Name: 6.5 DPC Fare Embriyolar diseksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 57 s
Description: Öğrenin, 6.5 DPC fare embriyolarını izole etmek için diseksiyon tekniklerini. Bu yöntem, embriyonik gelişimde gen desenlemesi ve hücre soy kararlarını incelemek için araştırmacılara güvenilir bir temel sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bir dişi fare üreme organları diseksiyonu <ol><li> Gebe hayvanlar sıkıştırılmış gaz kullanarak CO 2 boğulma tarafından ötenazi. </li><li> Emici ped hayvan yatar Lay ve fare saç diseksiyonu kontamine riskini azaltmak için% 70 etanol içinde bekletin. </li><li> Cilt sıkın ve düzenli cerrahi makas ile orta hatta küçük bir yatay kesi yapmak. Sağlam bir şekilde yukarıdan ve kesi altında tutun ve cilt cilt dışında karın ortaya çıkarmak için baş ve kuyruk doğru çekin. </li><li> Forseps ile tutun ve periton karın boşluğunda ortaya çıkarmak için kesilmiş. </li><li> Iki, rahim boynuzları, yumurtalık ve yumurtalıkların: vücut boşluğuna dorsal bölgedeki üreme organları bulun. </li></ol> İlkel Streak aşamalı (6.5 DPC) Diseksiyon <ol><li> Uterin horn rahim yumurtalık altında tutarak çıkarın ve mesometrium boyunca ücretsiz kesmek. Buz PBS disseke rahim yerleştirin. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_2/160_figure-1.jpg" alt="Şekil 1" width="263" height="132"> Şekil 1 </li><li> Her embriyo rahim boynuz boyunca implantasyon siteler arasında keserek ayırın. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_7_8_3/160._figure-2.jpg" alt="Şekil 2" width="575" height="171"> Şekil 2 </li><li> Saatçilik forseps çevresindeki kas tabakası ve zarflı desidua dokusu arasında kaydırarak kas rahim astar kavrayın. Peel, geri kas tabakası desidua ortaya. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_4/160_Figure-3.png" alt="Şekil 3" width="593" height="166"> Şekil 3 </li><li> Midventral veya distal ucu kapalı embriyo gösterecektir apeks (yaklaşık 1 / 5 desidua dokusu) maruz kalan desidua bir kısmını off klibi. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_5/160_Figure-4.png" alt="Şekil 4" width="589" height="212"> Şekil 4 </li><li> Forseps ve ipuçlarını kullanarak embriyo kabuklu olabilir. Pierce, forseps ve embriyo çevreleyen açık forseps ile desidua dışında desidua gözyaşı. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_6/160_Figure-5.png" alt="Şekil 5" width="249" height="200"> Şekil 5 </li><li> Bir kez embriyo kaldırılır, Reichart membran hala ectoplacental konisi (trofoblast) olarak de bağlı olabilir. Embriyo daha dikkatli diseksiyon ile disseke edilebilir. <img src="/files/ftp_upload/old/160_2008_8_15_7/160_Figure-6.png" alt="Şekil 6" width="356" height="222"> Şekil 6 </li></ol>

<ol><li>Nagy, A., et al. Manipulating the mouse embryo: A laboratory manual third edition. , Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. (2003).</li>
</ol>

Fare Postimplantation 4,5 DPC ve doğum arasında oluşur. Bu diseksiyon yöntemi olarak tanımlanan, aslında, önceki veya sonraki 5,5-8,5 DPC sahne embriyolar izole etmek için uygulanabilir.

<table><tbody><tr><td>Mikro Diseksiyon Penseti tırtıklı, düz</td><td>Araç</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5130</td><td>2 çift</td></tr><tr><td>Mikro Diseksiyon Penseti Model #55 INOX</td><td>Araç</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5010</td><td>2 çift</td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Fosfat Tamponlu Salin (1x)</td><td>Reaktif</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Steril Polistiren Petri Kabı</td><td>Araç</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>PBS içinde %4 Paraformaldehit</td><td>Reaktif</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Düz Sivri Uçlu Diseksiyon Makası</td><td>Araç</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-940</td><td></td></tr><tr><td>Gebe dişi fareler</td><td>Hayvan</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Mikroskobu</td><td>Mikroskop</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

