Name: Farelerin Hasat Sperm ve Suni Tohumlama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Öğrenin farelerde suni tohumlama yöntemini; erkeklerden sperm çıkarımı ve dişilere aşılama tekniklerini görsel olarak keşfedin. Bu yöntem transgenik çalışmalarda hassas zamanlama gerektiren gelişimsel biyoloji araştırmaları için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Mike kemirgen üreme Peromyscus Genetik Stok Center onun değerli bilgiler için, sabır ve bilgi Dewey teşekkür etmek istiyorum.

Suni dölleme Suni döllenme şansını artırmak için tüm kadın hamile olduğunu doğal çiftleşmelerin yerine kullanılır. 2 erkek her 1 süperovulasyon kadın veya östrus içinde olduğu bilinen bir kadın için kullanılmıştır. Olgun erkek fareler caudae epididymides% 9 süt süspansiyon yerleştirilir ve 18 gauge iğne ile açık dilimlenmiş. Sperm birkaç dakika için serbestçe yüzmeye izin verildi ve ardından karışımı epididymides alınmıştır. Süspansiyon izdiham ve hareketli sperm mikroskop ile değerlendirildi. A künt 22 göstergesi 1 ½ inç uzunluğunda iğne sperm yönetmek için kullanılır oldu. 120 ° bend iğne aşağı 3 / 4 th hakkında yerleştirildi. 0.05mls enjekte iğne ve 0.025 bend vajina içine yerleştirildi. Asistan, uygun pozisyonda kadın tutmak için kullanılır ise, anesteziklerin kullanımı gerekli değildir. Hazırlık <ol><li> 4 erkek 6 kadın için kullanın </li><li> Vivaryum erkek Euthanize </li><li> % 9 oranında süt, süt tozu yaklaşık 5 ml hazırlayın </li><li> Küçük Petri kabındaki 1.5 ml. </li><li> Epididymus ve vas deferens Kes </li><li> 1.5ml% 9 sütü koyun </li><li> Iki 18 numaralı insülin iğnesi kullanarak ve iğne ile uzun kesme hareketi kullanarak, sperm serbest epididymus ve vas deferens açmak dilim </li><li> Doku üzerinde sol dışarı atın ve mikroskop altında sperm kontrol </li></ol> Enjeksiyon <ol><li> 120 ° açıyla künt iğne kullanın. </li><li> Eli tutun ve fare karışımı enjekte edilir. Rahatsız tutma ve enjekte bir kişi varsa, iki kişi de kullanılabilir. Bilen biri olarak bu prosedürü nasıl etkileyebileceği hiçbir anestezi kullanılmalıdır. </li><li> Dişi başına sperm / süt karışımı kullanın 0.05ml </li></ol> Alıcı kadın <ol><li> Alıcı kadın vajinal smear (bu zaman alıcı kadın proestrus / östrüs olmalıdır) yapın </li><li> 5. Gün östrus ulaşmış değil kadınlarda muhtemelen kullanılmaktadır olmamalı </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Petri Kabı</td><td>Araç</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-30</td><td></td></tr><tr><td>18 G iğne</td><td>Araç</td><td>BD Biosciences</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>Toz süt</td><td>Reaktif</td><td>Herhangi bir Tedarikçi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL şırınga</td><td>Araç</td><td>National Scientific Company</td><td>S7510-1</td><td></td></tr><tr><td>Pens</td><td>Araç</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5060</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Araç</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s Fosfat Tamponlu Salin</td><td>Reaktif</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14200-075</td><td></td></tr><tr><td>22 G küt uçlu iğne</td><td>Araç</td><td>Give to me</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

