Name: Zebra balığı Maksiller Bärbel Çalışma Yöntemleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-23T16:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 30 s
Description: Öğrenin zebrafish maksiller bärbel rejenerasyonunu incelemek için cerrahi amputasyon ve histolojik analiz yöntemlerini. Bu teknik gelişim biyolojisi ve rejeneratif tıp araştırmalarında kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu yöntemler, JT, laboratuar Destek DePaul Üniversitesi Araştırma Konseyi ve JT (DE016678) NIH / NIDCR R01 hibe tarafından sağlanan bir araştırma izni sırasında EEL tarafından geliştirilmiştir. Biz minnetle Caroline Hunter, CMRC zebrafish çekirdek tesiste hayvan bakım teknisyeni lisans laboratuvar asistanı ve Paulina Pawluczuk çabaları kabul etmiş sayılırsınız.

Zebra balığı yetiştiriciliği Zebra balığı, 1 standart yöntemler göre ev sahipliği ve yetiştirilir . Geçmiş geç larva döneminde, bir zebrafish gelişimsel aşaması, kuyruk yüzgeci (posteriormost hypural plaka) tabanı standart uzunluğu üst dudak anteriormost noktası (SL) veya milimetre olarak düz bir çizgi mesafe ölçülebilir 2. Yaklaşık bir ay sonrası fertilizasyon (10-12 mm SL), burun ve maksiller barbels sırasıyla, koku çukurların yanında ve arka köşelerinde radyografları epitelyal tomurcuklar gibi şeffaf görünür. Zebra balığı olgunlaştıkça, barbels dar, bıyık gibi uzantıları içine uzanır. Maksiller Bärbel büyük (2-3 mm) ve işlemek için kolay olduğundan, protokolü sadece bu özel apendiks için geçerlidir; benzer teknikler, ancak, küçük burun Bärbel adapte olabilir. Bärbel Kırpma <ol><li> Sistem suyun pH 7.0 tamponlu (etil 3 aminobenzoate methanesulfonate) batırılarak istenilen aşamada (örneğin, 1.5-2.5 cm SL, ~ 3-6 ay sonrası fertilizasyon)% 0.015 MS-222 yetişkin Zebra balığı uyuşturan. Durdurana kadar yüzmeye hareketleri gözlemleyin ve solungaç havalandırma yavaş ve düzenli bir hale gelir. Balık büyüklüğüne bağlı olarak, tam bir anestezi yaklaşık 2-5 dakika sürer. </li><li> Bir akvaryum balık ağı kullanarak, bir defada 1-3 balık transferi bir Petri kabındaki ıslak kağıt havlu katlanmış bir parçası. Künt bir spatula kullanarak, şark onlar kadar birbirlerine ve sol lateral yan paralel şekilde balık. Katlama, işlem sırasında cilt ve solungaçları nemli tutmak için operculum&#39;un kadar tüm vücudu kaplayan balık, (solungaç kapakları) kaudal parçası üzerinde ıslak bir kağıt havlu parçasıdır. </li><li> Kafası bölgeyi aydınlatmak için düşük açılı ışık kullanarak, stereomicroscope altında Petri plaka. Maksillanın arka ventral köşesi (Şekil 1) çıkıntı sol maksiller Bärbel kaide üzerinde odaklanın. <img src="/files/ftp_upload/1558/1558fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. </li><li> Sıkıca Bärbel maksillanın kenarına hafifçe distal şaft kavramak. Bärbel mili Elevate ve forseps sadece proksimal ince uçlu bir yaylı makas çeneleri eklemek. Makas istikrar için forseps dokundu olabilir. Kesme kenarı maksilla kenarına yaklaşana kadar Bärbel mil boyunca makas çeneleri kaydırın. Bärbel mili kesmek için makas kapatın. Kesilmiş karakeçi, hala forseps kavradı sabitleme ya da daha fazla gözlem için çıkarılabilir. </li><li> Hemen bir damla metilen mavisi yüzeysel mantar enfeksiyonu kontrol etmek için içeren temiz su (~ 500 ml) küçük bir tank için balık transferi. Balık bir gecede kurtarmak için izin ver. Ertesi sabah, balık yetiştirme sistemi dönün. Bärbel rejenerasyon 2 hafta sonra gözlenir. </li></ol> Uyumlu Bärbel Çiftlerin Agar gömülmesi <ol><li> Uygun ötenazi tekniği ile balık toplayın ve ajitasyon ile 4 ° C gecede tamponlu salin (PBS)% 4, 50 ml tüp paraformaldehid-fosfat düzeltmek. Fiksatif hacmi en az on kez doku hacmi olmalıdır. Fiksasyon sonra, onaylanmış bir kapta paraformaldehid atık imha ve doku PBS çeşitli değişiklikler iyice durulayın. </li><li> % 2 250 ml cam şişesi 150 ml hazırlayın agaroz (T m ~ 37 ° C) distile su. Tamamen eriyene kadar bir mikrodalga veya sıcak plaka ile Isı, periyodik olarak ajitasyon. 