlemlenmelidir; karışımı nazikçe karıştırın ve 37 °C'de karanlıkta 30 dakika boyunca inkübe edin. TCA çözeltisi ile inkübasyonun sonunda, tüpleri oda sıcaklığında 10.000 G'de 10 dakika boyunca santrifüjleyin.Süpernatant, floresans ölçümünde kullanılan asit çözünür fite etiketli Cain fragmanlarını içerir; pelletle birlikte çöken kısımdan herhangi bir maddenin pipet ucuna çekilmemesi için tüpün üst kısmından nazikçe pipetleme yapın, aksi takdirde sonraki floresan deteksiyonu sırasında yanlış pozitif bir okuma gerçekleşecektir. Bir florimetre kullanarak proteaz aktivitesini ölçmek için, 10 µL TCA süpernatantını bir tüpte bir mililitre analiz tamponu ile birleştirin ve nazikçe karıştırın. Ek olarak, 1 mL analiz tamponuna 10 µL FE ekleyerek analiz için FE standardını seyreltin. FE kontrolü ve Tripsin standardı, örneğin aşmaması gereken bir floresans seviyesi sağlar. TCA süpernatantı ve analiz tamponu çözeltisi, floresans ölçümü yapılmadan önce 2 ila 8 °C'de karanlıkta 24 saate kadar saklanabilir.Bir küvet kullanılarak ölçüm yapılacaksa, çözeltiden bir mililitre uygun bir küvete aktarın; eğer çok sayıda örnek çalışılacaksa, florometrik verileri elde etmek için 96 kuyucuklu bir plaka ve floresan plaka okuyucu kullanılabilir. Bu analizde, olası cihaz kalibrasyonu için kontrol olarak floresein izotiyosiyanat sağlanmıştır. Burada, açıklanan prosedürü takiben FITC sinyalinin temsili bir lineerlik aralığı gösterilmektedir.Bu kitin, ilk inkübasyon adımı için 30 dakikalık bir inkübasyon süresiyle kullanılması, 1,5 nanogram ile 25 nanogram aralığındaki tripsin ve kontrol örnekleri için bu tipik standart eğriyi verir. Floresans ölçümleri çok kuyucuklu bir plakada yapılmıştır. Analizin tespit limiti, boş örnekle elde edilen değerin üzerinde anlamlı bir floresans okuması üreten proteaz miktarıdır.Bugün, biyolojik bir örnekteki florimetrik proteaz aktivitesini saptamak için Sigma Aldridge proteaz tayin kitinin nasıl kullanılacağını gösterdik. Bu kit kullanımınız için optimize edilmiş olsa da, çalıştırdığınız özel proteazlar için küçük modifikasyonlar yapmanız gerekebileceğini unutmamak önemlidir. Şimdilik anlatacaklarımız bu kadar.İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

use-protease-fluorescent-detection-kit-to-determine-protease

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu videoda, biyolojik örneklerdeki proteolitik aktiviteyi analiz etmek için elektroforetik bir teknik olan zimografi uyguluyoruz.

Floresan Peptit Zimografi: Zymogram Jellerinde Florojenik Substratlar Kullanılarak Proteaz Aktivitesini Tespit Etmek İçin Modifiye Edilmiş Bir Teknik

Bu video, florojenik peptitler kullanılarak proteazların proteolitik aktivitesini taramak için bir testi göstermektedir. Proteaz, peptit üzerindeki bölünme bölgesini tanır, onu parçalar ve söndürücüyü florofordan ayırarak floresan emisyonunu sağlar. Floresan sinyali, farklı peptit varyantlarının bölünme verimliliğini kontrol etmek için tespit edilir ve analiz edilir.

Proteazların proteolitik aktivitesini taramak için bir florojenik peptit bölünme testi

Bu video, balgam örneklerinde nötrofil serin proteaz aktivitesini ölçmek için bir in vitro testi göstermektedir. Salgılanan proteaz içeren numune, bir tanıma motifi taşıyan bir floresan raportör ile inkübe edilir. Motifin proteaz tarafından bölünmesi, raportörün donörü ve alıcı floroforu tarafından bireysel floresan emisyonunu mümkün kılar ve bu da numunedeki proteaz aktivitesini gösterir.

