Name: Organizatör ve Hayvan Kutbu eksplantlar Xenopus laevis Embriyolar ve Hücre Yapışma Testi Meclisi diseksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 21 s
Description: Öğrenin Xenopus laevis embriyolarından organizatör ve hayvan kutbu eksplantlarının diseksiyonunu ve hücre yapışma testi protokolünü. Bu yöntem gelişim biyolojisinde hücre davranışlarını ve yapışma moleküllerini incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yapışma Odaları hazırlanması (bir gün önce enjeksiyon / diseksiyonu) Yapışma Testi Odaları Geleneksel bir bileşik mikroskobu (sahne üzerinde optik bulur) varsa, bu düşük bir yükseklikte yapışma odasına aşağıdaki gibi yapmak için ncecessary. Eğer ters-optik mikroskop kullanılarak, daha sonra &quot;Nunc Lab-Tek odacıklı Coverglass&quot; sadece kullanılan ve adımları atlayın # 1 - 2. <ol><li> 40 x 24mm kapak astar üzerine &quot;basın-mühür silikon izolatör&quot; takın. Temiz masa üstü kapak kayma sıkıca yalıtkan basın ve yalıtkan herhangi bir hava kabarcıkları olmadan tamamen takılı olduğundan emin olun diğer taraftan bakın. </li><li> İsteğe Bağlı: yapışma odalarına kuru döngüsü Whatman filtre kağıdı ve otoklav ile sterilize etmek için cam Petri kabı koyun. RT serinleyin. </li></ol> Kaplama Odası <ol><li> 200ml otoklavlanmış bir yapışma odasının merkezi üzerine kaderin (10mg/ml) veya fibronektin (20mg/ml) çözüm çalışma sigmacoated sarı ipuçlarını kullanarak, bir damlacık koyun. 4 saat oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> Kaderin veya fibronektin çözüm dışarı atın ve bir 1.5ml tüp transfer. Bu çözüm, önümüzdeki iki hafta için yeniden kullanılabilir. </li><li> Odanın engellemek için% 4 BSA MBS-H 1x 500ml koyun. 1 saat oda sıcaklığında inkübe edin. </li><li> BSA çözüm aspire. 1x MBS-H 500ml odasına iki kez yıkayın. İkinci yıkamadan sonra, MBS-H (tamamen değil) en aspirat ve 4 º C&#39;de kapalı bir kapta saklayın Bu yapışma odasının sonraki 2 - 3 gün iyidir. </li></ol> Hayvan kap eksplant Diseksiyon ve ayrılma <ol><li> Otoklavlanmış 1x MBS-H seyreltilmiş non-otoklavlanmış orta ayrışmış hayvan kap hücreleri rahatsız bazen küçük mikroplar taşır gibi, 0.1x MBS-H enjekte edilen embriyolar, inkübe edin. </li><li> 60mm yemekleri örneklerin sayısı olarak en azından çok, 1x Barth agaroz plakaları ve CMF-MBS agaroz plakaları olun. 1x Barth plakaları otoklavlanmış 1x MBS-H dökün. CMF-MBS plakalar için, CMF-MBS 10ml dökün. </li><li> Embriyoların aşamada 8.5, 1x Barth plaka hayvan kapakları diseksiyon başlar. 10 - numuneler ortalama 15 eksplantlar bir deney için genellikle yeterlidir. </li><li> CMF-MBS plaka hayvan kap eksplantlar aktarın. 45 - 60 dakika için eksplantlar eksplantlar tamamen ayrışmış kadar inkübe edin. Nazik ajitasyon her 15 dakikada bir ayrışma yardımcı olacaktır. </li></ol> Hücre Yapışma Testi <ol><li> Hücrelerin Yayımlamak: 1x MBS-H 500ml Yukarıdaki bölümlerde, Yapışma Testi Odalar ve Kaplama Odası adımları hazırlanan yapışma odasına koyun. CMF-MBS plaka sigmacoated ve doğranmış-off sarı ipuçları P200 kullanarak yapışma odasına ayrışmış hayvan kap hücreleri aktarın. </li><li> İsteğe bağlı: Mümkünse, dikkatle, havaya hücreleri maruz kalmadan, yaklaşık 2 / 3 yarım orta kadar emmek. Yaklaşık olarak aynı ortamda yeterli Ca 2 içerdiğinden emin olun miktarda taze MBS-H + ve Mg 2 +. </li><li> 45 - 90 dakika oda sıcaklığında inkübe edin. Alt yüzeyinde bağlama olup olmadığını görmek için zaman zaman hücrelerin kontrol edin. </li><li> Şimdi hücrelerin mikroskop altında resim alabilir. </li><li> Izgara slayt camına yapışma odasına koyun. Yapışma odanın köşelerinden biri ızgara