50-60 ° C su banyosu içinde olan erimiş çözüm dengelenmesi. </li><li> Standart bir jel elektroforezi teçhizat sıkıca tampon odasının yanında karşı küçük bir contalı jel kalıp (~ 100 ml jel hacmi 10 x 10 cm) koyarak birleştirin. 2-4 küçük dişli örnek tarak (4 x 1.5 mm). </li><li> Bir yüzey üzerinde, çok sığ kuyular oluşturan, tarak tabanı kapsayacak sadece kalıp içine erimiş agaroz dökün. Hemen geri kalan agaroz sıcak su banyosu içine koymak, bu doku (9-12 Adımlar) gömmek için daha sonra kullanılabilir olacak. Pipet agaroz aynı sıcaklığı tutmak için uzun bir cam Pasteur pipeti balonun içine koyun. </li><li> 20-30 dakika sertleşmesi için jel izin verin. Tarak çıkarın, sonra tampon odasından sertleştirilmiş jel içeren jel kalıp çıkarmak. Jel dışarı slayt değildir laboratuvar bant ile jel kalıbın açık tarafı sıkıca bantlayın. Bu bant ek agaroz (Adım 13) daha sonra eklenebilir böylece agaroz yüzey üzerinde birkaç milimetre uzatmak gerekir. </li><li> Bir stereomikroskopta aşamasında jel kalıp yerleştirin. Boş bir iyi büyütmenize ve kenarları odak noktası haline getirmek. </li><li> Iyi komşu agaroz yüzeyine bir damla su veya sabit Bärbel örnekleri (örneğin, yeniden ve kontrol) içeren tampon pipetle. USIng nemli örneklerdir kuyunun içine sürükleyin ve onları aşağıya doğru itin, böcek iğne eğildi. Orient Bärbel milleri birbirine paralel ve iyi zıt uzun kenarlarına dizilen. Yüzey gerilimi, doku pozisyonda tutun yardımcı olacaktır. </li><li> Gömmek için hazır olduğunuzda, ince bir pipet veya aşırı sıvı kaldırmak için iyi bir laboratuvar doku köşe kullanın. Doku kurumasına izin vermeyin hızla çalışın. </li><li> Isıtılmış cam Pasteur pipeti kullanarak, yavaşça yerine mühür Bärbel doku örneklerinde ve çevresinde taze erimiş agaroz pipetle. Doldurmayın. Agaroz sertleşir önce, böcek iğneli son dakika ayarlamaları yapmak. </li><li> Iyi yanında numaralı bir kağıt numune etiket yerleştirin ve agaroz küçük bir damla ile sabitleyin. </li><li> Numunelerin her bir kuyu için 6 - 10 arasındaki adımları tekrarlayın. </li><li> Görüntü kalibrasyonu için İsterseniz, baskılı mikrometre ölçeğinde (örneğin, bir parça kağıt yerleştirin <a href="http://incompetech.com/graphpaper/multiwidth/">http://incompetech.com/graphpaper/multiwidth/</a> de boş bir dibine). Kuyunun dibine kağıt düzleştirin ve sıcak agaroz ile örtün. </li><li> Tüm örneklerin gömülü sonra, agaroz jel yüzey sertleştirilmiş damla, düzensiz olacaktır. Düz bir yüzey üzerinde jel yerleştirin ve üst yüzeyi tekdüze ek erimiş agaroz kadar yavaşça dökün. Düzgün bir yüzey elde etmek için gerekli agaroz en az miktarda kullanın; çok agaroz iletilen ışık fotoğrafçılığı belirsiz. Bu üst tabaka sertleşmesine izin verin. </li><li> Jel şimdi her Bärbel çifti için brüt morfolojisi kaydetmek için bir stereomikroskopta aşamasında fotoğrafı olabilir. Resim kalibrasyonu gömülü mikrometre ölçeğinde fotoğrafını elde edilir. </li><li> Tüm jel, ıslak kağıt havlu sarılır ve birkaç hafta boyunca 4 ° plastik bir torba içinde mühürlü saklanabilir. </li><li> Ayrıntılı analiz için jel agar blokları barbels eşlemeli çifti içeren bir neşter veya jiletle kesip olabilir ve parafin histoloji işlenen veya standart yöntemler ile 3,4 cryosectioning. Alternatif olarak, bireysel barbels suda durulanır ince iğneler, agaroz disseke ve diğer downstream uygulamalar (örneğin, tüm montaj immünohistokimya veya konfokal mikroskopi) işlenmiş olabilir. </li></ol>

