Name: Drosophila burnumun Eklenti Tepkisi (PER) Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 40 s
Description: Öğrenin Drosophila'da proboscis extension response (PER) testini; tat davranışlarını incelemek için şeker çözeltileri kullanılarak sineklerde duyusal tepkiler ölçülür. Bu yöntem nörobilim ve davranışsal biyoloji araştırmalarında değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Paul Graham, video sunumu bir kamera adam olarak hizmet için teşekkür ederiz.

Açlık <ol><li> İlk olarak, sinek açlıktan. </li><li> Kim-silin boş bir flakon su ile ıslatılmış küçük bir parça koyun. </li><li> Transferi 20-30, iyi beslenmiş, boş flakon uçar. </li><li> Kağıt nemli olduğundan emin olmak için her 12 -24 saat kontrol edin. </li><li> Sinek 36-72 saat açlıktan. </li></ol> Fix sinek <ol><li> Biri bir aspiratör uçmak çekin. </li><li> Açılış üzerinden 200 ul sarı ucu yerleştirin. Aynı zamanda saygısız ve üzerinde üfleme, sarı ucu içine sinek sıkmak olabilir. </li><li> Yavaşça hareket edemez bir noktaya sinek yukarı itmek için biraz hava geçerlidir. </li><li> Bir jilet kullanarak, sinek gözü yaklaşık bir işareti koymak, sonra sinek geri emmek ve ucu kesilmiş. </li><li> Yavaşça sinek konumuna geri darbe, ama sadece sonuna ulaşmadan önce, burnumun yer alacak konumda kesilmiş bir eğik. Bu eğik kesme olmadan yapabilirsiniz, ama kesinlikle aşağıdaki işlem daha kolay kılacak. </li></ol> Sakaroz fitiller hazırlayın <ol><li> Kimwipes, 6 mm genişliğinde bir şerit ® kağıt bir konu haline Twist, koni şeklinde fitil gibi küçük parçalar halinde (&lt;1 cm) içine çekin ayrı. </li><li> Bu küçük fitiller, sakaroz çözümler ya da suya daldırma ve kontak yaparak burnumun sunuldu. </li></ol> Kontrol ve deney hayvanlarında hazırlayın <ol><li> Herhangi bir tastants test etmeden önce, uçmak için% 4 sakaroz çözeltisini verir. Bu bir pozitif kontrol olarak görür. Yanıt vermedi herhangi bir sinek atın. </li><li> Ardından, sinek testi dH 2 0. Bu bir negatif kontrol olarak hareket ederler. Cevap ise sinek atın. </li><li> Tastants test sonra bu kontroller sınayın. </li></ol>

<ol><li>Dethier, V. G. The Hungry Fly. , Harvard University Press. Cambridge. (1976).</li>
</ol>

Bu sunumda, burnumun uzantısı yanıt tayini için tüm adımları geçtiniz. Bu yöntem oldukça basit geliyor ama pek çok diğer davranış testleri, çok küçük şeyler tahlil önleyebilir. Biz dikkat gereken birçok tür adımlarda gitti. Burada, en önemli faktörlerin vurgulanması. Böyle bir faktör fitil şekli. Ben çok iyi örnekler göstermiştir, ama tabii ki, gerçekte her şeyi çok iyi ve çok kötü arasında sürekli bir tayf olurdu. Başlangıçta, çok iyi tarafına yakın şeyler olabilir, ancak gün-gün, standart olmayan çok iyi bir dizi bit bit kaydıran ...

<table><tbody><tr><td>HDR-HC1</td><td>Kamera</td><td>Sony Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SMZ800</td><td>Mikroskop</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P-IBSS</td><td>Kamera Adaptörü</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x DC10LN</td><td>Kamera Adaptörü</td><td>Optem, Qioptiq Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>257010</td><td>Kamera Adaptörü</td><td>Optem, Qioptiq Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TREKKER Mk2</td><td>Tripod</td><td>BENBO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gorillapod SLR</td><td>Tripod</td><td>Joby</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iMac G5</td><td>Bilgisayar</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Power Mac G5</td><td>Bilgisayar</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iMovie</td><td>Yazılım</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MPEG Streamclip</td><td>Yazılım</td><td>SQUARED 5</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

drosophila burnumun eklenti tepkisi (per) testi

Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila

Burnumun uzantısı yanıt (PER), sineklerin yanı sıra bal arıları kullanılan bir tat davranış testtir. Sinek ağzına (labellum) yüzeyinde, tat nöronlar evler sensilla olarak adlandırılan saç gibi yapılar vardır. Çekici bir madde ile temas labellum yaptığında, sinek malzeme tüketmek burnumun uzanır. Burnumun Uzatma Tepkisi (PER) tayini bu lezzeti davranışı tepki önlemleri ve tek bir sinek gıda tercihleri ​​hakkında bilgi almak için kullanışlı bir yöntemdir. Çözümler, sakkaroz, glikoz ve fruktoz gibi çeşitli şekerler, uçmak için çok cazip. Tatlı bir çözüm karışık caydırıcı maddelerin etkisi de PER azaltılması olarak test edilebilir. Temel prosedür basitliğine rağmen, çalışmasını engellemek pek çok şey vardır. Dikkat gerektiren faktörlerden biri sinek tepki durumudur. Sinek uygun duyarlı durumuna getirmek için gerekli açlık süresi 36 ila 72 saate kadar büyük ölçüde değişir. Biz duyarlı olmayan veya aşırı duyarlı bireysel hayvanların taranmasına izin verir sinek devlet ve değerlendirmek için bir dizi kontroller kurdu. Bir başka önemli faktör etki seviyesi ve kelimelerle tarif etmek zor olacaktır labellum temas pozisyon. Bu video sunum, bu yöntemin tekrarlanabilirliği artıracak diğer birçok iyileştirmeler ile tüm bunları bir arada gösterir.

Burnumun uzatma yanıt veya BAŞINA sineklerin yanı sıra bal arıları kullanılan bir tat davranış testtir. Burnumun çekici bir madde ile temas yaptığında, uçucu madde tüketmek burnumun uzanır. Çeşitli şekerler Çözümleri uçmak için çok çekicidir.

Drosophila burnumun Eklenti Tepkisi (PER) Testi

Probosis uzatma yanıtı (PER), hem sineklerde hem de bal arılarında kullanılan bir tat davranışı testi olup, sineğin ağız yüzeyinde...

Merhaba. Bu sunumda, Esophagal'de Probosis Uzatma Yanıtı analizinin nasıl yapılacağını göstermek istiyoruz. Probosis uzatma yanıtı veya PER, hem sineklerde hem de bal arılarında kullanılan bir tat davranışı analizidir. Probosis çekici bir maddeyle temas ettiğinde, sinek maddeyi tüketmek için probosisini uzatır.Sükroz, glikoz, fruktoz gibi çeşitli şeker çözeltileri sinekler için oldukça çekicidir. PR, bacağa yapılan bir temasla da gözlemlenebilir, ancak bu sunumda probosis temasının üzerine odaklanmak istiyoruz. Bu nedenle, PR analizi için ilk adım sineği aç bırakmaktır.Açlık koşulunun optimize edilmesi, bu analiz için en önemli faktörlerden biridir. Burada önemli olan iki ana husus vardır: Birincisi açlık süresi, diğeri ise sineğin açlık öncesindeki vücut boyutudur.Ve bu ikisi arasında pozitif bir korelasyon olduğu görülmektedir. Eğer sinek büyük ve şişmansa, sineği daha fazla aç bırakmanız gerekir. Vücut büyüklüğü ise sinek yeminin besin değerine ve vial içindeki sinek yoğunluğuna bağlıdır.Şimdi size iyi bir örnek göstereyim. Bu flakonda sineklerin aşırı yoğun olmadığını görebilirsiniz. Flakonda yaklaşık, bakalım, yaklaşık yüz ila 150 PPE bulunuyor.Sinekler buradan çıktıktan hemen sonra, onları üç ila beş gün daha taze besin içeren bir ortamda tutmanız gerekir, ardından kağıt parçası bulunan boş bir flakona aktarın. Bu kağıt sürekli nemli tutulmalı ve açlık süresi 24 ile 96 saat arasında değişebilir. Açlık süresini daha sonra tekrar ele alıp açıklayacağız.Sineklerin PER için sabitlenmesi şu şekilde gerçekleştirilir. İlk olarak, bir sinek ve bir aspi aspiratör alın. Ardından, açıklığın üzerine 200 microliter'lık sarı bir uç yerleştirin.Şimdi aynı anda hem çevirip hem de üzerine üfleyin. Sineği sarı uca doğru nazikçe sıkıştırabilir ve sineği hareket edemeyeceği bir noktaya kadar itmek için hafifçe hava uygulayabilirsiniz. Bir jilet kullanarak sineğin gözü hizasına yaklaşık bir işaret koyun, ardından sineği geri çekin ve ucu kesin. Şimdi nazikçe tekrar üfleyerek sineği eski konumuna getirin.Ancak tam sona ulaşmadan hemen önce, probosun yerleştirileceği konuma bir SL kesiği yapın. SL kesiği olmadan da devam edebilirsiniz, ancak bu kesiğin yapılmış olması sonraki işlemleri kesinlikle kolaylaştıracaktır. Şimdi, sineğin altındaki sarı ucu kesin, alt kısmını kil ile doldurun ve dik bir şekilde yerleştirin.Uca daha fazla kil ekleyerek son ayarı yapabilirsiniz. Önemli bir nokta, sineği çok sert itmemeye çalışmaktır. Şuraya odaklanayım ve belki biraz daha yukarı itebilirim.Böylece sineğin başı biraz yukarısında kalacaktır. Şimdi, deneme yaptığınızda mikroskop altında nasıl görüneceği şöyledir; bu yandan görünüş, diğeri ise önden görünüştür. Artık pr'yi test etmeye hazırsınız.Tat iletimi için kullandığımız WIC şu şekilde hazırlanır. Kim wipe kullanıyoruz ve bunu bir parçalayıcıdan geçirerek bu şekilde şeritler elde ediyoruz. Şeridin genişliği yaklaşık altı milimetredir, yaklaşık beş ila altı milimetredir.