Name: Dilim İmmünohistokimya için hazırlıklar İnce Kesit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Öğrenin, küçük beyin dokuları ve biyopsiler için kriyostat dilimleme yöntemini. Alüminyum dondurma platformu kullanarak 5-10 mikron kalınlığında tutarlı seri kesitler hazırlayın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li> Ekim platformu için teypten kalıp hazırlayın. </li><li> OCT ile kalıp doldurun. Kriyostat içinde veya ezilmiş kuru buz ile dondurun. </li><li> Dondurulmuş Ekim platformu etrafında bandı çıkarın. </li><li> Donma ayna ve Kriyostat montaj aşamasında Chuck kilitlemek ve işaretleri hizalayın. </li><li> Yüzeyine kadar OCT platformu üzerinden Bölüm düzdür. </li><li> Kriyostat dondurma sahnede yeniden su yüzüne çıktı Ekim platformu ve yer çıkarın. </li><li> OCT Yeri doku örneği (daha önce PBS içinde% 30 gliserol veya sükroz ile Kriyoprezerve). </li><li> Ekim için de oluşturan sütun üstünden yaklaşık 5 mm dış halka yansıtarak dondurma sütun hazırlayın. </li><li> Dikkatle donma sütun yüzeyi merkezi üzerine pozisyon doku örneği ve iyi doludur kadar yavaşça Ekim eklemek. </li><li> Ezilmiş kuru buz ile dondurma sütun Surround. Doku ve OCT 20-60 saniye içinde tamamen dondurmak gerekir. </li><li> Örnek dondurulmuş kalırken, sıcaklık hazırlık arttıkça, dış bilezik çıkarılmalıdır. </li><li> Dondurma sütun yanlara ve Kriyostat yer kapalı örnek kaydırın. </li><li> Ekim platformu ve sabit basınç uygulayarak pozisyonda numune (doku aşağı) yüzey OCT Yeri bırakın. Numune Ekim platformu üzerine çabuk donar. </li><li> Güvenli Chuck üzerine Kriyostat hizalanmış işaretleri ile birlikte sahne montaj. </li><li> Ekim yoluyla doku örneği yüzeysel Bölümü. </li><li> Cam slaytlar üzerine ince bölümler monte çözülme ve dondurulmuş ya da oda sıcaklığında saklamak. </li><li> Immunoreactions cam slaytlar üzerine monte doku için yapılabilir. </li><li> Reaktif, havuzlu slayt üzerine hafifçe ajite olabilir ve eğer ışığa duyarlı karşılanabilir. </li><li> Reaksiyon daha sonraki aşamalarda kolayca slayt esneklik, atık yuvasına tersini slayt tarafından yapılan ve daha sonra bir sonraki reaktif uygulayarak. </li></ol>

<ol><li>Scoutern, C. W., O'Connor, R., Cunningham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+of+research+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Today%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation of research animals.</a> Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).</li>
<li>Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diminished+serotonergic+innervation+of+adult+medial+prefrontal+cortex+after+6-OHDA+lesions+in+the+newborn+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Dev.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).</li>
</ol>

Burada sunulan protokol ile araştırmacılar sağlayan bir özlü, kolay takip yapılacak ileri çalışmalar için biyopsileri ve beyin dilimleri gibi gibi küçük, zor yönetmek için, doku parçaları, ince Kriyostat bölümleri nasıl elde etmek için ana hatları in situ hibridizasyon veya immünohistokimya çeşitli boyama yöntemleri.

<table><tbody><tr><td>O. C. T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol Çözeltisi</td><td></td><td></td><td>PBS içinde %30'luk Gliserol Çözeltisi w/v</td></tr><tr><td>Sükroz Çözeltisi</td><td></td><td></td><td>PBS içinde %30'luk Sükroz Çözeltisi w/v</td></tr></tbody></table>