<ol><li>Westerfield, M. Chapter 1 General Methods for Zebrafish Care. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book.+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio)</a>. , 4th ed., Univ. of Oregon Press. Eugene. (2000).</li>
<li>Howe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+length%3A+Not+quite+so+standard%5BTitle%5D)+AND+%22Fisheries+Research+%28Amsterdam%29%22%5BJournal%5D)">Standard length: Not quite so standard.</a> Fisheries Research (Amsterdam). 56, 1-7 (2002).</li>
<li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paraffin+Embedding+Tissue+Samples+for+Sectioning%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22%5BJournal%5D)">Paraffin Embedding Tissue Samples for Sectioning.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 6, (2008).</li>
<li>Westerfield, M. Ch 8.3 Agar Embedding for Cryostat Sectioning of Embryos or Larvae. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWesterfield%2C+M+%22The+zebrafish+book.+A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+%28Danio+rerio%29%22">The zebrafish book. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio)</a>. , 4th ed., Univ. of Oregon Press. Eugene. (2000).</li>
<li>Hansen, A., Reutter, K., Zeiske, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taste+bud+development+in+the+zebrafish%2C+Danio+rerio%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Taste bud development in the zebrafish, Danio rerio.</a> Dev Dyn. 223, 483-496 (2002).</li>
</ol>

Zebrafish maksiller Bärbel zebrafish çeşitli hücre tiplerinin büyüme, bakım ve yenilenme eğitim için atıl doku sistemi. Bärbel apendiks hiçbir insan analog olmasına rağmen, içerdiği hücre tipleri çok mümkün optik açık ve anatomik basit bir silindirik yapıdaki cilt bezleri, melanosit, dolaşım damarları ve sinirleri çalışmak için korunmuş bulunmaktadır. Iyi çalışılmış bir kuyruk yüzgeci, Bärbel doku amputasyon tarafından yeniden başlatılabilir. Maksilla sınır anatomik bir dönüm noktası olarak kullanarak, amputasyon düzlemde Bärbel büyütme ölçümü kolaylaştırmak, hassas şekilde yerleştirilmiş olabilir. Deneyimli bir operatör için, her ameliyat, sadece birkaç saniye sürer. Kurtarma hızlı ve balık davranışları üzerinde herhangi bir kısa ya da uzun vadeli etkileri şu ana kadar tespit ettik. Zebra balığı, bir maksiller Bärbel yüzerek cerrahi sonrası 6 aya kadar, yemek ve cerrahi olmayan kontroller olarak etkin bir şekilde doğurmak ve doku toplama süresi ile karşılaştırılabilir bir yaşam süresine sahiptir. Bu ameliyatı fizyolojik etkileri, 1) Bärbel yürütülen ekstraoral tat tomurcukları da balık epitel dudaklar, yanaklar ve yüksekliği 5 de dahil olmak üzere diğer birçok parça bulunur, çünkü çok az olacağı tahmin, ve 2) ayırt tat ​​tomurcuklarının görünür 72 saat içinde yenileyici Bärbel (Leclair ve ark. yayınlanmamış veriler). maksiller Bärbel yara iyileşmesi, revaskülarizasyon ve reinnervation bir yetişkin omurgalı kapsamında eğitim için minimal invaziv bir sistem yapar. Rejenerasyon cerrahi indüksiyonundan sonra, sabit doku morfometrik ölçüm ve / veya mikroskopik analiz için barbels aralıklarla toplanmalıdır. Elverişli, maksiller Bärbel cryosectioning, tüm montaj immünhistokimya ve in situ, parafin histoloji dahil olmak üzere birçok standart protokoller, uygulanmasını kolaylaştırmak için, yaklaşık uzunluğu (2-3 mm) ve bir zebrafish embriyonun çapı (100-200 mm ). melezleşme. Birlikte ele alındığında, bu özellikleri maksiller Bärbel in vivo model, doku onarımı ve yenilenmesi eğitim için son derece gerçekçi olun .

