Name: Fare Oosit alımı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: Keşfedin Peromyscus farelerinden oosit ve embriyo izolasyonu için üreme biyolojisi yöntemini. Bu protokol gen ifadesi çalışmaları ve transgenik araştırmalar için hücre toplama verimliliğini artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Peromyscus Genetik Menkul Kıymetler Merkezi Mike Dewey onun yardımıyla, sabır ve bilgi için teşekkür etmek istiyorum.

Embriyo / Oosit alımı <ol><li> Embriyolar / oosit alımı öncesinde en az iki saat, 37 º C CO 2 kuvöz ve FHM KSOM yerleştirilir -20 ° çözülmüş olmalıdır. Üç içbükey sığ kuyulardan içeren bir cam tabak inkübatör KSOM ev damla kullanılır. Dehidratasyonu önlemek için, KSOM ve çanak alt kısmında su kapaklı bir kap konur. Bu cihaz, madeni yağ kullanılmadan buharlaşmasını önler. </li><li> Yumurtladığımı kadın siyon hatası FHM medya yerleştirilir. Yönelim ve sağlam bir infindibulum sağlamak için, bir yumurtalık, rahim, yumurtalık ve küçük bir bölümü ile birlikte küçük bir bölümü kesilir. Künt 30 iğne künt iğne infindibulum içine sokarak yumurtalık embriyolar / oosit dışarı atmak için kullanılır. Yumurtalık boru geçirmek için bir iğne için çok küçük olduğundan infindibulum embriyolar almak için kullanılması gerekir. Infindibulum tahrip olması halinde, yumurtalık ya da açık dilimlenmiş veya embriyolar sıkılmış olmalıdır. </li><li> Embriyolar / oosit Mikroskop Petri kabı dibine batırdı yağ damlacıkları üzerine odaklanarak FHM medya bulundu. Bu, yüksek büyütme daha geniş bir görüş alanı sağlar olarak embriyo / oosit izolasyonu 20x elde edilebilir. Embriyo / oosit çevresinde açık bir halka var yuvarlak yağ damlacıkları gibi görünüyorsun. Çekilmiş bir cam kapiller kullanarak Ağız pipetleme, kuluçka ve daha fazla manipülasyon için KSOM embriyo / oosit taşımak için kullanılır. </li></ol> Oosit Alma Usulü Hazırlık <ol><li> FHM çözülme ve kSOM hazırlamak. </li><li> Birkaç saat önce, yer altındaki su ile ucu kutusu, CO 2 kuvöz yerine yumurta kabı ve yeri kSOM. </li><li> Laboratuara kafesleri getirin ve hasat kadın öldürmek. </li><li> Yumurtalık yumurtalık parçası kesilmiş olmadığını sağlamak için bazı yumurtalık ve rahim kesmek için dikkatli olmak Kes. </li><li> Küçük Petri kabındaki FHM medya yerleştirin. </li><li> Ateş basması için kullanılan bir çift daha FHM medya Petri kutularına dökün. </li></ol> Flushing <ol><li> Spiral ucu ile bir 1ml iğne bağlanan bir kızarma iğne (30 ölçer künt) kullanın. </li><li> Yumurtalık parçası takılı kalmış yanında bulundu infundibulum takın, bir yumurtalık, bir zaman ve iğne kullanarak çekin. Infundibulum yok ve olamaz, daha sonra iki forseps almak ve Boruların bir ucundan tutun. Diğer forsepsle ile hafifçe herhangi bir embriyonun çıkarmak için, bir diş macunu tüpü gibi sıkmak. Not: Bu, bir çok doku ile gelecek büyük miktarda Petri kabındaki karışıklık yaratacak, böylece daha sonra farklı bir Petri kabı kullanmak isteyebilirsiniz . </li><li> , Embriyoların mikroskop yağ parçaları üzerinde odak ve net bir daire ile etrafında yuvarlak &quot;yağ parçası&quot; aramak için. Not: embriyolar yağ olarak aynı görünüme sahip, bu yüzden bulmak zor olabilir. Embriyolar dibine çöker, bu nedenle orada bak. </li><li> Alıcı kadın vajinal smear yapın. Bu aşamada, pseudopregnant olmalıdır. </li></ol>

Bu makalede, yumurtlama indüklenen (süperovulasyon) Peromyscus oosit alma göstermektedir. Süperovulasyon (doğal östrus döngüsü karşı) kullanımı nedeniyle çok daha fazla çıkan numaraları yaygındır. Ancak, yumurtlama ve kültür ikna etmek için kullanılan hormonlar etkileri olabilir, bu oosit / embriyoların kullanarak sonuçları yorumlanırken dikkatli alınmalıdır. Östrus onaylandığı zaman, kadınlarda euthenized ve siyon hatası yumurtalık küçük bir bölümünü birlikte kurtarıldı. Over küçük bir bölgenin infindibulum konumu için bir belirteç...