Şimdi yapmanız gereken, bu şeridi bir iplik oluşturmak için bükmek, sıkıca bükmek. Ben büküyorum ve artık bir ipliğimiz var, böylece şu şekilde bir ipliğe dönüşüyor. Ardından bir cımbız alıp, bu küçük tutamları iplikten çekerek ayırıyoruz.Sonda hazırlama işlemi bu şekilde gerçekleştirilir. Bu video klibinde, Pro Bois ile temas kurmak için uygun pozisyonu göstermek istiyoruz. %4 sükroz içeren bir emdirme ipi kullanacağız ve dorsal ventral aksındaki farklı bölgelere dokunarak hassasiyetteki farkı göstermek istiyoruz.Labrumun merkezi burasıdır ve burası en hassas konumdur. Bu nedenle, her zaman bu şekilde merkeze temas etmeye çalışmalısınız. Labrumun en üst kısmına veya dorsal bölgesine dokunduğunuzda, sinek tepki vermeyecektir.Böylece orada temas kuruyoruz, ancak sineğin ssis'i uzatmadığını görebilirsiniz. Labumun en ventral kısmına dokunduğunuzda da aynı durum gerçekleşir. Bu biraz daha zordur, ancak labumun en alt kısmıyla güzel bir temas kurup kuramayacağımıza bakalım.Nazik, çok nazik bir yaklaşım sergileyeceğiz. Ve şuraya bakalım. Bu sineğin hâlâ içeride olduğundan emin olmak için merkeze tekrar dokunacağım.Tatlı tadım ile ilgileniyoruz. Bu nedenle, lum'da her zaman merkeze, merkezdeki bu bölgeye dokunmalıyız. Deneyde dikey olarak baktığınızda, lum'un merkezi biraz aşağıya doğru bu yöne bakmaktadır.Bu yüzden leguma sadece yatay olarak, yani bu yönde, şu yönde yaklaştığınızda, en yakın nokta hassas ve hassas olmayan bölgenin arasında olacaktır. Dolayısıyla bu noktada tepki verir. Ancak, eğer sadece birazcık üzerindeyseniz, tepki vermeyecektir.Şimdi biraz araştırayım. İlk sıra silla'da yanıt yok, ikinci sırada yok, üçüncü sırada evet. Dolayısıyla silla'nın en az üçüncü sırasının altına inmeniz gerekiyor.Şimdi benzer bir sondalamayı alttan yapayım. Bu biraz daha zordur. Alttan ikinci sıraya dokunuyorum.Şimdi oraya geçeceğim. Oradaki üçüncü sıra, dördüncü sıra, hayır, yanıt vermiyor. Oradaki beşinci sıra.Alttan sayıldığında dördüncü veya beşinci sıra hücrelere dokunmanız gerekir. Tüm bunlar, sürekli olarak merkeze dokunmak istediğiniz anlamına gelir; aksi takdirde verilerinizin varyansı büyük ölçüde artacaktır. Bunu tekrar tekrar pratik yapmak isteyebilirsiniz.Ve temel faktör, yatay bir yaklaşımla en yakın noktadan biraz daha aşağıdan temas kurmaktır, ki burasıdır. Ardından, labumun medial ve lateral alanları arasındaki hassasiyet farkını göstermek istiyorum. Sinenin konumunu, bu resimde yukarı bakacak şekilde değiştiriyorum.Önce sinek labrumunun merkezine veya medial kısmına dokunacağım ve sineğin güzel bir şekilde tepki verdiğini görebilirsiniz. Şimdi, labrumun en lateral kısmında bulunan sensöre dokunacağım ve sineğin burada tepki vermediğini görebilirsiniz. Şimdi yandan merkeze doğru sonda yapayım ve en kenara dokunuyorum.Yavaş yavaş merkeze doğru ilerliyorum. Ve görebileceğiniz üzere, tam merkeze ulaştığı anda sinek tepki verecektir. Şimdi bunu kenardan merkeze doğru tekrar yapayım.Bu nedenle, seviyenin merkezine hem dikey hem de yatay olarak her iki yönde dokunmak önemlidir. Bu bölümde, osis ile nasıl temas kurulacağını göstermek istiyorum. Genel olarak, teması mümkün olduğunca nazik bir şekilde kurmanız gerekir.Etkinin iyi bir göstergesi, sineğin ortaya çıkan baş hareketidir. Bu nedenle, ideal dokunuş, başın hiç geri hareket etmediği durumdur. Diğer önemli faktör ise fitilin şeklidir.Bazı örnekler göstereceğim. Buradaki fitilin şekli oldukça iyi. Ne çok kalın ne de çok ince.Eğer çok kalınsa, hassas bir temas sağlamak zorlaşır ve darbe etkisi daha büyük olma eğilimindedir. Çok inceyse, solüsyonun en uç noktaya düzgün bir şekilde iletilip iletilmediğini bilemezsiniz ki bu durum kalının olmasından daha kötüdür. Bununla labuma birkaç kez dokunayım.Ve orada, orada, orada, temas noktasında neredeyse hiç baş hareketi görmezsiniz. Bazen buna benzer bir fitil elde edersiniz. Bu durumda uç kısmı açıkça çok incedir.Uçtaki konsantrasyonun iletmek istediğiniz miktarda olduğundan emin olamazsınız. Bu durumda yapabileceğiniz şey, sarı uç kısmını şu şekilde birkaç kez katlamaktır ve böylece, bunu şu şekilde temas ettirerek güzel bir şekle getirebilirsiniz. Böylece, uç kısmında pek fazla hareket olmadığını görebilirsiniz.Orada biraz kalça hareketi oldu ancak evet, bu da başka bir iyi örnek. Hassas ve nazik bir temas kurabildiğiniz sürece kalın olanları her zaman çöpe atmak zorunda değilsiniz. Bunları da hala kullanabilirsiniz.Kafa hareketi ince olanlardan biraz daha büyük olabilir, ancak eliniz sabit olduğu sürece, bunun gibi düzgün bir temas sağlayabilirsiniz. Bu, kullanmamanız gereken bir örnektir. Çok fazla fiber dışarı çıkıyor ve bunları bir araya getirmek zor oluyor.Bunları atıp başka bir tane bulmalısınız. Bu da uygun değil. Uç, daha kalın bir tane yapmak için katlanamayacak kadar ince ve kısa.Çevresindeki kısımlar ise hassas bir temas kurmak için çok kalındır. Bunları da atmalısınız. Şununla ilgili sorun ise üzerinde çok fazla sıvı olması ve bu nedenle hassas bir temas kurmanın zor olmasıdır.Bu durum, prop Bois üzerinde daha fazla sıvı kalmasına neden olur ve böylece sonraki prosedürü etkileyebilir. Çok iyi bir fitile sahip olsanız bile, hafif bir temas sağlamadığınız sürece bu yeterli olmayacaktır. İşte kötü bir örnek.Sinenin başının şiddetli bir şekilde hareket ettiği görülebilir. Güçlü bir darbe, sineğin bir maddeye tepki vermesini engelleyebilir ve sinek sonraki tatma işlemlerine kolayca ilgi kaybetmiş olabilir. Şimdi, bu darbeyi nasıl azaltabileceğinizle ilgili bazı ipuçları vermek istiyorum.İlk olarak, fitili sarı ucun hemen üzerinde, temas etmeden hemen önce durdurun. Bu sayede, o anki el titremenizin genliğini gözlemleyebilirsiniz. Bunu yaparak, son yaklaşma mesafesini görselleştirebilir ve fitili, el titremenizin en uzak noktasının vellumun illa kısmına ulaşacağı şekilde hareket ettirebilirsiniz.Ve elbette, hiçbir el temasının olmaması çok daha iyidir. Ancak bu yöntem, durumla çalışmanıza olanak tanır ve genel etkiyi azaltır. Dikkat ettiğimiz bir nokta, sinekleri aynı süre boyunca başlatmış olsanız bile, yetersiz açlık süresi nedeniyle hiçbir şeye tepki vermeyen bir grup sinekle karşılaşmanızdır.Öte yandan, tamamı ölmüş bir sinek grubuyla da karşılaşabilirsiniz. Bu nedenle, sineklerin durumuna bakılmaksızın sabit bir açlık süresindeki sinekleri test etmek pek akıllıca değildir. Bu durum, verilerin varyasyonunu öyle çok artırır ki incelediğiniz fenomeni gölgeleyebilir.Bu durumu iyileştirmek için, sineğin durumunu değerlendirmek amacıyla bir dizi kontrol düzeneği sunmak istiyoruz. İlk adım, %4 sucrose olan pozitif kontrolün PER'ini test etmektir. Bu konsantrasyon, bir yanıt oluşturmak için yeterince yüksektir.Çoğu yıldız sineği için, eğer sinek bu pozitif kontrole yanıt vermiyorsa, bu durum ya sineğin daha fazla açlık süresine ihtiyaç duyduğu ya da yaralanmalar gibi çeşitli diğer nedenlerle inaktif olduğu anlamına gelir. Bu nedenle, bu sinekleri elemeniz gerekir. Eğer yanıt verdilerse, negatif kontrol olan suyu deneyiniz.Eğer sinek suya tepki verdiyse, bu durum sineklerin susamış olduğu, her şeye tepki verdikleri veya yaklaşan herhangi bir şeyi yemeye koşullandıkları anlamına gelir. Bu durum, burada pozitif kontrol olarak verdiğimiz çekici maddeye bağlıdır. Böylece sinek, yaklaşan bir nesnenin muhtemelen tatlı olduğunu öğrenmiştir.Böylece bir öğrenme davranışını değil, bir tat davranışını ölçmeye