Name: Bradford Protein Testi lineerleştirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-04-12T17:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: Öğrenin, Bradford protein testini lineerleştirme yöntemiyle biyokimyasal analizlerde hassasiyeti yaklaşık 10 kat artırın ve deterjan etkilerini azaltın. Bu yöntem, 590 nm ve 450 nm absorbans ölçümleriyle güvenilir protein konsantrasyonu belirlemenizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu kağıt, burada açıklanan orijinal araştırma ev sahipliği yapan merhum Dr. Zvi Selinger anısına adanmış.

Bradford Protein Kalibrasyon Grafik Doğrusallaştırma: 1 Bradford testinin yaygın olarak bilinen Coomassie parlak mavi protein tahlil, yaygın, hızlı ve kullanışlı bir protokol yanı sıra bağıl duyarlılık nedeniyle kullanılır . Ne yazık ki, büyük ölçüde protein konsantrasyonları (Şekil 1) üzerinde geniş bir eğrilik var. Bu nedenle, nispeten yüksek protein konsantrasyonları, 2-10 mg / ml BSA, sadece dar bir aralıkta daha iyi (Şekil 1, yeşil) lineer regresyon uygun kalibrasyon grafiği için kullanılır. Ancak, doğrusal olmayan büyük bir hata önlemek için kalibrasyon grafiği sınırlı giren bilinmeyen örneklerin protein konsantrasyonu gerektirir ve aynı zamanda sınırlı aralığında hassasiyeti azaltır. Doğrusal mikrogram miktarda protein mevcut değildir, özellikle ciddi bir sorun sunar ve genellikle bilinmeyen örneklerin birden fazla dilüsyonları gerektirir. Orijinal Bradford yazıda belirtildiği gibi, "doğrusal kaynak, boya iki farklı renk formları spektrumunun bir çakışma olmadığından reaktif kendisidir." 1. Aslında, üç tür Coomassie parlak mavi boya 2 testin normal asidik pH, asit-baz dengesi . Kırmızı, mavi ve yeşil formları sırasıyla 590, 470 ve 650 nm (Şekil 2) absorbans maxima var. Mavi, yoğun, 594 nm 3, 4 (Şekil 2) ışık emer karmaşık bir şekillendirme, protein bağlayan şeklidir. Bradford 1 (Şekil 3) "reaktif için arka plan değeri daha fazla boya proteine ​​bağlı olarak sürekli azalmaktadır" diye kaydetti. Bu nedenle, artan protein miktarları eklenir, protein boyası kompleksi emmez, 450 nm dalga boyunda absorbans değişimi ölçerek, 590 nm arka plan azalma hesaplamak için çalıştı. Bulduğumuz azalan arka plan kısmen değil, tamamen doğrusal hesapları (Şekil 4). Protein-boya bağlayıcı bir denge 5 olduğu gibi, çünkü, sonra ücretsiz boya konsantrasyonunda azalma doğrusal yanıt başka bir bozulma ürettiği hipotezi, kompleks oluşum değil, aynı zamanda ücretsiz boya, sadece protein konsantrasyonu bağlıdır. (Şekil 5). Değişken ücretsiz boya konsantrasyonu ile ilgili hem konular göz önüne alırsak, biz, protein konsantrasyon ve absorbans ölçümleri 590 nm, 450 nm (Şekil 6) üzerinde oranı arasında doğrusal bir ilişki tanımlayan matematiksel bir denklem geliştirdi. Teorik ve deneysel çalışmanın ayrıntılı bir açıklama Analitik Biyokimya 6 1996 yayında bulunabilir. Matematiksel denklemi deneysel olarak test edilmiş ve tüm protein konsantrasyonları aralığı (Şekil 7) üzerinde lineer bir kalibrasyon eğrisi verimi tespit edildi. Ayrıca, denklem Y ekseni önünü 6, doğru pH-bağımlı değeri bağımsız bir kararlılık tarafından da doğrulandı . Geliştirilmiş Bradford Protein Testi için ayrıntılı Protokolü, Mikroplaka Absorbans Okuyucu: <ol><li> Standart, sığır serum albumin 0.1 mg / ml stok solüsyonu hazırlayın. Herhangi bir diğer standart seçilmiş, ancak aynı standart tüm deneylerde kullanılan gerektiğini unutmayın olabilir. </li><li> Bilinmeyen örnekler deiyonize su ile seyreltilir. 