slayt bir köşesine hizalayın. Sayın ve birkaç farklı ızgaraları ekli hücrelerinin sayısını kaydedin. </li><li> Büyük bir plastik kova (örneğin, Tupperware, vb.) MBS-H 1L dökün. Yapışma slayt odasına yavaşça kovanın dibine koydu. Az beş dakika boyunca düşük devirli (50) - 60rpm orbital çalkalayıcı döndürün. </li><li> Bu bölümde, Hücre Yapışma Testi # 5 adım olarak yapıldı odasının aynı köşede, aynı grid slayt köşesine hizalayarak ızgara slayt geri yapışma odasına koyun. Yıkamadan önce sayılır olduğunu, aynı şebekeye bağlı kalır hücrelerinin sayısını. Yıkamadan sonra bağlı kalır hücrelerinin yüzdesini hesaplayın. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>1x MBS-H</td><td>Tampon</td><td></td><td></td><td>Modifiye Barth&amp;rsquo;s besiyeri: 1 L reçete: 5,14 g NaCl 5 mg KCl 0,2 g NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt; 0,2 g MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;&amp;#8226;7H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O 60 mg CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;&amp;#8226;2H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O 80 mg Ca(NO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;)2&amp;#8226;4H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;. 38 g HEPES, serbest asit. pH'ı NaOH ile 7,4'e ayarlayın. Otoklavlayın.</td></tr><tr><td>CMF-MBS</td><td>Tampon</td><td></td><td></td><td>Bu, MBS-H'nin Ca&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;/Mg&lt;sup&gt;2+&lt;/sup&gt;-içermeyen versiyonudur. 500 mL reçete: 2,57 g NaCl 37,5 mg KCl 0,1 g NaHCO&lt;sub&gt;3/sub&gt; 1,19 g HEPES, serbest asit. pH'ı NaOH ile 7,4'e ayarlayın. Otoklavlayın.</td></tr><tr><td>%1 agaroz/1x Barth&amp;rsquo;s plakları</td><td></td><td></td><td></td><td>örnek sayısı kadar</td></tr><tr><td>%1 agaroz/CMF-MBS plakları</td><td></td><td></td><td></td><td>örnek sayısı kadar</td></tr><tr><td>E-Kaderin/Fc kimera</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-2278</td><td>100x ana stok (1,0 mg/ml) hazırlamak için 0,1 mg katı E-kaderini, %40 gliserol içeren 100 µL 1x MBS-H içinde çözün. &amp;#8211;20 &amp;deg;C'de saklayın. Kullanmadan hemen önce 10 µg/ml çalışma çözeltisi hazırlamak için 1x MBS-H ile 1/100 dilüsyon yapın. Örnek başına 200 µL bu çalışma çözeltisine ihtiyacınız vardır.</td></tr><tr><td>Fibronektin, %0,1 çözelti</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F-1141</td><td>Bu önceden hazırlanmış çözelti 50x stok olarak kullanılabilir. Kullanmadan hemen önce 20 &amp;mu;g/mL çalışma çözeltisi hazırlamak için 1x MBS-H ile 1/50 dilüsyon yapın. Örnek başına 200 &amp;mu;L bu çalışma çözeltisine ihtiyacınız vardır. Katı Fibronektin kullanımını önermiyorum, çünkü stok çözeltiyi hazırlamak için %0,1 konsantrasyonda çözmek zordur. Daha pahalı olmasına rağmen, tutarlı sonuçlar elde etmek için bu önceden hazırlanmış %0,1'lik çözelti daha iyidir.</td></tr><tr><td>%4 BSA /MBS-H</td><td>Tampon</td><td></td><td></td><td>BSA: moleküler biyoloji sınıfı fraksiyon V</td></tr><tr><td>Sigmacoted sarı uçlar</td><td>Araç</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>No.1 lameller</td><td></td><td></td><td></td><td>40 mm x 24 mm veya 60 mm x 24 mm</td></tr><tr><td>Bas-mühürle silikon izolatör</td><td>Araç</td><td>Glace Bio-Labs</td><td>JTR20-2.5</td><td>2,5 mm derinlik x 20 mm çap</td></tr><tr><td>NUNC Lab-Tek Kameralı Lam</td><td>Araç</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-471</td><td>2 kuyucuk/lam</td></tr><tr><td>Izgaralı lam camı</td><td>Araç</td><td></td><td></td><td>veya hücre sayımı için Finder gratikülü</td></tr></tbody></table>