farelerin hasat sperm ve suni tohumlama

Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice

Cinsi Peromyscus (geyik fareler) Kemirgenler en yaygın yerli Kuzey Amerika memeliler. Peromyscus türlerin toksikoloji, epidemiyoloji, ekoloji, davranış ve genetik çalışmalar da dahil olmak üzere geniş bir yelpazede araştırma kullanılır. Burada suni tohumlama gösteriler için yararlı bir model sağlar. Burada görüntülenir benzer yöntemler daha önce birkaç geyik Fareler üzerinde yapılan çalışmalarda, henüz herhangi bir ayrıntılı protokol yayımlanmıştır. Burada temel suni tohumlama yöntemi göstermektedir. Bu yöntem, sperm, epididim ve vas deferens izole kemirgen, sonra testis açılan gerektirir. Süt karışımı olgun sperm, yumurtlama zamanında, kadın üreme sisteminde yerleştirilir. Döllenme, embriyo gelişimi zamanlaması için her gün 0 olarak sayılır. Embriyolar sonra istenilen zaman noktasında alınan ve manipüle edilebilir. Suni tohumlama, embriyo tam olarak elde etmek için zamanlama çok önemli ya da zor çeşitli kemirgen türleri kullanılabilir. Bu teknik, hemen ve / veya çiftleşme değerlendirmek zordur arkadaşı olmayabilir türler veya suşları (çoğu Peromyscus dahil) için hayati önem taşımaktadır. Yanı sıra, gelişim, ilerleme ve / veya transgenik çalışma eşleme ya da suni tohumlama, embriyo gelişimi için kesin zamanlama sağlar. Döllenme garanti beri hayvanların azaltılmış numaraları kullanılabilir. Bu yöntem Peromyscus sistemi sürdürmek için hayati olmuştur ve umarım aynı zamanda başkalarının yararına olacaktır.

Bu protokol, erkeklerin testislerde sperm açılan ve daha sonra dişi farelerin döllemeden yöntemleri göstermektedir. Bu prosedür de transgenik çalışma olarak gelişim çalışmalarında hassas zaman gerekli olduğunda yararlıdır.

Farelerin Hasat Sperm ve Suni Tohumlama

Peromyscus cinsine ait kemirgenler (geyik fareleri), Kuzey Amerika'nın en yaygın yerli memelileridir. Peromyscus türleri, çok geniş bir araştırma yelpazesinde kullanılmaktadır...

Ben, California Irvine Üniversitesi'nde Dr. Paul Verana'nın laboratuvarından Amanda Dli. Bugün yapay dölleme prosedürünü göstereceğim. Bu işlem, spermin erkekten çıkarılmasını ve ardından bu spermin ovülasyon dönemindeki bir dişiye aktarılmasını kapsamaktadır.Bunu yapmanızın nedeni, erkek ve dişinin sizin istediğiniz zamanda çiftleşmeyebilmesi veya hiç çiftleşmemesi olabilir. Ayrıca bu yöntem, eğer bir fare hattı çok önemliyse, dondurulmuş sperm ile de uygulanabilir. Birçok kılavuzun ve derginin farenin tutulmasıyla ilgili doğru prosedürü göstermemesi nedeniyle, bu işlemin uygulamalı olarak gösterilmesi oldukça önemlidir.Dişi fareye herhangi bir anestezik uygulanmadan, tek bir kişi tarafından tutulabilir ve enjeksiyon yapılabilir. Bu durum, dişinin hiçbir şekilde zarar görmemesini sağlar ve döllenmenin mümkün olan en iyi şekilde gerçekleşmesine olanak tanır. Kullanacağımız disseksiyon aletleri, iki set keskin pens ve bir çift keskin makastır.Bunlar, testisler ve beslenen yağ boyunca en iyi farkı izole etmek için kullanılacaktır. Bu işlem tamamlandığında, epididimi izole etmek için penset kullanacağız. Spermleri dişiye aktarmak için %9'luk süt kullanılır.Yerel marketten temin edilen

harvesting-sperm-and-artificial-insemination-of-mice

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Burada fare sperm dondurulması için yeni geliştirilen I • Cryo kiti göstermektedir. Sperm ile dondurulmuş çözülmüş İki hücreli evre embriyo gelişimi bu kit kullanımı ile 5 fare suşlarının sürekli geliştirildi. 1.5 yıllık bir dönemde, 49 genetiği değiştirilmiş fare hatları I • Cryo kiti ile sperm dondurulması tarafından arşivlendiği ve daha sonra başarılı IVF tarafından kurtarıldı.

I · Cryo Kit kullanarak Fare Sperm Kriyoprezervasyon ve Kurtarma

Fare oositlerinin mikroenjeksiyonu hem klasik transgenezis ( yani, transgenlerin rastgele bütünleşmesi) hem de CRISPR aracılı gen hedeflemesi için yaygın olarak kullanılır. Bu protokol, kalite kontrolü ve genotiplendirme stratejileri üzerinde özel bir vurguyla mikroenjeksiyondaki en son gelişmeleri gözden geçiriyor.

