Name: Hawaii Bobteylleri Squid Hemocytes Alınması Euprymna scolopes Ve Simbiyotik ve Non-Simbiyotik Bakteriler bağlılık Gözlem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-02-11T04:52:00.000+00:00
Duration: 5 min 29 s
Description: Keşfedin Euprymna scolopes hemosit izolasyonu ve bakteri adezyon analizleri için floresan boyama yöntemini. Bu protokol hücre-bakteri etkileşimlerini görselleştirmek için güvenilir bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Finansman Kaynakları: SVN, Connecticut Araştırma Vakfı ve Moleküler ve Hücre Biyolojisi Bölümü Üniversitesi, Sigma Xi Grant Yardım Araştırma ve Antonio H. ve Majorie R. Romano Lisansüstü Eğitim Bursu AJC

<ol><li> 0.22 mikron filtre ile sterilize edilmiş yapay deniz suyu, 500 mL (tuzluluk 35 ppt FSW) hazırlayın. 0.22 mikron mikron filtre süzülür yapay ya da doğal deniz suyu parçacıklar ve bakteriler kaldırmak için. </li><li> FSW etanol% 2'lik bir çözüm koyarak bir yetişkin Hawaiian kuyruğu kesik kalamar (Euprymna scolopes) anestezisi. Yaklaşık 10 dakika için anestezi hayvan yerleştirin. Kalamar yüzme sona erecek ve aktif dokunmatik yanıt vermez. Devamı solunum, manto hareket tarafından belirtilen ve chromatophore aktivite hala dikkat edilmelidir. </li><li> Kalamar, standart bir balmumu diseksiyonu tepsisine yukarı bakacak şekilde ventral yüzü koyun. FSW% 2 oranında etanol içeren hayvan Batmak. </li><li> Bir standart 200 ul pipet uçları kullanarak, huni ve manto, iki göz arasında bulunan ana sefalik kan damarı ortaya çıkarmak için geri çekin. </li><li> 26.5 iğne, delinme sefalik kan damarı ve hemolimf 50-100 ul arasında çekilme ile 1 ml steril bir şırınga kullanarak. 1,5 mL steril bir tüp içinde buz üzerinde hemolimf yerleştirin. Not: bir hayvan birden çok kez bir bağış olarak hizmet verecek herhangi bir zamanda, sadece 10-20 ul hemolimf çekilme. Normal bir deniz suyu tankı hayvan dönün. 30 dakika içinde hayvan ihya edecek. </li><li> Taze toplanan hemocytes 500 ul Squid Ringer solüsyonu (530 mM NaCl, 10 mM KCl, 25 MgCl 2 mM, 10 mM CaCl 2 ve 10 mM HEPES tamponu, pH 7.5, S-Zil) ile yıkandı ve tekrar askıya alınır. </li><li> Hemocyte konsantrasyonları hemasitometre tarafından belirlenir ve yaklaşık 2.000 hücre odacıklı cam kapak fişleri eklenir ve oda sıcaklığında 10 dakika için cam uymak için izin verilir. Bu yoğunluk, hemocytes cam slayt yüzeyinde düzgün bir tek tabaka oluşturur. </li><li> Konak hemocytes bağlayıcı bakteri gözlemlemek için, hemocytes Vibrio fischeri ES114 ve / veya Vibrio harveyi B392, her bir yeşil floresan muhabiri içeren gibi floresan etiketli bir bakteri suşunun maruz kalmaktadır. V. fischeri ES114 ve V. harveyi B392 28 deniz suyu Tripton medya (cc) orta-log fazı ° C orbital çalkalayıcı yetiştirilmektedir. 600Nm optik yoğunluk hücre yoğunluğu belirlemek için spektrofotometrik olarak ölçülür. Bakteri santrifüj (5 dakika için 5.000 rpm) pelet, süpernatantı atılır ve pelet S-Zil sesleri yeniden askıya alınır. </li><li> 100,000 bakteri hücrelerinin de bu yüzden başına 50 ortalama hemocyte bakteri olduğunu her iki mecliste de eklenir. Hemocyte / bakteri karışımları S-Ringer solüsyonu 25 ° C 1 saat, bağlama maksimum düzeyde verim belirlenen bir süre inkübe edilir. </li><li> Sitoplazma hemocytes sonra floresan% 0.005 CellTracker Orange (Invitrogen) ile boyandı ve sonra hücrelerin görselleştirmek için S-Zil yıkanır. </li><li> Ilişkili bakteri ile Vitray hemocytes bir Zeiss Discovery V20 floresan Stereoskop veya Leica SP2 spektral lazer konfokal mikroskop ya kullanılarak floresans tarafından görüntülenebilir ve hayvan hücre, tüm yüzey üzerinde numaralandırılan. </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar Kafadan hemolimf oksijenasyon üzerine ekstrasellüler hemosiyanin ve hemoglobin içerdiğinden hemolimf, koyu mavi dönecektir. Bu yöntemi kullanarak ~ 5000 hemocytes hemolimf, ul başına ortalama elde edilecektir. Odacıklı kapak fişleri ve floresan boyama bağlılık sonra, hemocytes şeklinde parlak floresan kırmızı ve amoeboid görünmelidir. Bakteriyel yapışma için, V. fischeri ise V. (1-2 bakteri hücrelerinin kan hücresi başına) hemocytes kötü uyacaktır harveyi (ortalama 10-15 bakteri hücrelerinin hemocyte) Kesinlikle uyacaktır. <img src="/files/ftp_upload/1714/1714fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Yetişkin Hawai kuyruğu kesik kalamar Euprymna sefalik kan geminin konumunu gösteren scolopes. <img src="/files/ftp_upload/1714/1714fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 Vibrio fischeri (A) ve Vibrio harveyi (B) hemocyte maruz kalma. : Kırmızı, Hücre Tracker Turuncu, Yeşil, GFP-etiketli bakteri.

