Name: Meme Epitel Nakli Prosedürü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-06-10T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: Keşfedin meme epiteli hasatlama, yağ pedi temizleme ve ekzojen epitel nakli yöntemlerini farelerde meme gelişimini incelemek için. Bu teknik, meme tümör oluşumunun moleküler temellerini araştırmaya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Nakli Epitel hazırlanması Taze ya da dondurulmuş donör epitel doku temizlenir yağ yastığı içine nakledilen, ama dondurulmuş donör epitelin ön hazırlık nakli verimlilik minimal azalma (&gt;% 85 verimlilik) ile daha rahat olabilir. Dondurulmuş donör epitelin hazırlanması için protokol aşağıdaki gibi: Donör nakli epitel hazırlamadan önce, cryovials içine 1ml hakkında epitel ve kısım için dondurma medya hazırlar. Gerektiği kadar bu 4 ° C'de 6 ay kadar saklanabilir. Freeze medya, Hepes ve NaHCO 3,% 10 fetal sığır serumu (FBS) ve% 10 dimetil sulphoxide (DMSO) ile tampon DMEM/F12 medya içerir . Kısa bir süre önce ötenazi dişi fare meme epitel Hasat. <ol><li> Fare,% 70 EtOH ile yıkayın. </li><li> Ventral vücut boşluğunda seröz membranlar piercing vücut duvarı ile pubis sternum kadar uzanan bir mid-sagital kesim olun. Her arka bacak (Şekil 1) doğru pubis başlangıç ​​kesi oblik bir kesim olun. </li><li> Vücut duvarının alt kısmında fasya bağlı 5. inguinal meme bezi maruz seröz membranlar uzak vücut duvarı soyun. Bunu başarmak için en iyi şekilde delmek ventral vücut boşluğuna değil dikkatli olmak, seröz membranlar kavisli bir forseps bir çift kavisli bölümünü dikkatlice tutarak. Aynı zamanda, kesme kenarı düz dişli forseps ile kabuklarıyla kavramak ve vücut duvarı seröz membranlar uzak çekin. </li><li> Meme bezi içindeki lenf nodu belirleyin. Lenf nodu meme bezi üç önemli kan damarlarının kesişme noktasında yer alır ve yağ yastığı (Şekil 2) içinde yoğun bir nodül olarak hissedilebilir. Ucu ile bir çift göz makas, nip düğüm çevreleyen yağ dokusu. Baş parmak ile cildin epidermal tarafında bir yağ yastığı düğüm dışarı yükseltmek ve bir çift kavisli bir forseps ile çimdik basınç uygulanır. Lenf düğümü atın. </li><li> Cilt kenar boşluklarını tutarken, kavisli kenarı kavisli bir forseps bir çift ve yavaş yavaş yağ yastığı vücut duvarı uzak kabuğu meme yağ yastığı kavramak. Tek parça olarak tüm meme bezi kaldırmak olarak fare dorsal yüzeyine doğru yağ yastığı yönde uygulayın. </li><li> Meme bezi steril bir plastik kesme blok üzerine koyun. Bezinin yüzeyi nemli tutmak için, 200 ul hakkında, medya küçük bir miktar ekleyin. 1mm parçalar halinde taze bir jilet ile bezi Kıyma. Kıyılmış bezi dört parçaya bölün ve forseps ile dondurma medya dört cryovials arasında dağıtmak. Dış izopropil alkol 250ml bir Nalgene "Mr Frosty hücre dondurucu cryovials koyun. Nalgene dondurucuda -70 ° C derin dondurucuda 24 saat koyun. Kadar gerekli, sıvı nitrojen içinde meme parçalarının dondurulmuş şişeleri Mağaza nakli. Her cryovial 4-8 ev sahibi farelerin yağ pedleri temizlenir nakli için yeterli meme bezi parçaları içerecektir. </li></ol> 2. Nakli Hücreler hazırlanması Laboratuar ölümsüzleştirdi meme epitel hücre hatları, meme tümör hücre hatları veya bir fare içine primer meme hücrelerinin yağ yastığı temizledi dahil olmak üzere farklı hücre tipleri, nakledilen vardır. Virgülle D transplantasyon için hücrelerin hazırlanması için protokol aşağıdaki gibi: <ol><li> Virgülle D hücreleri DMEM içeren düzenli MECL medya kültürü: F12,% 2 Yetişkin Sığır Serum (ABS), mEGF, İnsülin, antimikotik / Antibiyotik (AB / AM) ile desteklenmiş. </li><li> Hasat Virgülle D hücreleri hücrelerin 85% -90% konfluent. </li><li> 5 dakika boyunca pelet hücreleri hücre süspansiyon 1200rpm santrifüjleyin. Taze MECL medya hücrelerinin yeniden süspanse edin ve 5 x 10 6 / ml hücre konsantrasyonunu ayarlamak. </li></ol> Primer meme hücrelerinin nakli için, birincil meme epitel hücreleri, fare 5. meme bezlerinin mekanik ve enzimatik dissosiasyon yolu ile izole edilmiştir . F12 medya ve istenen konsantrasyona göre ayarlanır, genellikle 5 x 10 6 / ml: Hücreler DMEM yeniden süspanse edilir. 3. Fare Meme Fat Pad temizlemek için Standart Yöntem <ol><li> Üç hafta eski konak fare anestezisi. Duktal meme büyümesi başlatılan olmamıştır sağlamak için &lt;12 g fareler seçin. Biz 2,2,2-tribromoethanol vücut ağırlığının 200mg/kg kullanın. </li><li> Fare uyuşturulduktan sonra karın alay böylece cerrahi bir sahnede sıkıca uzanmış uzuvları ile, ventral tarafta fare dizginlemek. Ameliyat öncesinde, analjezikler yönetmek; bupivakain (&lt;1mg/kg) veya buprenorfin (0.05mg/kg), subkutan. </li><li> Pelvis birkaç milimetre yukarıda forseps ile cilt kavrayın ve karından yukarı kaldırın . Nip makas ile cilt ve vücut duvarı ile pubis sternum kadar uzanan bir mid-sagital kesim yapmak. Delmek ventral vücut boşluğunda seröz membranlar etmeyin. Yara klipleri fare idrara çıkma yeteneği engel olmaz böylece ilk kesi çok üretra yakın yapmayın. </li><li> Ilk kesi, her arka bacak doğru pelvis boyunca orta hat cilt yoluyla eğik kesikler yapın. </li><li> Yavaşça seröz membranlar kavramak için kavisli bir forseps kavisli alanını kullanın. Deri kesme marjı kavramak ve seröz membranlar uzak vücut duvarı çekin ve vücut duvarının alt kısmında ön panoda bulunan 5 inci inguinal meme bezi maruz doku forseps kullanın. </li><li> Meme, düğüm ve düğüm (Şekil 2) önde gelen iki arter dağlamak </li><li> Dördüncü ve beşinci bezleri ayırın. 