6.5 dpc fare embriyolar diseksiyonu

Dissection of 6.5 dpc Mouse Embryos

Memeli embriyonik gelişimin erken aşamalarında gen ekspresyonu analizi, gen fonksiyonu, hücre-hücre etkileşimi ve sinyal mekanizmaları bu kılavuzu embriyonik desenlendirme hakkında önemli ipuçları sağlayabilir. Ancak, fare embriyo implantasyonu kısa bir süre sonra desidua diseksiyonu zor bir işlem olabilir ve bu sürecin ayrıntılı adım-adım belgelerine eksiktir. Burada ilk kez hamile bir fare rahim diseksiyon (vajinal fiş belirlenen gün 0.5 poist coitum tespit) ve daha sonra embriyonun anne desidua diseksiyon post-implantasyon (6.5 DPC) embriyolar nasıl izole edilir göstermektedir. Reichert membran diseksiyonu ectoplacental koni kaldırılması yanı sıra açıklanmıştır.

Postimplantation-dönem embriyoların İzolasyon bir gen desenlendirme hücre soy karar verme süreçlerini embriyonik gelişim sırasında çalışma ve analiz etmek için izin verir, fakat erken embriyo uygun diseksiyonu zor olabilir. Bu protokol erken ilkel bir çizgi-dönem embriyoların izole etmek için bir yöntem açıklanır (~ 6.5 gün coitum [DPC).

6.5 DPC Fare Embriyolar diseksiyonu

Memeli embriyonik gelişiminin erken evrelerindeki gen ekspresyon örüntülerinin analizi; gen fonksiyonu, hücre-hücre... hakkında önemli ipuçları sağlayabilir.

Benim adım Kelly Shea; Neilsen Laboratuvarı'nda laboratuvar yöneticisiyim ve aynı zamanda araştırma teknisyeniyim. Birçok kişi farklı doku tabakalarını nasıl ayırt edeceğini bilmediği için bu işlem oldukça zordur. Bu nedenle yapmanız gereken, esasen alttaki embriyoyu açığa çıkarmak için tüm doku tabakalarını geri soymaktır; embriyo bu aşamada henüz fazla vaskülarize olmamıştır. Bu yüzden oldukça şeffaftır ve ayırt edilmesi zordur.Küt uçlu pens ve makas alın. İlk olarak hayvanı tam orta hat boyunca sıkıştırın ve ilk kesiği yapın. Ardından, bu noktadan itibaren deriyi çekerek ayırın ve hayvanın abdomenini açığa çıkarın.Pens ile yukarı çekeceğiniz ince bir periton tabakası vardır; ardından burayı makasla keserek geriye doğru katlayabilirsiniz. Hayvanın orta hattı boyunca kesim yaparak, ortada birleşmiş olan her iki uterus kornusunu birbirinden ayırmanız gerekir. Tam taban kısmından kesebilirsiniz.Bununla birlikte muhtemelen çok miktarda yağ da gelecektir. Hayvanın uterus boynuzunun tamamını alın. Doğrudan PBS içine yerleştirin.İşte boynuzun içi burası. Bunlar implantasyon bölgeleri; 1, 2, 3, 4, 5. Yapmanız gereken tek şey bunları birbirinden ayırmaktır.Temel olarak tam buradan, implan

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Ilkel germinal hücrelerin ayırt etmek için erken geliştirme aşamasında, embriyonik germinal hücreler, kanser ve kısırlık hakkındaki hipotezi adresine yeteneği mükemmel bir model. Bu protokol, 10,5-11,5 gün coitum fare embriyoları, gelişmekte olan gonadlar ilkel germinal hücreleri izole etmek için nasıl gösterir.

Fare Embriyonik Germinal Hücreleri İzolasyon ve türetilmesi

Kemirgen omuriliğe duyusal aferentlerde kalıplaşmış projeksiyonları tek akson izleme yoluyla aksonal dallanma incelemek için kolay ulaşılabilir bir deneysel sistem sunuyoruz.

Fare Embriyonik Omurilik Tüm Dağı Hazırlık aksonal dallanma Eğitim DRG Nöronlar DII-Etiketleme

Embriyo yüz ektoderm ve mezenşimi ayrılması için bir protokol tanımlanmıştır. Biz, ilk bütün embriyolar tedavisinde tüm yüz çıkıntıları üzerinden incelemek dispase II kullanın ve sonra yüz ektoderm ve mezenşimi ayırın.

