Name: Kurul, Tuning ve Protein Görüntüleme için bir Apertureless Yakın Alan Kızılötesi Mikroskop Kullanımı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-11-25T03:33:00.000+00:00
Duration: 12 min 27 s
Description: Öğrenin, yakın alan kızılötesi mikroskop kurulumu ve hizalama tekniklerini kullanarak protein agregatlarını görüntüleme yöntemini. Bu teknik, biyofizik ve nörobilim araştırmalarında biyolojik görüntüleme olanaklarını ilerletir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz minnetle NSF, NSERC, NIH ve ONR kabul etmiş sayılırsınız.

<ol><li>Mueller, K., Yang, X., Paulite, M., Fakhraai, Z., Gunari, N., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+imaging+of+the+surface+of+self-assembled+polystyrene-b-poly%28methyl+methacrylate%29+diblock+copolymer+films+using+apertureless+near-field+IR+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Chemical imaging of the surface of self-assembled polystyrene-b-poly(methyl methacrylate) diblock copolymer films using apertureless near-field IR microscopy.</a> Langmuir. 24, 6946-6951 (2008).</li>
<li>Lahrech, A., Bachelot, R., Gleyzes, P., Boccara, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infrared-reflection-mode+near-field+microscopy+using+an+apertureless+probe+with+a+resolution+of+lambda%2F600%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Lett%22%5BJournal%5D)">Infrared-reflection-mode near-field microscopy using an apertureless probe with a resolution of lambda/600.</a> Opt. Lett. 21, 1315-1317 (1996).</li>
<li>Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+visible+and+mid-infrared+scattering-type+near-field+optical+microscopes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microsc%22%5BJournal%5D)">Performance of visible and mid-infrared scattering-type near-field optical microscopes.</a> J. Microsc. 210, 311-314 (2003).</li>
<li>Kim, Z. H., Leone, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polarization-selective+mapping+of+near-field+intensity+and+phase+around+gold+nanoparticles+using+apertureless+near-field+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Polarization-selective mapping of near-field intensity and phase around gold nanoparticles using apertureless near-field microscopy.</a> Optics Express. 16, 1733-1741 (2008).</li>
<li>Bridger, P. M., McGill, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observation+of+nanometer-scale+optical+property+discrimination+by+use+of+a+near-field+scanning+apertureless+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Opt.+Lett%22%5BJournal%5D)">Observation of nanometer-scale optical property discrimination by use of a near-field scanning apertureless microscope.</a> Opt. Lett. 24, 1005-1007 (1999).</li>
<li>Stebounova, L., Akhremitchev, B. B., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+the+weak+scattered+signal+in+apertureless+near-field+scanning+infrared+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Sci.+Instrum%22%5BJournal%5D)">Enhancement of the weak scattered signal in apertureless near-field scanning infrared microscopy.</a> Rev. Sci. Instrum. 74, 3670-3674 (2003).</li>
<li>Akhremitchev, B. B., Pollack, S., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apertureless+Scanning+Near-Field+Infrared+Microscopy+of+a+Rough+Polymeric+Surface%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Apertureless Scanning Near-Field Infrared Microscopy of a Rough Polymeric Surface.</a> Langmuir. 17, 2774-2781 (2001).</li>
<li>Hecht, B., Bielefeldt, H., Inouye, Y., Pohl, D. W., Novotny, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facts+and+Artifacts+in+Scanning+Near-Field+Optical+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phys%22%5BJournal%5D)">Facts and Artifacts in Scanning Near-Field Optical Microscopy.</a> J. Appl. Phys. 81, 2492-2498 (1997).</li>
<li>Labardi, M., Patane, S., Allegrini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Artifact-free+near-field+optical+imaging+by+apertureless+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Phys.+Lett%22%5BJournal%5D)">Artifact-free near-field optical imaging by apertureless microscopy.</a> Appl. Phys. Lett. 77, 621-623 (2000).</li>
<li>Palanker, D. V., Simanovskii, D. M., Huie, P., Smith, T. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+Contrast+Parameters+and+Topographic+Artifacts+in+Near-Field+Infrared+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Phys%22%5BJournal%5D)">On Contrast Parameters and Topographic Artifacts in Near-Field Infrared Microscopy.</a> J. Appl. Phys. 88, 6808-6814 (2000).</li>
<li>Akhremitchev, B. B., Sun, Y., Stebounova, L., Walker, G. C. Monolayer-Sensitive Infrared Imaging of DNA Stripes Using Apertureless Near-Field Microscopy.Langmuir. 18, 5325-5328 (2002).</li>
<li>Brehm, M., Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infrared+Spectroscopic+Mapping+of+Single+Nanoparticles+and+Viruses+at+Nanoscale+Resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nano+Lett%22%5BJournal%5D)">Infrared Spectroscopic Mapping of Single Nanoparticles and Viruses at Nanoscale Resolution.</a> Nano Lett. 7, 1307-1310 (2006).</li>
<li>Dazzi, A., Prazeres, R., Glotin, F., Ortega, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+nano-chemical+mapping+performed+by+an+AFM-based+%28%22AFMIR%22%29+acousto-optic+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Ultramicroscopy%22%5BJournal%5D)">Analysis of nano-chemical mapping performed by an AFM-based ("AFMIR") acousto-optic technique.</a> Ultramicroscopy. 107, 1194-1200 (2007).</li>
<li>Yang, D. S., Yip, C. M., Huang, T. H. J., Chakrabartty, A., Fraser, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manipulating+the+Amyloid-%CE%B2+Aggregation+Pathway+with+Chemical+Chaperones%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Manipulating the Amyloid-β Aggregation Pathway with Chemical Chaperones.</a> J. Biol. Chem. 274, 32970-32974 (1999).</li>
<li>Meadows, P. Y., Walker, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+Microscopy+Studies+of+Fibronectin+Adsorption+and+Subsequent+Cellular+Adhesion+to+Substrates+with+Well-Defined+Surface+Chemistries%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Force Microscopy Studies of Fibronectin Adsorption and Subsequent Cellular Adhesion to Substrates with Well-Defined Surface Chemistries.</a> Langmuir. 21, 4096-4107 (2005).</li>
</ol>

