Meme Epitel Nakli Prosedürü

Bu video, üç haftalık farelerde meme gelişimi çalışmak amacıyla meme epitelyumunun hasat edilmesi, meme yağ yastığının temizlenmesi ve eksojen epitelyumun transplantasyonu prosedürlerini göstermektedir; meme epitelyal ağacının büyümesi meme ucu civarıyla sınırlıdır ve yağ yastığı büyük oranda meme epitelyumundan yoksundur. Fare olgunlaştıkça, epitelyal ağaç yağ yastığı boyunca büyür.

Yedi haftalık yaşa gelindiğinde, epitelyal duktal ağ tüm yağ yastığına yayılır. Eğer epitelyum içeren yağ yastığının küçük bir kısmı üç haftalık yaşta çıkarılırsa, endojen epitelyum bellek yağ yastığını asla doldurmaz ve yağ yastığı temizlenmiş olarak tanımlanır ve olgunluk döneminde de temiz kalmaya devam eder. Ancak, transplant edilen donör belleği, epitelyumu veya epitelyal hücreler, temizlenmiş konakçı boyunca bellek duktal ağlarını yayma potansiyeline sahiptir.

Yağ pedi. Histoloji, daha sonra transgenik veya deney hayvanlarından nakledilen dokularda hafıza gelişiminin ilerlemesini izlemek için kullanılabilir. Merhaba, benim adım Joseph Jerry; Massachusetts Üniversitesi Veteriner ve Hayvan Bilimleri Bölümü'ndeyim.

Merhaba, benim adım Karen Dunphy. Jerry Laboratuvarı'nda çalışıyorum. Bugün bir meme epitelyal transplantasyonu gerçekleştireceğiz.

Bu prosedürü, meme tümörü genesisinin moleküler ve hücresel temelini incelemek ve bir meme kanseri modeli oluşturmak için kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım. Transplantasyon prosedürünün ilk adımı, donör fareden meme epitel dokusunun hasat edilmesidir.

Yeni ötanize edilmiş dişi bir fareyi, ventral vücut boşluğundaki SRU membranlarını delmeden %70 etanol ile yıkayarak başlayın. Pubisten sternuma kadar uzanan cilt boyunca orta sagittal bir kesi yapın. Ardından, pubisteki ilk insizyondan her bir arka bacağa doğru oblik bir kesi yapın.

Kavisli pensle SRU membranlarını tutun. Ardından düz tırtıklı pens kullanarak deri kesi kenarını kavrayın ve vücut duvarını S cs membranlarından dikkatlice soyarak ayırın.

Vücut duvarının alt kısmına yapışık olan dördüncü inguinal bellek bezini açığa çıkarmak için, bellek bezi içindeki lenf düğümü, bellek bezindeki üç belirgin kan damarının kesişim noktasında yer alır ve yağ yastığı içinde yoğun bir nodül olarak hissedilebilir. Bir çift göz makasının ucuyla, lenf düğümünü çevreleyen yağ dokusunu kesin. Ardından, işaret parmağınızı derinin epidermal tarafına yerleştirerek, düğümü yağ yastığından yukarı kaldırmak için basınç uygulayın ve onu koparıp alın.

Kavisli bir pens yardımıyla lenf düğümünü atın. Şimdi deri kenarlarını tutarken, meme yağ pedini kavisli bir pensin kavisli ucuyla kavrayın ve yağ pedini vücut duvarından kademeli olarak soyun. Yağ pedinin farenin dorsal yüzeyine doğru olan yönünü takip ederek, tüm meme bezini tek parça halinde çıkarın.

Hafıza bezini steril bir plastik kesim bloğunun üzerine yerleştirin ve nemli tutmak için bezin yüzeyine yaklaşık 200 µL kadar az miktarda besiyeri ekleyin. Ardından, yeni bir jilet kullanarak bezi bir mm'lik parçalar halinde ince ince kıyın. Kıyılmış bezi dört porsiyona ayırın.

Ardından pens yardımıyla, dondurma medyumu içeren dört kriyoviyale dağıtın. Kriyoviyalleri, dış bölmesinde 250 milliliters izopropil alkol bulunan bir Nalgene hücre dondurucusuna yerleştirin. Daha sonra hücre dondurucusunu 24 saat boyunca minus 70 degrees Celsius sıcaklıkta bekletin.

24 saat sonra, dondurulmuş hafıza fragmanı tüplerini transplantasyon için gerekli olana kadar sıvı azota aktarın. Her kriyotüp, dört ila sekiz konak farenin temizlenmiş yağ yastıklarına transplant edilmeye yetecek miktarda hafıza bezi fragmanı içerir. Üç haftalık konak bir farenin anestezi derinliği ayak parmağı sıkıştırma yöntemiyle doğrulandıktan sonra, fareyi karnı gergin olacak şekilde, ventral tarafı yukarıda ve ekstremiteleri açık halde bir cerrahi platformda sıkıca sabitleyin.

Preoperatif analjezik olarak bupivakain veya buprenorfin uygulanmalıdır. Subkütan olarak. Cerrahi bölgeyi alkol ve iyot bazlı bir scrub solüsyonu ile forseps kullanarak dezenfekte edin. Deriyi pelvisin birkaç milimetre üzerinden kavrayın ve abdomenden yukarı kaldırın.

Yara klipslerinin yerleştirilmesinin farenin idrar yapma yeteneğini engellememesi için, ilk kesinin üretraya çok yakın olmamasına dikkat ederek deriyi dikkatlice kıstırın. Ardından, SRU membranlarını delmemeye özen göstererek, pubisten sternuma kadar uzanan midsagittal bir deri kesisi yapın.

