Name: İzolasyon ve Büyük Ölçekli Genişleme Yetişkin İnsan Endotel Koloni Oluşturan Progenitör Hücreler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-28T07:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 17 s
Description: Keşfedin, yetişkin insan periferik kanından endotelyal koloni oluşturan progenitör hücrelerin (ECFC) hayvan serumu içermeyen ortamda izolasyonu ve büyük ölçekli genişlemesi için güvenilir bir yöntem.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, mükemmel teknik destek için pHPL ve Margaretha Frühwirth ve Daniela Thaler sağlamak için Dr. Katharina Schallmoser teşekkür ederim.

A.) ECFC ISOLATON 1. GÜN: <ol><li> Deney başlamadan önce, hücre kültür ortamı Endotel Büyüme Orta-2 (EGM-2) hazırlar. (Sigma, St Louis, MO 500ml Endotel Bazal heparin (1000 U / ml 1 ml) ile Orta-2, 5ml 100x çözüm penisilin / streptomisin Ek <a href="http://www.sigmaaldrich.com/">www.sigmaaldrich.com</a> ), L-glutamin (2 mM nihai konsantrasyonu ) ve 50 ml toplanmış insan trombosit lizatı (pHPL). Ardından 0.2 ml hidrokortizon, 2 ml hFGF-B, 0.5 ml VEGF, 0.5 ml EGF, 0.5 ml IGF-1 ve 0.5 ml askorbik asit (SingleQuots olarak verilmiştir, tüm Lonza, Walkersville, MD eklemek <a href="http://www.lonzabioscience.com/">http://www.lonzabioscience. com /</a> ). Steril süzüntü 0.2 m gözenek boyutu 500 ml Millipore vakum filtresi ile orta. PHPL küçük pıhtıları formları için bir orta ve iki filtreler gerekebilir. Pre-sıcak süzülmüş EGM-2 37 ° C su banyosunda </li><li> Yetişkin insan periferik kan kübital venden 5 ml 6ml koruyucu sodyum heparin kan vacutainer tüp içine çekerek kan örnekleri toplayın. En fazla iki saat içinde kan örnekleri işlemek gerekir. </li><li> Bacalı kap, bir adet 25 ml pipet ve bir laminer akış tezgahı iki adet 5 ml pipetler şişesi, bir adet 75 cm 2 (Costar T75) hazırlayarak başlayın. </li><li> Ön dolgu 15 ml, 25 ml pipet ile önceden ısıtılmış EGM-2 balonun içine desteklenmiş. Şimdi kan flakon ve 5 ml ölçülü balona pipetle 5 ml örnek açın. Ikinci 5 ml pipetle 5 ml ilave EGM-2, boş bir kan şişe ile durulayın. T75 içinde toplam hacim 25 ml. 37 ° ° C,% 5 CO 2 ve% 95 nem, 24 saat için bir kuluçka şişesi ve yer Bacalı-kapağını kapatın . </li></ol> 2. GÜN: <ol><li> Yaklaşık 24 saat sonra (gece boyunca) yapışık olmayan hücrelerin kurtulmak için orta-kan karışımı kaldırmanız gerekir. Laminer akış hazırlamak bu iki 25 ml pipetler ve üç adet 5 ml pipetler için, ön-sıcak 20 ml, bir su banyosunda 37 ° C EGM-2 (önceki gün hazırlanmıştır) ve 30 ml PBS desteklenmiş. </li><li> Inkübatör örnek şişesi çıkarın ve 25 ml pipet ile tüm süpernatant kaldırmak. Herhangi bir potansiyel kolonisi zarar görmesini önlemek için balon yüzeyinde çiziklerin oluşmasına özen gösterin. Diğer bir tarafı hafifçe önceden ısıtılmış PBS ve devirme şişesi 10 ml ekleyerek iç şişesi hücre temas yüzeyi üç kez yıkayın. PBS, hemen her zaman ve atın çıkarın. </li><li> Balona 20 ml taze önceden ısıtılmış EGM-2 ve inkübatör içine yerleştirin. Bu süreç, ayırmak için değil, bağlı hücreler için mümkün olduğunca hızlı ve yumuşak olarak yapılmalıdır. PBS içinde ya da oda sıcaklığında uzun süre için tutulur ECFCs kolayca ayırmak. </li><li> Ekran sistemik her ikinci gün balondaki yoluyla düşük bir büyütme ECFC akıbet için arayan bir ışık mikroskobu kullanılarak iki gün başlayan. Bir koloni koloni konumunu gösteren balonun dış tarafında üst üste işareti bulunduğunda. Flaks kuluçka dışında 5 dakikadan fazla olmaması gerektiğini unutmayın. </li></ol> 5. Gün: <ol><li> Beşinci gününde tohumlama sonra yapışmaz hücreleri çıkarmak için tam bir orta değişim gerçekleştirmek. Bu amaçla ön-sıcak 20 ml EGM-2 37 ° C su banyosu ve iki adet 25 