çalışıyoruz. Öğrenme nedeniyle önceki denemenin sonraki denemeyi etkilemesini istemezsiniz. Pozitif kontrol olarak daha yüksek bir konsantrasyon kullanıldığında, negatife verilen yanıt olasılığının arttığı görülmektedir.Artık, elinizdeki herhangi bir madde veya koşulla sineği PER açısından test edebilirsiniz; ancak testten sonra pozitif ve negatif kontrolleri tekrar denemek istersiniz. Çünkü eğer sinek burada pozitife yanıt vermezse, bu durum sineğin test sırasında uyarıcılara karşı ilgisini kaybettiği anlamına gelir ve testteki yanıtsızlığın sineğin genel ilgi eksikliğinden kaynaklanıp kaynaklanmadığını bilemezsiniz. Ayrıca, sinek negatif kontrole yanıt verirse, bu durum sineğin susadığı veya yaklaşan bir nesneye karşı koşullandığı anlamına gelir. Eğer sinek negatife yanıt vermediyse, nihayet biriktirebileceğiniz bir veriye sahipsiniz demektir.Bu pencere genellikle yaklaşık 5 ila 10 veya 15 dakika sürer. Bazı durumlarda bu pencerenin 30 dakikaya kadar uzayabildiğini gördüm. Bir süre sonra bunu fark ettik; bu grafik, denizyıldızı süresi ile mortalite arasındaki ilişkiyi göstermektedir.Burada zaman ve bir flakondaki canlı sineklerin yüzdesi yer alıyor. Tabii ki sinekler ölmeye başlayacak ve bu durum büyük farklılıklar gösterecek. Fark ettiğim bir nokta ise, belirli bir noktaya kadar pozitif kontrole yanıt verecek hiçbir sinek olmayacağı, ancak aniden yanıt vermeye başlayan bir sinek görmeye başlayacağınızdır.Ve elbette zaman geçtikçe bunu kullanmaya devam edebilirsiniz. Ancak belirli bir noktadan sonra, negatif kontrole yanıt veren daha fazla sinek olacağını fark ettik. Dolayısıyla, ER'leri gerçekleştirmek için yakalamanız gereken zaman dilimi budur.Peki soru şu, bu ne zaman gerçekleşecek? Deneyimlerime göre, çok iyi koşullarda bu genellikle 36 ile belki 48 saat civarında gerçekleşir, ancak bazen bu süre 72 saate kadar çıkabilir ve gerçekten çok değişkenlik gösterir. Bu nedenle, bu dar zaman penceresini yakalayabilmek için birden fazla flakon ve düzenek hazırlamanızda fayda vardır.Aynı açlık süreleri, aynı besin ve diğer her şey aynı olsa bile, bu durum gerçekten çok değişkenlik gösterir. Dolayısıyla, çok benzer bir genetik arka plana sahip olanlarda bile bu durum büyük farklılıklar sergiler. Bu nedenle, özellikle dikkat etmeniz gereken nokta budur.Uyaranlara karşı koşullandırılan ve artık her şeye yanıt veren sineklerden bahsettik. Bunu önlemenin bir yolu, çekici tadı tekrarlayıcı şekilde vermemek ve araya negatif kontroller eklemektir. Şimdi size bunun nasıl çalıştığını göstereyim.Bu, pozitif bir kontroldür. Burada iki kez %4 sükroz verdik. Eğer bu şekilde tatlı bir uyaran vermeye devam edersek, sonunda koşullanma gerçekleşecektir.Şimdi bunun yerine, bir negatif kontrol ekleyeceğiz. Gördüğünüz üzere, negatif kontrole yanıt vermiyor. Bunu tekrar yapayım.İlk pozitif kontrol, %4 sükroz ile %4. Şunu biraz bükeyim. Bir kez daha çok güçlü ve çok hızlı bir yanıt.Şimdi bir kez daha negatif kontrole geçeceğiz. Bakalım, uygun bir yer yok, şunu bir çevireyim. Tamam, burada.Bu, negatif kontrol suyudur. Dolayısıyla, negatif bir kontrole yanıt vermeyeceğini görürsünüz. Şimdi size kötü bir örnek göstereyim.Yani burada %8 sükroz veriyoruz, bu kullandığımız pozitif kontrolden daha yüksek bir oran. Bu nedenle sinek bunu gerçekten seviyor ve onu aramaya çalışıyor, şuna bakalım, hadi bir kez daha deneyelim. Oradaki hafif temasa bakalım.Ve çok aktif bir şekilde arayış içerisinde. Probunu uzatmaya devam ediyor. Bu yüzden bir süre bekleyelim ve orada tekrar bir temas kuralım.Ah, işte orada. Yani, evet, hâlâ onu arıyorum. Onu arıyorum.Evet, hâlâ uygun olduğundan emin olun. Ve belki bir kez daha, bir kez daha, bir kez daha. Ah, işte orada, evet, çok güçlü bir yanıt var.