Mikroskop Ekipman Aktarılır ve olay fiber optik aydınlatma ile stereo diseksiyon mikroskobu Bärbel kırpma ve agar gömme için gerekli. Bärbel Kırpma <ul><li> Balık sistem su </li><li> 2 zebrafish geçiş tankları </li><li> MS-222 (etil 3-aminobenzoate methanesulfonate; Sigma Chemical # E10521-10G) </li><li> 120 mm steril Petri plaka </li><li> ıslak kağıt havlu </li><li> künt metal spatula </li><li> Dumont # 55 Bio Inox Forseps (Güzel Bilim Araçları # 11.255-20) </li><li> Mini-Vannas yaylı makas (Güzel Bilim Araçları # 15.000-00) </li><li> metilen mavisi antifungal ajan (Drs. Foster &amp; Smith # CD-905.781) </li><li> küçük akvaryum fishnet </li></ul> Doku toplama ve agar gömme <ul><li> 1x 4% paraformaldehid fosfat tamponlu salin (PF-PBS), 50 ml konik tüpler içine aliquoted ve -20 ° C arasında dondurulup saklanan kadar kullanımda </li><li> 1x fosfat tamponlu salin (pH 7,27-6) </li><li> 250 ml cam şişesi </li><li> % 2 agaroz distile su içinde </li><li> standart küçük agaroz jel elektroforezi teçhizat (jel boyut = ~ 10 cm kare) </li><li> küçük dişli elektroforez örnek tarak (tarak boyutu 4 x 1,5 mm) </li><li> sıcak su banyosunda (50-60 ° C) </li><li> laboratuvar bant </li><li> siyah böcek iğne, boyut 000 (Güzel Bilim Araçları # 26.000-25) emaye </li><li> 1-2 pin sahipleri (İnce Bilim araçları # 26.016-12) </li><li> 9-inç cam Pasteur pipeti </li><li> pipet ampul veya pompa </li><li> laboratuvar doku </li><li> küçük kağıt etiketler </li><li> (Isteğe bağlı) basılı kalibrasyon ölçekli </li><li> ıslak kağıt havlu </li><li> zip kapanması plastik torba </li><li> neşter / jiletle (agar blokları kesip) </li></ul>

