Name: Fare Akciğer içine çözünenlerin Doğrudan Trakeal damlatma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-08-29T17:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: Öğrenin fare akciğerlerine çözünenlerin doğrudan trakeal damlatma yöntemini. Bu teknik, alveollere hedefli madde iletimi sağlayarak solunum fizyolojisi ve akciğer hastalıkları araştırmalarında güvenilir bir çerçeve sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüsü, K99 HL09222601 ve MNH verilen S &amp; R Vakfı Ryaji Uneo Ödülü tarafından desteklenen oldu.

1. Anestezi <ol><li> Izofluran ile fareler anestezi intraperitaneally anestezi yönetmek için önce hayvan taşıma ve tutma kolaylaştırabilir. Inhale anestezik kullanılması veya belirli bir çalışma için uygun olmayabilir olabilir: izofluran kullanarak önerilen akciğer çalışması ilk etkisi, ya da başka herhangi bir anestezi belirlemek. </li><li> Izofluran ile hayvanların anestezisi. Video izofluran az% 2 oksijen ile karışık bir izofluran buharlaştırıcı odası kullanımını gösterir. Izofluran bir odasına yoksa, alternatif standart açık bırak maruz kalma teknikleri kullanarak yapabilirsiniz. Alt takılan bir tel örgü ile bir fanus sıçan (veya diğer uygun olmayan gözenekli bir kap) içine alın. Örgü tel altına yerleştirilen bir gazlı bezle,% 30 v / v izofluran propilen glikol karışımı uygulanır. Mesh kullanımı, hayvan, ciltte tahriş ve potansiyel doz aşımı neden olabilir izofluran bulanmış yüzeyi, temas olmadığını sağlar. Izofluran kısa maruz kaldıktan sonra, hayvanın anestezi olmalı ve kavanoz uçlu ve ayak tutam sonra yanıt vermez doğrulan bir refleksle cevap vermeyecektir. </li><li> Xylazine ve Ketamin bir karışımı bir periton içi enjeksiyon ile daha oturaklı fareler. (Bağırsak bölümlerini veya diğer hayati organlara nüfuz edilmemiş olması sigorta geri çekmek için intraperitoneal yaparken iyi bir uygulamadır.) 150 mcL Xylazine (100 mg / ml)% 0.9 'luk steril fosfat 8850 mcL 1000 mcL Ketamin (100 mg / ml) ile karıştırın tamponlu salin (PBS). Fareler için, doz, vücut ağırlığı 10 gram başına yaklaşık 80 mcL olacaktır. Son konsantrasyonu 10 mg / Kg Xylazine ve 100 mg / kg Ketamin olacaktır. Hayvanların kuru tutulmalı ve aşırı vücut ısı kaybını önlemek için izole edilmelidir. Oftalmik merhem gözleri korneanın kurumasını önlemek için uygulanabilir. </li></ol> 2. Cerrahi Alan hazırlanması <ol><li> Cerrahi kesi yapılacaktır alanında Tıraş olmayan prepped alanlarda kirlenmesini önler. Bir elektrikli tıraş makinesi, hayvan yakından kapalı kürk tıraş edebilirsiniz. Traş kesi siteden daha büyük olmalıdır. </li><li> Gibi Nair epilasyon kremi, sonraki uygulama, geriye kalan tüm kürk kaldıracaktır. Cerrahi alanında epilasyon kremi kalın bir tabaka uygulayın ve 3 dakika bekletin. Kürk ve kıl dökücü krem ​​nemli bir havlu ile silin. Tüy dökücü krem, 10 dakikadan fazla bırakmayın. </li><li> Aseptik cerrahi alanı hazırlamak için,% 70 alkol veya alternatif bir fırçalayın çözümü kullanın. </li></ol> 3. Cerrahi Prosedür <ol><li> Anestezi hayvan, eğimli bir cerrahi tahta ya da açılı frenleyici stand üzerine yerleştirin. </li><li> Küçük bir kesi boynun ön yüzüne (boğaz bölgesi) yakın olun. </li><li> Trakeal halkalar görselleştirmek ve erişmek için platysma ve anterior trakeal kasları parçalara ayır. </li><li> Tipik olarak, intratrakeal enjeksiyon hacimleri 3 kilo ul başına gram (yaklaşık 30-75 mcL son hacim). Instillate uygun miktarda 1 ml subkutan (alt-Q), 30 gauge, 5/16-inch iğne şırınga kullanarak yönetme. Şırınganın konik tarafı yukarı tutun ve paralel trakea, trakea içine tam instillate hacmi enjekte. </li><li> Hayvan Ciğerlere çözünen instilasyon nefes nefese cevap verebilir. Şırınga hava yoluyla tanıtılması ve akciğerleri genişletmek olmadığını gözlemleyerek de başarılı entübasyon teknikleri onaylamak. </li><li> Trakea şırınga çıkarın. </li></ol> 4. Dikişler. <ol><li> Bir iğne tutucu iğne sıkma (dikiş materyaline bağlı olduğu iğne kalın kısım) kavrayın. </li><li> Deri kalınlığına bağlı olarak yara kenarından 90 ° açı yaklaşık 1-3 mm iğne ucu ile deriye nüfuz ederler. Doku üzerinden geçtikten sonra çıkarken iğne kavrayın. Basit dikiş, tek tek düğümlü, verimli bir yara kapanacak. </li></ol> 5. Hayvan Kurtarma <ol><li> Hayvanlar 3-24 saat sonra anestezi ve cerrahi prosedür tamamen kurtarmak gerekir. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Floresan bileşik intratrakeal instilasyon, dekstran konjuge Cy5.5, B6 fare akciğer floresan bileşik (Şekil 1) başarılı instilasyon gösterir. Floresan boya, öncelikle akciğer hedef ve eşit olarak dağıtılır. Floresan sinyal prosedürü izleyerek hemen gastrointestinal sistem, yemek borusu (Şekil 2) prosedürü sırasında yanlışlıkla entübe olduğunu gösterir. Araştırmacılar ayrıca akciğer içine bileşiklerin hedef teslim doğrulamak ve instillate dağıtımı kontrol edin, akciğerler şişirme ve akciğer dokusunda dilimleri (2, 3) hazırlama prosedürü izleyerek ya da sabit histolojik örnekleri. <img src="/files/ftp_upload/1941/1941fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 Floresan Cy5.5 sinyal başarıyla aşılamış fare akciğer X-ray görüntü ile birlikte kayıtlı. 1.4 mg Cy5.5 Dextran'ın (10 mg / ml 'lik bir konsantrasyon), B6 ​​fare akciğer trakea içine damlatıldı. 675 nm eksitasyon filtresi ve 695 nm emisyon filtresi kullanarak Cy5.5 sinyal tespit edildi. <img src="/files/ftp_upload/1941/1941fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 floresan sinyal zayıf aşılamış fare X-ray kaplama ile gösterilir Co-kaydı. Bağırsaklarda Cy5.5 teslim trakeal instilasyon protokol sırasında yemek borusu Uygunsuz entübasyon.