6. bezi büyümesinin önlemek için beşinci bezinin marjı dağlamak. </li><li> Düğümün (meme karşı tarafı) sadece ventral makas ile yağ yastığı kesen dördüncü meme bezinin yağ yastığı bölün. Kavisli bir forseps yağ yastığı ventral kısmı sıkıca kavrayın ve tek parça olarak vücut duvarı uzağa çekmek için kullanın. Iki slaytlar arasındaki yağ yastığı ventral kısmı basın ve Carnoy Kullanıcı fiksatif içeren bir cam histoloji boyama çanak koymak. Bu doku, sabit ve daha sonra karmin şap çözüm temizlenir marjları (Şekil 3) kontrol etmek için boyanmış olacaktır. Fasya kaldırılan kısmı kavisli bir forseps ile meme bezinin tüm izlerini silmek için yağ yastığı bölgesi etrafında temizleyin. </li></ol> 4. Fat Pad Takas için alternatif "Ayırma Prosedürü Bir fare meme yağ yastığı temizleme için standart bir prosedür ile yetkili haline gelmiştir sonra, onlar daha az invaziv bir koruyucu prosedür Brill ve ark (2008) 2 tarafından geliştirilen girişimi için tercih edebilirsiniz. <ol><li> Standart prosedür olarak fare hazırlayın. </li><li> Dördüncü inguinal meme bezi meme kavramak ve makas ucu ile meme başı etrafında 3-5 mm çevresi daire kesmek. </li><li> Deri kesme kısmını ayırmak dördüncü inguinal meme bezi ve delikten dışarı çekmek için vücuttan meme çekin. </li><li> Düğüm tanımlayın. Delikten düğüm ve 6 ncı meme bezi dağlamak için koter kullanın. </li><li> 5. meme bezinin düğümün hemen önce en yüzeysel kısmı kesin ve kesin. Meme, cilt ve meme yağ pedi içeren epitel bölümünü dairesel alanda tek parça halinde çıkarılır. </li></ol> 5. Doku / Hücre Transplantasyonu <ol><li> Epitel parçaları nakli için, defrost epitel cryovial ve DMSO sulandırmak için taze medya içeren bir Petri kabı epitel parçaları transfer. Yeni epitel makas ucu ile temizlenir yağ yastığı küçük bir delik veya cep olun. Iğne forseps ile cebine donör epitelin 1mm parçası koyun. Cep doku yerinde kalır, böylece iğne forseps geri doku forseps ile kapalı tutun. </li><li> Hücrelerin nakli için, her bir yağ yastığı içine 22s iğne ile 50μl Hamilton şırınga kullanarak medya 10 ul 50.000 hücreleri enjekte edilir. </li></ol> 6. Kapanış / Mouse Revival <ol><li> Cilt kapatılması için düzenleyin. Cilt marjları karşı tutun, forseps ile onları bir arada tutmak ventral vücut boşluğunda seröz membranlar onları kaldırarak ve yara klipleri ile yakın. Genellikle, mid-sagital insizyon ve standart prosedür için her oblik kesi için tek bir klibin kapatmak için iki klipleri kullanmak için gereklidir. Üretra engellemekten kaçının. Bu, bir dikiş ile orta sagital ve oblik insizyon kesiştiği cilt açıklarını kapatmak için gerekli olabilir. Koruyucu prosedürü her iki tarafı için sadece bir yara klip gerekecektir. </li><li> . Onu kafese yerleştirin ve fare fare gündeme getirdi kadar kafes bir ısıtma lambası altında tutmak. </li><li> Yara klipler, 2 hafta sonra çıkarılmalıdır. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 kesi desen gösterilmesi. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 lenf nodu, kan damarları, meme ve endojen epitel yeri. Yerlerinde belirtilen dağlamak. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Tüm montaj, bu endojen epitel daire içinde alan ile sınırlı ve bu nedenle marjları "açık 'gösteriyor . 7. Temsilcisi Sonuçlar _r.jpg "alt =" Şekil 4 "/&gt; Şekil 4 Tüm montaj temizlenir marjları gösteren 3 haftalık fare kaldırılır yağ yastığı. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig2_r.jpg" alt="Şekil 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 5"> Şekil 5 Tüm montaj gösteren bir yağ yastığı endojen meme epitel temizlenir 10 haftalık fare. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig3_r.jpg" alt="Şekil 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 6"> Şekil 6 Hematoksilen ve eosin ile boyanan bölümünde, 10 haftalık fare bir temizlenmiş yağ yastığı . <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig4_r.jpg" alt="Şekil 7" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 7"> Şekil 7 nakledilen epitel geliştirilen normal meme duktal ağaç gösteren bir 10 haftalık fare Tüm montaj. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig5_r.jpg" alt="Şekil 8" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 8"> Şekil 8 Hematoksilen ve eosin ile boyanan bölümünde nakledilen epitel geliştirilen meme kanalları. <img src="/files/ftp_upload/1849/1849fig6_r.jpg" alt="Şekil 9" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 9"> Şekil 9 Hematoksilen ve eosin ile boyanan bölümünde nakledilen epitel geliştirilen bir meme tümörü.