zebra balığı maksiller bärbel Çalışma yöntemleri

Methods for the Study of the Zebrafish Maxillary Barbel

Barbels cilt duyusal uzantıları, balıklar, sürüngenler ve amfibiler bulundu. Zebra balığı Danio rerio barbels-kısa bir burun çifti ve uzun maksiller çiftinin iki çift geliştirir. Bärbel doku, deri hücreleri, salgı bezleri, tat tomurcukları, melanositler, dolaşım damarları ve duyusal sinirler dahil olmak üzere ektodermal, mezodermal ve nöral krest kökenli hücreler içerir. Çoğu yetişkin doku aksine, maksiller Bärbel, bize yaşam döngüsü boyunca bu doku tiplerinin geliştirme ve bakım görselleştirmek için izin, optik açıktır. Bu video maksiller Bärbel (yaklaşık bir ay sonrası döllenme başlamadan) erken gelişim gösterir ve yenilenme yetişkin apendiks (&gt; 3 ay sonrası fertilizasyon) ikna etmek için bir cerrahi protokol göstermektedir. Kısaca, bir anestezi balık sol maksiller karakeçi maksilla kaudal kenarı hemen distalinde steril forseps ile yükselir. Ince, steril bir yaylı makas amputasyon düzlemde anatomik için bir dönüm noktası oluşturan bu seviyede Bärbel mili kesmek için forseps karşı konumlandırılmış. Rejeneratif büyüme ve kontralateral Bärbel karşılaştırıldığında bu uçağa göre ölçülebilir. Bärbel doku yaralanma 2 hafta içinde maksimum regrowth ulaşan hızla yeniler. Rejenere Bärbel analiz teknikleri, standart bir DNA elektroforez jel kuyulardan barbels eşli çiftler (yeniden ve kontrol) diseksiyon ve gömme içerir. Gömülü örneklerin uygun bir brüt morfolojisi ve morfometri stereomikroskop altında fotoğraflandı ve parafin histoloji gibi downstream uygulamaları öncesinde hafta boyunca saklanan cryosectioning ve / veya tüm montaj immünohistokimya olabilir. Bu yöntemler, in vivo doku sistemi, birden fazla hücre tiplerinin yenileyici kapasitesi zebrafish genetik kapsamında eğitim için bir roman olarak maksiller karakeçi kurmak .

Zebrafish maksiller Bärbel ektodermal, mezodermal ve nöral krest türevleri içeren bir kabukla duyu organ. Önemlisi, yetişkin Bärbel proksimal amputasyon sonra yeniden oluşturabilirsiniz. Bu video maksiller Bärbel gelişimi tanıtır ve Bärbel örneklerin toplanması, gömme ve alt görüntüleme ile takip rejenerasyon ikna etmek için bir cerrahi protokolü göstermektedir.

Zebra balığı Maksiller Bärbel Çalışma Yöntemleri

Bıyıklar; balıklarda, sürüngenlerde ve amfibilerde bulunan deri duyusal uzantılarıdır. Zebra balığı, Danio rerio, iki çift bıyık geliştirir; kısa bir nazal...