<ol><li>Driscoll, K. E., Costa, D. L., Hatch, G., Henderson, R., Oberdorster, G., Salem, H., Schlesinger, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+instillation+as+an+exposure+technique+for+the+evaluation+of+respiratory+tract+toxicity%3A+uses+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Intratracheal instillation as an exposure technique for the evaluation of respiratory tract toxicity: uses and limitations.</a> Toxicol Sci. 55, 24-35 (2000).</li>
<li>Helms, M. N., Jain, L., Self, J. L., Eaton, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redox+regulation+of+epithelial+sodium+channels+examined+in+alveolar+type+1+and+2+cells+patch-clamped+in+lung+slice+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Redox regulation of epithelial sodium channels examined in alveolar type 1 and 2 cells patch-clamped in lung slice tissue.</a> J Biol Chem. 283, 22875-22883 (2008).</li>
<li>Helms, M. N., Self, J., Bao, H. F., Job, L. C., Jain, L., Eaton, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+activates+amiloride-sensitive+sodium+channels+in+alveolar+type+I+cells+in+lung+slice+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dopamine activates amiloride-sensitive sodium channels in alveolar type I cells in lung slice preparations.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 291, L610-L618 (2006).</li>
<li>Iyer, S. S., Ramirez, A. M., Ritzenthaler, J. D., Torres-Gonzalez, E., Roser-Page, S., Mora, A. L., Brigham, K. L., Jones, D. P., Roman, J., Rojas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidation+of+extracellular+cysteine%2Fcystine+redox+state+in+bleomycin-induced+lung+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Oxidation of extracellular cysteine/cystine redox state in bleomycin-induced lung fibrosis.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 296, L37-L45 (2009).</li>
<li>Li, T., Folkesson, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+interference+for+alpha-ENaC+inhibits+rat+lung+fluid+absorption+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">RNA interference for alpha-ENaC inhibits rat lung fluid absorption in vivo.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 290, L649-L660 (2006).</li>
<li>Sager, T., Porter, D., Robinson, V., Lindsley, W., Schwegler-Berry, D., Castranova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+to+disperse+nanoparticles+for+in+vitro+and+in+vivo+investigation+of+toxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Nanotoxicol%22%5BJournal%5D)">An improved method to disperse nanoparticles for in vitro and in vivo investigation of toxicity.</a> Nanotoxicol. 1, 118-129 (2007).</li>
<li>Xu, J., Gonzalez, E. T., Iyer, S. S., Mac, V., Mora, A. L., Sutliff, R. L., Reed, A., Brigham, K. L., Kelly, P., Rojas, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+senescence-accelerated+mouse+model+in+bleomycin-induced+lung+injury+suggests+that+bone+marrow-derived+cells+can+alter+the+outcome+of+lung+injury+in+aged+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gerontol+A+Biol+Sci+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Use of senescence-accelerated mouse model in bleomycin-induced lung injury suggests that bone marrow-derived cells can alter the outcome of lung injury in aged mice.</a> J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 64, 731-739 (2009).</li>
<li>Yeh, T. F., Lin, H. C., Chang, C. H., Wu, T. S., Su, B. H., Li, T. C., Pyati, S., Tsai, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+intratracheal+instillation+of+budesonide+using+surfactant+as+a+vehicle+to+prevent+chronic+lung+disease+in+preterm+infants%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Early intratracheal instillation of budesonide using surfactant as a vehicle to prevent chronic lung disease in preterm infants: a pilot study.</a> Pediatrics. 121, e1310-e1318 (2008).</li>
</ol>

Intratrakeal instilasyonlar test bileşikler (6) toksisitesini değerlendirmek için çok çeşitli çalışmalar kullanılmış olan alveoler akciğer hasarı (4, 7) neden doğrudan küçük oligonükleotidler teslim yoluyla yüzey (8), gen ekspresyonu gibi değiştirmek yerine akciğer (5). Şu anda akciğer içine floresan redoks duyarlı malzeme farmakolojik bileşikler, DNA vektörleri, virüs, ve floresan göstergeleri instilling) yanı sıra 2 olarak, normal ve patofizyolojik koşullar altında in vivo oksidatif stresi ölçmek için) 1 instilling ke...

<table><tbody><tr><td>İzofluran</td><td>Webster Veterinary</td><td>14043-220-05</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Lloyd, Inc.</td><td></td><td>Yeni Hayvan İlacı Başvurusu #139-236</td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Bioniche Pharma</td><td>67457-001-10</td><td></td></tr><tr><td>Nair</td><td></td><td></td><td>Eczanelerde mevcuttur</td></tr><tr><td>1mL SubK Şırınga</td><td>BD Biosciences</td><td>309597</td><td>26 5/8 G</td></tr><tr><td>4-0 Naylon Sütur</td><td>Ethicon Inc.</td><td>1894G.S30</td><td></td></tr></tbody></table>

fare akciğer içine çözünenlerin doğrudan trakeal damlatma

Direct Tracheal Instillation of Solutes into Mouse Lung

Intratrakeal instilasyonlar doğrudan ciğerlerine çözünenlerin sağlar. Bu prosedür, akciğer distal bölgeye instillate teslim hedefler ve bu nedenle sık sık alveoller okuyan yönelik çalışmalar dahil edilmiştir. Biz farelerde intratrakeal instilasyonlar gerçekleştirmek için ayrıntılı bir yaşam protokolü sağlar. Bu yaklaşımı kullanarak, distal akciğer içine test çözünenlerin veya katı teslim (akciğer terapötikler, yüzey, virüs, ve küçük oligonükleotidler gibi) hedefleyebilir. Trakeal instilasyonlar öncelikle üst solunum yolu hedef ve araştırmacı muhtemelen potansiyel olarak tehlikeli maddelere maruz inhalasyon protokolleri üzerinden tercih edilen bir yöntem olabilir. Ayrıca, trakeal instilasyon protokolünü kullanarak, hayvanlar tamamen non-invaziv kurtarabilirsiniz. Bu aynı hayvan kullanarak test hayvanları, ya da yeniden yükleme sonraki fizyolojik ölçümler yapmak için sağlar. Akciğer içine tanıtıldı instillate miktarı dikkatlice belirlenir ve ozmotik hayvan kurtarma sağlamak için dengeli olmalıdır. Tipik olarak, 30-75 mcL instillate hacmi fare akciğer içine sokulabilir.