ml pipetler hazırlamak. </li><li> 25 ml pipet kullanarak tam orta çıkarın ve mümkün olan en kısa sürede taze, önceden ısıtılmış takviye EGM-2 ekleyin. Hücreler kurutma önlemek için bir dakika daha fazla orta olmadan bırakılmamalıdır. Inkübatör içine yerleştirin ve şişeyi günlük tarama tekrarlayın. </li><li> Taze takviye EGM-2 haftada iki kez,% 30 orta yerine hücreleri tarafından besleyin. </li></ol> GÜN 14-28: <ol><li> Arnavut kaldırımı taş morfolojisi ile tipik kolonilerin etrafında 12 günde görünmelidir. Her koloninin konumunu belirtmek için balonun üst dış tarafında işaretleyin. Tek hücreleri ayırmak için sürece koloniler 28 gün kadar büyümeye izin verin. Sonra, birincil koloniler, büyüklüğüne göre 14 ile 28 gün arasında hasat edilebilir tespit edilmiştir. </li></ol> B.) ECFC HASAT <ol><li> Pre-sıcak 5 ml tripsin 0.05% / EDTA, 20 ml PBS ve 5ml taze takviye EGM-2. </li><li> Tamamen (herhangi bir potansiyel kolonisi zarar görmesini önlemek için balonun yüzeyine dokunmamaya özen) bir Falcon tüp içine şişeden orta kaldırmak ve 10 ml önceden ısıtılmış PBS ile hücreleri dikkatli bir şekilde yıkayın. </li><li> Inkübatör 5 dakika için 5 ml tripsin / EDTA ve inkübe ekleyin. Toksik hale yana hücreleri fazla 7 dakika tripsin maruz olmamalıdır. Balonun tarafı iyice dokunarak hücreleri ayırmak için yardımcı olur. Korunmuş kullanılan kültür ortamı yaklaşık 10 ml ekleyerek tripsin proteaz aktivitesi Quench. </li><li> 50 ml Falco içine hücre süspansiyonu çıkarınn tüp. Hasat edilen hücre süspansiyonu daha sonra eklenir şişeyi kez 10 ml PBS ile yıkayın. 4 7 dakika için 300 g hücre süspansiyonu Santrifüj ° C hücreleri toplamak ve tripsin kaldırmak için. Süpernatantı atın ve hemen 1 mL PBS içinde hücre pelletini tekrar süspansiyon haline getirin. Buz üzerinde tutun. </li><li> Vallahi bir protokolde R. Ricardo ve K. Phelani tarafından açıklandığı gibi hücre sayısını belirler. 5 </li></ol> C.) ECFC GENLEŞME <ol><li> Ek 500 ml EGM-2) A 1.1 &#39;de tanımlanmıştır. Ön-sıcak - 37 ° C su banyosu. </li><li> Nunc, Naperville, IL; yaklaşık 2500 cm 2 kültür alanı için 11 T220 (225 cm 2) veya 15 T175 (175 cm 2) ya da birinin dört katmanlı hücre fabrikası (CF-4 <a href="http://www.nuncbrand.com/">hazırlamak</a> http://www.nuncbrand <a href="http://www.nuncbrand.com/">com</a> ). Ayrıca iki tatlı havalandırma kapakları ve laminer akış tezgah özel steril huni gerekecektir. </li><li> 100 bir başlangıç ​​hücre yoğunluğu tohum ECFCs için hücre sayısı c / cm 2 hesaplanması gerekmektedir. Biri için CF-4 500 ml taze EGM-2 252.800 hücrelerinin yeniden süspanse ve steril huni kullanarak CF-4 dökülür. Bir havalandırma havalandırma kapağı ile kapatın ve 4 unları arasında orta eşit dağılımını sağlayan, CF-4 bir boylam yan yatırmak. Sonra odasına geri eğme ve havalandırma kapağının kapağı açın. CF-4 inkübatöre yerleştirin. </li><li> CF-4 kadar en az haftada bir kez orta% 20 değiştirin konfluent. </li><li> Hasat hücreler tripsin / EDTA 70 ml ve yaklaşık 200 ml PBS kullanarak) B. açıklanan. </li></ol> TEMSİLCİSİ SONUÇLAR Bu izolasyon yöntemi kullanarak 12 gün az ilkokul koloni oluşumu gözlemledi. Önceki bir çalışmada, ortalama 4.0 ± periferik kan her ml edilen 0,8 ECFC-sömürgelerde kurtarmak için başardık 4 ECFCs tipik bir Arnavut kaldırımı taş görünümü gösterdi . Büyük ölçekli genişleme sonra, ekim yoğunluğu 100 hücre / cm 2, 3 erkek ve 1 kadın gönüllüler (26 ve 50 yılları arasında yaş) yaklaşık 30 gün olmak üzere toplam&gt; 1 x 10 8 hücre elde. Kültür ECFC bu koşullar altında, proliferatif, fonksiyonel ve genomik istikrarlı olması gösterildi 4 Ayrıca hücrelerin daha sonra kullanmak üzere sıvı azot (% 10 DMSO) saklanabilir. 3,4