<table><tbody><tr><td>Yıkama iğnesi</td><td>Araç</td><td>Zephyrtronics</td><td>ZT5-130-L</td><td>30 G küt uçlu</td></tr><tr><td>Forseps (2)</td><td>Araç</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5060</td><td></td></tr><tr><td>Peromyscus</td><td>Hayvan</td><td>Peromyscus Genetic Stock Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Araç</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5880</td><td></td></tr><tr><td>FHM HEPES Tamponlu Besiyeri</td><td>Reaktif</td><td>Specialty Media</td><td>MR-025-d</td><td></td></tr><tr><td>KSOM Embriyo Kültür Besiyeri (5x 10 mL)</td><td>Reaktif</td><td>Specialty Media</td><td>MR-020P-5F</td><td></td></tr><tr><td>Ağız Pipeti</td><td>Araç</td><td></td><td></td><td>Cam kılcal tüplerden çekilmiş ve kauçuk hortuma bağlanmış</td></tr><tr><td>Oosit tutma kabı</td><td>Araç</td><td></td><td></td><td>Konkav oyuklara sahip cam kap</td></tr></tbody></table>

fare oosit alımı

Retrieval of Mouse Oocytes

Bugüne kadar, sadece birkaç çalışma Peromyscus embriyogenez veya üreme biyolojisi başarılı manipülasyonlar bildirdin. Peromyscus Genetik Stock Merkezi (http://stkctr.biol.sc.edu) ile birlikte, biz bu sistemi geliştirmek için gerekli belirgin farklılıklar karakterize edilir. Oosit / erken embriyo alma optimize etmek için öncelikli bir hedef olmuştur.

Bu protokol, farelerde yumurtalık açılan oosit ve erken evre döllenmiş embriyolar tekniği göstermektedir. Infindibulum belirlemek ve künt bir sonu iğne içine girmek için doğru işlemi gerçekleştirmeden yeteneği esastır.

Fare Oosit alımı

Bugüne kadar, sadece birkaç çalışma *Peromyscus* embriyogenezinin veya üreme biyolojisinin başarılı manipülasyonlarını bildirmiştir. *Peromyscus* ile birlikte...