<ol><li>DeOme, K. B., Faulkin, L. J. Jr, Bern, H. A., Blair, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+mammary+tumors+from+hyperplastic+alveolar+nodules+transplanted+into+gland-free+mammary+fat+pads+of+female+C3H+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Development of mammary tumors from hyperplastic alveolar nodules transplanted into gland-free mammary fat pads of female C3H mice.</a> Cancer Res. 19, 515-520 (1959).</li>
<li>Brill, B., Boecher, N., Groner, B., Shemanko, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sparing+procedure+to+clear+the+mouse+mammary+fat+pad+of+epithelial+components+for+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animals%22%5BJournal%5D)">A sparing procedure to clear the mouse mammary fat pad of epithelial components for transplantation analysis.</a> Laboratory Animals. 42, 104-110 (2008).</li>
<li>Jerry, D. J., Kittrell, F. S., Kuperwasser, C., Laucirica, R., Dickinson, E. S., Bonilla, P. J., Butel, J. S., Medina, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mammary-specific+model+demonstrates+the+role+of+the+p53+tumor+suppressor+gene+in+tumor+development%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">A mammary-specific model demonstrates the role of the p53 tumor suppressor gene in tumor development.</a> Oncogene. 19, 1052-1058 (2000).</li>
<li>Shackleton, M., Vaillant, F., Simpson, K. J., Stingl, J., Smyth, G. K., Asselin-Labat, M. -L., Wu, L., Lindman, G. J., Visvader, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+a+functional+mammary+gland+from+a+single+stem+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Generation of a functional mammary gland from a single stem cell.</a> Nature. 439, 84-88 (2006).</li>
<li>Stingl, J., Eirew, P., Ricketson, I., Shackleton, M., Vaillant, F., Choi, D., Li, H. I., Eaves, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+unique+properties+of+mammary+epithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Purification and unique properties of mammary epithelial stem cells.</a> Nature. 439, 993-997 (2006).</li>
<li>Medina, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preneoplastic+Lesions+in+Murine+Mammary+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Preneoplastic Lesions in Murine Mammary Cancer.</a> Cancer Res. 36, 2589-2595 (1976).</li>
<li>Wagner, K. -U., Boulanger, C. A., Henry, S. gagias, Hennighausen, M., Smith, G. H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+adjunct+mammary+epithelial+cell+population+in+parous+females%3A+its+role+in+functional+adaptation+and+tissue+renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">An adjunct mammary epithelial cell population in parous females: its role in functional adaptation and tissue renewal.</a> Development. 129, 1377-1386 (2002).</li>
<li>Dunphy, K. A., Blackburn, A. C., Haoheng, Y., O Connell, L. R., Jerry, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen+and+progesterone+induce+persistent+increases+in+p53-dependent+apoptosis+and+suppress+mammary+tumors+in+BALB%2Fc-Trp53%2B%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Estrogen and progesterone induce persistent increases in p53-dependent apoptosis and suppress mammary tumors in BALB/c-Trp53+/- mice.</a> Breast Cancer Res. 10 (3), R43-R43 (2008).</li>
</ol>

