JoVE Encyclopedia of Experiments
Kanser Araştırmaları
0 görüntüleme • 3:14 dk • April 30th, 2023
Bir fare böbreğinin ince bölümlerini hazırlamak için önce yeni hasat edilmiş bir fare böbreği edinin. Böbreği bir filtre kağıdına aktarın ve vibratom numune tutucusuna en iyi şekilde yapışmasını sağlamak için kurutun.
Daha sonra, vibratom numune tutucusunun tabanına uygulanan ince bir siyanoakrilat yapıştırıcı tabakası kullanarak böbreği üreter tarafı aşağı gelecek şekilde monte edin ve böbreği dik konumda sabitleyin. Numune tutucuyu bir tampon tepsisine aktarın.
Böbreğin üst yüzeyini tamamen daldırmak için tepsiyi uygun bir tamponla doldurun. Dilimleme sırasında ısı birikmesinden kaynaklanan doku hasarını önlemek için tepsiyi bir buz banyosu çevreler. Vibratom bıçağını uygun bir açıya, hıza ve genliğe ayarlayın. İstenilen kalınlıkta doku kesitleri elde etmek için kalınlık parametresini ayarlayın.
Çalışma sırasında, bıçak yanal olarak titrer ve ilerleyerek doku örneğine nüfuz eder. Titreşimli bıçak, daha az basınçla kesit almaya izin verir ve doku deformasyonunu en aza indirerek, doku morfolojisini korurken ilgilenilen tek tip böbrek dokusu bölümleri oluşturur.
Bu arada, dokunun fizyolojik koşullarını taklit etmek için uygun bir soğutulmuş tampon çözeltisi içeren çok kuyulu bir plaka monte edin. Şimdi, dilimlenmiş doku bölümlerini tampona aktarın. Son olarak, doku bölümlerini daha fazla aşağı akış analizine kadar düşük sıcaklıkta saklayın.
Hazırlanan böbreği buz gibi soğuk KRB çözeltisinden nazikçe kavramak ve çıkarmak için künt uçlu forseps kullanın. Fazla dış nemi gidermek için böbreği hemen yaklaşık 2 ila 4 saniye boyunca emici kağıda yerleştirin. Parankimin her tarafının kuruduğundan emin olmak için böbreği emici kağıt üzerinde nazikçe yuvarlayın, böylece böbreğin vibratom aşamasına en iyi şekilde yapışmasını sağlayın.
Vibratom numune plakasının tabanına hemen ince bir siyanoakrilat yapıştırıcı tabakası uygulayın ve böbreği üreter tarafı aşağı bakacak şekilde yapıştırıcıyla kaplı alana yerleştirmek için künt uçlu forseps kullanın. Yapıştırıcıyı kurutmak için forsepsin düz kenarı ile böbreğin üst kısmına yaklaşık 10 ila 20 saniye boyunca nazikçe aşağı doğru basınç uygulayın.
Numune plakasını tampon tepsisinin dibine sıkıca sabitleyin ve KRB çözeltisinin seviyesini, böbreğin üst kısmı tamamen daldırılacak şekilde ayarlayın. Otomatik vibratom kesiti için, tüm böbrek düzleminin kesitlere ayrıldığından emin olmak için vibratom bıçağı kesme döngüsünün başlangıç ve bitiş konumlarını böbrekten 0,5 ila 1 santimetre uzakta seçin.
Bıçağın böbreğe temas ettiğinden emin olarak otomatik kesme işlemini başlatın. Forseps kullanarak, böbrekten serbest bırakılan bölümleri toplayın ve hemen tek tek kuyucuklara aktarın.