İnsan Derisi Keratinosit İzolasyonu: Deri Örneklerinden Primer Keratinositlerin Kültürlenmesinde Bir Yöntem
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 5:36 dk. • April 30th, 2023
- Keratinositler, epidermiste veya cildin en dış tabakasında bulunan en belirgin hücrelerdir. Melanositler, dendritik hücreler ve merkel hücreleri gibi diğer çeşitli hücre tipleriyle ilişkili olarak dermis üzerinde birden fazla katman halinde düzenlenirler.
Keratinositleri izole etmek için, epidermal dokuyu insan derisinden alarak başlayın. Daha sonra, enzimatik bir sindirim tamponu ile muamele edin. Tampondaki enzimler, epidermal dokuda bulunan hücre dışı matriks proteinlerini bozar ve böylece hücre ayrışmasını başlatır. Şimdi uygun bir ortam ekleyin ve dokuyu mekanik olarak bozun.
Ayrışmış hücreleri süspansiyona bırakmak için, hücre kümelerini veya kalıntılarını gidermek için epidermal hücre süspansiyonunu bir süzgeçten süzün. Epidermal hücreleri peletlemek ve bunları enzim içeren süpernatandan ayırmak için santrifüjleyin. Süpernatanı çıkarın ve tercih edilen bir keratinosit büyüme ortamı kullanarak hücreleri yeniden süspanse edin. Hücreleri istenen süre boyunca kültürleyin.
Kültür sırasında, optimize edilmiş ortam, diğer epidermal hücre tiplerine göre seçici büyümelerini teşvik ederek keratinositlerin genişlemesini zenginleştirir. Aşağıdaki protokolde, keratinositlerin yetişkin
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin