Mekanik Ayrışma: Bir Dokudan Canlı Hücre Elde Etme Yöntemi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 5:26 dk. • April 30th, 2023
İlk olarak, bir doku parçasını tartın ve uzunluğunu, genişliğini ve yüksekliğini ölçün. Dokuyu bir kültür ortamı ile bir kültür kabına yerleştirin ve bir neşter kullanarak küçük parçalara ayırın. Bir Pasteur pipeti kullanarak homojenizasyon için her şeyi bir C-tüpüne aktarın.
Tüpü mekanik bir ayırıcıya yerleştirin ve döngüleri gerektiği gibi çalıştırın. Aparat, yüzey proteinleri de dahil olmak üzere hücresel bütünlüğü korurken doku örneğinden canlı tek hücreleri çıkarmak için mekanik kuvvetler kullanır. Homojenatı bir santrifüj tüpüne sabitlenmiş bir hücre süzgecinden boşaltın.
Kalan dokuyu yeniden homojenize edin ve homojenatı hücre süzgecinden tüpe süzün. Homojenatı santrifüjleyin ve süpernatanı çıkarın. Şimdi, hücre peletini kültür ortamında yeniden süspanse edin ve az miktarda hücre süspansiyonunu tripan mavisi boyası içeren bir tüpe aktarın.
Boyamadan sonra, hücreleri bir hemositometre lamına aktarın. Saydam canlı hücreleri sayın. Ölü hücreler, hücre zarları sağlam olmadığı için lekeyi alır. Aşağıdaki protokolde, CD45+ hücrelerinin kantitatif ve kalitatif analizi için taze insan dokusunun enzimatik olmayan ayrışmasını gerçekleştireceğiz.
- Doku örneğini tartarak ve ardından do
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin