Name: Ferumoxides implantasyonu Kıkırdak Kusur İnsan Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-04-05T17:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 39 s
Description: Öğrenin, Ferumoxides ile etiketlenmiş insan mezenkimal kök hücreleri kullanarak kıkırdak kusurları için matris ilişkili kök hücre implantları üretme yöntemini. Bu tekrarlanabilir teknik, MR görüntüleme ile hücre takibini mümkün kılar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Ulusal Artrit Enstitüsü ve Kas-iskelet Deri Hastalıkları, NIH RO1AR054458 bir hibe ile desteklenmiştir.

1. Endorem ile hMSCs Etiketleme <ol><li> Hücreler,% 80 izdiham etiketleme en az 18 saat önce büyüdü. </li><li> Bu süre zarfında 100 ug Fe / ml serum ücretsiz medya bir doz örnek Endorem ekleyerek, etiketleme ortam hazırlanır. </li><li> Hücreleri izdiham büyüdü sonra, kültür medya aspire edilir ve hücreler PBS veya serum ücretsiz medya ile 1x yıkanır. </li><li> Daha sonra, durulama çözüm aspire edilir ve önceden hazırlanmış etiketleme medya eklenir. Bu hücreler daha sonra 37 inkübe ° C,% 5 CO 2 4 saat. </li><li> 4 saat inkübasyondan sonra, medya etiketleme aspire edilir ve hücreler PBS ile durulanır ve her zamanki gibi tripsinize. </li><li> Bir kez tripsinize, hücreler PBS ile 3x yıkanır ve 400rcf 5 dakika santrifüj edilir. </li><li> Bu yıkama adımdan sonra, hücreler, yeniden süspanse sayılır, canlılığı açısından değerlendirildi ve deneyler için gerekli olarak kullanılır. </li></ol> 2. Agaroz hazırlanması <ol><li> Hücrelerin etiketli edildikten sonra agaroz çözeltisi hazırlamak için zamanı. </li><li> Ince bir ölçekte, agaroz toz 80mg tartılır ve PBS 2ml eklendi. </li><li> Bu çözüm daha sonra hafifçe sarsıldı ve otoklava. </li><li> Yaklaşık 40 dakika sonra, sıvı agaroz çözüm otoklav alınacak. Hacmi önceden ısıtılmış PBS ile ölçülür ve buna göre ayarlanması gerekir. </li><li> Sonra çözüm 42 kadar soğutulur ° C </li></ol> 3. Masi Oluşturma <ol><li> Agaroz çözümü istenilen sıcaklığa ulaştığında, hücreler sayılır ve son kez bir 1.5ml Eppendorf tüp santrifüj. </li><li> Santrifüj sonra, süpernatant atılır ve hücreler 30 x 10 6 hücre / ml 'lik bir konsantrasyon ulaşmak için DMEM ile karıştırılır. </li><li> Şimdi hücreler 42 ° C sıcak agaroz ile karıştırılır. </li><li> Soğuk bir pipet agaroz ucu içinde katılaşmaya yol açabilir, bu nedenle sıcak steril PBS pipetleme yukarı ve aşağı ucu ön ısıtma için tavsiye edilir </li><li> Şimdi, böylece homojen bir süspansiyon oluşturulan medya alınır ve hücre-medya-süspansiyon ile iyice karıştırılır olarak agaroz aynı hacimde. </li><li> Agaroz sağlamlaştırmak için yeterli soğumaya kalmaması karıştırma Eppendorf tüp önceden ısıtılmış bir su banyosu içinde tutun. </li><li> Süspansiyon homojen olduğunda, hücrelerin defekt implante edilirler. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1793/1793fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 kıkırdak defektleri implante hMSCs ile patella örnek Koronal T2 ağırlıklı SE görüntüleri (TR 4000 ms / TE 18.27 ms).