<ol><li>Solovey, A., Lin, Y., Browne, P., Choong, S., Wayner, E., Hebbel, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+activated+endothelial+cells+in+sickle+cell+anemia%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Circulating activated endothelial cells in sickle cell anemia.</a> N Engl J Med. 337, 1584-1590 (1997).</li>
<li>Yoder, M. C., Mead, L. E., Prater, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redefining+endothelial+progenitor+cells+via+clonal+analysis+and+hematopoietic+stem%2Fprogenitor+cell+principals%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals.</a> Blood. 109, 1801-1809 (2007).</li>
<li>Schallmoser, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+large-scale+expansion+of+functional+mesenchymal+stem+cells+from+unmanipulated+bone+marrow+without+animal+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Eng+Part+C+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid large-scale expansion of functional mesenchymal stem cells from unmanipulated bone marrow without animal serum.</a> Tissue Eng Part C Methods. 14, 185-196 (2008).</li>
<li>Reinisch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+large-scale+expanded+endothelial+colony-forming+cells+function+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Humanized large-scale expanded endothelial colony-forming cells function in vitro and in vivo.</a> Blood. , (2009).</li>
<li>Ricardo, R., Phelan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counting+and+Determining+the+Viability+of+Cultured+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Counting and Determining the Viability of Cultured Cells.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
</ol>

Bu roman izolasyon ve genişleme yöntemi, daha verimli ve daha az zaman alıcı ve herhangi bir hücre ayırma herhangi bir yoğunluk gradiyenti (gerekli) kaçınarak, geleneksel yöntemlere göre daha daha az pahalı bir basit ve verimli bir süreç. Büyükbaş antijen ve varsayılan sonraki xenoimmunization pHPL temas kullanarak dışındadır. Kültür dönemde küçük pıhtıları pHPL neden oluşturabilir. Tecrübelerimize dayanarak bu pıhtıları koloni oluşumu ve hücre çoğalması veya fonksiyon etkisi yoktur.