Bu raporda, meme epitel nakli için hazırlık fare meme yağ yastığı temizlenmesi için iki alternatif yöntemler sunuyoruz. Standart prosedür DeOme ve arkadaşları tarafından 1959 yılında gelişimi beri kullanımda olan 1 daha invaziv meme bezinin yapısı ve yönünü kolayca ederken görülüyor, çünkü acemi eğitimi için standart bir yöntem tercih edilen bir yöntemdir. Ancak, koruyucu prosedür, çeşitli avantajları 2 nedeniyle daha deneyimli bir cerrah tarafından tercih edilebilir. En önemlisi, koruyucu...

meme epitel nakli prosedürü

Mammary Epithelial Transplant Procedure

Bu makalede anlatılan ve DeOme KB ve ark tarafından geliştirilen yağ yastığı izni prosedürü karşılaştırır 1 Brill Yatak ve arkadaşları tarafından geliştirilen ve tutucu bir prosedür. 2, meme epitel nakli prosedürünün izledi . Ergenlik sonrasına kadar meme epitel önemli bir gelişme meydana gelmeyeceği gerçeğinin yararlanır çünkü meme nakli prosedürünün çok meme biyologlar tarafından kullanılır. 3 hafta yaş, meme epitel ağacının büyüme, meme başının çevresinde sınırlıdır ve yağ yastığı meme epitel büyük ölçüde yoksun, ancak yaşı 7 hafta epitel duktal ağaç tüm yağ yastığı boyunca uzanır. Bu nedenle, yağ yastığı epitel içeren bu küçük bir kısmını, meme ve lenf nodu arasındaki bölge, yaş 3 hafta kaldırılması durumunda, endojen epitel meme yağ yastık doldurmak asla ve yağ yastığı &quot;temizlenmiş olarak tanımlanır &quot;. Bu zamanda, başka bir kaynaktan meme epitel yağ yastığı boyunca meme duktal ağaçları artırma potansiyeline sahiptir temizlenmiş yağ yastığı transplante edilebilir. Bu prosedür 4,5 sınırlı seyreltme hücre nakli tarafından belirlenmesi, meme kök hücrelerin belirlenmesinde, transgenik meme epitel doku tümör fenotip genotip karıştırıcı etkisi olmadan tüm hayvan 3 incelenmesi de dahil olmak üzere pek çok deneysel modellerde kullanılan olmuştur hiperplastik nodüller meme tümörlerinde 6 ilerlemek ve meme epitel 7,8 davranışı önceden hormon maruz kalmanın etkisini değerlendirmek. Üç haftalık ana fareler, anestezi, cerrahi bir sahnede temizlenmeli ve ölçülü. Mid-sagital bir kesi, deri yoluyla yapılmış, ancak değil, periton, pubis sternum uzanan. Eğik keser Her bacak doğru pelvis boyunca mid-sagital kesi deri yoluyla yapılır. Cilt 4. inguinal meme bezi maruz periton uzak çekilir. Yağ yastığı, lenf nodu, yağ ped doku anterior kaldırarak temizlenir. Epitel parçaları veya epitel hücreleri temizlendi kalan yağ yastığı içine nakledilen ve fare kapalıdır.