<ol><li>Mauck, R. L., Yuan, X., Tuan, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chondrogenic+differentiation+and+functional+maturation+of+bovine+mesenchymal+stem+cells+in+long-term+agarose+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Chondrogenic differentiation and functional maturation of bovine mesenchymal stem cells in long-term agarose culture.</a> Osteoarthritis Cartilage. 14, 179-189 (2006).</li>
<li>Pittenger, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilineage+potential+of+adult+human+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells.</a> Science. 284, 143-147 (1999).</li>
<li>Rahfoth, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+allograft+chondrocytes+embedded+in+agarose+gel+into+cartilage+defects+of+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Transplantation of allograft chondrocytes embedded in agarose gel into cartilage defects of rabbits.</a> Osteoarthritis Cartilage. 6, 50-65 (1998).</li>
<li>Henning, T. D., Boddington, S., Daldrup-Link, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labeling+hESCs+and+hMSCs+with+iron+oxide+nanoparticles+for+non-invasive+in+vivo+tracking+with+MR+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Labeling hESCs and hMSCs with iron oxide nanoparticles for non-invasive in vivo tracking with MR imaging.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
</ol>

Açıklanan protokol demir oksit nano ile MKH etiket ve kıkırdak hasarlarının içine bu etiketli MKH implant tekrarlanabilir bir şekilde sağlar. Bu teknik, MR, Masi yetmezliği erken teşhis sağlayan kıkırdak hasarlarının kök hücre nakli non-invaziv bir tasviri izin verir. Etiketli hücreleri efflux çıkığı ya da MR görüntüleri nakli sitesinden etiket yok dayalı teşhis edilebilir. Bu olayların bir erken tanı ve arzu edilen bir durumdur ve hastanın gereksiz alternatif invaziv tanısal işlemler önleyecektir. Masi sonuçların teşhi...

<table><tbody><tr><td>D-MEM Yüksek Glikoz</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5648</td><td></td></tr><tr><td>PBS (Ca&lt;sup&gt;++&lt;/sup&gt;, Mg&lt;sup&gt;++&lt;/sup&gt; içermeyen)</td><td></td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA %0,05</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>25399-120</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td></td><td>Hyclone</td><td>SH30071.03</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin/Streptomisin</td><td></td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Ferumoksitler (Endorem)</td><td></td><td>Guerbet</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Agaroz Tip VII</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9045</td><td>Agarozu, final konsantrasyonu %4 olacak şekilde PBS içinde seyreltin</td></tr></tbody></table>

ferumoxides implantasyonu kıkırdak kusur İnsan mezenkimal kök hücreler etiketli

Implantation of Ferumoxides Labeled Human Mesenchymal Stem Cells in Cartilage Defects

Doku mühendisliği alanında özel hücreler ve fonksiyonel doku rejenerasyonu doğru mühendislik, hücre biyolojisi ve tıp ilkelerini bütünleştiren. Matrix ilişkili kök hücre implantlar (Masi) artritik veya travmatik eklem yaralanmaları nedeniyle kıkırdak defektleri yeniden hedefliyoruz. Yetişkin mezenkimal kök hücreler (MKH) chondrogenic soy hücrelerin içine ayırt etme yeteneğine sahip ve hücre tabanlı eklem kıkırdağının onarım teknolojileri için umut verici sonuçlar göstermiştir. Otolog MKH, dokuların çeşitli izole edilebilir farklılaşma potansiyelini kaybetmeden hücre kültürlerinde genişletilebilir, ve in vitro ve in vivo 1, 2 chondrogenic farklılaşma göstermiştir. Kıkırdak hasarlarının yerel tutma ve nakledilen MKH canlılığı sağlamak amacıyla, bir iskele de sonraki farklılaşması ve proliferasyonu destekler ihtiyaç vardır. Iskele kılavuzları doku oluşumu mimarisi ve kök hücreleri tarafından üretilen ekstraselüler matriks, genişletmek için izin verir. Önceki soruşturma% 2 agaroz iskele istikrarlı hyalin kıkırdak gelişimini desteklemek ve bağışıklık yanıtlarını 3 neden olmadığını göstermiştir. Uzun vadeli tutma Masi nakledilen kök hücrelerin kıkırdak rejenerasyonu için kritik öneme sahiptir. Demir oksit nano ile MKH Etiketleme non-invaziv MR görüntüleme teknikleri 4 in vivo izleme uzun vadeli sağlar. Bu sunum, demir oksit nano-etiketleme MKH, kıkırdak hasarlarının hücre agaroz yapıları ve bu yapıları implantasyonu nesil tekniklerini gösterecektir. Etiketli yapıları MR görüntüleme ile non-invaziv takip edilebilir.

Sunumun Amaç, kıkırdak defektleri, MR görüntüleme ile görüntülendi olabilir matris ilişkili kök hücre implantları üretmek için son derece tekrarlanabilir bir yöntem göstermektir. Kök hücreler, agaroz ile karışık FDA onaylı Ferumoxides, kıkırdak hasarlarının içine implante edilerek 7T MR tarayıcı ile görüntülü olarak etiketlenir.