Benim adım Amanda dli. University of California Irvine'daki Dr. Paul Verana'nın laboratuvarından geliyorum. Bugün size oosit toplama prosedürünü göstereceğim.Bu işlem, videx'in dişiden izole edilmesini gerektirir. Ovex izole edildikten sonra, videx üzerinden FHM medyumu enjekte edeceğiz ve ardından uterus üzerinden cytes çıkış yapacaktır. Bu işlem tamamlandığında, medyum içindeki cytes'leri izole edeceğiz ve bunları gelecekteki deneylerde kullanacağız.Bu prosedürü, sitlerin izolasyonuna ek olarak, belirli zaman noktalarındaki embriyoları izole etmek için de kullanmak isteyebilirsiniz. Bu prosedürü video formatında görmenizi istememizin bir nedeni, oviduktun farklı kısımlarının ayırt edilmesinin oldukça zor olabilmesidir. Bu videoda, FHM medyasını enjekte edeceğiniz infundibulumu göstereceğim.Kullanacağınız diseksiyon araçları, iki set keskin pens ve bir çift keskin makastır. Dişiden alınan ova kanalları, 35 milimetrelik bir doku kültürü kabı içindeki FHM medyumuna yerleştirilecektir. Yumurtalar, bir mililitrelik bir şırıngaya takılı 30 milimetrelik küt uçlu bir iğne kullanılarak geri alınacak ve uc keskin bir pens ile sabitlenecektir.FHM, sitlerin toplanması için kullanılan bir tutma ortamıdır. KSOM ise, döllenmeleri durumunda sitlerin inkübatör içinde büyümelerini sağlamak için kullanılan ortamdır. Yumurtalar ve embriyolar ovidukttan alındıktan sonra, kapiler tüpten çekilmiş bir cam transfer pipeti kullanacağız, buna bazı borular ekleyeceğiz ve bunları ağızla çekerek bir tutma ortamına aktaracağız.Embriyoları ve yumurtaları tutmak için cam bir konkav kap kullanılır. Bunlar, daha kolay bulunmaları için ayrı bölmelerde olacak şekilde her bir konkav daireye yerleştirilebilir. Bu düzenek, yağ kullanılmadan bir CO2 inkübatörüne yerleştirilebilmesi için bu kabın içerisine konur.Kullanılan medyuma bağlı olarak, FHM medyumunun veya KSOM'un üzerine, tabana su konularak musluk kapatılır ve sıvı yerinde tutulur. Kılların uzaklaştırıldığından emin olmak için %70 etanol kullanılır. Karın bölgesine küçük bir kesi ve karın boşluğuna bir insizyon yapılır.Karın bölgesini açığa çıkarmak için yapılan kesiyi genişleteceğiz. Rahim görünür olduğunda, bağırsakları kenara çekeceğiz; böylece rahim hemen aşağıda kalacaktır. Rahim Y şeklindedir ve rahim kısımlarını dikkatle ayıracağız.Kesildiğinde, ovidukt spagettiye benzer. Oviduktun bir kısmını almaya çalışacağım. UCT'yi ve yağla çevrili olan yumurtalıkların bir kısmını alacağım.Diğer taraf da alınacak. Bu noktada, tekrar, yumurtalığı veya rahimi kaldıracağız. Buradaki rahimi kaldırın, bağlantı noktasının altından kesin. Vid kanalları bu aşamada bulunur.OV overinin bir kısmını yanımıza alacağım. Bu kısım daha sonra besiyerine yerleştirilecek. Uterus hâlâ kasılıyor.Uterus düz kastan oluşur, bu nedenle vücuttan ayrılmış olsa bile nöronlar hala ateşlenmeye devam eder. Uterus burada gösterilmiştir. OV kanalı spagettiye benzerken ve yumurtalık bunun üzerindeyken, OV kanalı aslında yumurtalığa bağlı değildir.Şu an için yumurtalığın sadece bir kısmını göstermiş olsak da, 30 gauge küt uçlu iğneyi tuttuğum baskın elim sağ elimdir. Bunu, in fibula'yı izole etmek için bir penset gibi kullanıyorum. İzoleme işlemi tamamlandıktan sonra, küt uçlu iğneyi in fibula'ya yerleştireceğim ve uterustan dışarı akacak bir miktar sıvı enjekte edeceğim.Sol elimle keskin forseps tutuyorum. Bu, fibula içindekileri izole etmek ve her şeyi yerinde tutmak için kullanılır. Am dula, burada izole edilen trompet şeklinde bir yapıdır.İğnemin ucu, doku tabakasının arasından geçen fibulada. Tamam. Tüm embriyoları ve yumurtaları izole ettiğimden emin olmak için, rahmi bir diş macunu tüpü gibi sıkmayı tercih ediyorum. Yağ yastıkçıklarına odaklandığınızda, mükemmel şekilde simetrik görünen yağ damlacıklarına benzer yapıları ararsınız.Şu an tam olarak o uzun yağın solunda bir tane var. Bu tek bir yumurta. Yapacağım şey, ağız pipetiyle yumurtayı alıp, yumurtaları izole edebilmemiz için biraz daha tutma besiyerine koymak.Bugün size dişi üreme sisteminden hücrelerin nasıl izole edileceğini gösterdim. Ayrıca, oviduktin farklı yapılarını da gösterdim. Özellikle, FHM medyumunu enjekte edebileceğiniz tek yapı olan infundibulumu inceledik.30 gauge bir iğne ile işlemi gerçekleştiriyorum. Bu teknikle, dişinin üreme yolunda bulunan sitositleri ve varsa embriyoları izole ettim. Bunları gen ekspresyon çalışmaları veya transgenik çalışmalar için kullanabilirim.

