Ferumoxides implantasyonu Kıkırdak Kusur İnsan Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli
5 Nisan 2010
Sunumun Amaç, kıkırdak defektleri, MR görüntüleme ile görüntülendi olabilir matris ilişkili kök hücre implantları üretmek için son derece tekrarlanabilir bir yöntem göstermektir. Kök hücreler, agaroz ile karışık FDA onaylı Ferumoxides, kıkırdak hasarlarının içine implante edilerek 7T MR tarayıcı ile görüntülü olarak etiketlenir.
Sunumun amacı, kök hücre bazlı tedavinin izlenmesi için HME'ler olarak adlandırılan para oksitler ile kolay ve tekrarlanabilir bir MASI üretim yöntemini göstermektir. MR Görüntüleme etiketlemesi ile besiyeri hazırlanır, bir T 75 şişesine eklenir ve dört saat boyunca inkübe edilir. Daha sonra hücreler tripler, inize edilir ve yıkanır.
Yıkamadan üç kez sonra hücreler yeniden süspanse edilir ve tüpe agros jel eklenir. Artık hücreler kıkırdak kusurlarına implantasyon için hazırdır. Merhaba, ben Alex.
California San Francisco Üniversitesi Radyoloji Bölümü'ndeki Kontrast Madde Laboratuvarı olan High Delta Blink laboratuvarından yeniden soyulmam gerekiyor. Ben Lydia Men. Aynı şekilde Kontrast Medya Laboratuvarı'ndan.
Bugün size ilaç hemo kök hücrelerini demir oksit nanopartikülleri ile etiketlemek, hücre agros yapıları oluşturmak ve bu yapıları kıkırdak kusurlarına implante etmek için bir prosedür göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu işlemi manyetik rezonans görüntüleme ile mezenkimal kök hücreleri non-invaziv olarak izlemek için kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım.
Başlamak için, hücreler etiketlemeden en az 18 saat önce %80 oranında büyütülür. Bu süre zarfında, etiketleme ortamını, hücreler birleştiğinde kullanıma hazır olacak şekilde hazırlayın. Bunu yapmak için, serumsuz ortamın mililitresi başına 100 mikrogram demir dozunda numuneye son durum ekleyin.
Hücreler birleşene kadar büyüdükten sonra, kültür ortamını aspire edin ve hücreleri PBS veya serum içermeyen ortam ile yıkayın. Ardından, durulama solüsyonunu aspire edin ve hazırlanan etiketleme ortamını ekleyin. Hücreleri dört saat boyunca 37 santigrat derece,% 5 karbondioksitte inkübe edin.
Dört saatlik inkübasyondan sonra, etiketleme ortamını aspire edin. Hücreleri PBS ile durulayın ve ardından tripsin buzu ile durulayın. Bir kez denedikten sonra, hücreleri PBS ile üç kez yıkayın ve beş dakika boyunca 400 RCF'de santrifüjleyin.
Bu yıkama adımından sonra, hücreleri yeniden canlandırın, askıya alın, sayın, canlılık açısından değerlendirin ve son olarak deney için gerektiği gibi kullanın. Şimdi matris ilişkili kök hücre implantlarının nasıl oluşturulacağını görelim. Taze bir tarımsal çözelti hazırlayarak başlayın.
Agros 42 santigrat dereceye kadar soğutulduktan sonra, hücreleri sayın ve 1.5 mililitrelik bir einor tüpünde santrifüjleyin. Santrifüjlemeyi takiben, süpernatanı atın ve hücreleri ılık aros ile karıştırmadan önce mil'de 30 kez 10 ila altı hücreye ulaşmak için hücreleri dobe echo'nun modifiye edilmiş kartal ortamıyla karıştırın, pipet ucunu sıcak, steril PBS'yi pipetleyerek önceden ısıtın. Bu, agroların ucun içinde katılaşmasını önleyecektir.
Daha sonra ortamla aynı hacimde aros alın ve hücre ortamı süspansiyonu ile iyice karıştırın ve kabarcık oluşmamasına dikkat edin. Karıştırma sırasında einor tüpünü önceden ısıtılmış bir su banyosunun içinde tutun, böylece süspansiyon homojen olduğunda agros katılaşacak kadar soğumaz. Hücreler defekte implante edilir ve artık MR için hazırdır. Görüntüleme.
Şimdi size bazı temsili sonuçlar göstereceğiz, ilki etiketleme tekniğimiz ve ikincisi implantasyon tekniğimiz. Etiketlemeden sonra, şişelerdeki hücreler hala etiketlenmemiş hücrelerle aynı görünüme sahiptir. Beklendiği gibi, etiketli hücrelerin canlılığı, Kaspaz üç testinde gösterildiği gibi değişmez.
Etiketli hücrelerin agros ile kombinasyonu, T iki ağırlıklı MR görüntülerinde görüldüğü gibi implantlarda bir sinyal kaybına yol açar, etiketsiz hücreler herhangi bir sinyal göstermez. Hücre agrosunun bölümlerini azaltın, Prusya mavisi ile leke oluşturur. Hücre içi demir birikimini onaylayın.