kurul, tuning ve protein görüntüleme için bir apertureless yakın alan kızılötesi mikroskop kullanımı

Assembly, Tuning and Use of an Apertureless Near Field Infrared Microscope for Protein Imaging

Bu kağıt kırınım sınır ötesinde görüntüleme için bir kızılötesi yakın alan mikroskobu montajı ve işletilmesi okuyucu öğretmeyi hedefliyor. Apertureless yakın alan mikroskobu, yaklaşık 20 nm çözünürlükte infrared spektrumları sağlayan bir ışık saçılması tipi araçtır. Bileşenler ve kullanımı için bir adım-adım protokolü tam bir listesi verilir. Genel hatalar, montaj ve enstrüman ayar tartışılmıştır. Bir amiloid fibril ikincil yapısını gösteren bir temsilci veri seti sunulmaktadır.

Görüntüleme protein büyüklükler bir nearfield kızılötesi mikroskop montaj açıklanmıştır.

Kurul, Tuning ve Protein Görüntüleme için bir Apertureless Yakın Alan Kızılötesi Mikroskop Kullanımı

Bu makale, okuyucuya difraksiyon limitinin ötesinde görüntüleme yapabilen bir kızılötesi yakın alan mikroskobunun kurulumu ve çalıştırılması konusunda eğitim vermeyi amaçlamaktadır.

Optik düzeneğin ilk kurulumu, çok modlu bir FM ve optik mikroskobun ayarlanmasıyla tamamlanır. Görünmez kızılötesi ışının hizalanması, önce görünür kırmızı helyum neon lazerle hizalama yapılarak kolaylaştırılır. Kızılötesi ışınla üst üste binmesi için düz çizgi, lazer ışığının konsol ucunun tepe noktasına ve kızılötesi dedektöre çarptığının gözlemlenmesi amacı taşıyan kesikli çizgi kullanılır.Kızılötesi ışının nihai hizalaması, istenen yakın alan sinyali elde edildiğinde doğru şekle sahip tek bir F sinyali almak için optik mikroskop konumunun ve aynaların ayarlanmasıyla gerçekleştirilir. Eş zamanlı olarak, nano scope yazılımı kullanılarak bir FM topografyası ve yakın alan görüntüleri toplanır. Merhaba, ben Toronto Üniversitesi Kimya Bölümü'nden Profesör Gilbert Walker.Merhaba, ben de Gilbert Walker laboratuvarından Melissa Paulite. Bugün size, açıklık listeli, yakın alan kızılötesi tarama mikroskobunun ilk kurulum ve hizalama prosedürünü göstereceğiz. Laboratuvarımızda protein agregatlarını incelemek için bu prosedürü kullanıyoruz.Hadi başlayalım. Görüntüleme sisteminin kurulumunu ve ayarlarını anlatmadan önce, tüm sistemin kısa bir genel bakışına göz atalım. Bu videoda açıklayacağımız görüntüleme sistemi parçaları arasında optik masa, çok modlu atom kuvvet mikroskobunun (AFM) tabanı, çok modlu AFM'nin tarayıcısı, yükseltilmiş optik ekmek tahtası, yönlendirici aynalar ve iris ile merkezleyici içeren optik tüp yer almaktadır.Çinko selenür kısmi reflektörlü optik küpü, düzeneği yükseltme platformuna sabitlemek için kullanılan optik tüp ile engelleyin. Kızılötesi objektif, toplanan geri saçılan ışık için kullanılan optik tüptür. Eksen dışı paraboloid aynalı küp, germanyum plakayı 45 derece açı ile tutan küptür.Mikroskop okülerleri, XY tablasına monte edilmiş iğne deliği, cıva kadmiyum tellürür veya MCT kızılötesi detektör. Kızılötesi detektör ön amplifikatörü, ışın konumunu hareket ettirmek için XY tablası, ışını odaklamak için yükseltme tablası, kızılötesi detektörü konumlandırmak için Z tablası ve kızılötesi detektörü konumlandırmak için X tablası. Optik düzeneğin montajına başlamak için, helyum neon ışınını optik tablaya paralel hale getirmek amacıyla ayar aynalarını kullanın.Ardından, küp içerisinde ışın ayırıcı olmadan ve küpün diğer ucunda uzatılmış optik tüp varken, helyum neon ışınını tüplerin uçlarına takılı irislerden geçirin. Şimdi tarayıcıyı çıkarın ve kızılötesi objektifin yerine uzatılmış optik tüpü takın. Işını numuneye yönlendirmek için çinko selenür kısmi reflektörü yerleştirin.Helyum neon ışınının, optik kübün geometrik merkezinde reflektörün ön yüzeyine çarpacağı şekilde monte edilmelidir. Kısmi reflektörü döndürerek ışını kapalı çıkıştan yönlendirin. Kısmi reflektör tutucusu parçayı tam dik tutmadığı için, ışının dikey hareketini sağlamak amacıyla kendimiz tarafından takılmış iki ayar vidası kullanıyoruz.Ardından, vidaları sıkarak paraloid aynayı monte etmek için kauçuk O-ringler kullanın. O-ringler sıkışarak aynanın ayarlanmasına olanak tanır. Helyum neon ışınını ters yöne yönlendirmek için ek aynalar kullanın ve ışını daha önce kullanılan irislerden geçecek şekilde ayarlayın.Bu ışın, paraboloid aynayı ayarlamak için kullanılacaktır. Optik küp içerisine yerleştirilen paraboloid ayna, ışığı pinholün ardına konumlandırılacak olan dedektöre doğru yansıtır. Ayar vidaları, ışının küp çıkışına yerleştirilen pinholden geçecek şekilde yönlendirilmesine olanak tanır.Işın iğne deliği üzerinden ayarlandıktan sonra, MCT dedektörünü iğne deliğinin yakınına yerleştirin. Kızılötesi dedektörünün konumunu, helyum neon ışını dedektörün algılayıcı elemanı üzerinde olacak şekilde ayarlayın. Dedektörü yaklaşık iki milimetre aşağı indirin.Şimdi, germanyum pencereli tutucuyu pinhole'den önce bulunan optik kübe yerleştirin. Yansıma önleyici kaplamalı germanyum pencere, bir kızılötesi filtre görevi görerek kantileverin ve numunenin görsel olarak gözlemlenmesine olanak tanır. Ardından, okülerle bağlantıyı kurun.Kübün açısını döndürmek, germanyum pencerenin yuvasını çevirerek okülerle istenen yöne bakılmasını sağlar. Helyum neon ışınını okülerin ortasından geçirin. Kızılötesi objektifi ve bir FM tarayıcıyı bağlayın ve ışın durdurucuyu takın.Bir örneği tarayıcı üzerine yerleştirin ve helyum neon ışınını giriş optik tüpü üzerinden yönlendirin. Işının, hüzmenin dışına taşacak kadar geniş olduğundan emin olun. Oküler dişlisini ayarlayarak durdurun.Numuneye odaklanmış ışının net bir görüntüsünü elde edin. Ardından, FM kafasını takın ve probu numune üzerine yerleştirin. Helyum neon ışınını görüntüleme konsolunun ucuna odaklayın.Eğer bu işlem ışını giriş optik tüpünün ortasından kaydırırsa, ışın merkezlenene kadar ayarlama adımlarını tekrarlayın. Paraboloid aynanın son ayarlamalarına başlamak için, çıkış iğne deliğini paraboloid aynanın odak noktasındaki iris ile değiştirin; germanyum pencereyi ve kızılötesi dedektörü çıkarın.Kızılötesi detektörün konumunu işaretlemeyi unutmayın. İris diyagramından sonra, lensin yaklaşık odak uzaklığına ek bir lens takın. Bağlanmış olan konsol (cantilever) artık lens üzerinden görünür olmalıdır.Paraboloid aynanın konumunu, kapalı iris üzerinden ucun sonuyla merkezlenecek şekilde ayarlayın. Helyum neon ışını ucun üzerine doğru şekilde odaklandığında, uç ile numunenin yüzeyindeki yansıması arasında parlak bir ışıltı oluştuğuna dikkat edin. Germanyum pencereyi tekrar takın ve konsolun rahatça görsel gözlemi için ayarlamasını yapın.İrisi iğne deliği ile değiştirin. Kızılötesi algılama için kullanılan iğne deliğinin, germanyum pencerenin kızılötesi ışını kaydırması nedeniyle merkezden uzağa kaydırılması gerektiğini unutmayın. Kızılötesi dedektörü daha önce işaretlenmiş konuma yerleştirin ve kızılötesi ışını, ayarlama için kullanılan görünür ışınla birlikte ilerleyecek şekilde yönlendirin.Şimdi rutin ayarlama prosedürüne bakmaya hazırız. Düzenek, görünmez kızılötesi ışın yerine görünür helyum neon ışını ile daha kolay hizalanır. Helyum neon ışını ile kızılötesi ışının yolu, eğilebilir aynada birleşir.Bu ayna aşağı doğru eğilirse, helyum neon geçebilir. Ayna konumunda olduğunda, kızılötesi ışın yakın alana gider. Işınlardan birinin hizalanması için kurulum.Diğer yolla ortak olmayan iki ayna kullanın. Homodyn kolundaki ışına baktığınızda, korona benzeri bir ışın profili görmelisiniz. Yakın alan tablası ile hassas hizalama yapabilmek için kuvvet geri beslemeli AFM artık devreye girmiştir.Işığı, saçıldığı uç noktaya odaklamak için yansıtmalı mikroskop objektifini hareket ettirin. Germanyum pencereyi optik küpün içine yerleştirin. Paraloid aynadan sonra, ışın bir paraloid ayna ile bu noktaya odaklanır.Germanyum penceresini kullanarak, ucun ve numune yüzeyindeki yansımasının net görüntüsünü görene kadar sahneyi geriye veya ileriye hareket ettirin. Şimdi, helyum neon demeti olmadan konsolu ve ucu görebileceğiniz teleskopla bakın. Hala biraz kırmızı ışık görebilirsiniz, ancak bu AFM mesafe kontrolünden gelen dahili ışıktır.Ucun ucunda parlak kırmızı bir parıltı elde edene kadar sahneyi sağ, sol, yukarı ve aşağı yönlerde hareket ettirin. Homodyn alanını saçılan ışıkla örtüştürmek için