dilim İmmünohistokimya için hazırlıklar İnce kesit

Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry

Nörobilim yanı sıra diğer disiplinlerden birçok araştırmalar, küçük eğitim dahil, henüz korunmuş doku makroskopik parçalar veya bölümleri, taze beyin dokusu dilim hazırlıkları gibi, kaldırılır veya eksize ama canlı tutulur. Doku örnekleri ele almak zor olabilir, bu malzeme sonraki mikroskobik çalışmaları, zor olabilir. Burada gösterilen aralığı 0,2-5,0 mm kalınlığı ile ince bir doku Kriyostat bölümleri elde etmek için bir yöntemdir. Biz rutin olarak 5-10 mikron koronal Kriyostat bölüme seri 400 mikron kalınlığında Vibratome beyin dilimleri kesti. Dilimleri genellikle ilk elektrofizyoloji deneyleri için kullanılan ve daha sonra kayıtları gözlendi bölgenin hücre mimarisini mikroskopik analizi gerektirir. Biz kontrollü ve tekrarlanabilir hazırlanması ve doku dilim konumlama sağlayan basit bir aygıt inşa ettik. Bu cihaz, 1.2 cm çapında, donma dilim için bir aşama olarak görür uzun bir silindir 5 cm oluşur. Bir halka doku (örneğin, OCT) donma bileşik dalmış izin dilim etrafında silindir sağlayarak duvarları üzerinde rahatça kayar. Bu daha sonra ezilmiş kuru buz ile hızlı dondurulmuş ve ortaya çıkan gofret Kriyostat kesit için kolay pozisyon olabilir. İnce bölümler olabilir çözülme monte ileri çalışmalar, burada gösterildiği gibi, in situ hibridizasyon veya immünohistokimya gibi çeşitli boyama yöntemleri olarak gerçekleştirilebilir için izin kaplı Slaytlarınıza.

Mevcut yöntem, biyopsileri ve beyin dilimleri gibi küçük, zor yönetmek için, doku parçaları, kesit tekrarlanabilir Kriyostat sağlar. Biz basit bir alüminyum donma aşamasında doku taşıma ve rutin olarak 400 mikron kalınlığında beyin dilimleri 5-10 mikron seri bölümleri üretmek için bir standart Kriyostat kolaylaştırmak için kullanır.

Dilim İmmünohistokimya için hazırlıklar İnce Kesit

Nörobilim ve diğer disiplinlerdeki pek çok araştırma, ... olan küçük ancak makroskobik doku parçalarının veya kesitlerinin incelenmesini içerir.

Merhaba, ismim Jun Park, Harvard Tıp Fakültesi'nde araştırma görevlisiyim ve aynı zamanda Güney Kore'deki Severance Hastanesi, Y Üniversitesi Tıp Fakültesi'nde tıp öğrencisiyim. Bunlar, kesit preparatlarının ince kesilmesi için gerekli materyallerdir. Bant kullanarak OCT platformu üzerinden kalıp hazırlıyorum.OCT ile kalıplama ve kriyostat içinde dondurma işlemlerini gerçekleştiriyorum veya ezilmiş kuru buz kullanarak donmuş OCT platformu etrafındaki TAFE'yi temizliyorum. Dondurma kalıbı ve kriyostat montaj tablası üzerindeki hizalama işaretlerini ve kalıptaki kilidi gösteriyorum. OCT platformu üzerinden kesit alıyorum.Ontario yüzeyi düzdür. Yeniden yüzeylemiş OCT platformunu kaldırıyor ve kriyostat dondurma tablasına yerleştiriyorum. Bu örneği OCT içine yerleştiriyorum; bu örnek daha önce PBS içinde %30 gliserol veya sakkaroz ile kriyoprezerve edilmiştir.Bu adım, donma kolonunun hazırlanma aşamasıdır; dış halka, kolon formunun üst kısmının yaklaşık beş milimetre üzerine çıkarak OCT için bir kuyu oluşturur. Doku örneği donma kolonu yüzeyinin merkezine dikkatlice yerleştirilir ve kuyu dolana kadar yavaşça OCT eklenir. Donma kolonunun etrafını kırılmış kuru buzla çevreliyorum.Doku ve

thin-sectioning-of-slice-preparations-for-immunohistochemistry

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Aşağıdaki videoda, formalin fiksasyonu ve parafin gömme ile bir dokunun morfolojisinin nasıl korunacağı açıklanmaktadır.

Formalinle Sabit Parafin Gömülü (FFPE) Doku Koruma: Doku Morfolojisini İncelemek İçin Bir Yöntem

Bu giriş seviyesi protokolü, örnek olarak mikroglia ve nöronal elementler için belirteçler kullanarak, kemirgen beyinlerinin immünohistokimyasal boyamasını tamamlamak için gereken reaktifleri, ekipmanı ve teknikleri açıklar.