Bu makale DeOme KB tarafından geliştirilen yöntemle gösterir<em&gt; Ve ark.</em&gt; (1959) ve Brill B tarafından geliştirilen koruyucu prosedür<em&gt; Ve ark.</em&gt; (2008), meme parçaları, meme epitel hücreleri, veya meme tümör hücrelerinin nakli için hazırlık Ergenlik fare 4. inguinal meme yağ yastığı temizlenmesi için.

Meme Epitel Nakli Prosedürü

Bu makale, DeOme KB ve ark.1 tarafından geliştirilen yağ yastıkçığı temizleme prosedürünü ve Brill B ve ark.2 tarafından geliştirilen koruma prosedürünü tanımlamakta ve karşılaştırmaktadır, ...

Bu video, üç haftalık farelerde meme gelişimi üzerine çalışmak amacıyla meme epitelyumunun hasat edilmesi, meme yağ yastığının temizlenmesi ve eksojen epitelyumun nakledilmesi prosedürlerini göstermektedir; meme epitelyal ağacının büyümesi meme başı çevresiyle sınırlıdır ve yağ yastığı büyük ölçüde meme epitelyumundan yoksundur. Fare olgunlaştıkça, epitelyal ağaç yağ yastığı boyunca büyür.Yedi haftalık yaşa gelindiğinde, epitelyal kanal ağacı tüm yağ yastığına yayılır. Epitel içeren yağ yastığının küçük bir kısmı üç haftalık yaşta çıkarılırsa, endojen epitel hafıza yağ yastığını hiçbir zaman doldurmaz; bu durumda yağ yastığı "temizlenmiş" olarak tanımlanır ve olgunluğa eriştiğinde de temiz kalmaya devam eder. Ancak, transplant edilen donör hafızası, epitel veya epitelyal hücreler, temizlenmiş konakçı boyunca hafıza kanal ağaçlarını yayma potansiyeline sahiptir.Yağ pedi. Histoloji, ardından transjenik veya deney hayvanlarından nakledilen dokularda hafıza gelişiminin ilerlemesini izlemek için kullanılabilir. Merhaba, benim adım Joseph Jerry; Massachusetts Üniversitesi Veteriner ve Hayvan Bilimleri Bölümü'ndeyim.Merhaba, benim adım Karen Dunphy. Jerry Laboratuvarı'nda çalışıyorum. Bugün bir meme epitelyum transplantasyonu gerçekleştireceğiz.Bu prosedürü, meme tümörü oluşumunun moleküler ve hücresel temelini ve bir meme kanseri modelini incelemek için kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım. Transplantasyon prosedürünün ilk adımı, donör fareden meme epitelyal dokusunun hasat edilmesidir.Yeni ötanize edilmiş dişi bir fareyi, ventral vücut boşluğundaki SRU membranlarını delmeden %70 etanoldü yıkayarak başlayın. Pubis'ten sternuma kadar uzanan cilt üzerinden orta sagital bir kesi yapın. Ardından, pubis'teki ilk insizyondan her bir arka bacağa doğru oblik bir kesi yapın.Kavisli pens kullanarak SRU membranlarını kavrayın. Ardından düz tırtıklı pens kullanarak derinin kesik kenarını kavrayın ve vücut duvarını S cs membranlarından dikkatlice soyarak ayırın.Vücut duvarının alt kısmına tutunmuş olan dördüncü inguinal bellek bezini açığa çıkarmak için, bellek bezi içindeki lenf düğümü, bezdeki üç belirgin kan damarının kesişim noktasında yer alır ve yağ yastığı içinde yoğun bir nodül olarak hissedilebilir. Bir çift göz makasıyla, lenf düğümünü çevreleyen adipoz dokuyu kesin. Ardından, işaret parmağınızı derinin epidermal tarafına yerleştirerek düğümü yağ yastığından yukarı kaldırmak için baskı uygulayın ve düğümü kopararak çıkarın.Kavisli bir pens yardımıyla lenf düğümünü atın. Şimdi cildin kenarlarını tutarken, kavisli bir pensin kavisli ucuyla meme yağ pedini kavrayın ve yağ pedini vücut duvarından yavaşça soyun. Farening dorsal yüzeyine doğru yağ pedinin yönünü takip ederek, meme bezinin tamamını tek parça halinde çıkarın.Hafıza bezini steril plastik bir kesme bloğu üzerine yerleştirin ve nemli kalmasını sağlamak için bezin yüzeyine yaklaşık 200 µL kadar az miktarda besiyeri ekleyin. Ardından, yeni bir jilet kullanarak bezi bir milimetrelik parçalar halinde kıyın. Kıyılmış bezi dört porsiyona ayırın.Ardından pens yardımıyla, dondurma ortamı içeren dört kriyotüpe dağıtın. Kriyotüpleri, dış bölmesinde 250 milliliters izopropil alkol bulunan bir Nalgene hücre dondurucusuna yerleştirin. Daha sonra hücre dondurucusunu 24 saat boyunca minus 70 degrees Celsius sıcaklıkta bekletin.24 saat sonra, dondurulmuş bellek fragmanı tüplerini, transplantasyon için gerekli olana kadar sıvı azota aktarın. Her kriyotüp, dört ila sekiz konak farenin temizlenmiş yağ pedlerine transplant edilmek üzere yeterli miktarda bellek bezi fragmanı içerir. Üç haftalık konak bir farenin anestezi derinliği ayak parmağı sıkıştırma yöntemiyle doğrulandıktan sonra, fareyi karnı gergin olacak şekilde, ventral tarafı yukarıda ve ekstremiteleri açık halde bir cerrahi platform üzerinde sıkıca sabitleyin.Preoperatif analjezik olarak bupivakain veya buprenorfin uygulanmalıdır. Subkütan olarak. Cerrahi bölge, forseps kullanılarak alkol ve iyot bazlı bir scrub ile dezenfekte edin. Pelvisin birkaç milimetre üzerinden deriyi tutun ve karnın üzerinden yukarı kaldırın.Yara klipslerinin yerleştirilmesinin farenin idrar yapma yeteneğini engellememesi için ilk insizyonun üretraya çok yakın olmamasına dikkat ederek deriyi dikkatlice kıstırın. Ardından, SRU membranlarını delmemeye özen göstererek, pubis bölgesinden sternuma kadar uzanan midsagittal bir deri kesisi yapın.