önce homodyn kolunu açın. Ardından okülerden bakın.Azalan yoğunlukla bir hat üzerinde üç veya daha fazla nokta göreceksiniz. İkinci noktanın, ucun ve yansımasının birleştiği yerdeki uç görüntüsüyle örtüşecek şekilde homodyn kolundaki aynayı hareket ettirin. Dedektörü konumlandırmak için ek aynayı çıkarın.Helyum neon ışını artık tüpün arkasındaki dedektör yönüne doğru ilerleyecektir. En az iki halka şeklinde nokta görebilirsiniz. Sağdan ikinci nokta, dedektörün önündeki ısı koruma folyosundaki delikten geçmeli ve algılama elemanına çarpmalıdır.Rutin ayarlamalar tamamlandığında, en yüksek yoğunluğa sahip noktanın deliğin üzerinde görülmesi gerekir. Şimdi kızılötesi ışının hizalamasına bakalım. Kızılötesi ışını hizalamak için en az 100 milliwatt yoğunluğa sahip bir karbonmonoksit lazer hattı kullanın.Bu işlem hizalamayı kolaylaştıracaktır. Başlamak için dedektörü sıvı azot ile doldurun. Kızılötesi ışının mikroskoba yönelmesi için kinematik bir çevirme düzeneğine monte edilmiş olan aynayı yukarı kaldırın.İlk irisin arkasına bir güç ölçer yerleştirin ve kinematik flip monta montajlı aynanın önünde bulunan aynayı ayarlayın. En yüksek gücü elde etmek için, güç ölçeri yakın alan tablasına en yakın olan irisin arkasında tutun ve maksimum gücü alana kadar eğilebilir aynayı hareket ettirin. Hizalama işlemi sırasında, tek F sinyalini izlerken bu adımları birkaç kez tekrarlayacaksınız.1F sinyalini kontrol etmek için, amplifikatördeki lock referansını 1f = FM osilasyon frekansına getirin ve force plot modunda 3 µm Zs tarama boyutuna geçin. Hizalama hatalıysa, 3 µm ölçeğinde geniş bir tümsek göreceksiniz. Bunu düzeltmek için, hizalama iyileşene kadar önceki adımları sürekli olarak tekrarlamanız gerekecektir.Orta düzeyde bir hizalamaya sahipseniz, ilk tümseğin eğriliği hafifçe konkav görünecektir, ancak ikinci tümsek birinciden daha büyük olacaktır. Bu durumda, hizalama aynalarından birini veya her ikisini ayarlayarak hizalamayı düzeltmeyi deneyebilirsiniz. Hizalamanız iyiyse, yalnızca iki tümsek göreceksiniz ve birincisi ikincisinden daha yüksek olacaktır.İlk tümseğin sağ tarafındaki eğrilik negatif olacaktır. İyi bir hizalama elde ettiğinizde, ilk tümseğin maksimum değerini artırmak için aynaları hareket ettirebilirsiniz. İlk tümseğin şekli daha kritik olmakla birlikte, tek F sinyali 5 ve 12 volt arasında bir yerde olmalıdır.Son olarak, iki F'ye geçiş yapın ve sinyali biraz daha iyileştirmeye çalışın. Aynaları hafifçe döndürerek fazı değiştirdiğinizde, iki F sinyali 0,6 ile iki volt arasında bir yerde olmalıdır. Deneysel topografya ve yakın alan.21 ila 31 peptid fibrilinin görüntüleri gösterilmektedir. Üst ölçek nanometre cinsinden yüksekliği, alt ölçek ise lock-in voltajı cinsinden yakın alan kontrastını göstermektedir; burada sunulan, 1.631 cm⁻¹ radyasyonu kullanılarak elde edilen yakın alan görüntüsüyle eş zamanlı olarak toplanmış bir topografya görüntüsüdür. 1.691 cm⁻¹ kullanılarak elde edilen yakın alan görüntüsüyle eş zamanlı olarak toplanmış bir topografya görüntüsü.Radyasyon gösterilmiştir. Etiketler belirli FI'ları temsil eder ve her bir FI'ın sahip olduğu ikincil doğrulama türünü vurgulamak için kullanılır. Size bir hattın nasıl kurulacağını ve açıklık listeli bir yakın alan taramalı kızılötesi mikroskobun nasıl kullanılacağını göstermiş olduk.Hizalamanız yanlış olursa adımlarınızı geriye doğru takip edebilmeniz için hizalama sırasında gerçekleştirdiğiniz işlemleri hatırlayın ve hepsinden önemlisi sabırlı olun. İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler.Deneylerinizde başarılar dileriz.