<ol><li>Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+of+host+hemocytes+during+the+initiation+of+the+squid-Vibrio+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Bull%22%5BJournal%5D)">Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis.</a> Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).</li>
<li>McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unseen+forces%3A+the+influence+of+bacteria+on+animal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Unseen forces: the influence of bacteria on animal development.</a> Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).</li>
<li>McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Symbiont+recognition+and+subsequent+morphogenesis+as+early+events+in+an+animal-bacterial+mutualism%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism.</a> Science. 254, 1491-1494 (1991).</li>
<li>Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+between+symbiotic+Vibrio+fischeri+and+the+haemocytes+of+Euprymna+scolopes%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes.</a> Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).</li>
<li>Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+winnowing%3A+establishing+the+squid-Vibrio+symbiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis.</a> Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).</li>
<li>Nyholm, S. V., Stabb, E. V., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+an+animal-bacterial+association%3A+recruiting+symbiotic+Vibrios+from+the+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Establishment of an animal-bacterial association: recruiting symbiotic Vibrios from the environment.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 10231-10235 (2000).</li>
<li>Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sampling+the+light-organ+microenvironment+of+Euprymna+scolopes%3A+description+of+a+population+of+host+cells+in+association+with+the+bacterial+symbiont+Vibrio+fischeri%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Bull%22%5BJournal%5D)">Sampling the light-organ microenvironment of Euprymna scolopes: description of a population of host cells in association with the bacterial symbiont Vibrio fischeri.</a> Biol Bull. 195, 89-97 (1998).</li>
<li>Visick, K. L., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vibrio+fischeri+and+its+host%3A+it+takes+two+to+tango%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango.</a> Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).</li>
</ol>

Bağışıklık sisteminin moleküler sinyal yararlı bakteri ve ev sahipleri arasında arabuluculuk rolü ile ilgili çalışmalar, son yıllarda, kendi Mikrobiyota ökaryotlarda eş-evrim anlayışımıza önemli katkılarda bulunmuşlardır. Squid / vibrio sistemi, bu alanda 2,3,5,6,8 temel soruları yanıtlamak için bir uysal bir model sistem olarak kendini kanıtlamıştır. Kalamar Euprymna scolopes ışık organ ışık bakteri Vibrio fischeri tarafından özel olarak kolonizasyon izin verir. Dokular o evde bakteriler, d...

<table><tbody><tr><td>Lab-Tek hazneli #1.0 borosilikat lamel sistemi (8 hazneli)</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>155411</td><td></td></tr><tr><td>26.5 G 1ml lateks içermeyen insülin şırıngası</td><td>BD Biosciences</td><td>C34551</td><td></td></tr><tr><td>Cell Tracker Orange</td><td>Invitrogen</td><td>C34551</td><td></td></tr><tr><td>SteREO Discovery V20 Mikroskobu</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SP2 Konfokal Mikroskobu</td><td>Leica Microsystems</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

hawaii bobteylleri squid hemocytes alınması euprymna scolopes ve simbiyotik ve non-simbiyotik bakteriler bağlılık gözlem

Obtaining Hemocytes from the Hawaiian Bobtail Squid Euprymna scolopes and Observing their Adherence to Symbiotic and Non-Symbiotic Bacteria