Şimdi, başlangıç kesisinden itibaren cilt üzerinden orta hattan pelvis boyunca her bir arka bacağa doğru oblik kesikler yapın. Kavisli pensler kullanarak, ventral vücut duvarının S ceros membranlarını nazikçe tutun. Ardından, cildin kesik kenarını tutmak için doku pensi kullanın ve vücut duvarını ceros membranlarından uzaklaştırın.Dördüncü inguinal hafıza bezini açığa çıkarmak için, dördüncü hafıza bezini belirleyin. Beşinci hafıza bezini belirleyin, meme nodunu ve noda giden iki arteri koterize edin. Dördüncü ve beşinci bezleri birbirinden ayırın, ardından beşinci bezin kenarını koterize edin.Ardından, makas kullanarak, dördüncü meme bezinin yağ yastığını bölmek için düğümün hemen ventral kısmından yağ yastığını kesin. Kavisli pens yardımıyla yağ yastığının ventral kısmını sıkıca kavrayın ve vücut duvarından uzaklaştırın. Eksize edilen dokunun tek parça halinde, etiketlenmiş iki lam arasında bastırılarak Carnoy fiksatifinde tespit edilmesi önerilir.Daha sonra doku boyanabilir, lam üzerine monte edilebilir ve temizlenmiş kenarlar açısından değerlendirilebilir. Pens kullanarak, yağ yastığının çıkarılan kısmının çevresindeki bellek bezine ait tüm kalıntıları temizleyin. Hayvan artık doku veya hücre transplantasyonu için hazırdır.Taze veya hızlı dondurulmuş donör epitel dokusu, temizlenmiş yağ pedine nakledilebilir. Alternatif olarak, ölümsüzleştirilmiş hafıza epitel hücre hatları, hafıza tümör hücre hatları veya primer hücreler nakledilebilir. Hücre hazırlama ile ilgili detaylar için lütfen epitel fragmanlarının nakline ilişkin beraberindeki yazılı protokole bakınız. Hazırlandı.Bu video, dondurulmuş bir epitel kriyotüpünün çözülmesi ve fragmanların taze medya içeren bir Petri kabına aktarılmasıyla başlar. DMSO'yu seyreltmek için makas kullanarak alıcı farenin temizlenmiş yağ pedi epitelyumunda bir cep oluşturun. Ardından, iğne pensi yardımıyla donör epitelyumdan alınan bir milimetrelik bir parçayı bu cebin içine yerleştirin.Gerekirse, cep doku pensi ile kapalı tutun ve dokunun yerinde kalması için iğne pensini geri çekin. Derinin karşıt kenarlarını kavrayın. Bunları pensle birlikte tutun.Bunları ventral vücut boşluğunun seroz membranlarından kaldırın ve yara klipsleri ile kapatın. Midsagittal insizyonu kapatmak için iki klips, her bir oblik insizyon için ise bir klips kullanın. Gerekirse üretranın tıkanmasını önleyin.Midsagittal ve oblik insizyonların kesişim noktasındaki cilt boşluklarını bir sütür ile kapatın. Fareyi kafesine yerleştirin ve fare ayılana kadar kafesi ısıtıcı lambanın altında tutun. Yara klipsleri iki hafta sonra çıkarılmalıdır.Aşağıdaki slaytlar, besleme pedi temizlendikten ve epitel nakli yapıldıktan sonra konak hafıza bezinde nelerin bulunabileceğinin temsili görüntülerini göstermektedir; bu görüntü, üç haftalık bir fareden çıkarılan endojen hafıza epitelini göstermektedir. Bez temizleme prosedüründe, kesim kenarındaki net sınırlara dikkat edin. Temizlenmiş sınırları değerlendirmek için her prosedürün ardından buna benzer bir bütün mount (whole mount) hazırlanmalıdır.Bu görüntü, şeffaflaştırma prosedüründen yedi hafta sonra farenin şeffaflaştırılmış yağ yastığını göstermektedir. Tüm yağ yastığının bellek, epitelyum, hematin ve asinlerden arındırılmış olduğuna dikkat edin. Şeffaflaştırma prosedüründen yedi hafta sonra şeffaflaştırılmış bir yağ yastığının boyanması da bezin bellek epitelyumundan arındırılmış olduğunu kanıtlamaktadır.10 haftalık bir fareden alınan donör hafıza epiteli ile nakledilmiş, şeffaflaştırılmış bir yağ yastığının temsilci bütün montajı gösterilmiştir. Nakledilen epitelin normal epitelyal duktal ağaçlar, hematin ve asin oluşturduğuna dikkat edin. Şeffaflaştırılmış bir yağ yastığının ve hafızanın boyanması.Aynı yaştaki epitelyal transplantasyon, ekzojen epitelyumdan normal epitelyal duktus üretimini ortaya koymaktadır. Burada, berraklaştırılmış bir yağ yastığının hematoksilin ve eosin boyaması, meme tümörüne gelişmiş bir epitelyal transplantasyonu göstermektedir. Size meme epitelyumunun nasıl hasat edileceğini ve meme epitelyal transplantasyonunun nasıl yapılacağını göstermiş olduk.Bu prosedür uygulanırken, nodu ve meme ucunu koterize etmek için dördüncü ve beşinci bez arasındaki bağlantıları kesmeyi ve endojen epitelyumun tüm izlerini temizlemeyi hatırlamak önemlidir. Endojen epitelyumun temizlenmiş yağ yastığına doğru büyüme olasılığının bulunmadığından emin olmanız gerekir. Ayrıca, temizleme sınırlarını kontrol etmek için meme bezinin çıkarılan kısmının tamamının alınması tavsiye edilir.İşte böyle. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu raporda, izole etmek için bir sistem ve fare meme bezi kültür donör hücreleri göstermek ve bu hücrelerin orthotopically nakli stromal analiz etmek için alıcı farelerde meme tümör gelişimi sırasında epitelyal etkileşimler.