assembly-tuning-use-an-apertureless-near-field-infrared-microscope

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bir substrat üzerindeki hücre adezyon Topolojisi değişken açılı toplam iç yansıma floresan mikroskobu (VA-TIRFM) tarafından nanometre hassasiyetle ölçülür.

Değişken Açılı Toplam İç Yansıma Floresan Mikroskopi (VA-TIRFM) üzerine Hücre yapışma Nanotopology

Protein fonksiyonunun temel adımları, özellikle omurga konformasyonel değişiklikleri ve proton transfer reaksiyonları, genellikle mikrosaniye ila milisaniye zaman ölçeğinde gerçekleşir. Bu dinamik süreçler, özellikle işlevi ışık tarafından tetiklenen proteinler için, zaman çözümlü adım taramalı Fourier dönüşümü kızılötesi spektroskopisi ile incelenebilir.

Tarafından Işığa Proteinler Proton Transferi ve Protein Konformasyon Dynamics Zamanda çözülmüş kızılötesi spektroskopi Fourier-dönüşümü Step-tarama

Onlar yaşayan hücrelerden salgılanan gibi biz tek etiketlenmemiş proteinler gerçek zamanlı Optik algılama için bir iletişim kuralı mevcut. Bu çeşitli farklı biyolojik sistemleri ve yapılandırmaları için uygulanabilir dalgaboyu saçılma (iSCAT) mikroskopi dayanmaktadır.

Etiket içermeyen Imaging, tek proteinler salgılanan iSCAT mikroskobu ile yaşayan hücrelerden

Bu protokol, etiket içermeyen, yüksek kontrastı, yüksek hızlı görüntüleme için standart bir floresan mikroskop üzerinde girişim yansıma mikroskopisi uygulamak için bir kılavuzdur mikrotubules in vitro yüzeyler kullanarak.

Microtubules etiketi içermeyen, yüksek hızlı görüntüleme için girişim Reflection Microkopi uygulanması

Burada, İmmünohistokimya ve yüksek çözünürlüklü beyin bölgelerinin proteinleri için tarama ile birlikte yakın kızılötesi boyalar kullanan bir protokol sunuyoruz.