Intratrakeal instilasyonlar doğrudan ciğerlerine çözünenlerin sağlar. Bu prosedür, akciğer distal bölgeye instillate teslim hedefler ve bu nedenle sık sık alveoller okuyan yönelik çalışmalar dahil edilmiştir. Biz farelerde intratrakeal instilasyonlar gerçekleştirmek için ayrıntılı bir yaşam protokolü sağlar.

Fare Akciğer içine çözünenlerin Doğrudan Trakeal damlatma

İntratrakeal instilasyonlar, çözünen maddelerin doğrudan akciğerlere iletilmesini sağlar. Bu prosedür, instilatın ...'nın distal bölgelerine iletilmesini hedefler.

Bu prosedürde, çözünmüş maddeler doğrudan akciğerlere iletilebilir. Önce trakeayı açın. Küçük kemirgenin tüylerini temizleyin ve boynun ön kısmının yakınına küçük bir insizyon yapın.Trakeayı açığa çıkarın. Trakea üzerinden, vücut ağırlığının gramı başına üç mikrolitre solüsyon vermek için bir mililitrelik subkutan iğne kullanın. Şırıngayı çıkarın ve yarayı sütüre edin.Merhaba, ben Emory Üniversitesi Fizyoloji Bölümü'nden Dr. Ma Helms. Merhaba, ben Emory Üniversitesi Tıp Bölümü'nden Dr. Mauricio Rojas. Bugün size çözünür maddelerin akciğerlerin distal kısımlarına doğrudan verilmesi prosedürünü göstereceğiz.Laboratuvarımızda, instilasyon yoluyla uygulanan çeşitli bileşiklere yanıt olarak akciğer sıvısı klirensini incelemek için bu prosedürü rutin olarak kullanmaktayız ve ayrıca akciğer hasarı olan erkek fare modeli oluşturmak için bu tekniği kullanıyoruz. Küçük kemirgenlerin akciğerlerine solütlerin doğrudan instilasyonu, çalışmalarınızda faydalı olabilir.Hadi başlayalım. Cerrahi hazırlık kapsamında, fareye başlangıçta izofluran ile anestezi uygulanır ve ardından ksilazin ve ketamin karışımının intraperitonal enjeksiyonu ile sedasyon derinleştirilir. Hayvanın tamamen anestezi altında

direct-tracheal-instillation-of-solutes-into-mouse-lung

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz anestezi farelerin trakea yoluyla ciğerlerine test malzemelerin cerrahi olmayan teslimat göstermektedir. Bu yöntem, bakteriyel ve viral patojenler, sitokinler, antikorlar, boncuk, kimyasallar, ya da boyalar akciğer maruz izin verir. Daha hasat ve flow sitometri akciğer ve akciğer drenaj lenf düğümleri (LDLNs) işlenmesi açıklanmaktadır.

Akış Sitometri Akciğerler ve Akciğer Boşaltma lenf düğümleri Analizi fareler cerrahi olmayan intratrakeal damlatma

Bu videoda, akciğer damlatma, fiksasyon ve akciğer hacmi ölçümü için soluk borusuna sıvı eklemenin basit ve güvenilir bir yöntemi açıklanmaktadır.

Akciğer İnstilasyonu ve Fiksasyonu: Sabit Akciğer Hacmini Ölçmek için Trakeaya Sıvı Verilmesi ve Akciğerlerin Sabitlenmesi

Kaynak: Venuprasad, K., ve diğerleri. Hava Yolu Enflamasyonunu İncelemek İçin Fare Modellerinde Haemophilus influenzae'nin Trakeal İçi Uygulaması. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, alt solunum yolu enfeksiyonunu modellemek için akciğer patojenik bir bakteri inokulumunun anestezi uygulanmış bir fareye intratrakeal olarak verilmesini göstermektedir.