Mermerler (marbles), amfibilerde, sürüngenlerde ve balıklarda bulunan heterojen bir duyusal yapı koleksiyonudur. Zebra balığı, biri daha küçük olan nazal çift ve diğeri daha büyük olan maksiller çift olmak üzere iki çift mermer geliştirir. Bu şeffaf uzantılar; çeşitli zebra balığı hücre tiplerinin gelişimini, korunmasını ve rejenerasyonunu incelemek için kullanılabilir.Bu video, üst çene mermer gelişimini tanıtmakta ve rejenerasyonu tetiklemek için bir cerrahi protokolü göstermektedir. Barbullar birkaç gün veya hafta sonra toplanır, ardından rejeneratlar ve kontrollerin diseksiyonu ve gömülmesi gerçekleştirilir. Merhaba, ben DePaul Üniversitesi'ndeki LeClair Laboratuvarı'ndan Elizabeth LeClair ve ben de Northwestern Üniversitesi Tıp Fakültesi ve Çocuk Memorial Araştırma Merkezi'nden Ya Chesky.Bugün size zebrafish maksiller mermerini incelemek için kullanılan bazı prosedürleri göstereceğiz. Bu prosedürleri, zebrafish mermerinin büyüme ve gelişimini incelemek için kullanıyoruz. Hadi başlayalım.Döllenmeden sonra yaklaşık 30 ila 40 gün içinde, maksiller barbell maksillanın posterior ventral köşesinin yakınında şeffaf bir epitelyal tomurcuk olarak belirir. Zebrafish olgunlaştıkça, barbell birkaç milimetre uzunluğunda, dar bir bıyık ayağı uzantısına dönüşür. Olgun barbell; pigment hücreleri, bez hücreleri, tat tomurcukları, dolaşım damarları ve miyelinli sinirler dahil olmak üzere birkaç önemli hücre tipi içerir.En iyisi de, mermer balığı gelişimin tüm aşamalarında şeffaftır. Diğer zebrafish organları gibi, maksiller bıyık da proksimal amputasyon sonrası rejenerasyon gösterebilir. Bu bölümde, bıyığın maksilla tabanından kesilmesi işlemini gösteriyoruz.Bu işlem tek taraflı bir ektomi olarak da adlandırılabilir. Ameliyat günü, biri anestezi biri de iyileşme için olmak üzere iki küçük balık suyu tankı hazırlayın. Anestezi tankı, pH 7.0'a tamponlanmış %0.015 trica içerir.Balık suyunda, geri kazanım tankı; balıkları, suyu ve fungal enfeksiyonları kontrol altına almak için bir damla metilen mavisi içerir. Bir ila üç adet yetişkin zebra balığını, yüzme hareketleri durana ve solungaç ventilasyonu yavaş ve düzenli hale gelene kadar trica tankına daldırarak anestezi uygulayın. Balık boyutuna bağlı olarak, tam anestezi iki ila beş dakika sürebilir.Balıkları bir Petri kabı üzerindeki ıslatılmış kağıt havlu parçasına aktarmak için bir akvaryum balık ağı kullanın. Küt uçlu bir spatula yardımıyla, balıkları birbirine paralel olacak şekilde hizalayın. Sol lateral taraf yukarı bakacak şekilde, balıkları nemli tutmak için kağıt havlunun bir kısmını üzerlerine katlayın.Ardından, başı aydınlatmak için düşük açılı gelen ışığı kullanarak Petri plağını stereo mikroskop altında inceleyin. Hassas penset kullanarak sol maksiller mermerin tabanına odaklanın. Mermer şaftını, maksilla sınırının hafifçe distalinden sıkıca kavrayın.Mermeri kaldırın ve stabilite sağlamak için pensetin hemen proksimaline ince uçlu bir yaylı makas yerleştirin. Makas pensete veya alternatif olarak petri kabının tabanına değebilir. Makasın ağızlarını, kesici kenar maksilla kenarına yaklaşana kadar mermerin şaftı boyunca kaydırın.Mermer şaftı kesin ve amputasyonla ayrılan mermer parçasını çıkarın. Bu doku sabitlenebilir ve ayrı olarak analiz edilebilir. Ameliyat sonrası balığı iyileşme tankına aktarın.Balıkların birkaç saatten bir geceye kadar iyileşmelerine izin verin ve balıkları yetiştirme sistemine geri koyun. Barb rejenerasyonunun gerçekleşmesi için bir ila iki hafta bekleyin. Bir sonraki bölümde, analiz için fikse edilmiş mermer dokusunun nasıl hazırlanacağını göstereceğiz.Bu prosedür, ameliyattan günler, haftalar veya aylar sonra toplanmış ve fikse edilmiş mermer balıklarıyla başlar. Fikse edilmiş dokuyu tamponlu bir salin solüsyonu ile durulayın ve rejenerasyon geçirmiş mermeri başın sol tarafından ayırarak çıkarın. Geçici depolama için kontrol grubu olarak hizmet eden sağ barbı unutmayın.Eşleşmiş her mermer çiftini, bir Petri kabı üzerindeki bir damla saline içine pipetle aktarın. Bir kapakla kapatın ve siz ayrılırken tezgah üzerinde bırakın. Jelini hazırlamak için, tamamen çözünene kadar 150 milliliters 2%agros ısıtın.Çözeltiyi 50 ila 60 °C sıcaklıktaki bir su banyosunda dengeye getirin. Ardından, standart bir jel elektroforez düzeneği kurun ve örnekler için bir ila dört küçük dişli tarak ekleyin. Erimiş agroz'u düz bir yüzeydeki jel kalıbına, sadece çok sığ kuyucuklar oluşturacak kadar dökün.Kalan aros'ları derhal sıcak su banyosuna geri yerleştirin. Pipetin aros'larla aynı sıcaklığa ulaşması için uzun bir cam pastör pipeti yerleştirin. Jel soğuduktan sonra önce tarakları, ardından jel kalıbını çıkarın.Jeli sıkıca sabitlemek için her iki yanını tercih ettiğiniz renkte bir laboratuvar bandı ile bantlayın. Bant, daha sonra ek agar dökülebilmesi için agar yüzeyinin birkaç milimetre üzerine kadar uzanmalıdır. Jel kalıbını bir stereo mikroskobun tablasına yerleştirin. Boş bir kuyucuğu büyütün ve kenarları netleyin.Eğik böcek iğneleri takılmış tutacaklar kullanarak, misketleri Petri kabından kuyucuğun yanındaki jel yüzeyine pipetleyin. Misketleri kuyucuğun içine sürükleyin ve dibe doğru itin. Halterleri birbirine paralel ve kuyucuğun uzun kenarlarına yaslanacak şekilde hizalayın. Gömme işleminden önce, fazla sıvıyı uzaklaştırmak için ince bir pipet veya laboratuvar mendili kullanın.Isıtılmış cam pipeti kullanarak, dokunun etrafına nazikçe taze eritilmiş agros ekleyin. Agros sertleşmeden önce son düzenlemeleri yapın ve kuyucuğu aşırı doldurmayın. Yakın bir yere küçük, numaralandırılmış bir kâğıt parçası ekleyerek numune numarasını kaydedin.Tüm örnekler gömüldükten sonra, üzerine ince bir tabaka aros dökerek jelin üst yüzeyini düzeltin. Fotoğraflama sırasında jelin şeffaf kalması için mümkün olduğunca az miktar kullanın. Jel sertleştiğinde, her mermer çiftinin boyutunu ve şeklini kaydetmek ve daha sonraki analizler için morfometrik ölçümler toplamak amacıyla bir stereo mikroskop altında fotoğraflanabilir.Eşleşmiş misket çiftleri içeren agar blokları, bir skalpel veya jilet yardımıyla jelden kesilip çıkarılabilir. Bunlar daha sonra standart yöntemlerle parafin histolojisi veya kriyokesitleme için işlenebilir. Alternatif olarak, tekil misketler suyla durulanmış ince iğnelerle agarlardan ayrıştırılabilir ve ardından tüm mount immünohistokimya veya konfokal mikroskopi gibi diğer alt uygulamalar için işlenebilir.Son olarak, jel tamamen bir torba içine kapatılabilir ve soğukta saklanabilir. Örnekler birkaç hafta boyunca korunacaktır. Size gelişmekte ve yeniden oluşmakta olan maksiller çubuğun nasıl gözlemleneceğini ve analiz edileceğini göstermiş olduk.Zebrafish'te yeni bir sistem olduğu için keşfedilecek çok şey var. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