<table><tbody><tr><td>Endotel Bazal Medium-2</td><td>Lonza Inc.</td><td></td><td>500ml</td></tr><tr><td>EGM-2 SingleQuots</td><td>Lonza Inc.</td><td></td><td>EGF, hFGF-B, VEGF, IGF-1, Hidrokortizon, askorbik asit</td></tr><tr><td>koruyucu içermeyen Heparin</td><td>Biochrom AG</td><td></td><td>her EGM-2 için 10U/ml</td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>her EGM-2 için 2mM</td></tr><tr><td>Penisilin ve Streptomisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>her&lt;br/&gt;EGM-2 için 100U/mL Penisilin ve&lt;br/&gt;100&amp;#x03BC;g/mL Streptomisin</td></tr><tr><td>Trypsin/1mM EDTA </td><td>Invitrogen</td><td></td><td>T75 flask için 7ml&lt;br/&gt;CF-4 için 70ml</td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dört katmanlı hücre fabrikası (CF-4) </td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril Huni</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>T75cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt; kültür flaskı (havalandırmalı kapaklı)</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6 mL vacutainer tüpleri (koruyucu içermeyen sodyum heparin) </td><td>BD Biosciences</td><td></td><td>108 IU/6ml koruyucu içermeyen sodyum heparin ile&lt;br/&gt;önceden doldurulmuş</td></tr><tr><td>50ml Falcon tüpleri</td><td>Falcon BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>5ml Stripetts</td><td>Costar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>25ml Stripetts</td><td>Costar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sıkıştırıcı</td><td>Costar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>0,2 gözenek boyutlu steril filtre</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td>her EGM-2 için 2x 500ml</td></tr></tbody></table>

İzolasyon ve büyük Ölçekli genişleme yetişkin İnsan endotel koloni oluşturan progenitör hücreler

Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells

Bu kağıt heparinize gelen endotel progenitör hücrelerin koloni oluşturan (ECFCs) için yeni bir kurtarma stratejisi tanıttı ama aksi takdirde ortalama 12 gün içinde yetişkin insan periferik kan unmanipulated. &gt; 1x10 8 ECFCs büyük ölçekli bir genişleme sonra, daha ileri testler için elde edilebilir. Avantajlı pHPL ile sığır serum antijenleri ile insan hücrelerinin kişi hariç tutulabilir. Akım sitometri ve immünohistokimyasal olarak izole hücreler ECFC ve in vitro işlevselliği gibi vasküler yapılar oluşturmak için bir matrigel tayininde test edilebilir olarak karakterize edilebilir . Ayrıca bu hücrelerin subkutan bir fare modelinde in vivo olarak fonksiyonel, perfüze damarları oluşturmak için enjekte edilebilir. Uzun vadeli büyüme ve kriyoprezervasyon çoğalması sonra, fonksiyon ve genomik istikrar korunmuş gibi görünüyor. 3,4 Bu hayvansal protein izolasyonu ve genişleme yöntemi ECFCs bir büyük miktarda üretmek için kolay uygulanabilir.

Endotel progenitör hücrelerin koloni oluşturan (ECFCs) vasküler homeostazı ve onarım çalışması için bir gelecek vaat eden bir araçtır.<sup&gt; 1,2</sup&gt; Bu kağıt, izolasyon ve anti-sığır aşılama riski azalan toplanmış insan trombosit lizatı (pHPL) heparinli yetişkin insan periferik kan ECFC genişlemesi için bir roman hayvan-serum ücretsiz bir yöntem.