Şimdi %8 sucrose yerine, bir negatif kontrol uygulayalım. Öyleyse, bu fitili buraya getirelim. Bu biraz fazla ince.Şimdi bunu katlayıp güzel bir basamak oluşturayım. Ancak bu su. Böylece, sineğin suya nasıl tepki verdiğini bu durumda görebilirsiniz.Şimdi bu örnekte, çok çekici bir maddeyi beş kez verdik. Bu durum, iki kez vermenin uygun olduğu ancak beş kez vermenin kötü olduğu anlamına gelmez. Sineğin sadece bir kez %4'lük sükroz veya daha düşük bir konsantrasyon uygulanmasıyla koşullandığı birçok durum mevcuttur.Önemli olan husus, çekici bir maddenin tekrarlanan uygulama sayısını azaltmaya çalışmaktır. Eğer çekici bir tadın bir dizi konsantrasyonuna sahipseniz, düşük konsantrasyondan başlayıp daha yükseğe doğru ilerlemek daha güvenlidir; tadı mümkün olduğunca hızlı bir şekilde geri çekmek, sineğin bundan çok fazla tüketmesini engelleyecek ve böylece sineğin koşullanmasını da azaltacaktır. Merhaba, bu sunumda prob uzatma yanıt testi için tüm adımları inceledik.Yöntemin kendisi oldukça basit görünse de, diğer birçok davranış analizinde olduğu gibi, bu analizin çalışmasını engelleyebilecek küçük detaylar vardır. Dikkat gerektiren bu adımların çoğunun üzerinden geçtik. Burada, en önemli faktörlerden bazılarını tekrar vurgulamak istiyorum.İlk olarak fitilin şekli gelir. Bazı çok iyi örneklere ait resimler gösterdim ancak gerçekte her şey, çok iyiden çok kötüye uzanan bu sürekli spektrumda olacaktır. Başlangıçta bu çok iyi aralıkta bir şey kullanıyor olabilirsiniz ancak gün geçtikçe durum değişmeye başlayabilir.Kullandığınız haftalar, pek de iyi olmayan bir aralığa kaymaya başlayabilir. Sözde "iyi" olanın insan algısı, fark edilmeden çok kolay bir şekilde değişebilir. Bunu önlemenin bir yolu, çok iyi çalışan bir WIC'in düzgün bir fotoğrafını çekmek ve P'yi test etmeden hemen önce bu fotoğrafa bakmaktır. Şimdi, ikinci önemli faktör etkidir.Bu durumla başa çıkmak daha kolaydır çünkü en iyi temas, yani darbe, başın hiç hareket etmediği temastır. Bu nedenle, işlemi mümkün olduğunca nazik yapabilirseniz ve sineğin başının herhangi bir şekilde kaydığını görmezseniz, bu en iyisi olur. Şimdi üçüncü madde olan açlık durumu, kontrol edilmesi en zor faktördür.Birçok tat davranışsal testi veya koku davranışsal testinde, genellikle 24 saatlik bir açlık süresi kullanılır ve 24 saat, deneyi gerçekleştiren biz insanlar için oldukça uygun olabilir. Ancak, sineklerinizi çok iyi koşullarda yetiştiriyorsanız, bu 24 saatlik süre oldukça kısadır. Çok zengin bir sinek yemi kullansanız ve sinek yoğunluğunu hassas bir şekilde kontrol etseniz bile, bu deney penceresi örneğin 36 saatten 72 saate kadar değişiklik gösterebilir.Bir deney olarak şunu söylemeliyim ki; bir insanın veya insanların bu deneyi gerçekleştirmesi oldukça zahmetlidir, ancak deneyciler için durumu daha da zorlaştıran başka bir faktör daha vardır. Aslında, deney penceresinin çok kısa olduğu, hatta hiç bulunmadığı birçok parti olabilir. Dolayısıyla, aşmanız gereken bazı önemli engeller bulunmaktadır.Ancak en önemli husus pozitif kontrol ve negatif kontroldür. Bu standartlara çok sıkı bir şekilde uyarak güvenilir veri setleri toplayabilirsiniz.