5-50 mg / ml hedefliyoruz. Ancak, testin doğrusal aralığı için belirgin bir sınır olmadığı için daha yüksek veya daha düşük protein konsantrasyonları, kabul edilebilir. Ancak, ölçüm absorbans okuyucu doğrusal aralığı içinde olmalıdır. </li><li> Deiyonize su Bradford reaktifi (Bio-Rad) 2.5 kat sulandırınız. </li><li> 0 ve üç nüsha kuyuları (0-5 mg BSA kalibrasyon eğrisi oluşturma) BSA stok solüsyonu 10-50 ul ekleyin. / Ul 100 ulaşmak için deiyonize su ile tamamlayın. </li><li> Farklı bir kuyu, 100 ul triplicates bilinmeyen örnek ekleyin. Bilinmeyen örnek çeşitli konsantrasyonlarda doğruluğunu artırmak için kullanılıyor olabilir. </li><li> Tüm kuyulara seyreltilmiş Bradford reaktifi 100 ul ekleyin. Toplam hacmi 200 ul / iyi. </li><li> En az 5 dakika değil, renk gelişimi için fazla 60 dakika bekleyin. </li><li> Boş deiyonize su (ve sıfır protein boyası) 200 ul olmalıdır. </li><li> 590 nm ve 450 nm dalga boyunda absorbansı ölçülür. </li><li> , 590 nm net absorbans değerleri bölerek ve 450 nm dalga boyunda bir kalibrasyon grafiği hazırlayın. Sıfır protein (sadece boya) değer bir veri noktası (Şekil 8) olarak dahil olması gerektiğini unutmayın. </li><li> Kalibrasyon eğrisi (Şekil 9) lineer denklem dayalı bilinmeyen numune konsantrasyonu hesaplayın. </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar: Absorbans 590 nm tek bir dalga boyu, absorbans değerleri, 590 nm 450 nm üstü oranı aksine, lineer wi. protein konsantrasyonu (Şekil 10). Bilinmeyen örnek protein konsantrasyonu kalibrasyon eğrisi (Şekil 10, denklem) lineer denklem kullanılarak hesaplanmıştır olabilir. Ancak, artan doğruluğu bilinmeyen birkaç numune dilüsyonları ölçerek elde edilir. Bu amaçla, iki grafikler hazırlar. Ilk X ekseni (Şekil 11, sağ) mg protein ile standart bir kalibrasyon grafiği. İkinci grafikte X ekseni (Şekil 11, sol) orijinal sulandırılmamış örnek ul, bilinmeyen bir örnek. Boya sadece değeri (Şekil 11) her iki grafiklerde dahil edilmelidir. Bilinmeyen örnek protein konsantrasyonu bilinmeyen bir örnek ve standart eteklerinde (Şekil 11, denklem) bölünmesi ile elde edilir. <img src="/files/ftp_upload/1918/1918fig2.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Konvansiyonel Bradford kalibrasyon grafiği. Doğrusal aralığı yeşil sembollerle temsil edilmektedir. <img src="/files/ftp_upload/1918/1918fig1.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 protein-boya kompleks ve yalnız boya Spectra. <img src="/files/ftp_upload/1918/1918fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Protein-boya denge. <img src="/files/ftp_upload/1918/1918fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4 doğru hesaplanan arka plan Azaltma kısmen doğrusal azalır. <img src="/files/ftp_upload/1918/1918fig5.jpg" alt="Şekil 5" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 5"> Şekil 5 Protein-boya denge. <img src="/files/ftp_upload/1918/1918fig6.jpg" alt="Şekil 6" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 6"> Şekil 6 Bradford protein testinin doğrusallaştırma için matematiksel olarak. <img src="/files/ftp_upload/1918/1918fig7.jpg" alt="Şekil 7" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 7"> Şekil 7 Bradford kalibrasyon grafiği Doğrusallaştırma. <img src="/files/ftp_upload/1918/1918fig8.jpg" alt="Şekil 8" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 8"> Şekil 8 absorbans oranı değerlerinin hesaplanması. <img src="/files/ftp_upload/1918/1918fig9.jpg" alt="Şekil 9" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 9"> Şekil 9 A lineer Bradford kalibrasyon grafiği. <img src="/files/ftp_upload/1918/1918fig10.jpg" alt="Şekil 10" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 10"> Şekil 10 Bradford kalibrasyon grafiği Doğrusallaştırma. <img src="/files/ftp_upload/1918/1918fig11.jpg" alt="Şekil 11" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 11"> Şekil 11 Bilinmeyen numune konsantrasyonu hesaplama.

<ol><li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> Anal Biochem. 72, 248-254 (1976).</li>
<li>Chial, H. J., Thompson, H. B., Splittgerber, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+spectral+study+of+the+charge+forms+of+Coomassie+blue+G%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A spectral study of the charge forms of Coomassie blue G.</a> Anal Biochem. 209, 258-266 (1993).</li>
<li>Chial, H. J., Splittgerber, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+the+binding+of+Coomassie+brilliant+blue+to+proteins+at+low+and+neutral+pH%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A comparison of the binding of Coomassie brilliant blue to proteins at low and neutral pH.</a> Anal Biochem. 213, 362-369 (1993).</li>
<li>Compton, S. J., Jones, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+dye+response+and+interference+in+the+Bradford+protein+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Mechanism of dye response and interference in the Bradford protein assay.</a> Anal Biochem. 151, 369-374 (1985).</li>
<li>Congdon, R. W., Muth, G. W., Splittgerber, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+binding+interaction+of+Coomassie+blue+with+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">The binding interaction of Coomassie blue with proteins.</a> Anal Biochem. 213, 407-413 (1993).</li>
<li>Zor, T., Selinger, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linearization+of+the+Bradford+protein+assay+increases+its+sensitivity%3A+theoretical+and+experimental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Linearization of the Bradford protein assay increases its sensitivity: theoretical and experimental studies.</a> Anal Biochem. 236, 302-308 (1996).</li>
</ol>

Bradford protein tahlil performans ve bağıl duyarlılık kolaylığı nedeniyle popüler. Protokol ile elde edilen aralığı tüm protein konsantrasyonları üzerine doğrusallaştırma, bilinmeyen örnekler aralığında kalibrasyon grafiği düşmeye gerek yok, burada daha fazla testin kolaylaştırır sundu. Önemlisi, daha da geliştirilmiş protokol orijinal Bradford protokolü üzerinden aşağıdaki avantajları sağlar: <ol><li> Doğruluğunu arttırdı. </li><li> Hassasiyet, mümkün olduğunca az 50 ng BSA mikroplaka ...

<table><tbody><tr><td>Bradford ayıracı</td><td>Bio-Rad</td><td>500-0006</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serum Albümini</td><td>Amersco</td><td>0332</td><td></td></tr><tr><td>Çoklu plaka absorbans okuyucu</td><td>BioTek</td><td>Synergy2</td><td></td></tr></tbody></table>

bradford protein testi lineerleştirilmesi

Linearization of the Bradford Protein Assay

Bradford Coomassie parlak mavi tayininde protein mikrogram miktarların belirlenmesi, 590 nm&#39;de absorbans ölçümü ile gerçekleştirilir. Bu en yaygın test biyokimyasal ölçümleri normalleştirme amacıyla, hızlı ve basit bir protein, hücre lizatları, hücresel kesirler, ya da rekombinant protein örneklerinin kantifikasyon sağlar. Ancak, içsel bir doğrusal bu yöntemin duyarlılığı ve hassasiyeti uzlaşır. Bu, standart test koşulları altında 590 nm&#39;de absorbans ölçümleri ve 450 nm dalga oranı, protein konsantrasyonu ile kesinlikle doğrusal olduğunu göstermiştir. Bu basit bir prosedür doğruluğunu artırır ve 50 ng bovine serum albumin, 10 kat izin kantifikasyon hakkında testinin duyarlılığını artırır. Ayrıca, sık hücre lizatları oluşturmak için kullanılan deterjanların piyasaya girişim yeni bir protokol tarafından büyük ölçüde azalır. Kitlesel eylem ve Beer yasası temelinde geliştirilen bir lineer denklem deneysel veriler mükemmel uyuyor.

Hızlı ve rahat Bradford yöntemi ile protein tayini doğruluk ve hassasiyet içsel doğrusal tehlikeye düşer. Biz büyük ölçüde hassasiyeti artırır yaklaşık 10 kat testin duyarlılığını artırır ve anlamlı deterjanların müdahaleleri azaltıyor, basit bir doğrusallaştırma prosedürü göstermektedir.

Bradford Protein Testi lineerleştirilmesi

Bradford Coomassie brilliant blue analizinde mikrogram düzeyindeki protein miktarlarının tayini, 590 nm'deki absorbans ölçümü ile gerçekleştirilir. ...

Bradford protein analizi, artan miktarlarda BSA standardının ve bilinmeyen bir örneğin farklı seyreltilerinin 96 kuyucuklu plakaya eklenmesiyle başlar; değişken hacmi tamamlamak için deiyonize su eklenir. Ardından, boş kontrol (blank) kuyucuğu hariç tüm kuyucuklara Bradford reaktifi eklenir; boş kontrol kuyucuğunda sadece su bulunmalıdır. Beş dakika sonra, protein-boya kompleksinin tespiti için 590 nanometrede ve referans olarak 450 nanometrede absorbans ölçümü yapılır.Grafiğin doğrusallaştırılması için, 590 nanometre ve 450 nanometredeki absorbans değerlerinin oranı protein miktarı ile kesin olarak doğrusaldır. Merhaba, İsrail'deki Tel Aviv Üniversitesi Biyokimya Bölümü'ndenim, laboratuvardan [İsim/Kısaltma]. Bugün size, geliştirilmiş Doğrusallaştırılmış Bradford protokolünü kullanarak protein konsantrasyonunun belirlenmesi prosedürünü göstereceğiz.Laboratuvarımızda bu prosedürü, örneğin jelleri yüklemeden önce SZaS'deki protein miktarını normalize etmek için kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım. Bradford Analizi'nde, Coomassie brilliant blue boyasının üç formu, analizin olağan asidik pH değerinde asit bazlı bir dengededir.Kırmızı, mavi ve yeşil formların absorbsiyon maksimumları sırasıyla 470, 590 ve 650 nanometredir. Mavi form, proteinle bağlanarak 594 nanometrede yoğun ışık absorbe eden bir kompleks oluşturan formdur. Yaygın olarak kullanılan bu analiz yöntemi, geniş bir protein konsantrasyonu aralığında yüksek derecede eğrilik göstermektedir.Bu nedenle, kalibrasyon grafiği için yalnızca nispeten yüksek protein konsantrasyonlarının dar bir aralığı kullanılır, böylece grafik doğrusal regresyona daha iyi uyar. Doğrusalsızlığın bir nedeni, protein miktarı arttıkça azalan serbest boyanın 590 nanometredeki absorbansıdır. Doğrusalsızlık, protein-boya kompleksinin değil, boyanın kendisinin absorbans gösterdiği 450 nanometredeki absorbans değişiminin ölçülmesiyle kısmen azaltılır.Doğru hesaplanmış kör değerin çıkarılmasıyla, serbest boya konsantrasyonundaki azalma, lineer yanıtta başka bir bozulmaya neden olur; çünkü protein-boya bağlanması dengede olduğundan, kompleks oluşumu sadece serbest protein konsantrasyonuna değil, aynı zamanda serbest boya konsantrasyonuna da bağlıdır. Serbest boyanın değişken konsantrasyonu ile ilgili her iki sorun da dikkate alınarak, protein konsantrasyonu ile absorbans ölçümlerinin oranı (450 nanometreye karşı 590 nanometre) arasında lineer bir ilişkiyi tanımlayan matematiksel bir denklem geliştirilmiştir.Matematiksel denklem deneysel olarak test edilmiş ve tüm protein konsantrasyon aralığı boyunca doğrusal bir kalibrasyon eğrisi verdiği saptanmıştır. Başlamak için, standart sığır serum albümininle 0.1 mg/mL stok çözeltisi hazırlayın. Başka herhangi bir standart seçilebilir, ancak tüm deneylerde aynı standardın kullanılması gerektiğine dikkat edin.Bilinmeyen numuneleri deiyonize su ile seyreltin. Mililitre başına beş ila 50 mikrogram hedefleyin; ancak, analiz yöntemi için belirgin bir lineer aralık sınırı olmadığından daha yüksek veya daha düşük protein konsantrasyonları da kabul edilebilir. Yine de ölçümün, absorbans okuyucunun lineer aralığında olması gerektiğini unutmayın.Ayrıca Bradford reaktifini deiyonize su ile 2,5 kat seyreltin. Ardından, 0 ile 50 µL arasında BSA stok çözeltisini, 96 kuyucuklu bir plakadaki üç tekrarlı kuyucuklara ekleyerek 0 ile 5 µg BSA kalibrasyon eğrisi oluşturun; her bir kuyucukta 100 µL hacme ulaşmak için farklı kuyucukları deiyonize su ile tamamlayın. Bilinmeyen örnekler için üç tekrarlı 100 µL örnek ekleyin; doğruluğu artırmak için bilinmeyen örneğin birkaç farklı konsantrasyonu kullanılabilir.Son olarak, tüm kuyucuklara 100 µL seyreltilmiş Bradford reaktifi ekleyin. Kuyucuk başına toplam hacim 200 µL'dir. Ayrıca absorbansı ölçmek için bir kör örnek hazırlayın.Buna, sıfır protein boyası değil, 200 µL deiyonize su eklenmelidir. Renk gelişimi için kuyucuklar en az beş dakika, ancak 60 dakikadan fazla bekletilmelidir.590 nanometre ve 450 nanometre dalga boylarında absorbans ölçümüne geçiniz. Kör ölçüm için su kullanmayı unutmayınız. 590 nanometredeki net absorbans değerlerini 450 nanometredeki net absorbans değerlerine bölerek bir kalibrasyon grafiği hazırlayınız.Sıfır protein değerinin bir veri noktası olarak dahil edilmesi gerektiğini unutmayın. Bilinmeyen örneğin konsantrasyonunu, kalibrasyon eğrisinin doğrusal denklemine dayanarak hesaplayın. Tek bir dalga boyu olan 590 nanometredeki absorbansın aksine, 590 nanometredeki absorbans değerlerinin 450 nanometredeki değerlere oranı protein konsantrasyonu ile doğrusal bir ilişki gösterir.Bilinmeyen örneğin protein konsantrasyonu, kalibrasyon eğrisinin doğrusal denklemi kullanılarak basitçe hesaplanabilir. Ancak, bilinmeyen örneğin birkaç farklı dilüsyonu ölçülerek daha yüksek doğruluk elde edilir. Bu amaçla, iki grafik hazırlayın.Birincisi, x ekseninde mikrogram protein bulunan standartlar için bir kalibrasyon grafiğidir. İkinci grafik, x ekseninde orijinal seyreltilmemiş örneğin mikrolitreleri bulunan bilinmeyen örnek içindir. Sadece boya değeri her iki grafiğe de dahil edilmelidir.Bilinmeyen örneğin protein konsantrasyonu, bilinmeyen örnek ve standarttaki eğimlerin birbirine bölünmesiyle elde edilir. Geliştirilmiş, lineerleştirilmiş bir Bradford protokolü kullanarak protein konsantrasyonunun nasıl ölçüleceğini size göstermiş olduk. Bu prosedürün kullanılması, analiz hassasiyetini yaklaşık 10 kat artırır, doğruluğunu önemli ölçüde yükseltir ve deterjanların neden olduğu girişimi belirgin şekilde azaltır.Sıfır proteinli boya örneği yerine, uygun boşluk olarak suyun kullanılması gerektiğini hatırlamak önemlidir. İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde başarılar dileriz.