Ferumoxides implantasyonu Kıkırdak Kusur İnsan Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli

Doku mühendisliği alanı; spesifik hücrelerin ve ... rejenerasyonu yönünde mühendislik, hücre biyolojisi ve tıp prensiplerini entegre eder.

Sunumun amacı, kök hücre tabanlı tedavilerin takibi için para oksitlerle işaretlenmiş HME'ler kullanılarak MASI üretiminin kolay ve tekrarlanabilir bir yöntemini göstermektir. MR Görüntüleme işaretlemesiyle, medya hazırlanıp bir T 75 flaskına eklenir ve dört saat boyunca inkübe edilir. Ardından hücreler tripsinize edilir ve yıkanır.Yıkama işleminden sonra hücreler üç kez yeniden süspande edilir ve tüpe agros jel eklenir. Artık hücreler, kıkırdak defektlerine implantasyon için hazırdır. Merhaba, ben Alex.Ben High Delta Blink'ten, California Üniversitesi San Francisco Radyoloji Bölümü Kontrast Madde Laboratuvarı'ndan geliyorum. Ben de Kontrast Madde Laboratuvarı'ndan Lydia Men.Bugün size, mezankimal kök hücrelerin demir oksit nanoparçacıklarıyla etiketlenmesi, hücre agregat konstrüktlerinin oluşturulması ve bu konstrüktlerin kıkırdak defektlerine implante edilmesi prosedürünü göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu prosedürü, mezankimal kök hücreleri manyetik rezonans görüntüleme ile non-invaziv olarak takip etmek için kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım.Başlangıç olarak, hücreler etiketlemeden en az 18 saat önce %80 konfluense ulaşıncaya kadar büyütülür. Bu süre zarfında, hücreler konfluens

implantation-ferumoxides-labeled-human-mesenchymal-stem-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Değerlendirilmesi için yeni kök hücre tedavileri ile enjekte edilen hücrelerin in vivo takip non-invaziv önemlidir. Bu video demir oksit bazlı kontrast ajanlar ile insan mezenkimal ve embriyonik kök hücreleri, in vivo sonraki MR, in vivo olarak nasıl etiketlemek için size gösterecektir.

Demir Oksit hESC ve hMSCs Etiketleme MR Görüntüleme in vivo Takip Non-Invasive Nanopartiküller

İnsan perivasküler kök hücreler (PSC'ler) mezenkimal kök hücreler (MKH) benzer iskelet doku yenilenmesine yönelik yeni bir kök hücre sınıfı vardır. PSC'ler standart bir yağ emme prosedürleri sırasında temin adipoz dokusu FACS (floresans aktive hücre ayırma) yoluyla izole edilebilir, ardından kemik oluşumunu sağlamak için bir osteoendüktif iskelesi ile...

Kemik Rejenerasyon için İnsan perivasküler Kök Hücre kullanın

Biz, FDA onaylı, süperparamanyetik demir oksit (SPIO), ferumoxytol (Feraheme) ile kök hücre etiketleme ve izleme için kullanılan bir tekniktir açıklar. Hücresel görüntüleme tekniği, manyetik rezonans görüntüleme (MR) görüntüleme için kullanır Bu, başarılı ya da başarısız hastalarda kök hücre engraftments uzun vadeli izleme ve teşhis için kolay erişilebilir.

Kök Hücreler Ferumoxytol, FDA Onaylı Demir Oksit Nanopartikül Etiketleme

Tavşan diz ekleminde kıkırdak defektlerinin tedavisi için bir deney tekniği tarif edilmektedir. Bir matris üzerinde numaralı seribaşı otolog kondrosit implantasyonu tatmin edici uzun vadeli sonuçlar sağlayan eklem kıkırdağı lezyonların yeniden ve onarım için bir iyi kabul edilen bir yöntemdir. Matrix destekli otolog kondrosit transplantasyonu (MACT) bir standart ve klinik olarak kurulan implantasyon yöntem sunmaktadır.

Bir Tavşan Modelinde Kondral Kusurların Tadilat ve Onarım için matris destekli Otolog Kondrosit Nakli

Tavşan diz eklemi osteokondral defektlerinin tedavisi için bir deney tekniği tarif edilmektedir. Osteokondral kusurları içine allojenik mezenkimal kök hücrelerin implantasyon doku mühendisliği alanında umut verici bir gelişme sağlar. Fibrin pıhtısı hücre...