C57BL/6J Fare Stromal Cells ve Karsinomu Hücreler Meme Nakli

Time-lapse görüntüleme özgü davranışsal parametreler ve farklı genetik lezyonlar arasında bir korelasyon olup olmadığını belirlemek için meme kanseri riskinin genetik fare modelleri türetilmiştir birincil preneoplastic meme epitel hücrelerinin davranışlarını değerlendirmek için kullanılır.

Birincil Preneoplastic Meme Epitel Hücrelerinin Time-lapse görüntüleme Meme Kanseri Genetik Fare Modelleri türetilen

Meme kanseri metastazını hedef alan adjuvan tedaviyi değerlendiren klinik öncesi modeller eksiktir. Buna değinmek için, de novo pulmoner meme adenokarsinom metastazına ait bir fare modeli geliştirdik, burada adjuvan ortamında (primer tümörlerin cerrahi sonrası rezeksiyonu) uygulanan terapiler önceden tohumlanmış pulmoner metastazları etkilemek için etkinlik açısından değerlendirilebilir.

Klinik Öncesi Bir Murin Modeli İçin Cerrahi Prosedürler ve Metodoloji<emDe Novo</emMeme Kanseri Metastazı

Bu protokol, adherent / mezenkimal meme epitel hücrelerinden ekstraselüler veziküller (EV) / ekzozomların arıtılması, nicelendirilmesi ve karakterize edilmesine yönelik yöntemleri ve meme bezi oluşturma yeteneğini luminal meme epitel hücrelerine aktarmak için kullanmayı açıklamaktadır. Gövde benzeri meme epitel hücrelerinden türetilmiş EVs / eksozomlar, bu hücre özelliğini EV'leri / eksosomları emen hücrelere aktarabilir.