İzolasyon ve Büyük Ölçekli Genişleme Yetişkin İnsan Endotel Koloni Oluşturan Progenitör Hücreler

Bu makale, heparinize edilmiş ancak bunun dışında herhangi bir işlem uygulanmamış yetişkinlerden endotelyal koloni oluşturucu progenitor hücrelerin (ECFC'ler) geri kazanımı için özgün bir strateji sunmaktadır...

Toplam kanın, hayvan serumu içermeyen optimize edilmiş bir ortamda kültüre edilmesiyle. 75 santimetrekarelik bir flask içerisinde, E CFC'ler flask yüzeyine yapışarak kırmızı ve beyaz kan hücrelerinin çoğunun uzaklaştırılmasını sağlar. Birinci günde flaskı yıkayın ve beşinci günde toplam ortamı değiştirerek geri kalan hücreleri ortamdan uzaklaştırın.Koloni taramasına gün aşırı veya uygunsa haftada üç kez devam edin. İlk kolonileri yaklaşık 12. gün civarında gözlemlemelisiniz. Merhaba, ben Medical University grots Kök Hücre Araştırma Birimi'ndeki laboratuvardan Nicole Hoffman.Bugün size, yetişkin insan periferik kanından endotelyal koloni oluşturucu öncül hücrelerin veya ECFC'lerin izolasyonu ve genişletilmesi için basitleştirilmiş bir süreci göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu süreci, ECFC'lerin in vitro ve in vivo fonksiyonlarını ve biyolojisini incelemek için kullanıyoruz. Haydi başlayalım.Bu bölüm, kültürde kullanılacak olan endotelyal büyüme ortamı ikisinin hazırlanması ve filtre sterilizasyonu ile başlar. EFC'ler için 20 mililitre ortam 37 derecelik bir su banyosunda ön ısıtmaya tabi tutulur. Erişkin insan periferik kanından 5 mililitre, kubital veinden koruyucu madde içermeyen

isolation-large-scale-expansion-adult-human-endothelial-colony

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol deneysel nakli amaçlı otolog yaratmanız serum hayvan kullanmadan mezenkimal stromal hücreleri ve endotel koloni oluşturan hücrelerin izolasyonu ve sonraki genişleme açıklamaktadır.

İnsan Göbek kordonu İzolasyon ve Hayvan Serum Genişleme Mezenkimal stromal hücreler (MKH) ve endotel Koloni Oluşturan Progenitör Hücreler (ECFCs) Türetilmiş

Endotel koloni oluşturan hücreleri (ECFCs) intrensek göstermeyen sağlam klonal bir proliferatif potansiyeli olan endotel hücreleri...

Endotel Colony Forming Hücrelerinin Fenotipik ve Fonksiyonel Karakterizasyonu İnsan Göbek Kordonu Kanı türetilen

Bu video, yetişkin insan fibroblastlarından türetilen indüklenmiş nöral progenitör hücreleri (iNPC'ler) izole etmek için bir tekniği göstermektedir. iNPC kolonilerinin izole edilmesi ve iNPC popülasyonunun sürekli çoğalmasını ve genişlemesini kolaylaştıran uygun kültür ortamının varlığında laminin kaplı çok kuyulu plaka kuyularında kültürlenmesi ile ilgili adımları ana hatlarıyla belirtir.

Yetişkin İnsan Fibroblastlarından Türetilen İndüklenmiş Nöral Progenitör Hücre Kolonilerinin İzole Edilmesi

Genetik olarak tasarlanmış fare modellerinden primer tümöre özgü endotel hücrelerini izole etmek ve kültürlemek için güvenilir bir yöntem bildiriyoruz.