Mikroglia ve nöronlar için örnek Boyama: Cryosectioned Rat Beyin Dokusu Üzerine İmmünohistokimya için Astar

Bu makalede açıklanan dolaylı immünfloresan protokol algılama ve fare meme bezinde proteinlerin yerelleştirme verir. Tam bir yöntem olup, meme bezi örnekleri hazırlamak için floresan mikroskobu ile görüntü, doku kesitlerinde immunhistokimya gerçekleştirmek için ve görüntüleri yeniden verilir.

Fare Meme Bezinin Dondurulmuş Bölümler Dolaylı İmmünofloresan

İnsan beyni tümörlerinin birçok türü, beynin belirli bölgelerine lokalizedir ve kültürde büyümesi zordur. Bu protokol, tümör mikroçevresinin rolünü ele alır ve organotipik bir fare beyin diliminde büyüyen floresan primer beyin tümörü hücrelerini analiz ederek yeni ilaç tedavilerini araştırır.

İlaç Tedavileri tümörün mikro incelenmesi ve Hedeflenen A Beyin Tümörü / Organotipik Dilim Co-kültür Sistemi

Burada, kolay ve düşük maliyetli sağlar ve zaman tasarrufu sağlayan bir protokol kimyasal transmisyon elektron mikroskobu için immünohistokimya ön gömme uyumlu uzun süreli koruma sağlayan, akrolein sabitleyici ile primat beyin dokusunun düzeltmek için.

İmmünohistokimya ve elektron mikroskobu Ön gömme için İnsan Olmayan Primat Beyin Dokusu Hazırlanması

Burada, parafin kesit geliştirmek için bir protokol mevcut. Bu yöntem kesme ve geleneksel yöntemle gerekli aktarım işlemi önlemek için basit bir termostatik odası kullanarak yüzen birleştirir. Sonuç olarak, verimliliği ve bozulmamış parafin bölüm sayısı büyük ölçüde düzeldi.

Kesme ve kesit için doku parafin gömülü için yüzen yöntemi

Biz üretimi, yetiştirme ve fare akciğer tümörleri türetilmiş organotypic dilimleri sistematik analizi için bir yöntem sağlar. Biz de dilim kalınlığı için en iyi duruma getirme ve tümör dilimleri tedavisi için ilaç konsantrasyonları seçin anlatan.

Kuruluş ve tümör dilim analizini Explants tanı testleri için bir önkoşul olarak

Yetişkin insan beyninden serbest yüzen dilim kültürleri hazırlamak için bir protokol sunulmaktadır. Protokol membran ekler kullanarak yaygın olarak kullanılan dilim kültür yönteminin bir varyasyonudur. Bu basit, maliyet-etkin, ve yaşilişkili beyin hastalıkları arkasında nörodejenerasyon mekanizmaları çözmek için amaçlayan kısa vadeli tahliller çalıştırmak için önerilir.

Yetişkin İnsan Beyninden Kısa Süreli Serbest Kayan Dilim Kültürleri

Serbest yüzen teknik, araştırmacıların biyolojik yapıları, hücre tipini ve protein ekspresyonunu ve lokalizasyonunu görselleştirmek için sabit doku kesitlerinde immünohistokimya da dahil olmak üzere histolojik tabanlı boyamalar yapmalarını sağlar. Bu, beyin, kalp ve karaciğer gibi çok sayıda dokuyu araştırmak için yararlı olabilecek etkili ve güvenilir bir histokimyasal tekniktir.

Serbest Yüzen Doku Kesitleri Kullanılarak Histolojik Tabanlı Boyamalar

Bu protokol, bütün tavşan gözlerinin yüksek kaliteli kriyoseksiyonlarını elde etmek için güvenilir bir yöntemi açıklar. Daha büyük gözlerde immünohistokimya kullanan herhangi bir çalışmada kullanım için kolayca uyarlanabilen tavşan gözü diseksiyonu, fiksasyonu, gömme ve kesit alma prosedürlerini detaylandırır.

Bütün tavşan gözünün yüksek kaliteli kriyoseksiyonlarının elde edilmesi 

Öğrenin, küçük beyin dokuları ve biyopsiler için kriyostat dilimleme yöntemini. Alüminyum dondurma platformu kullanarak 5-10 mikron kalınlığında tutarlı seri kesitler hazırlayın.

Dilim İmmünohistokimya için hazırlıklar İnce Kesit

Daha fazla video keşfet