Bağışıklık sisteminin moleküler sinyal yararlı bakteri ve ev sahipleri arasında arabuluculuk rolü ile ilgili çalışmalar, son yıllarda, kendi Mikrobiyota ökaryotlarda eş-evrim anlayışımıza önemli katkılarda bulunmuşlardır. Hawaii kuyruğu kesik kalamar arasındaki simbiyotik ilişki,<em&gt; Euprymna scolopes</em&gt; Bioluminescent bakteri<em&gt; Vibrio fischeri</em&gt; Hayvan gelişimi üzerinde yararlı bakterilerin etkileri anlamak için bir model sistem olarak kullanılmıştır. Son çalışmalar, makrofaj gibi hemocytes, kalamar ev sahibinin doğuştan gelen bağışıklık sisteminin tek hücresel bileşeni, büyük olasılıkla, bu derneğin kurulması ve bakım arabuluculuk önemli bir rol oynadığını göstermiştir. Bu protokol gelen hemocytes elde etmek için nasıl göstereceğiz<em&gt; E. scolopes</em&gt; Ve daha sonra bakteriyel bağlayıcı tayinlerde bu hücreleri kullanır. Hemolimf ana sefalik kan damarı şırınga tarafından toplanan önce Yetişkin kalamar ilk anestezi. Ayıklanan hemolimf alan ev sahibi hemocytes, odacıklı cam lamelleri yapıştırılır ve daha sonra yeşil flüoresan protein etiketli simbiyotik maruz<em&gt; Vibrio fischeri</em&gt; Ve non-simbiyotik<em&gt; Vibrio harveyi</em&gt;. Hemocytes floresan boya ile zıt (Hücre Tracker Portakal, Invitrogen) ve ardından floresan mikroskopi kullanılarak görüntülendi.

Bu video, Hawaii kuyruğu kesik kalamar hemocytes (kan hücreleri) elde etmek için nasıl göstereceğiz<em&gt; Euprymna scolopes</em&gt; Hücre biyolojik ve bakteriyel adezyon tayinlerde kullanım için. Hemocytes floresan boya ile boyanmış ve GFP-etiketli bakterilere maruz kalacak.

Hawaii Bobteylleri Squid Hemocytes Alınması Euprymna scolopes Ve Simbiyotik ve Non-Simbiyotik Bakteriler bağlılık Gözlem

Yararlı bakteriler ile konakçıları arasındaki moleküler sinyal iletiminde bağışıklık sisteminin oynadığı role ilişkin çalışmalar, son yıllarda ...

Yetişkin bobtail kalamarlar tanklarından çıkarıldıktan sonra %2 etanol içeren filtrelenmiş deniz suyu çözeltisi ile anestezi altına alınır. Sefalik kan damarı aracılığıyla kanları alınır. 26,5 gauge'lik bir şırınga ile çekilen hemolenf mavi renkte görünür.Hemosiyanin varlığı nedeniyle, hemositler istenen konsantrasyona kadar seyreltilir ve sekiz bölmeli bir lam üzerine paylaştırılır. Hemositler lama yapıştıktan sonra, floresan bir boya olan hücre izleyici turuncu (cell tracker orange) ile boyanır ve floresan mikroskobunda görselleştirilebilen GFP etiketli bakterilerle karşı karşıya getirilirler. Merhaba, ben Connecticut Üniversitesi Moleküler ve Hücre Biyolojisi Bölümü'nden Spencer Olm.Ben NY Home Lab'den Andrew Collins. Bugün size Hawaii bobtail mürekkep balığından hemolenf veya kan çıkarma prosedürünü göstereceğiz. Bu opis'i hazırlıyorsunuz.Bobtail mürekkep balıkları, Hawaii kıyılarındaki mercan resifleri yakınlarında yaşayan gececil hayvanlardır ve en sevdikleri yiyecek olan karidesleri avlamak için gece dışarı çıktıklarında, simbiyotlarının ürettiği ışığı kendilerini kamufle etmek için kullanırlar. Laboratuvarda, faydalı bakterilerin hayvan dokularını nasıl kolonize ettiğini in

obtaining-hemocytes-from-hawaiian-bobtail-squid-euprymna-scolopes

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Amerikan at nalı yengeci, Limulus Polyphemus'un, tartışmalı, büyük miktarda herhangi bir omurgasız kan için en uygun bir kaynağıdır. Kan genel dolaşımı, granül amebocyte ve plazma, hemosiyanin, C-reaktif protein ve α2-makroglobulin sadece üç bol protein sadece tek bir hücre tipi, kompozisyon basit. Kan kalpten toplanır ve kan hücreleri ve plazma santrifüj ile ayrılır.

Amerikan Horseshoe Yengeç, Limulus Polyphemus&#39;un Kan Toplama

Bu protokol, eşzamanlı ve lokalize epitel hücreleri ve bakteri kültürü için bir mikroakışkan ortak kültür modeli açıklamaktadır. Bu model, varsayılan probiyotik bakteri suşlarının etkinliğini patogenezinde farklı çözünür moleküler sinyallerin rolünü araştıran gibi ekran için kullanılabilir.