Tümör spesifik Endotel Hücreleri İzolasyon ve Kültürü Genişleme

Bu protokol, küçük bir yetişkin periferik kan hacminden kan büyümesi endotel hücrelerinin (BOEC'ler) güvenilir bir şekilde oluşturulmasına ve karakterizasyonuna izin verir. BOEC'ler, vasküler bozuklukları olan hastalardan alınan endotel hücreleri için bir vekil olarak ve indüklenmiş pluripotent kök hücrelerin üretimi için bir substrat olarak kullanılabilir.

İnsan çevresel kanından üretilmesi ve kültür Blood üremesi Endotel Hücreleri

Endotelyal Ata Hücreler (EPC'ler) önemlisi, iskemik dokuların neovaskülarizasyonu katılmaktadırlar. Bu yöntem, periferal kandan alınan insan EPC izolasyonunu, hem de kalp cerrahi hastalarında serum örneklerinde karşı göç potansiyelinin belirlenmesi açıklanmaktadır.

Kalp Damar Cerrahisi sonra serum Örnekleri etkilenerek Sağlıklı Gönüllüler ve Bunların Göçmen Potansiyelden Endotel Ata Hücreleri İzolasyon

Bu iletişim kuralının amacı göbek kordon kanı endotelyal progenitor hücrelerini izole etmektir. Bazı uygulamalar bu hücreler bir biyomarker hastaların kardiyovasküler riski ile iskemik hastalıklar, tedavi tanımlamak için kullanmayı içerir ve oluşturma doku Mühendisliği vasküler ve kalp kapak oluşturur.

Yalıtım endotelyal Progenitor Hücre insan göbek kordon kanı

Tümör endotel hücrelerinin tümör microenvironment önemli belirleyicileri ve hastalığın seyrini vardır. Burada, saf ve uygun endotel hücre insan kolorektal karsinom ve uyuşturucu testi ve Patogenez araştırmalarda kullanılmak üzere normal kolon yalıtımı için bir protokol açıklanmıştır.

Yalıtım Normal kolon ve kolorektal Karsinom - gelişmiş bir iletişim kuralı üzerinden insan endotel hücrelerinin

Burada, bir besleyici ve Xeno-ücretsiz durumda insan pluripotent kök hücrelerinden hemogenik endotelyum tam olarak oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem hastalık modelleme ve terapötik bileşikler için tarama geniş uygulamalara sahip olacaktır.

Bir besleyici içinde ınsan pluripotent kök hücrelerinden hemogenik endotelyum farklılaşma-ve Xeno-ücretsiz tanımlı koşul

Üç boyutlu eş-kültür spheroid anjiyogenez tsay sistemi fizyolojik anjiyogenezi taklit etmek için tasarlanmıştır. Co-kültür sheroidler iki insan vasküler hücre öncüleri, ECFCs ve MSCs oluşur ve kollajen jel gömülü. Yeni sistem anjiyojenik modülatörlerin değerlendirilmesinde etkilidir ve in vivo çalışmaya daha uygun bilgiler sağlar.

Endotel Kolonisi Oluşturan Hücreler ve Mezenkimal Kök Hücreler tarafından Oluşturulan Eş Kültür Sfaoidler Kullanılarak Üç Boyutlu Anjiyogenez Tsay Sistemi

Burada hemojenik endotel hücrelerinin insan pluripotent kök hücrelerinden yaklaşık 1 hafta içinde yönlendirilmiş farklılaşması için basit bir protokol sunulmaktadır.

Hemojenik Endotel Hücrelerinin İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden Yönlendirilmiş Farklılaşması

Keşfedin, yetişkin insan periferik kanından endotelyal koloni oluşturan progenitör hücrelerin (ECFC) hayvan serumu içermeyen ortamda izolasyonu ve büyük ölçekli genişlemesi için güvenilir bir yöntem.

İzolasyon ve Büyük Ölçekli Genişleme Yetişkin İnsan Endotel Koloni Oluşturan Progenitör Hücreler

Daha fazla video keşfet