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Oosit mayotik olgunlaşması sırasında kromozom segregasyon hataları nedeniyle anöploidi yatkındır. Anöploid yumurta, kısırlık, düşüklere veya gelişimsel bozukluklar, Down sendromu gibi neden olabilir. Burada, yumurta ve mayotik olgunlaşma incelemek ve Ploidi değerlendirmek için yöntemler seçim malzemeleri tanıtmak için yöntemler açıklanmaktadır.

Fare Oosit Mikroenjeksiyon, olgunlaşması ve ploidi Değerlendirmesi

Bu videoda, yeni hasat edilmiş fare yumurtalıklarından antral oositlerin izolasyonu anlatılmaktadır. Bu antral oositler daha ileri karakterizasyon ve gelişimsel çalışmalar için kullanılabilir.

Fare Antral Oosit İzolasyonu: Taze Hasat Edilmiş Fare Yumurtalıklarından Antral Oositleri İzole Etmek İçin Bir Yöntem

Burada, fare oosit mayoz mili montaj ve organizasyon değerlendirmek için immünoflüoresans analizi ile takip özgü siRNA aracılı mRNA tükenmesi için bir protokol mevcut. Bu protokol, transkript in vitro tükenmesi ve farklı mili ve / veya oositlerde MTOC ilişkili faktörler fonksiyonel değerlendirmesi için uygundur.

SiRNA aracılı susturma Mouse Oositlerinin içinde mayoz Mili Değerlendirmesi

Burada Nükleolar organizasyon dayalı fare antral oosit karakterizasyonu için bir protokol mevcut.

Nucleolar Kromatin Teşkilatı dayanarak Fare Antral OOSİT İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Oogenesis memelilerde özellikle kromozom missegregation nedeniyle hataya, olduğu bilinmektedir. Bu el yazması için fare profaz, yaymak Kromatin hazırlama yöntemleri açıklar metafaz ı ve II sahnelenen yumurtalar. Bu temel teknikler Kromatin bağlı proteinler ve kromozom morfolojisi memeli oogenesis boyunca çalışma sağlar.

Kromatin fare oosit ilerleme profaz metafaz II analizi için hazırlıklar yaymak

Yakın kızılötesi femtosaniye lazer kullanılarak metafaz I sırasında fare oositlerinde sitoplazmik mikrotübül düzenleme merkezlerinin tükenmesini sağlayan optimize edilmiş bir protokol sunulmaktadır.

Fare Oositlerinde Sitoplazmik Mikrotübül Düzenleme Merkezlerinin Multi-Foton Lazer Ablasyonu

Kromozom ayrışmasında hata, oositlerde yaygın bir özelliktir. Bu nedenle, iş mili montaj kontrol noktasının incelenmesi, sağlıklı yumurta üretmek için gereken mekanizmalar hakkında önemli ipuçları verir. Mevcut protokol, fare oositlerinde iş mili montaj kontrol noktası bütünlüğünü değerlendirmek için üç tamamlayıcı tahlil tanımlamaktadır.

Fare Oositlerinde İş Mili Montaj Kontrol Noktası Bütünlüğünün Değerlendirilmesi

Bu protokol, hücre iskeletinin nükleer şekil ve fare oosit sistemindeki iç zarsız organeller üzerindeki fiziksel etkisini belgelemek için deneysel bir çerçeve sağlar. Çerçeve, diğer hücre türlerinde ve bağlamlarında kullanılmak üzere uyarlanabilir.

Fare Oosit Çekirdeğinin Hücre İskeleti Tabanlı Ajitasyonunun Uzamsal Ölçeklerde Yakalanması

Bu protokol, fare oositlerinin in vitro olgunlaşması, in vitro döllenme ve ardından blastosist evresine kadar embriyo kültürü prosedürlerini açıklar.

Fare Oositleri In Vitro Olgunlaşma, Döllenme ve Preimplantasyon Embriyolarının Kültürü

Bu film ve protokol nükleer transfer öğrenmeye yardımcı olmayı amaçlamaktadır.

Fare Oosit içine Nükleer Transfer

Keşfedin Peromyscus farelerinden oosit ve embriyo izolasyonu için üreme biyolojisi yöntemini. Bu protokol gen ifadesi çalışmaları ve transgenik araştırmalar için hücre toplama verimliliğini artırır.

Fare Oosit alımı

Daha fazla video keşfet