Kemirgen beyninde protein Ifadesini ölçmek için yakın kızılötesi floresan ve yüksek çözünürlüklü tarama kullanma

Biz kızılötesi nanospectroskopi ve yüksek çözünürlüklü atomik kuvvet mikroskobu oligomerik agregalar ve amiloid fibrils içine protein kendini montaj sürecini görselleştirmek için uygulama açıklar, yakından başlangıç ve geliştirme ile ilişkilidir insan nörodejeneratif bozuklukların geniş bir yelpazede.

Bireysel Protein Agregalarının Kızılötesi Nanospektroskopi ve Atomik Kuvvet Mikroskobu ile Karakterizeleştirilmesi

Canlı hücrelerin plazma zarında ligand bağlanması ile indüklenen mEGFP etiketli-reseptör oligomerlerinin ortalama oligomerik durumunun belirlenmesi için bir görüntüleme yaklaşımını tanımladık. Protokol, Sayı ve Parlaklık (N&amp;B) analizi ile birlikte Toplam İç Yansıma Floresan (TIRF) mikroskobuna dayanmaktadır.

Toplam İç Yansıma Floresan Mikroskobu Ile Canlı Hücrelerdeki Hücre Yüzey Reseptörlerinin Oligomerizasyon Dinamiği Sayı ve Parlaklık Analizi ile Birlikte

Bu protokol, hücresel bir ortamda reseptörlere gerçek zamanlı olarak adenin nükleotid bağlanmasını ölçmek için bir yöntem sunar. Bağlanma, trinitrofenil nükleotid türevleri ile kanonik olmayan, floresan amino asit ile etiketlenmiş protein arasındaki Förster rezonans enerji transferi (FRET) olarak ölçülür.

Sağlam, fonksiyonel membran proteinlerine bağlanan nükleotidin gerçek zamanlı olarak ölçülmesi

Atomik Kuvvet Mikroskopisi-Kızılötesi Spektroskopi (AFM-IR), bakteriyel çalışmalar için güçlü bir platform sağlayarak nano ölçekli çözünürlük elde etmeyi sağlar. Her ikisi de, hücre altı değişikliklerin haritalandırılması (örneğin, hücre bölünmesi üzerine) ve kimyasal bileşimin karşılaştırmalı çalışmaları (örneğin, ilaç direncinden kaynaklanan) bakterilerde tek bir hücre düzeyinde yapılabilir.

Atomik Kuvvet Mikroskopisi, Tek Bakteri Kimyasını Araştırmak için Bir Araç Olarak Kızılötesi Spektroskopi ile Birleştirildi

Dinamik mikrotübüllerin ve floresan olarak etiketlenmiş mikrotübülle ilişkili proteinlerin eşzamanlı görüntülenmesi için girişim-yansıma mikroskobu ve toplam-iç-yansıma-floresan mikroskobu uygulamak için bir protokol sunuyoruz.

Dinamik Mikrotübülleri ve İlişkili Proteinleri Görüntülemek için Eşzamanlı Girişim Yansıması ve Toplam İç Yansıma Floresan Mikroskobu

Bu makale, katı destekli lipid çift katmanlarında tek protein izleme için örnekler nasıl oluşturulacağına dair ayrıntılı bir açıklama sunmaktadır. Ayrıca, tek molekül hassasiyeti ve hızlı kare hızına sahip basit bir floresan mikroskobu da açıklar. Son olarak, tek protein yörüngelerinin çıkarılması prosedürünü özetliyoruz.

Lipid çift katmanlarında tek proteinlerin floresan mikroskopisi kullanılarak takibi

Öğrenin, yakın alan kızılötesi mikroskop kurulumu ve hizalama tekniklerini kullanarak protein agregatlarını görüntüleme yöntemini. Bu teknik, biyofizik ve nörobilim araştırmalarında biyolojik görüntüleme olanaklarını ilerletir.

Kurul, Tuning ve Protein Görüntüleme için bir Apertureless Yakın Alan Kızılötesi Mikroskop Kullanımı

Daha fazla video keşfet