linearization-of-the-bradford-protein-assay

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Microvolume örnekleri doğal yüzey gerilimi, küvet ya da kılcal damarların kullanmadan örnekleri korumak için kullanan bir spektrofotometre sistem tarafından sayısal. Ölçülebilir olan protein konsantrasyonları ve hız dinamik aralık, bu yöntem büyük ölçüde artmıştır.

NanoDrop 2000c Spektrofotometre kullanılarak Microvolume Protein Konsantrasyonu Tayini

Video, bir numunedeki hedef protein ekspresyonunu ölçmek için toplam protein normalizasyonuna dayalı bir western blotlama tekniğini göstermektedir. Numunenin toplam protein boyaması kullanılarak, hedef proteinin nispi ekspresyon seviyesini belirlemek için bir oransal analiz yapılır.

Protein Ekspresyon Seviyelerini Tahmin Etmek için Kantitatif Western Blotting

Burada protokolleri Bio-tabaka interferometrisi ile protein-protein etkileşimleri kinetik analizleri tarif eder. Hücresel enerji metabolizmasında yer alır F tipi ATP sintaz, bakteriler kendi ε alt birimi ile inhibe edilebilir. Biz, ε inhibitör C-terminal alanı ile katalitik kompleksinin etkileşimleri incelemek için Bio-tabaka interferometre adapte edilmiştir.

