Meme Epitel Nakli Prosedürü

Bu video, üç haftalık farelerde meme gelişimi üzerine çalışmak amacıyla meme epitelyumunun hasat edilmesi, meme yağ yastığının temizlenmesi ve eksojen epitelyumun nakledilmesi prosedürlerini göstermektedir; meme epitelyal ağacının büyümesi meme başı çevresiyle sınırlıdır ve yağ yastığı büyük ölçüde meme epitelyumundan yoksundur. Fare olgunlaştıkça, epitelyal ağaç yağ yastığı boyunca büyür.

Yedi haftalık yaşa gelindiğinde, epitelyal kanal ağacı tüm yağ yastığına yayılır. Epitel içeren yağ yastığının küçük bir kısmı üç haftalık yaşta çıkarılırsa, endojen epitel hafıza yağ yastığını hiçbir zaman doldurmaz; bu durumda yağ yastığı "temizlenmiş" olarak tanımlanır ve olgunluğa eriştiğinde de temiz kalmaya devam eder. Ancak, transplant edilen donör hafızası, epitel veya epitelyal hücreler, temizlenmiş konakçı boyunca hafıza kanal ağaçlarını yayma potansiyeline sahiptir.

Yağ pedi. Histoloji, ardından transjenik veya deney hayvanlarından nakledilen dokularda hafıza gelişiminin ilerlemesini izlemek için kullanılabilir. Merhaba, benim adım Joseph Jerry; Massachusetts Üniversitesi Veteriner ve Hayvan Bilimleri Bölümü'ndeyim.

Merhaba, benim adım Karen Dunphy. Jerry Laboratuvarı'nda çalışıyorum. Bugün bir meme epitelyum transplantasyonu gerçekleştireceğiz.

Bu prosedürü, meme tümörü oluşumunun moleküler ve hücresel temelini ve bir meme kanseri modelini incelemek için kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım. Transplantasyon prosedürünün ilk adımı, donör fareden meme epitelyal dokusunun hasat edilmesidir.

Yeni ötanize edilmiş dişi bir fareyi, ventral vücut boşluğundaki SRU membranlarını delmeden %70 etanoldü yıkayarak başlayın. Pubis'ten sternuma kadar uzanan cilt üzerinden orta sagital bir kesi yapın. Ardından, pubis'teki ilk insizyondan her bir arka bacağa doğru oblik bir kesi yapın.

Kavisli pens kullanarak SRU membranlarını kavrayın. Ardından düz tırtıklı pens kullanarak derinin kesik kenarını kavrayın ve vücut duvarını S cs membranlarından dikkatlice soyarak ayırın.

Vücut duvarının alt kısmına tutunmuş olan dördüncü inguinal bellek bezini açığa çıkarmak için, bellek bezi içindeki lenf düğümü, bezdeki üç belirgin kan damarının kesişim noktasında yer alır ve yağ yastığı içinde yoğun bir nodül olarak hissedilebilir. Bir çift göz makasıyla, lenf düğümünü çevreleyen adipoz dokuyu kesin. Ardından, işaret parmağınızı derinin epidermal tarafına yerleştirerek düğümü yağ yastığından yukarı kaldırmak için baskı uygulayın ve düğümü kopararak çıkarın.

Kavisli bir pens yardımıyla lenf düğümünü atın. Şimdi cildin kenarlarını tutarken, kavisli bir pensin kavisli ucuyla meme yağ pedini kavrayın ve yağ pedini vücut duvarından yavaşça soyun. Farening dorsal yüzeyine doğru yağ pedinin yönünü takip ederek, meme bezinin tamamını tek parça halinde çıkarın.

Hafıza bezini steril plastik bir kesme bloğu üzerine yerleştirin ve nemli kalmasını sağlamak için bezin yüzeyine yaklaşık 200 µL kadar az miktarda besiyeri ekleyin. Ardından, yeni bir jilet kullanarak bezi bir milimetrelik parçalar halinde kıyın. Kıyılmış bezi dört porsiyona ayırın.

Ardından pens yardımıyla, dondurma ortamı içeren dört kriyotüpe dağıtın. Kriyotüpleri, dış bölmesinde 250 milliliters izopropil alkol bulunan bir Nalgene hücre dondurucusuna yerleştirin. Daha sonra hücre dondurucusunu 24 saat boyunca minus 70 degrees Celsius sıcaklıkta bekletin.

24 saat sonra, dondurulmuş bellek fragmanı tüplerini, transplantasyon için gerekli olana kadar sıvı azota aktarın. Her kriyotüp, dört ila sekiz konak farenin temizlenmiş yağ pedlerine transplant edilmek üzere yeterli miktarda bellek bezi fragmanı içerir. Üç haftalık konak bir farenin anestezi derinliği ayak parmağı sıkıştırma yöntemiyle doğrulandıktan sonra, fareyi karnı gergin olacak şekilde, ventral tarafı yukarıda ve ekstremiteleri açık halde bir cerrahi platform üzerinde sıkıca sabitleyin.

Preoperatif analjezik olarak bupivakain veya buprenorfin uygulanmalıdır. Subkütan olarak. Cerrahi bölge, forseps kullanılarak alkol ve iyot bazlı bir scrub ile dezenfekte edin. Pelvisin birkaç milimetre üzerinden deriyi tutun ve karnın üzerinden yukarı kaldırın.

Yara klipslerinin yerleştirilmesinin farenin idrar yapma yeteneğini engellememesi için ilk insizyonun üretraya çok yakın olmamasına dikkat ederek deriyi dikkatlice kıstırın. Ardından, SRU membranlarını delmemeye özen göstererek, pubis bölgesinden sternuma kadar uzanan midsagittal bir deri kesisi yapın.