methods-for-the-study-of-the-zebrafish-maxillary-barbel

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Zaman atlamalı konfokal görüntüleme embriyo gelişimini karakterize etmek için yararlı olan bir güçlü bir tekniktir. Burada, yöntemini açıklar ve iskeletsel vahşi tür morfolojilerinden yanı sıra, PDGFRA, smad5 ve smo mutant embriyolar karakterize eder.

4D konfokal mikroskopi kullanılarak Zebra balığı Kranyofasiyel morfogenez Analizi

Nörolojik ve non-nörolojik hastalıkların çok zebra balığı model yetişkin balık ziyade embriyo / larva incelenir için, erişkin zebrabalıkları hastalık modellerinde uygulanabilen bir nicel yan hat rejeneratif deneyi geliştirilmiştir. Deney 1) neuromast ve 2) tek tek saç hücre düzeyde çözünürlüğü dahil.

Yetişkin Zebra balığı Lateral Hat Rejenerasyon için bir Deneyi

Zebra balığı embriyo gelişim biyoloji araştırma için mükemmel bir model. Embriyogenez sırasında, zebra balığı örnek gözlem ve analiz için üç-boyutlu zorluklar sunuyor, bir yumurta sarısı kitle ile gelişir. Bu protokol situ (DİLERİZ) lekeli Zebra balığı embriyo örnekleri içinde bütün montaj iki-boyutlu düz monte hazırlıkları nasıl oluşturulacağı açıklanır.