Protein-protein etkileşimleri ve Allosterik Ligand Etkileri Kinetiği Ölçüm Bio-katman Interferometri

Hedef proteinler üzerinden toplam protein ürünleri ölçmek için bir ticari platformu kullanarak bir kılcal tabanlı immunoassay gösterilmiştir. Buna ek olarak, pozlama süresi, protein konsantrasyonu ve antikor seyreltme tahlil parametreleri bir hücre kültür modeli sistemi için optimize edilmiştir.

Yordam ve anahtar optimizasyon stratejileri için bir otomatik Kapiler elektroforetik tabanlı Immunoassay yöntemi

Bu iletişim kuralı için ticari ışık mikroskobu tarama kullanarak floresans dalgalanma spektroskopisi üzerinde temel protein homo-Oligomerizasyonda vitro miktarının kalibrasyon-Alerjik bir yaklaşım açıklar. Doğru satın alma ayarları ve analiz yöntemleri gösterilir.

Kalibrasyon-Alerjik Vitro miktar Protein Homo-Oligomerizasyonda ticari araçları ve ücretsiz, açık kaynak parlaklık analiz yazılımı kullanarak

Bu yöntem protein düzeyleri farklı dokular ve standartlaştırılmış bir nicel Batı blotting yaklaşım kullanarak farklı gelişim timepoints karşılaştırılması için sağlam ve tekrarlanabilir bir yaklaşım açıklar.

Sağlam dokulara ve standart nicel Western Blot kullanarak geliştirme boyunca Protein düzeylerinin karşılaştırılması

Bu protokol, ticari olarak temin edilebilen protein bileşenlerini kullanarak boncukların yüzeylerinde aktin kuyruklu yıldızlarının nasıl üretileceğini açıklamaktadır. Bu tür sistemler, hücrelerde bulunan çıkıntılı yapıları taklit eder ve kuvvet üretiminin fizyolojik mekanizmalarını basitleştirilmiş bir şekilde incelemek için kullanılabilir.

Aktin bazlı hareketliliğin ticari olarak temin edilebilen proteinlerle yeniden yapılandırılması

Bu makale, Bradford tahlili ve analitik bir cihaz olarak bir akıllı telefon kullanarak protein miktar tayini için bir protokol sağlar. Numunelerdeki protein seviyeleri, bir akıllı telefonla çekilen bir mikroplaka resminden çıkarılan renk verileri kullanılarak ölçülebilir.

RGBradford: Akıllı Telefon Kamerası ile Protein Kantitasyonu

Burada, ubikitin ligazları Von Hippel-Lindau E3 ligaz (VHL) ve Cereblon (CRBN) içeren kimeraları (PROTACS) hedefleyen proteoliz tarafından indüklenen üçlü kompleks oluşumunun biyofiziksel karakterizasyonu için protokolleri açıklıyoruz.  Burada gösterilen biyofiziksel yöntemler arasında yüzey plazmon rezonansı (SPR), biyokatman interferometrisi (BLI) ve izotermal titrasyon kalorimetrisi (ITC) bulunur.

Kimeraları Hedefleyen Proteoliz Tarafından İndüklenen Üçlü Kompleks Oluşumunun Değerlendirilmesi için Biyofiziksel Testlerin Geliştirilmesi ve Uygulanması (PROTACS)

Bu makale, streptavidin bazlı bir biyokatman interferometrisi (BLI) sistemi kullanarak DNA-protein etkileşimlerini incelemek için bir protokolü açıklamaktadır. Etkileşimin denge bağlanma afinitesini(KD) belirlemek için temel veya ileri bağlanma kinetiğini kullanmak için temel adımları ve hususları ana hatlarıyla belirtir.

DNA-Protein Etkileşimlerinin Streptavidin Tabanlı Biyotabaka İnterferometrisi ile İncelenmesi

Öğrenin, Bradford protein testini lineerleştirme yöntemiyle biyokimyasal analizlerde hassasiyeti yaklaşık 10 kat artırın ve deterjan etkilerini azaltın. Bu yöntem, 590 nm ve 450 nm absorbans ölçümleriyle güvenilir protein konsantrasyonu belirlemenizi sağlar.

Bradford Protein Testi lineerleştirilmesi

Daha fazla video keşfet