Membran Bazal Epitelyal Hücreler ile Membran Luminal Hücreler Arasındaki Meme Bezi Oluşturma Yeteneğinin Ekstraselüler Vesiküller / Ekzozomlar Yoluyla Transferi

Bu çalışma, mikroskopik gözlem için tüm montaj dokusu hazırlığının ardından meme yağ padi transplantasyonu yoluyla vasküler endotel kök hücrelerinin (VESC'lerin) çoğalmasını, farklılaşmasını ve damar oluşturma potansiyelini değerlendirmek için yeni bir yaklaşımı göstermektedir. VESC'lerin in vivo davranışlarını araştırmak için bir soy izleme stratejisi de sunulmuştur.

Vasküler Endotelyal Kök Hücrelerin Damar Oluşumunu Görselleştirmek İçin Yeni Bir Göğüs Göğsü Transplantasyon Tekniği

Bu protokol amacı yeni bir meme kanseri modelleme yaklaşımı CRE-ifade adenovirüsü fare meme bezleri içine intraduktal enjeksiyon dayalı açıklamak için. Bu yaklaşım, Onkojenik olayların hem hücre tipi hem de Organ spesifik manipülasyon geçici olarak kontrollü bir şekilde sağlar.

CRE-ifade Adenovirus fare mammary bezi içine bir Intraductal enjeksiyon yoluyla meme kanseri modelleme

Bu makalede, alıcı hayvanların interscapular beyaz yağ yastığı içine donör sıçan meme epitel hücreleri greft bir transplantasyon yöntemi açıklanmaktadır. Bu yöntem, meme epitel gelişimi üzerindeki konak ve/veya donör etkilerini incelemek ve ön temizleme ihtiyacını ortadan kaldırmak ve böylece bu tekniğin kullanışlılığını genişletmek için kullanılabilir.

Interscapular Beyaz Yağ Ped içine Rat Mammary Epitel Hücre Nakli

Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri ve nakledilebilir genetik olarak tasarlanmış fare modelleri insan hastalığına sadık kalınarak rekapitulate edilir ve temel ve çevirisel meme kanseri araştırmaları için tercih edilen modellerdir. Burada, tümör biyolojisini incelemek ve ilaç yanıtını değerlendirmek için meme tümörü parçalarını meme yağ yastığına ortotopik olarak nakleden bir yöntem açıklanmaktadır.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Burada tarif edilen intravital görüntüleme yöntemi, 4D intravital görüntülerin derinlemesine analizi için etiketlenmemiş bir tümör mikroçevresini tümör, stromal ve vasküler kompartmanlara invaziv olmayan bir şekilde segmentlere ayırmak için metabolik ko-faktör NAD (P) H'den kollajen ikinci harmonik jenerasyonu ve endojen floresanı kullanır.

Meme Tümörü Mikroçevresinin İntravital Görüntülemesi için Etiketsiz Bir Segmentasyon Yaklaşımı

Burada, tek bir aksiller insizyon ile endoskopik bilateral meme başı koruyucu mastektomi ve prepektoral implant tabanlı meme rekonstrüksiyonu için ayrıntılı cerrahi prosedürler sunuyoruz. Bu işlem meme kanseri hastaları için güvenli ve uygulanabilir bir yöntemdir.

İmmediat Prepektoral İmplant Tabanlı Meme Rekonstrüksiyonu ile Tek Bir Aksiller İnsizyon ile Endoskopik Bilateral Meme Ucu Koruyucu Mastektomi

Bu çalışma, primer insan meme epitel hücrelerini (HMEC'ler) küçük miktarlarda meme dokusundan verimli bir şekilde izole etmek ve büyütmek için daha kolay, zaman kazandıran ve ekonomik bir protokol bildirmektedir. Bu protokol, hem laboratuvar hem de klinik uygulamalar için birincil HMEC'lerin hızlı bir şekilde üretilmesi için uygundur.

Primer İnsan Meme Epitel Hücrelerinin İzolasyonu ve Kültürü

Keşfedin meme epiteli hasatlama, yağ pedi temizleme ve ekzojen epitel nakli yöntemlerini farelerde meme gelişimini incelemek için. Bu teknik, meme tümör oluşumunun moleküler temellerini araştırmaya olanak tanır.

Meme Epitel Nakli Prosedürü

Daha fazla video keşfet