Kuyruk Damarı Enjeksiyonu: Bir Fare Modelinde Metastatik Çalışmalar için Kanser Hücrelerini Uygulamak İçin Bir Yöntem

Yüzeyden ayırmak için etiketli meme kanseri hücreleri içeren bir Petri kabına tripsin ekleyerek başlayın. Tripsinin etkisini durdurmak için serum içeren ortam ekleyin. Hücre süspansiyonunu konik bir tüpe aktarın ve pelet hücresine santrifüjleyin.

Süpernatanı atın ve hücreleri fosfat tamponlu tuzlu su içinde yeniden süspanse edin. Hücre metabolizmasını yavaşlatmak için tüpü buzun üzerine yerleştirin. Gerekli miktarda hücre içeren bu hücre süspansiyonunu bir Luer kilit şırıngasına yükleyin ve üzerine bir iğne sabitleyin.

Bir fareyi kuyruğu dışarıda olacak şekilde bir kemirgen tutucuya yerleştirin. Damarları genişletmek için kuyruğu ılık suya batırın. Yan taraflarda iki damar ve kuyruğun ventral tarafında bir arter vardır. Kuyruğu alkolle silin, iğneyi yerleştirin ve hücre süspansiyonunu enjekte edin.

Enjekte edilen kanser hücreleri kan dolaşımına girdikten sonra akciğerler gibi organlara girer ve çoğalır. İğneyi yavaşça çıkarın ve kanamayı durdurmak için baskı uygulamak için enjeksiyon bölgesinde steril bir gazlı bez kullanın. Fareyi kafesine geri koyun ve tam bir iyileşme sağlayın. Aşağıdaki protokolde, meme kanseri metastazı ve kolonizasyonunu ölçmek için etiketli metastatik kanser hücrelerinin bir fare modeline enjeksiyonunu gösteriyoruz.

Ortamı aspire edin ve hücre plakalarını 1X PBS ile durulayın. Hücreleri 15 santimetre plaka başına 5 mililitre tripsin ile iki ila beş dakika boyunca tripsinize edin ve tüm hücreleri konik bir tüpe aktarın. Doku kültürü kabından kalan hücreleri, tripsini söndürmek için yeterli tam büyüme ortamı ile yıkayın. Yıkamayı aynı konik tüpe ekleyin. Toplam hücre sayısını belirlemek için otomatik bir hücre sayacı kullanarak hücreleri sayın.

Daha sonra, hücreleri üç dakika boyunca 122 kez G'de santrifüjleyin ve süpernatanı aspire edin. Hücreleri istenen konsantrasyonda 1X PBS'de yeniden süspanse edin. Burada, her fareye 100 mikrolitre PBS'de 25.000 hücre enjekte edilir, bu nedenle yeniden askıya alınan hücreler mililitre başına 250.000 hücredir. Hücre süspansiyonlarını enjeksiyona kadar buz üzerinde tutun.

Hayvan tesisindeki bir başlıkta çalışarak, nazikçe, ancak tüpü ters çevirerek veya 1 mililitrelik bir şırınga kullanarak hücreleri homojen bir şekilde yeniden süspanse edilmelerini sağlamak için iyice karıştırın. Şimdi, hücre süspansiyonlu 1 mililitrelik bir Luer kilit şırıngası yükleyin ve fazla hava kabarcıklarını dışarı atın. Eğim yukarı bakacak şekilde şırınganın üzerine 1/2 inç, 30 gauge bir iğne yerleştirin ve hava kabarcıklarını dışarı atın.

Fareyi nazikçe bir kemirgen tutucuya yerleştirin. Lateral kuyruk damarı görünür ve genişlemiş olmalıdır. Değilse, kuyruğun tabanını hafifçe sıkıştırın ve damarları genişletmek için kuyruğu ılık musluk suyuna batırın. Kuyruğu temizlemek için alkollü mendil kullanın. Daha sonra iğneyi kuyruk damarına, eğimli tarafı yukarı bakacak şekilde yerleştirin ve 100 mikrolitre hücre süspansiyonu enjekte edin. İğne damar içine düzgün bir şekilde yerleştirilirse, kolayca hafifçe ileri ve geri kaymalı ve piston itildiğinde direnç olmamalıdır.

Başarılı enjeksiyonlar, enjeksiyonu takiben birkaç saniye boyunca damarın mavi renginin beyaza döndüğü bir kızarma ile de sonuçlanmalıdır. İğneyi yavaşça çıkarın ve steril bir gazlı bez kullanarak, herhangi bir kanamayı durdurmak için enjeksiyon bölgesine baskı uygulayın. Fareyi kafesine geri koyun ve tam iyileşmeyi sağlamak için 15 dakika izleyin.