organizatör ve hayvan kutbu eksplantlar xenopus laevis embriyolar ve hücre yapışma testi meclisi diseksiyonu

Dissection of Organizer and Animal Pole Explants from Xenopus laevis Embryos and Assembly of a Cell Adhesion Assay

Kişinin kaş yapılan özel bir diseksiyon aracı - Bu video kaş bıçak kullanımı da dahil olmak üzere Xenopus laevis embriyolar, ajanda ve hayvan kutup eksplantlar hazırlanması için kullanılan tekniği göstermektedir. Yapışma tahlil montaj için protokol de önemli adezyon moleküllerinin varlığı için problar yüzey düzenleyen veya uygun şekilde gelişimi için kritik olan hayvan kutup hücreleri mevcut verilir.

Organizatör ve Hayvan Kutbu eksplantlar Xenopus laevis Embriyolar ve Hücre Yapışma Testi Meclisi diseksiyonu

Merhaba, ben Sochi Agata. California Üniversitesi Irvine'deki Dr. Ken Cho'nun gelişimsel ve hücre biyolojisi laboratuvarında doktora sonrası araştırmacıyım. Bugün, kurbağa XUS embriyosundan hayvan şapkası eksplantının veya organize edici eksplantın diseksiyonunu ve adezyon analizini göstereceğim.Bu prosedür, diseke edilmiş dokudan elde edilen hücrelerin hücre yapışma özelliklerini ve hücre morfolojisini incelemek için kullanılabilir. Bu prosedür, xenopus kurbağa embriyosundan belirli bir dokunun diseksiyonunu, bu dokunun kalsiyum ve magnezyum içermeyen ortamda dissosiye edilmesini ve ardından dissosiye edilen hücrelerin hücre yapışma molekülleri ile kaplanmış lam üzerine, kalsiyum ve magnezyum içeren koşullarda getirilmesini içerir. Bu prosedür ile diseke edilen hücrelerin hücre davranışını, hücre göçünü ve yapışma özelliklerini inceleyebiliriz.Tamam, embriyo diseksiyonu ve adhezyon deneyi prosedürünün tamamı için önce özel yabancı aletler kullanıyorum. Bu, kalsiyum ve magnezyum içermeyen 1x PBS, %1 agro püskürtülmüş olandır. Ve hemen buradaki, embriyoyu disekte ettiğiniz 1x PBS, %1 agro püskürtülmüş olandır.Ve işte bu bir diseksiyon, pensler dışında kullanılan özel bir diseksiyon

dissection-organizer-animal-pole-explants-from-xenopus-laevis-embryos

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu testte commissural aksonların yeniden yönlendirmek için bir sinyal molekülü yeteneği, burada kemik morfogenetik protein 7 (BMP7) değerlendirir. Embriyonik dorsal spinal kord bir eksplant COS hücreleri salgılayan aday büyüme faktörleri toplu bir komşu kültür. Eksplant içinde büyüyen Nokia'nın commissural aksonlar immünohistokimya ile görüntülendi.

Embriyonik Spinal Commissural Aksonlar yönünü difüze Sinyal Molekülleri yeteneği Assaying

Hayvan kapaklar eksprese gen ürün (ler), gelişmekte olan kanadını...

Doku belirlenmesi Hayvan Cap Nakli (ACT) Testi Xenopus laevis</em

Xenopus embriyonik epitel, epitel morfolojilerinden sırasında kutup geliştirme ve şekil değişikliği gibi hücre davranışlarını incelemek için ideal bir model sistem . Geleneksel sabit örnekleri histoloji giderek canlı hücre konfokal görüntüleme tarafından tamamlanmaktadır. Burada, kurbağa dokularda izole ve canlı hücre konfokal mikroskopi kullanılarak canlı epitel hücreleri ve hücre iskeletinin görselleştirmek için yöntemler göstermektedir.