Fibrin pıhtısı içinde allojenik Mezenkimal Kök Hücre implantasyonu ile Tavşan Diz Eklemi içinde Osteokondral Kusur tedavisi

otolog serum ile insan Mezenkimal Stromal Hücreleri (hMSCs) Kültürleme, ksenojenik malzeme ve diğer olumsuz etkileri ile reddi riskini azaltır. Aynı zamanda, taze hMSCs sağlayabilir mezodermal progenitörlerin bir alt kümesi, bir geri kazanımını sağlar. otolog fibrin pıhtısı içinde hMSCs gömülmesi kolay kullanım ve etkin bir cerrahi implantasyon sağlar.

Mezenkimal Stromal Otolog Koşullarında Hücre Kültürü ve Teslimat: Ortopedik Uygulamalar için Akıllı Yaklaşım

Kök hücrelerden kondrogenezis kültür koşulları ince ayar gerektirir. Burada, hücreleri yoğunlaştırmak için bir manyetik yaklaşım sunmak, önemli bir adım kondorjenez başlatmak için. Buna ek olarak, bir biyo-reaktör içinde dinamik olgunlaşma hücresel yapıların mekanik uyarma uygulanır ve kıkırdak hücre dışı matris üretimini artırdığını göstermektedir.

Kıkırdak Yenileme için 3D Manyetik Kök Hücre Toplama ve Biyoreaktör Olgunlaşma

Bu iletişim kuralı tarafından far-red floresan intra artiküler (IA) enjeksiyon yoluyla bir sıçan diz osteoartrit (KOA) modelinde etiketleme hücre sebat ve biodistribution insan yağ elde edilen Mezenkimal kök hücrelerin (haMSCs) izlemek için etkili bir yöntem açıklanır.

Vivo İnsan yağ elde edilen Mezenkimal kök hücrelerin sıçan diz osteoartrit modelinde floresan lipofilik membran boya ile izleme

Burada sunulan non-invaziv mezenkimal kök hücre için bir protokol (MSC) teslim ve travmatik beyin hasarı bir fare modeli nde izleme. Süperparamanyetik demir oksit nano partikülleri, msc etiketlemesi için manyetik rezonans görüntüleme (MRG) prob ve gerçek zamanlı MRG kullanılarak intranazal doğumdan sonra invaziv in vivo izleme için non-invaziv in vivo izleme olarak kullanılır.

Travmatik Beyin Hasarı Murine Modelinde İntranazal Doğum sonrası MRG kullanarak Süperparamanyetik Demir Oksit etiketli Mezenkimal Kök Hücrelerin Takibi

Mezenkimal kök hücrelerden üretilen yapay kıkırdak dokusunun implante edilmesiyle endokondral kemikleşme yoluyla kemik tedavisi, geleneksel tedavilerin dezavantajlarını aşma potansiyeline sahiptir. Hyaluronik asit hidrojelleri, in vivo kaynaşmış greftler arasında vaskülarizasyon ile entegre kemik oluşturmanın yanı sıra homojen olarak farklılaşmış kıkırdak greftlerinin ölçeklendirilmesinde etkilidir.

Mezenkimal Kök Hücreler Kullanılarak İn Vivo Endokondral Ossifikasyon Yoluyla Entegre Kemik Oluşumu

Burada, kemik ve kıkırdak dokusu yenileme çalışmaları için uygun deneysel bir model oluşturmak amacıyla, koyun dizlerinde kontrollü osteokondral lezyonlar oluşturmak için entegre bir protokol sunuyoruz. Protokol, femoral kondilde tam kalınlıkta osteokondral defekt oluşturmak için hayvan refahı etkilerini ve sonuçlardaki değişkenliği en aza indiren teknikler kullanarak bir yöntem ortaya koyuyor.

Tam Kalınlıkta Osteokondral Defektli Bir Koyun Modelinin Oluşturulması ve Değerlendirilmesi

Öğrenin, Ferumoxides ile etiketlenmiş insan mezenkimal kök hücreleri kullanarak kıkırdak kusurları için matris ilişkili kök hücre implantları üretme yöntemini. Bu tekrarlanabilir teknik, MR görüntüleme ile hücre takibini mümkün kılar.

Ferumoxides implantasyonu Kıkırdak Kusur İnsan Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli

Daha fazla video keşfet