proboscis-extension-response-per-assay-in-drosophila

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Koku için koku alma duyu nöronlarının elektrofizyolojik yanıtlar tek sensillum kayıtları kullanarak böcekleri ölçülebilir. Bu video makalede, sirke sineği antenler tek sensillum kayıtları nasıl gerçekleştirileceği gösterecektir...

Böcekler Tek Sensillum Kayıtlar Drosophila melanogaster Ve Anofel gambiae</em

Belirlenen Nöronlar ve Beslenme Davranışı Kalsiyum sinyaller aynı anda kayıt Drosophila melanogaster</em

Meyve sinekleri karmaşık bir koku alma sistemine sahiptir, yüzlerce koku maddesini ayırt edebilir ve davranışsal kararları yönlendirmek için koku alma duyularını kullanabilirler. Bu video, sineklerde koku alma davranışsal tepkilerini incelemek için bir yöntem olan dört olfaktometre testini açıklamaktadır. Öne çıkan protokol klibi, test sineklerinin nasıl ele alınacağını ve testi gerçekleştirirken kritik adımların neler olduğunu gösterir.

Dört Olfaktometre Testi: Drosophila'da Koku İşaretli Tepkileri Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

Bu videoda, meyve sineğinde koku alma keşif davranışını test etmek için Y-labirenti adı verilen bir yöntem açıklanmaktadır. Öne çıkan protokol klibi, testin nasıl kurulacağını ve yürütüleceğini gösterir.

Drosophila Y-labirent Testi: Sineklerde Koku Alma Tepkilerini Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

Bu video makalede, Drosophila melanogaster uçmak yetişkin meyve koku bağımlı gıda arama davranışı üzerine açlık veya tokluk etkisini ölçmek için otomatik bir deneyi açıklar.

Toplayıcılık Davranış için Tek-sinek Deneyi Drosophila

Bal arısı (Apis mellifera) için geliştirilen Proboscis Extension Response (PER) koşullandırma protokolü, birçok böcek türünde birkaç farklı öğrenme mekanizmasını incelemek için ekolojik olarak ilgili ve kolayca ölçülebilir bir araç sağlar.

Bir burnumun Extension Tepki Böcekler Davranış Plastisitesi incelenmesi için protokol: Basic, Biyomedikal Uygulama ve Tarımsal Araştırma

Biz Y-labirent testi kullanılarak Drosophila davranışı üzerindeki koku etkisini ortaya çıkarmak için bir seçim testi sunuyoruz.

Test<em&gt; Drosophila</emBir Y-labirenti testi ile&gt; koku alma

Mekanosasyonu etkileyen yeni mutasyonları tanımlamak için, MARCM yöntemi ile üretilen mutant klonlarda sinek kıllarının dokunsal uyarımına davranışsal tepkiyi ölçen bir test tasarladık. Tekniklerin kombinasyonu, aksi takdirde ölümcül olabilecek mekanosensitif mutasyonların tanımlanmasına izin verir.

Arasında Mechanosensation için bir davranış tahlilinde klonlarda MARCM tabanlı<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Bu iletişim kuralı Drosophila larva yanıt onun koku nöronlar eşzamanlı optogenetic uyarılması için gezinme davranışını analiz eder. 630 nm dalga boyunda ışık kırmızı kaymıştır kanal rhodopsin ifade bireysel koku nöronlar etkinleştirmek için kullanılır. Larva hareketi aynı anda izlenir, dijital olarak kaydedilmiş ve özel olarak yazılmış yazılım kullanılarak analiz.

Yanıt koku nöronlar Optogenetic uyarılması olarak Drosophila larva davranışını izlemek

Bu protokolün amacı, Drosophila larvalarında mekanik nosiception için geliştirilmiş bir tahlilin nasıl gerçekleştirildiğini göstermektir. Buradaki tahlilleri, Drosophila larvalarında mekanik aşırı duyarlılığın (allodynia ve hiperaljezi) var olduğunu göstermek için kullanıyoruz.

Drosophila Larvalarında Mekanik Nosiception Ölçümü için Geliştirilmiş Bir Tahlil ve Araçlar

Bu makale, belirli nöronları aktive etmek ve susturmak için CsChrimson ve GtACR2 kullanarak Drosophila melanogaster'de optogenetik manipülasyon yöntemlerini sunmaktadır. Termotaktik ve tat davranışlarını keşfetmek için optogenetiği kullanmak ve bu süreçleri yöneten altta yatan nöral mekanizmalar hakkında bilgi sağlamak için dört deney tanımlanmıştır.

Drosophila melanogaster'de Nöral Devrelerin Optogenetik Manipülasyonu için Davranışsal Testler

Öğrenin Drosophila'da proboscis extension response (PER) testini; tat davranışlarını incelemek için şeker çözeltileri kullanılarak sineklerde duyusal tepkiler ölçülür. Bu yöntem nörobilim ve davranışsal biyoloji araştırmalarında değerlidir.

Drosophila burnumun Eklenti Tepkisi (PER) Testi

Daha fazla video keşfet