Az önce size mekanik kök hücreleri demir oksit nanopartikül uç geçici ile nasıl etiketleyeceğinizi gösterdik. Etiket hücreleri ile bir agros yapısı nasıl oluşturulur ve bunların kıkırdak kusurlarına nasıl implante edileceği. Bu prosedürü yaparken, hücre ortamı süspansiyonuna sıcak aros eklemeden önce pipet ucunuzu önceden ısıtmayı unutmamak önemlidir.
Mr.Imaging'in herhangi bir baloncuk oluşumunu önlemesi de çok önemlidir. İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde iyi şanslar.
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin
Genel Bakış
Bu sunum, kıkırdak kusurları için matrisle ilişkili kök hücre implantlarını üretmek için tekrarlanabilir bir yöntem gösterir. Yöntem, kök hücreleri etiketlemek için FDA onaylı Ferumoksitler kullanır ve bunlar daha sonra 7T MR tarayıcısı kullanılarak görselleştirilir.
Çalışmanın Ana Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Kök Hücre Tedavisi
- Tıbbi Görüntüleme
Arka Plan
- Matrisle ilişkili kök hücre implantları, kıkırdak kusurlarının onarılmasında kritik öneme sahiptir.
- Ferumoksitler, kök hücreleri görüntüleme ve izlemek için FDA onaylıdır.
- MR görüntüleme, implantları görselleştirmek için invazif olmayan bir yöntem sağlar.
- Kök hücre tedavilerinin klinik uygulamaları için tekrarlanabilirlik esastır.
Çalışmanın Amacı
- Matrisle ilişkili kök hücre implantlarını üretmek için bir yöntem sunmak.
- MR görüntülemeyi kök hücre implantlarını takip etmek için kullanmayı göstermek.
- Yöntemin araştırmacılar tarafından kolay ve tekrarlanabilir olduğundan emin olmak.
Kullanılan Yöntemler
- Kök hücreler Ferumoksitler ile etiketlenir.
- Hücreler implantasyon için agaroz ile karıştırılır.
- Implantlar kıkırdak kusurlarına sokulur.
- Görselleştirme, 7T MR tarayıcısı kullanılarak gerçekleştirilir.
Ana Sonuçlar
- Yöntem, tekrarlanabilir kök hücre implantları başarılı bir şekilde üretir.
- MR görüntüleme, kıkırdak kusurlarındaki implantları etkili bir şekilde görselleştirir.
- Ferumoksitlerle etiketleme, kök hücrelerin net izlenmesini sağlar.
- Süreç basittir ve diğer araştırmacılar tarafından tekrarlanabilir.
Sonuçlar
- Bu yöntem, kıkırdak onarımında kök hücre tedavilerinin potansiyelini artırır.
- MR görüntüleme, kök hücre implantlarını izlemek için değerli bir araç olarak hizmet eder.
- Gelecekteki çalışmalar bu tekrarlanabilir yöntem üzerine klinik uygulamalar için inşa edebilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
Reliable tracking and retention of mesenchymal stem cells (MSCs) in cartilage repair models is a critical challenge for translational tissue engineering and regenerative medicine pipelines. The use of iron oxide nanoparticle labeling and MR imaging enables non-invasive, quantitative monitoring of cell-based implants, supporting predictive confidence in early-stage therapeutic development. This approach strengthens mechanistic de-risking and informs go/no-go decisions for cell therapy portfolios targeting joint and cartilage disorders.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables direct interrogation of MSC retention and viability in engineered cartilage environments.
- Supports biological de-risking by confirming cell localization and persistence post-implantation.
- Facilitates functional target validation for cell-based regenerative strategies.
Screening & Assay Development
- Provides a reproducible workflow for generating and labeling MSC-agarose constructs.
- Standardizes MR imaging as a quantitative readout for implant tracking.
- Enables assay scalability and cross-study comparability for cell therapy candidates.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant models of cartilage injury and repair.
- Supports translational continuity by enabling non-invasive, longitudinal monitoring of cell fate.
- Informs risk-adjusted advancement of regenerative medicine assets.
Pipeline & Workflow Integration
This method integrates into the discovery-to-preclinical continuum for cell-based cartilage repair, bridging in vitro validation and in vivo tracking of therapeutic MSCs.
- Discovery Biology: Confirms MSC viability and localization in engineered constructs for hypothesis testing.
- Screening: Delivers standardized, quantitative MR imaging outputs for comparative analysis.
- Analytics: Enables measurement of cell retention and distribution within cartilage defects.
- Translational Research: Provides continuity from cell labeling through in vivo monitoring in preclinical models.
- Enterprise Reuse: Establishes a platform workflow for tracking diverse cell therapy candidates in tissue engineering applications.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence in cell therapy retention and viability.
- Operational Value: Standardizes cell labeling and imaging protocols for reproducibility.
- Strategic Value: Reduces mechanistic ambiguity and supports informed portfolio triage.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of regenerative medicine programs.
Implementation Considerations
- Requires expertise in stem cell culture, nanoparticle labeling, and MR imaging.
- Needs access to cell culture facilities and high-field MR imaging infrastructure.
- Demands rigorous cross-team standardization of labeling and imaging protocols.
- Adaptation may be needed for different cell types or scaffold materials.
- Careful handling is required to avoid artifacts such as air bubbles during construct preparation.
