Kurul, Yükleme ve Analitik ultrasantrifüjdeki Örnek Hücre Hizalama

Merhaba, ben Andrea Balbo. Ulusal Sağlık Enstitüleri'nde Peter Shucks grubunda çalışıyorum. Bu videoda, analitik bir ultrasantrifüj numune hücresinin montajı, yüklenmesi ve rotor hizalaması için prosedürlerimizi size göstereceğiz.

Başlayalım. Toplanan. Analitik bir ultrasantrifüj numune hücresinin bileşenleri şunlardır: Hücre muhafazasının içinde istiflenmiş 12 milimetrelik çift sektörlü bir kömür alanı, iki pencere düzeneği arasına sıkıştırılacak epon merkez parçasıdır. Her pencere tertibatı, bir pencere contası, bir pencere kaplaması ve pencere tutucusunun içinde tutulan bir pencereden oluşur.

Bu parçalar daha sonra, kama yuvaları muhafaza namlusunun içinde bulunan anahtarla, bir muhafaza contasıyla hizalanarak hücre muhafazasının içinde aşağı kaydırılacak ve daha sonra bir vida halkası, numune hücresini 120 ila 140 inç pound arasında bir tork basıncıyla kapatacaktır. Numunenizi referans olarak yükledikten sonra, deneyler sırasında artefaktları, sızıntıları ve kırılmaları taramayı önlemek için hücrenin yükleme deliklerini iki muhafaza tapası contası ve bir muhafaza tapası kapatın, tüm bileşenlerin temiz, kuru, tozsuz, tozsuz ve mümkün olan en iyi durumda olması, sık sık incelemesi ve gerektiğinde değiştirmesi hayati önem taşır. Ayrıca aşağıdakilere de ihtiyacınız olacak: analitik bir ultrasantrifüj, titanyum dört delikli rotor, bir laboratuvar terazisi, okunabilir kadranlı bir tork anahtarı ve bir tork standı, Bir denge ve karşı ağırlık ağırlıkları, Bir düz uçlu tornavida, bir çift forseps, uzun konik pipet ucu ile donatılmış 200 mikrolitrelik bir pipetleyici, hizalama araçları ve spin coat yağlayıcı.

İki pencere düzeneğini bir araya getirerek numune hücresi yapımına başlıyoruz. İlk olarak, pencere tutucusunun altına bir pencere contası yerleştirin. Daha sonra, pencere astarını veya bazen pencere minderi olarak adlandırılır, pencere tutucusunun içine yerleştirin, böylece astarın açıklığı tutucunun kama yuvasının karşısına hafif bir açıyla geçer.

Ardından, penceredeki çizik işaretini pencere tutucusunun kama yuvası ile hizalayarak pencereyi tutucuya yerleştirin. Pencerenin her iki yanındaki en kenarlardan hafifçe bastırın. Numune hücresinin düzgün bir şekilde sızdırmaz hale getirilmesini ve doğru bir şekilde twerking yapılmasını sağlamak için, muhafaza contasını vida halkasına hafifçe kaplıyoruz.

Spin coat kayganlaştırıcı ile, başparmağınız ve işaret parmağınız arasına çok az miktarda spin coat yayın. Vida halkası dişlerini ince, görünmez bir sıkma tabakası filmiyle kaplayın. Aynı şekilde muhafaza contasını da kaplayın.

Görünür kayganlaştırıcıyı silin. Örnek hücre montajına başlamak için. Kama yuvasını muhafaza anahtarıyla hizalayarak, pencere yukarı bakacak şekilde bir pencere aksamını hücre muhafazasına kaydırın.

Merkez parça anahtar yuvasını muhafaza anahtarıyla hizalayın ve muhafazanın içindeki pencere aksamının üzerine yavaşça düşmesine izin verin. Merkez parçayı hücre muhafazasına itmek için asla herhangi bir alet kullanmayın. Bu, merkez parçasında kalıcı hasara neden olabilir ve bu da sızıntı depolama deneylerine neden olabilir.

İkinci pencere düzeneğini, pencere merkeze doğru ve sizden uzağa bakacak şekilde çevirin. Kama yuvasını muhafaza anahtarıyla hizalayın ve orta parçanın üzerinde aşağı kaydırın. Muhafaza contasını üstüne yerleştirin.

Ardından, kelimenin görünür olması için bir vida halkası. Parmaklarınızı kullanarak. Ardından bir hizalama aleti, vida halkasını elle sıkın.