Fare Embriyonik Yüz Ektoderm ve mesenchyme ayrılması

Primer ilişkisiz embriyonik hipokampal nöronal kültürler, nöron ölümünde rol oynayan sinyal mekanizmalarını araştırmak için yararlıdır. Hipokampusun izolasyonu ve ayrışmasından önce embriyoların cinsiyetlendirilmesi, araştırmacının cinsiyete özgü hücre sinyallerini tanımlamasını ve araştırmasını sağlayan ayrı erkek ve dişi kültürlerin hazırlanmasına izin verir.

İskemik Hücre Ölümü Pathways Eğitim için seks Katmanlı Nöronal Kültürleri

Düğüm ve notochordal plaka gelişmekte olan çeşitli teknikler kullanarak görüntülenir fare embriyo organizatörler sinyal geçici. Burada, biz iki çalışma onların yapısı ve morfogenetik bozmak nasıl ayrıntılı olarak tarif: 1) Tarama elektron mikroskobu (SEM); ve 2) bütün Dağı ayirt (WMIF).

Düğüm ve Notochordal plaka Gastrulating fare embriyo Tarama elektron mikroskobu ve bütün Dağı ayirt kullanarak görselleştirme

Biz bütün Dağı epifluorescent mikroskobu ventrikül belirli MLC-2v-tdTomato muhabir çakma fareler disseke fare embriyosu üzerinde kullanarak fare kalp geliştirme incelemek için protokolleri mevcut. Bu yöntem her aşamasında emek yoğun histochemical yöntemleri olmadan fare kalp geliştirme sırasında ventrikül oluşumu doğrudan görselleştirmek için bize izin verir.

Bütün Mount Epifluorescence kullanarak fare embriyogenez sırasında kalp odası gelişimin analizi

Burada, geç embriyonik Drosophila erkek gonadını canlı olarak görüntülemek için gerekli bir diseksiyon protokolü sunuyoruz. Bu protokol, normal koşullar altında veya transgenik veya farmakolojik manipülasyondan sonra dinamik hücresel süreçlerin gözlemlenmesine izin verecektir.

Geç Embriyonik Drosophila Gonad'ın Diseksiyonu ve Canlı Görüntülemesi

Burada, fare embriyolarının üç ve dört boyutlu görüntü verilerinin, toto optik projeksiyon tomografisi ve multifoton mikroskobu kullanılarak canlı görüntüleme ve tam montajlı immünofloresan boyama ile elde edilen eksenel uzama ve segmentasyon bağlamında görselleştirilmesini ve analizini sağlayan hesaplamalı araç ve yöntemleri açıklamaktayız.

Omurgalı Eksenel Uzama ve Segmentasyonunu İncelemek için Üç ve Dört Boyutlu Görselleştirme ve Analiz Yaklaşımları

Klasik olarak, fare embriyonik kapak primordiyumunun endokardiyumu transversal, koronal veya sagital kesitler kullanılarak analiz edilmiştir. Valvulojenik bölgelerde endokardın en yüzlü, iki boyutlu görüntülenmesi için yeni yaklaşımımız, kapak gelişimi sırasında endokardın düzlemsel polarite ve hücre yeniden düzenleme analizine izin verir.

En Yüz Fare Embriyolarında Düzlemsel Morfogenez Analizi için Endokardiyal Minderin Hazırlanması

Bu makale, tek hücrelerin ve çekirdeklerin dizilimi için gastrulasyon yapan fare embriyolarının yüksek kaliteli tek hücreli ve çekirdek süspansiyonları için bir boru hattı oluşturur.

Mutant Bütün Fare Embriyolarının Tek Hücreli RNA Dizilimi: Epiblasttan Gastrulasyonun Sonuna Kadar

Öğrenin, 6.5 DPC fare embriyolarını izole etmek için diseksiyon tekniklerini. Bu yöntem, embriyonik gelişimde gen desenlemesi ve hücre soy kararlarını incelemek için araştırmacılara güvenilir bir temel sunar.

6.5 DPC Fare Embriyolar diseksiyonu

Daha fazla video keşfet