Çözünür Sinyal aracılı Etkileşimleri Araştırılması için Epitel Hücreleri ve Bakteriler mikroakışkan Co-kültür

Yöntemine göre Hawaiian Bobteylleri squid prosedür...

Kolonizasyon Euprymna scolopes Squid tarafından Vibrio fischeri</em

Böcek hemocytes böcek tüm gelişim aşamalarında immün ve non-immün hem de pek çok önemli fonksiyonları, yürütmek. Hemocyte türleri ve işlev Bizim bugünkü bilgi böcek genetik modeller üzerinde çalışmalar geliyor. Burada, biz, ayıklanması ve niceleme yabani tırtıllar gelen hemocytes görselleştirmek için bir yöntem mevcut.

Vahşi Tırtıllar gelen Hemocytes ayıklamak için basit bir protokol

Bu video, Drosophila larvalarının hematopoetik ceplerinde hemosit yeniden yapışmasını değerlendiren hemosit bozukluğu testini göstermektedir. Mekanik bozukluk, yerleşik hemositleri serbest bırakarak dolaşımdaki hemosit sayısını yükseltir. İyileşme sonrası, yerleşik hemositlerin yeniden yapışması doğrulanır ve bu da geri dönüşümlülüğü gösterir.

Hemositin hematopoietik ceplere yeniden yapışmasını değerlendirmek için bir Hemosit bozukluğu testi

Heligmosomoides polygyrus yakından yüksek yaygın insan helmint enfeksiyonu benzeyen güçlü bağışıklık yetenekleri ile bir kemirgen nematod olduğunu. Burada H. uzun vadeli bakım için bir protokol tarif polygyrus yaşam döngüsü.

Yetiştirme<em&gt; Heligmosomoides Polygyrus:</em&gt; Bir immunsupresif Nematodu Parazit ve Salgılanmış Ürünleri

Kalamar Doryteuthis pealeii kromatoforlardaki nano yapılı granüllerden pigmentlerin çıkarılması için bir protokol verilmektedir.

Squid pigmentlerin çıkarılması için bir yöntem<em&gt; Doryteuthis pealeii</em

Dostum koruma davranışı cinsi Tigriopusgelgit kopepodların çoğaltılması içinde önemli bir rol oynar. Ancak, bu davranış eğitim yöntemleri de açıklanan olmamıştır. Burada biz yöntemleri tarif: bakire Tigriopus hayvan ve 2) kantitatif analiz dostum koruyan davranışlarının 1) bireysel kültür.

Bireysel Tigriopus kopepodların ve kantitatif analiz dostum koruyan davranışlarının kültür

SEM analiz tür kimlik ya da fenotipik ayrımcılık yardım etmek için etkili bir yöntemdir. Bu iletişim kuralı organizmalar üç temsilcisi tür özel morfolojik detayları inceleyerek yöntemlerini açıklar ve birçok organizma özelliklerinin incelenmesi için genel olarak geçerli olacaktır ve doku türleri.

Elektron mikroskobu (SEM) tarama morfolojik analiz için kimyasal kurutma kullanarak prokaryotik ve ökaryotik organizmaların hazırlanması

Mercanlar hem insanlar hem de deniz canlıları için önemli olan biyoçeşitlilik ekosistemleri oluştururlar. Ancak, hala tam potansiyel ve birçok mercan hücrelerinin fonksiyonu anlamıyorum. Burada, taşlı mercan hücre popülasyonlarının izolasyonu, etiketlemi ve ayrılması için geliştirilmiş bir protokol salıyoruz.

Skleraktin Hücre Popülasyonlarının İzolasyoniçin Floresan-Aktive Hücre Sıralaması

Makale, Mytilus galloprovincialis hemositlerinin motilitesine dayalı olarak kirleticilerin toksisitesinin ve ekotoksisitesinin hızlı ve hassas bir şekilde değerlendirilmesi için yeni bir in vitro yöntem önermektedir. Yöntem, daha etik ve hassas toksikolojik ve ekotoksikolojik maruziyet testlerinin geliştirilmesine katkıda bulunmayı amaçlamaktadır.

Midye (Mytilus galloprovincialis) Hemosit Motilitesine Dayalı Toksikolojik ve Ekotoksikolojik Bir Test

Keşfedin Euprymna scolopes hemosit izolasyonu ve bakteri adezyon analizleri için floresan boyama yöntemini. Bu protokol hücre-bakteri etkileşimlerini görselleştirmek için güvenilir bir yaklaşım sunar.

Hawaii Bobteylleri Squid Hemocytes Alınması Euprymna scolopes Ve Simbiyotik ve Non-Simbiyotik Bakteriler bağlılık Gözlem

Daha fazla video keşfet