Oositlerin Mikroenjeksiyonu ile Genetiği Değiştirilmiş Farelerin Üretilmesi

Meni الرسالة sperm seminal jel--dan özgür olmak için gereklidir. Bu çalışma yordamları kadın üreme sistemi sonrası cinsel birleşme sperm toplama ve meni الرسالة Süre ölçümünü sağlar.

Meni kadın üreme sistemi ve meni الرسالة farelerde ölçümü sonrası çiftleşme koleksiyonu

Burada, lentiviral bir vektör perivitelline alanda bir döllenmiş yumurta, basit bir iğne ile transgene entegrasyon ve kurucusu transgenik fareler ile yüksek etkinlik üretimini teşvik için bir protokol mevcut.

Lentiviral aracılı transgenik fareler üretimi: doğrudan eğitim kurucuları basit ve son derece etkili bir yöntem

Burada, tek hücreli embriyoların kriyopreservation için değiştirilmiş bir yöntem yanı sıra genetik olarak değiştirilmiş farelerin verimli nesil için dondurulmuş çözülmüş embriyolar ve elektroporasyon kullanarak çiftler bir protokol sıyoruz.

Genetiği Değiştirilmiş Farelerin Yüksek Verimli Üretimi için Dondurulmuş Çözülmüş Embriyoların Kullanımı

Endometriozisin birçok kemirgen modeli teknik karmaşıklık, tekrarlanabilirlik ve / veya bağışıklığı baskılanmış hayvanlara veya özel muhabir farelere ihtiyaç duyma ile sınırlıdır. Bağımsız olarak doğrulanabilir, objektif puanlama sistemine sahip ve ovaerektomi veya sağkalım ameliyatı için gereklilik olmayan herhangi bir deneysel fare kullanarak basitleştirilmiş bir lezyon indüksiyon sistemi sunuyoruz.

Doğal Bisiklet Fareleri Kullanarak Endometriozis Bir Syngeneic Murine Modeli

Burada, CRISPR RNP Zygotes Elektroporasyonu (CRISPR-EZ) adı verilen genetiği değiştirilmiş farelerin verimli bir şekilde üretilmesi için tasarlanmış basit bir tekniği açıklıyoruz. Bu yöntem, elektroporasyon yoluyla düzenleme reaktiflerini embriyolara %100'e yaklaşan bir verimlilikle teslim eder. Bu protokol, memeli embriyolarındaki nokta mutasyonları, küçük genomik eklemeler ve delesyonlar için etkilidir.

Zigotların CRISPR Elektroporasyonu ile Farelerin Verimli Genom Düzenlemesi

Sunulan servikal manipülasyon yöntemi, vazektomize erkeklerle üreme dişilerine gerek kalmadan farelerde yalancı gebeliği indükleyebilir. Yalancı gebelik indüksiyonu, her ikisi de sunulan ameliyatsız embriyo transferi ve ameliyatsız suni tohumlamanın başarısı için gereklidir.

Cerrahi olmayan embriyo transferi veya suni tohumlamadan önce vazektomize erkeklere ihtiyaç duymadan dişi farelerde yalancı gebeliğin indüklenmesi

Burada, farelerde yuvarlak spermatid enjeksiyonu (ROSI) gerçekleştirmek için bir yöntem sunuyoruz, umut verici klinik uygulamaları olan ve embriyonik gelişimin altında yatan mekanizmaları araştırmak için faydalı bir teknik.

Fare Yuvarlak Spermatid Enjeksiyonu

Burada, intrasitoplazmik sperm enjeksiyonu (ICSI)-embriyo transferi (ET) fare modeli oluşturmak için bir protokol sunuyoruz, bu da ICSI'ye atfedilebilecek glikoz metabolizmasındaki yaşa bağlı değişiklikleri gözlemlememize olanak tanıyarak insan gelişimi üzerindeki potansiyel uzun vadeli etkileri hakkında bilgi veriyor.

İntrasitoplazmik Sperm Enjeksiyonu Sonrası Fare Yavrularında Kan Şekerinin İzlenmesi

Öğrenin farelerde suni tohumlama yöntemini; erkeklerden sperm çıkarımı ve dişilere aşılama tekniklerini görsel olarak keşfedin. Bu yöntem transgenik çalışmalarda hassas zamanlama gerektiren gelişimsel biyoloji araştırmaları için değerlidir.

Farelerin Hasat Sperm ve Suni Tohumlama

Daha fazla video keşfet