Canlı hücre Görüntüleme ve Kantitatif Analiz Embriyonik Epitel Hücreleri Xenopus laevis</em

Xenopus embriyonik ektoderm hücre polarite çalışmaları için cazip bir model haline gelmiştir. Bir tahlil floresan proteinlerin hücre içi dağıtım ektoderm hücreler değerlendirilir olduğu açıklanmıştır. Bu protokol adresi sorular sinyal mekansal kontrolü ile ilgili yardımcı olacaktır.

Floresan Proteinleri Polarize Translokasyon Xenopus Wnt Sinyalizasyonu Cevabı Ektoderm

Dan Sinir Eksplantasyon Kültürleri<em&gt; Xenopus laevis</em

Xenopus laevis hücre kaderinin şartname ve primer hücre kültüründe bireyin retina hücrelerinin fizyolojik fonksiyonu eğitim için ideal bir model sistem sağlar. Burada retina dokuları diseksiyon ve kalsiyum etkinliği için görüntülü ve in situ hibridizasyon ile analiz edilir primer hücre kültürlerinde üretmek için bir yöntem mevcut.

Diseksiyon, Kültür ve Analizi<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embriyonik Retina Doku

Bu protokol Xenopus laevis neurulas gelen premigratory kranial sinir kret (NC) teşrih nasıl açıklanır. Bu eksplantlar, fibronektin ve in vitro kültürlenmiş üzerine kaplanır, ya da arka ana embriyolara aşılanabilirler. Bu teknik NC epitel-to-mezenşimin geçiş, göç, ve farklılaşma mekanizmaları eğitim veriyor.

Diseksiyonu<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Sinir Crest için<em&gt; In vitro</em&gt; Eksplantasyon Kültür veya<em&gt; In vivo</em&gt; Transplantasyon

El yazması burada Xenopus floresan levhası 'ligandların salgılanmasını ve difüzyon analiz yöntemleri basit bir kümesi sağlar. Bu ligand dağılımını değiştirmek için başka proteinlerin yeteneğini test ve morfojen degradeler düzenleyen mekanizmalar içgörü verebilir deneyleri izin verdiği için bir ortam sağlar.

Konfokal Analizi Kullanımı<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Wnt ve Shh morfogen Gradyanların modülyatorlar Soruşturma

Xenopus embriyolarında, blastocoel'in çatısından alınan hücreler pluripotenttir ve çeşitli dokular oluşturmak üzere programlanabilir. Burada, erken nöral gelişimin temel in vivo ve in vitro özelliklerini araştırmak için bir test sistemi olarak amfibi blastocoel çatı eksplantlarını kullanma protokollerini açıklıyoruz.

Kök hücre benzeri<em&gt; Xenopus</em&gt; Embriyonik Eksplantlarındaki Erken Nöral Gelişim Özellikleri Okuyacak<em&gt; İn Vitro</em&gt; Ve<em&gt; İn Vivo</em

Floresan kalsiyum görüntülemeile in situ hibridizasyonunu birleştiren ve deneycinin kalsiyum aktivitesi modellerini tek hücreli düzeyde gen ekspresyonu profilleriyle ilişkilendirmesine olanak tanıyan iki parçalı bir protokol salıyoruz.

Xenopus laevis'te Nöronal Öncül Karakterizasyonu için Floresan Kalsiyum Görüntüleme ve Daha Sonra Yerinde Hibridizasyon

Xenopus laevis embriyolarından izole edilmiş derin ektoderm hücrelerinden mukozisel epitel organoidleri geliştirmek için basit bir protokol uyguluyoruz. Çok güçlü atalar epitel goblet hücre öncüllerini yeniler ler ve organoidlerin yüzeyinde hücre geçişlerinin başlatılmasıve ilerlemesinicanlı olarak izlemesağlarlar.

Kenopus Embriyonik Hücrelerden Mukosiyaliyer Epitel Organoidler: Nesil, Kültür ve Yüksek Çözünürlüklü Canlı Görüntüleme

Öğrenin Xenopus laevis embriyolarından organizatör ve hayvan kutbu eksplantlarının diseksiyonunu ve hücre yapışma testi protokolünü. Bu yöntem gelişim biyolojisinde hücre davranışlarını ve yapışma moleküllerini incelemek için kullanılır.

Organizatör ve Hayvan Kutbu eksplantlar Xenopus laevis Embriyolar ve Hücre Yapışma Testi Meclisi diseksiyonu

Daha fazla video keşfet