Floresan Raportör Kullanarak Nötrofil Serin Proteaz Aktivitesini Ölçmek için İn Vitro Test

Bu video, florojenik bir peptit testi kullanılarak korku koşullandırılmış ve kontrol sıçan beyinlerinden lateral amigdalanın farklı hücre altı bölmelerindeki proteazom aktivitesinin nasıl ölçüleceğini göstermektedir. Proteazom, florojenik peptit substratını parçalayarak, nükleer ve sinaptik protein fraksiyonlarındaki proteazom aktivitesini değerlendirmek için bir plaka okuyucu kullanılarak nicelleştirilen floresan molekülleri serbest bırakır. Artan nükleer aktivite, gen ekspresyonundaki...

Sıçan Beyninin Farklı Hücre Altı Bölmelerinde Proteazom Aktivitesinin Ölçülmesi

Burada, canlı hücrelerdeki integral zar proteinlerinin oryantasyonunu ve topolojisini belirlemek için bir protokol sunuyoruz. Bu basit protokol, ilgilenilen protein ile GFP arasındaki kimeraların seçici proteaz duyarlılığına dayanır.

Floresan Proteaz Koruma Kullanma Membran Protein topolojisini belirlenmesi (FPP)

Proteaz sıkıca düzenlenmiş temel biyolojik süreçlerin ve dysregulated proteaz aktivitesi sürücüler ilerleme kanser gibi karmaşık hastalıkların katılan enzimlerdir. Bu yöntemin hedef ana bilgisayar idrardan algılanabilir ve hastalık ayrımcılık bir bölünme sinyal üreterek proteaz aktivitesi in vivo ölçmek nanosensors oluşturmaktır.

Nanosensors için noninvaziv tanı koyma proteaz aktivitesi Vivo tespit

Burada, N-terminal hexahistidine/maltoz-bağlayıcı protein ve nikel-nitrilotriacetic yüzeye bağlı floresan protein erimiş rekombinant yüzeylerde kullanan bir son zamanlarda geliştirilen proteaz tahlil platform ayrıntılı yordam mevcut asit manyetik özel boncuk. Bir sonraki jel analiz Sodyum Lauryl Sülfat-polyacrylamide jel elektroforez tarafından ayrılmış tahlil örnekleri de sunulmaktadır.

Rekombinant füzyon protein flüoresan proteaz tahlil Platform ve onların jel Renaturation kullanımı

Biz peptidler viral füzyon peptidler bölünme sitenin temsil eden proteaz proteolitik aktivite hızlı bir tarama sağlayan bir fluorogenic peptid bölünme tahlil mevcut. Bu yöntem aynı zamanda bir protein sıra içinde diğer amino asit motif üzerinde proteaz aktivitesi için test etmek için kullanılabilir.

Bir Fluorogenic peptid bölünme tahlil için proteolitik aktivite ekran: coronavirus uygulamalarda spike protein etkinleştirme

Burada, floresan peptidler yerli protein yerine parçalanabilir substrat olarak kullanıldığı bir değiştirilmiş zymographic teknik için detaylı bir iletişim kuralı mevcut. Elektroforez floresan peptid zymograms Biyolojik örneklerin daha önceki zymographic teknikleri geniş proteaz tespiti sağlar.

Floresan peptid Zymography tarafından proteaz aktivitesinin algılama

Mevcut protokol, akış sitometrisi veya spektroflorometre kullanarak florojenik bir substrat yoluyla kaspaz aktivitesini ölçmek için iki yöntem tanımlamaktadır.

Florometrik Tahlil veya Akış Sitometrisi Kullanarak Kaspaz Aktivitesinin Ölçülmesi

Öğrenin, Proteaz Floresan Algılama Kiti ile FITC işaretli kazein substratı kullanarak florometrik proteaz aktivitesi ölçümü yapmayı. Bu hassas yöntem, biyolojik örneklerde düşük düzeyde proteaz kontaminasyonunun tespiti için kalite kontrol laboratuvarlarında uygulanır.

Proteaz Aktivitesi belirleme Proteaz Floresan Algılama Kit kullanın

Daha fazla video keşfet