Tüm Dağı ile Zebra balığı Embriyo örnekler Vitray gözlenmesi ve Analiz Daire Dağı Hazırlık<em&gt; In situ</em&gt; Melezleme

Sonlu Elemanlar Analizi, yapıların yük altındaki mekanik performansını araştırmak için sıkça kullanılan bir araçtır. Burada, zebra balığı çenesinin biyomekaniğini modellemek için kullanımını uyguluyoruz.

Zebra balığı Çeneli Biyomekanik Araştırma Sonlu Elemanlar Modelleri Bina

Bu yazıda zebra balığı embriyolarının ve larva spinal nöronların elektrofizyolojik kayıtları için yöntemleri tarif eder. Hazırlık yerinde nöronları korur ve genellikle asgari diseksiyonu kapsar. Bu yöntemler, erken larva aşamalarında ilk elektrik uyarılma alımından spinal nöronların çeşitli elektrofizyolojik çalışmaları için izin verir.

Zebra balığı<em&gt; Situ</em&gt; Omurilik Omurilik duyusal ve motor nöronlar gelen Elektrofizyolojik Recordings Hazırlık

Zebra balığı içinde öldürücü iskelet mutant fenotipleri alellerle tarafından seçici üreme değiştirmek için bu iletişim kuralını hedefidir. Ölümcül mutantlar yetişkinliğe büyüdü ve kendilerini bred, bu nedenle bu protokolü izleme ve sınama döl tarafından birden fazla nesilden alellerle seçmek için bir yöntem açıklanır.

Zebra balığı öldürücü iskelet Mutant alellerle test döl tarafından değişen

Bu yazıda yetişkin zebrafish stres davranışsal ölçmek için basit bir yöntem açıklanmaktadır. Yaklaşım, stresli bir durumda, zebra balığı bir tankın alt yarısını tercih ettiği doğuştan gelen eğilimin avantajlarından yararlanır. Biz de Farmakoloji ile tahlil bağlantı için yöntemleri tarif.

Zebrafish içinde doğuştan stres eğitimi için davranışsal yaklaşımlar

Optik berraklık, zebra balıklarında hücre biyolojik ve fizyolojik çalışmaları için önemli bir avantajdır. Bireysel hayvanlarda hücre büyümesinin ölçülmesi için sağlam yöntemler, iskelet kasının ve komşu dokuların büyümesinin tüm vücut büyümesiyle nasıl bütünleştiğine dair yeni bilgiler sağlayan tanımlanmıştır.

Değiştirilmiş elektriksel aktiviteye maruz kalan bireysel canlı zebra balıklarında iskelet kası büyümesinin gerçek zamanlı ve tekrarlanan ölçümü

Bu protokol, in vivo rejenerasyon sırasında zebra balığının elasmoid pullarının toplanmasını ve görselleştirilmesini açıklar. Ayrıca hasattan sonra 7 güne kadar bu ölçeklerin ex vivo kültürü sunulmaktadır.

Zebra Balığı Pul Rejenerasyonu Toto ve Ex Vivo Pul Kültürü

Burada açıklanan protokol, 5 günlük bir zebra balığı larvasında kraniyofasiyal kıkırdakların boyanması ve diseksiyonu için basit ve takip etmesi kolay bir prosedür sunmaktadır. Çeşitli gelişim koşulları altında bu yapıların anatomisini, şeklini ve boyutunu incelemek için kullanılabilir.

Zebra Balığı Kraniyofasiyal Dokularının Alcian Mavisi ile Boyanması Üzerine Diseksiyonu

Bu çalışma, zebrafish larvalarında yüz yapısındaki değişiklikleri ölçmek için ücretsiz yazılım (tpsDigs2, MorphoJ ve PAST) kullanılarak kraniofasiyal kıkırdak şeklinin nicelendirilmesine yönelik bir protokolü tanımlar.

Şekil Morfometrik Analizleri: Zebrafish'te Kraniofasiyal Şekil Nicelesi için Analiz Yazılımı Araç Kutusu

Öğrenin zebrafish maksiller bärbel rejenerasyonunu incelemek için cerrahi amputasyon ve histolojik analiz yöntemlerini. Bu teknik gelişim biyolojisi ve rejeneratif tıp araştırmalarında kullanılabilir.

Zebra balığı Maksiller Bärbel Çalışma Yöntemleri

Daha fazla video keşfet