Bazen merkez parçası muhafaza namlusuna kolayca kaymaz. Önce hizalayabilir, ardından ikinci pencere aksamını üzerine yerleştirebilirsiniz. Pencere aksamına aşağı doğru hafif bir baskı uygulayarak.

Her ikisini de aynı anda hücre muhafazasına kaydırabilirsiniz. Bu şekilde, doğrudan merkez parçasına basmaktan kaçınırız. Şimdi hücrede toz, tüy ve parmak izleri aramak için iyi bir zaman.

Ayrıca, orta parça ile pencereler arasında hala hava olduğunu gösteren Newton'un halkalarını da fark edeceksiniz. Bunlar, vida halkası yukarı bakacak ve kelime dışarı görünecek şekilde torklandıktan sonra kaybolacaktır. Örnek hücreyi hücrenin içine tamamen yerleştirin.

Tork standının tork koltesi. Tork sehpası koluna sabit basınç uygulayarak hücreyi yerinde tutun. Tek bir sürekli hareketle, vida halkasını 120 ila 140 inç pound arasında torklayın.

Tork standı kolunu serbest bırakın ve numune hücresini dikkatlice çıkarın. 12 milimetrelik merkez parçasının her bir sektörüne rutin olarak 400 mikrolitrelik bir hacim yüklüyoruz. 200 mikrolitrelik bir pipet kullanarak, numune hücresini, yükleme delikleri üstte ve vida halkası üzerindeki kelime görünür olacak şekilde konumlandırın.

Pipet ucunu yükleme deliklerinden sol orta parça sektörüne yarıya kadar kaydırın ve 200 mikrolitre referans solüsyonu yavaşça dağıtın. Aynı pipet ucunu ve aynı tekniği dikkatli ve yavaş bir şekilde kullanarak toplam 400 mikrolitreye kadar bir kez tekrarlayın. Doğru merkez parçasını 400 mikrolitre numune çözeltisi ile doldurun.

Referans ve numune çözeltilerinin hacimlerini mümkün olduğunca yakın bir şekilde eşleştirmek zorunludur. Pipet ucunu pipete sıkıca oturtun, solüsyonları yavaşça yükleyin ve dağıtın, baloncuk yüklemekten kaçının ve her iki solüsyon için de aynı pipet ucunu kullanın. Hepsi, hücreyi mühürlemek için hacimleri eşit tutmaya yardımcı olur.

Her bir yükleme deliğine iki kırmızı muhafaza tapa contasını sıkıca yerleştirin ve bunların orta parça ile alüminyum muhafaza arasına dikkatlice yerleştirildiğinden emin olun. Her yükleme deliğini bir muhafaza tapasıyla kapatın ve küçük bir düz uçlu tornavidayla elle sıkın. Rotoru yüklemeden önce, karşı dengenin ve karşı dengenin karşısına çıkacak hücrenin ağırlık olarak birbirinden 0.5 gram uzakta olduğundan emin olun.

Sıfırda bir bakiye ile başlayın. İlk olarak, karşı ağırlığın karşısında olacak bir numune hücresini tartın. Numune hücresi ağırlığını çıkarmak için dengeyi yırtın.

Ardından karşı ağırlığı tartın. Burada karşı ağırlığın numune hücresinden 4.193 gram daha hafif olduğunu buluyoruz. Dört gramlık bir denge ağırlığı seçin ve üstten çıkıntı yapmadığından emin olarak karşı ağırlığın bağlantı deliğine vidalayın.

Nihai ağırlığın 0,5 gram içinde olduğundan emin olmak için karşı dengeyi yeniden kontrol edin. Dört delikli bir rotor kullanarak, beyaz ok görünecek ve merkezkaç kuvveti yönünü gösterecek şekilde karşı dengeyi dördüncü konuma getirin. Bir hizalama aracı kullanarak, rotorun içinde tamamen olduğundan emin olun.

Terazi s'yi konumlandırınample: hücre, muhafaza tapaları rotorun merkezine bakacak ve vida halkası üzerindeki kelime dışarı bakacak şekilde yerleştirin. Yine, bir hizalama aracı kullanarak, rotorun içinde tamamen olduğundan emin olun. Rotorun altından bakıyor.

İç kısmı hizalayın. Çizik, bir hizalama aracı kullanarak rotorun merkezine en yakın işareti karşı denge üzerindeki çizici işaretiyle işaretleyin. Aynı şekilde, numune hücresini ikinci konumda hizalayın.

Tüm hücreler hizalandıktan sonra, rotor santrifüj odasına yerleştirilmeye hazırdır.