Şimdi, başlangıç kesisinden itibaren cilt üzerinden orta hattan pelvis boyunca her bir arka bacağa doğru oblik kesikler yapın. Kavisli pensler kullanarak, ventral vücut duvarının S ceros membranlarını nazikçe tutun. Ardından, cildin kesik kenarını tutmak için doku pensi kullanın ve vücut duvarını ceros membranlarından uzaklaştırın.

Dördüncü inguinal hafıza bezini açığa çıkarmak için, dördüncü hafıza bezini belirleyin. Beşinci hafıza bezini belirleyin, meme nodunu ve noda giden iki arteri koterize edin. Dördüncü ve beşinci bezleri birbirinden ayırın, ardından beşinci bezin kenarını koterize edin.

Ardından, makas kullanarak, dördüncü meme bezinin yağ yastığını bölmek için düğümün hemen ventral kısmından yağ yastığını kesin. Kavisli pens yardımıyla yağ yastığının ventral kısmını sıkıca kavrayın ve vücut duvarından uzaklaştırın. Eksize edilen dokunun tek parça halinde, etiketlenmiş iki lam arasında bastırılarak Carnoy fiksatifinde tespit edilmesi önerilir.

Daha sonra doku boyanabilir, lam üzerine monte edilebilir ve temizlenmiş kenarlar açısından değerlendirilebilir. Pens kullanarak, yağ yastığının çıkarılan kısmının çevresindeki bellek bezine ait tüm kalıntıları temizleyin. Hayvan artık doku veya hücre transplantasyonu için hazırdır.

Taze veya hızlı dondurulmuş donör epitel dokusu, temizlenmiş yağ pedine nakledilebilir. Alternatif olarak, ölümsüzleştirilmiş hafıza epitel hücre hatları, hafıza tümör hücre hatları veya primer hücreler nakledilebilir. Hücre hazırlama ile ilgili detaylar için lütfen epitel fragmanlarının nakline ilişkin beraberindeki yazılı protokole bakınız. Hazırlandı.

Bu video, dondurulmuş bir epitel kriyotüpünün çözülmesi ve fragmanların taze medya içeren bir Petri kabına aktarılmasıyla başlar. DMSO'yu seyreltmek için makas kullanarak alıcı farenin temizlenmiş yağ pedi epitelyumunda bir cep oluşturun. Ardından, iğne pensi yardımıyla donör epitelyumdan alınan bir milimetrelik bir parçayı bu cebin içine yerleştirin.

Gerekirse, cep doku pensi ile kapalı tutun ve dokunun yerinde kalması için iğne pensini geri çekin. Derinin karşıt kenarlarını kavrayın. Bunları pensle birlikte tutun.

Bunları ventral vücut boşluğunun seroz membranlarından kaldırın ve yara klipsleri ile kapatın. Midsagittal insizyonu kapatmak için iki klips, her bir oblik insizyon için ise bir klips kullanın. Gerekirse üretranın tıkanmasını önleyin.

Midsagittal ve oblik insizyonların kesişim noktasındaki cilt boşluklarını bir sütür ile kapatın. Fareyi kafesine yerleştirin ve fare ayılana kadar kafesi ısıtıcı lambanın altında tutun. Yara klipsleri iki hafta sonra çıkarılmalıdır.

Aşağıdaki slaytlar, besleme pedi temizlendikten ve epitel nakli yapıldıktan sonra konak hafıza bezinde nelerin bulunabileceğinin temsili görüntülerini göstermektedir; bu görüntü, üç haftalık bir fareden çıkarılan endojen hafıza epitelini göstermektedir. Bez temizleme prosedüründe, kesim kenarındaki net sınırlara dikkat edin. Temizlenmiş sınırları değerlendirmek için her prosedürün ardından buna benzer bir bütün mount (whole mount) hazırlanmalıdır.

Bu görüntü, şeffaflaştırma prosedüründen yedi hafta sonra farenin şeffaflaştırılmış yağ yastığını göstermektedir. Tüm yağ yastığının bellek, epitelyum, hematin ve asinlerden arındırılmış olduğuna dikkat edin. Şeffaflaştırma prosedüründen yedi hafta sonra şeffaflaştırılmış bir yağ yastığının boyanması da bezin bellek epitelyumundan arındırılmış olduğunu kanıtlamaktadır.

10 haftalık bir fareden alınan donör hafıza epiteli ile nakledilmiş, şeffaflaştırılmış bir yağ yastığının temsilci bütün montajı gösterilmiştir. Nakledilen epitelin normal epitelyal duktal ağaçlar, hematin ve asin oluşturduğuna dikkat edin. Şeffaflaştırılmış bir yağ yastığının ve hafızanın boyanması.

Aynı yaştaki epitelyal transplantasyon, ekzojen epitelyumdan normal epitelyal duktus üretimini ortaya koymaktadır. Burada, berraklaştırılmış bir yağ yastığının hematoksilin ve eosin boyaması, meme tümörüne gelişmiş bir epitelyal transplantasyonu göstermektedir. Size meme epitelyumunun nasıl hasat edileceğini ve meme epitelyal transplantasyonunun nasıl yapılacağını göstermiş olduk.

Bu prosedür uygulanırken, nodu ve meme ucunu koterize etmek için dördüncü ve beşinci bez arasındaki bağlantıları kesmeyi ve endojen epitelyumun tüm izlerini temizlemeyi hatırlamak önemlidir. Endojen epitelyumun temizlenmiş yağ yastığına doğru büyüme olasılığının bulunmadığından emin olmanız gerekir. Ayrıca, temizleme sınırlarını kontrol etmek için meme bezinin çıkarılan kısmının tamamının alınması tavsiye edilir.

İşte böyle. İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.