Bir Fare Modelinde İntratrakeal Bakteri Dağıtımının Gerçekleştirilmesi

Bu yazıda akciğer fonksiyonu ölçümleri veya fareler kurtarmak için ve daha sonraki dönemlerde de incelenebilir sağlar pulmoner instilasyon için fare entübasyon bir striaghforward ve etkili bir yöntem açıklanır. Işlem doğrudan soluk borusu yanması pahalı olmayan bir fiber optik ışık kaynağı içerir.

Fare Akciğer Entübasyonun Basit Bir Yöntem

Insanlarda akciğer hastalıklarının durumunu taklit eden bir modelinin kullanılması, belirli bir hastalığın patofizyolojisi ve / veya etyolojisinin araştırılması için ve terapötik müdahale geliştirmek için çok önemlidir. Burada doğrudan fare akciğerlere eksojen malzemeleri teslim noninvazif bir entübasyon yöntemi sunulmuştur.

Noninvaziv Entübasyon Fare Akciğer Patolojisi ve Fizyolojisi Eğitim için

Reaktiflerin Entübasyon aracılı intratrakeal (IMIT) instilasyon solunum yolu hastalıkları, hem de akciğer içine doğrudan tedavi reaktifler aşılamak için bir yöntem incelenmesi için mükemmel, invazif olmayan bir yöntemdir. Bu klinik öncesi test için uygun bir hızlı ve yüksek oranda çoğaltılabilir bir yöntemdir.

Entübasyon-aracılı intratrakeal (IMIT) damlatma: A Noninvaziv, Lung-özel Dağıtım Sistemi

Bu yazının amacı, büyük ölçüde akciğer kanseri ya da diğer patolojiler ile kurulum ve fare akciğerlerin analizine yardımcı olacak basit yöntemler tarif etmektir. Biz sadece ve güvenilir akciğer instilasyonlar, fiksasyon ve akciğer hacim ölçümleri yürütmek için 3 protokol sunuyoruz.

Fare Akciğer Kanseri Araştırma Faydalı instillation ve Fiksasyon Yöntemi

Bu makalede, entübasyon yoluyla fare trakea içine doğrudan bleomisin yönetmek için hızlı ve basit bir yöntem sunar. Bu yöntemin en önemli avantajları usta son derece tekrarlanabilir kolay ve özel ekipman ya da uzun iyileşme süreleri gerektirmez vardır.

Farelerde Trakea hızlı intübasyon için geliştirilmiş bir yöntem

İlaçların doğrudan yenidoğan kemirgenlerinin trakeasına damlatılması tekniği, lokal olarak uygulanan ilaçların veya biyolojiklerin yenidoğan akciğer hastalıkları üzerindeki etkisini incelemede önemlidir. Ek olarak, bu yöntem hayvan modellerinde akciğer hasarını indüklemek için de kullanılabilir.

Yenidoğan Kemirgenlerinde Akciğer Hastalığını Tedavi Etmek İçin İlaçların İntratrakeal İnstilasyonu İçin Minimal İnvaziv Bir Yöntem

Burada, noninvaziv orofaringeal endotrakeal entübasyon yoluyla intratrakeal lipopolisakkarit (LPS) doğumu için bir protokol öneriyoruz. Bu yöntem, hayvan için cerrahi prosedürün travmasını en aza indirir ve LPS'yi trakeaya ve daha sonra akciğerlere doğru bir şekilde iletir.

Farelerde Noninvaziv İntratrakeal Lipopolisakkarit Damlatma

Bu protokol, bir farenin en uygun şekilde konumlandırılmasının ve kamera tabanlı bir otoskopun transoral olarak yerleştirilmesinin glotisin görselleştirilmesini, minimal doku travması ile hızlı entübasyonu ve akciğerlere tutarlı sıvı verilmesini nasıl sağladığını gösterir.

Fare Akciğerine Sıvı İletimi için Geliştirilmiş Metodoloji: Tüketici Otoskopu Kullanılarak Entübasyon

Öğrenin fare akciğerlerine çözünenlerin doğrudan trakeal damlatma yöntemini. Bu teknik, alveollere hedefli madde iletimi sağlayarak solunum fizyolojisi ve akciğer hastalıkları araştırmalarında güvenilir bir çerçeve sunar.

Fare Akciğer içine çözünenlerin Doğrudan Trakeal damlatma

Daha fazla video keşfet