Şimdi, ilk insizyondan başlayarak, cilt üzerinden orta hattan pelvis boyunca her bir arka bacağa doğru oblik kesiler yapın. Kavisli pensler kullanarak, ventral vücut duvarının S ceros membranlarını nazikçe tutun. Ardından, cildin kesilen kenarını tutmak için doku pensleri kullanın ve vücut duvarını ceros membranlarından uzaklaştırarak çekin.

Dördüncü inguinal hafıza bezini açığa çıkarmak için, dördüncü hafıza bezini belirleyin. Beşinci hafıza bezini belirleyin, meme nodunu ve noda giden iki arteri koterize edin. Dördüncü ve beşinci bezleri birbirinden ayırın, ardından beşinci bezin kenarını koterize edin.

Ardından, makas kullanarak, dördüncü meme bezinin yağ yastığını bölmek için nodun hemen ventralinden yağ yastığını kesin. Kavisli pensle yağ yastığının ventral kısmını sıkıca kavrayın ve vücut duvarından uzaklaştırarak çekin. Eksize edilen dokuyu, tek parça halinde, etiketlenmiş iki lam arasında bastırmanız ve karnoy sabitleyicide sabitlemeniz önerilir.

Daha sonra doku boyanabilir, lam üzerine monte edilebilir ve temizlenmiş kenarlar açısından değerlendirilebilir. Pens kullanarak, yağ yastığının çıkarılan kısmının çevresindeki bellek bezine ait tüm kalıntıları temizleyin. Hayvan artık doku veya hücre transplantasyonu için hazırdır.

Taze veya şok dondurulmuş donör epitelyal doku, temizlenmiş yağ yastığına nakledilebilir. Alternatif olarak, ölümsüzleştirilmiş bellek epitelyal hücre hatları, bellek tümör hücre hatları veya primer hücreler nakledilebilir. Hücre hazırlama ile ilgili ayrıntılar için lütfen epitelyum fragmanlarının nakline ilişkin ekteki yazılı protokole bakınız.Hazırlandı.

Bu video, epitelium içeren bir kriyotüpün çözülmesi ve fragmanların taze medyum içeren bir Petri kabına aktarılmasıyla başlar. DMSO'yu seyreltmek için makas yardımıyla, alıcı farenin temizlenmiş yağ yastığı epiteliumunda bir cep oluşturun. Ardından, iğne pensi kullanarak donör epiteliumdan bir milimetrelik bir parçayı bu cebin içine yerleştirin.

Gerekirse, cep kısmını doku pensetiyle kapalı tutun ve dokunun yerinde kalmasını sağlamak için iğne pensetini geri çekin. Derinin karşıt kenarlarını kavrayın. Bunları pensetle birlikte tutun.

Bunları ventral vücut boşluğunun seroz membranlarından uzaklaştırın ve yara klipsleriyle kapatın. Midsagittal insizyonu kapatmak için iki klips, her bir oblik insizyon için ise bir klips kullanın. Gerekirse üretra'nın tıkanmasını önleyin.

Midsagittal ve oblik insizyonların kesişim noktasındaki deri boşluklarını bir sütür ile kapatın. Fareyi kafesine yerleştirin ve fare ayılana kadar kafesi ısıtma lambası altında tutun. Yara klipsleri iki hafta sonra çıkarılmalıdır.

Aşağıdaki slaytlar, besleme pedinin temizlenmesi ve epitelyum transplantasyonundan sonra konak hafıza bezinde bulunması beklenen temsili görüntüleri göstermektedir; bu görüntü, üç haftalık bir fareden çıkarılan endojen hafıza epitelyumunu göstermektedir. Bez temizleme prosedüründe, kesim kenarındaki net sınırlara dikkat edin. Temizlenmiş sınırları değerlendirmek için her prosedürün ardından buna benzer bir bütün mount (whole mount) hazırlanmalıdır.

Bu görüntü, şeffaflaştırma prosedüründen yedi hafta sonra farenin şeffaflaştırılmış yağ pedini göstermektedir. Tüm yağ pedinin hafıza, epitel, hematin ve asinden yoksun olduğuna dikkat edin. Şeffaflaştırma prosedüründen yedi hafta sonra şeffaflaştırılmış bir yağ pedinin boyanması da bezin hafıza epitelinden yoksun olduğunu kanıtlamaktadır.

10 haftalık bir fareden alınan donör hafıza epiteliyle nakledilmiş, şeffaflaştırılmış bir yağ yastığının temsili bir tüm monte görüntüsü gösterilmiştir. Nakledilen epitelyumun normal epitelyal duktal ağaçlar, hematin ve asin oluşturduğuna dikkat edin. Şeffaflaştırılmış bir yağ yastığının ve hafızanın boyanması.

Aynı yaştaki epitel nakli, ekzojen epitelden normal epitel kanalları oluştuğunu göstermektedir. Burada, berraklaştırılmış bir yağ yastığının hematoksilin ve eosin boyaması, bir meme tümörüne dönüşmüş epitel naklini göstermektedir. Size meme epitelinin nasıl toplandığını ve meme epitel naklinin nasıl yapıldığını göstermiş olduk.

Bu prosedürü gerçekleştirirken, nodu ve meme ucunu koterize etmek için dördüncü ve beşinci bez arasındaki bağlantıları kesmeyi ve endojen epitelyumun tüm izlerini temizlemeyi hatırlamak önemlidir. Endojen epitelyumun temizlenmiş yağ yastığına büyüme olasılığının bulunmadığından emin olmanız gerekir. Ayrıca, temizlenmiş sınırları kontrol etmek için meme bezinin çıkarılan kısmının tamamının alınması önerilir.

İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde başarılar dileriz.