Name: İlaçlar, Viral Vektörler, veya Hücre Transplantasyon teslimi için Microinjections Derin Beyin Yapıları Hedefleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-01T16:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Öğrenin, 50 µm lümenli cam kapiler iğneler kullanarak derin beyin yapılarına ilaç, viral vektör veya hücre nakli için hassas mikroenjeksiyon tekniğini. Bu yöntem beyin hasarını en aza indirir ve hedefe yönelik teslimat sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

RG-P CONACyT s hibe (CB-2008-101.476) ve FRABA (686/10) tarafından desteklenmiştir. AQ-H Ulusal Sağlık Enstitüsü, Howard Hughes Tıp Enstitüsü, Robert Wood Johnson Vakfı ve Maryland Kök Hücre Vakfı tarafından desteklenmektedir.

<ol><li> Fare ameliyat öncesi cam iğneler olun: <ol class="lalpha"><li> Mikropipet çektirmenin kapiller cam tüp koyun. </li><li> Yerelleştirilmiş alan cam tüp yumuşatmak için cam tüp ortasında ısıtın. </li><li> Uzunlamasına eksen boyunca cam tüp, yerelleştirilmiş alan cam tüp çapı bir azalma neden olmak için yeterli bir başlangıç ​​mesafe gerin. </li><li> Cam tüp kalıncaya kadar uzanan tutun. Bu şekilde, iki özdeş tek varil iğneler elde edilir. </li></ol></li><li> Bir microforge cam iğne koyun. A 30 ° açı yeterli konik ucu. </li><li> Her iğne doğru iç çapı olduğu mikroskop altında kontrol edin. Hidrofilik ilaçların çoğu için bir iç çapı 30-50 mikron idealdir (Şekil 1). </li><li> Mineral yağ ile en geniş cam iğne ucundan iğne doldurun. ~ 50% kılcal tüpün uzunluğu ulaşıncaya kadar mineral yağ (MSDS, Cat M7700) kapilarite girer edelim. Koyun yüksek vakum iğne geniş sonlandırma piston etrafında yağ (Dow Corning, Kedi 05.054-AB). </li><li> Piston iğne geniş sonuna kadar yerleştirin ve hafifçe mineral yağ küçük bir damla yağ cam iğne ucu çıkıyor görüldüğü kadar itin. </li><li> Mikroenjektör sahibi cam iğne sabitleyin. </li><li> % 2.5 Avertin (2,2,2-tribromoethanol + tert-amil alkol, 1:1 w / v) ile fare anestezisi. Dosis gram intraperitoneal başına 25-30μL. </li><li> 37 hayvanın vücut sıcaklığı tutmak için stereotaktik cihaz ° C üzerinde bir ısıtıcı yastık koyun </li><li> Stereotaktik cihaz, kulak çubukları ve dişlerin tutucu kullanarak fare baş koyun ve güvenli. </li><li> Ikinci kez% 70 Etanol ve% 0.1 Klorheksidin glukonat% 0.1 Klorheksidin glukonat çözüm, fare kafasını temizleyin. </li><li> Lamba kafatası hattı fare kulakları bir cerrahi bıçak # 15 cilt İnsizyon. </li><li> Kurumasına ve cerrahi alanında cilt çekin bir pamuk takas kafatası Lehçe. </li><li> Bregma dikiş tepe noktasında cam iğne ucu kullanın. Enjektör ("sıfır" koordinat) başlangıç ​​konumunu ayarlamak zorunda. </li><li> "X" ve "Y" kafatası üzerinde stereotaktik cihazın eksen hareket ettirerek delinmiş noktayı ayarlayın. </li><li> Seçilen koordinat çok dikkatli bir delik delin. Microdrills ve diğer metal aletler daha önce 250 sterilize ° C kuru bir cam boncuk sterilizatör ile 60 saniye (Cole Palmer, Kedi No EH-10.779-00). </li><li> Ince forseps kemik derin tabaka dikkatlice çıkarın ve duramatter membran (bazı beyin omurilik sıvısı dışarı sızdıran göreceksiniz) break ile. </li><li> Iğne delikli gidebilirsiniz onaylayın. </li><li> Pipet 1 parafilm küçük bir parça enjekte koymak istediğiniz ilaç ul. </li><li> Parafilm kafatası üzerine koyun. </li><li> Sıvı cam iğne içine kadar gidiyor mikroskop altında kontrol ederken, mikroenjektör Çarkın dönmesi ilaç emer. </li><li> Parafilm çıkarın ve sıfır koordinat yeniden ayarlanmalıdır. </li><li> Cam iğne ucu beyin yüzeyini hafifçe dokunun ve sıfırdan "Z" koordine kadar tutucu aşağı, seçilen koordinatlarına iğne taşıyın. </li><li> Seçilen derinlikte beyin parankimi içine cam iğne tanıtmak. </li><li> ~ 1 nl / sn hızında yavaş yavaş ilaç enjekte edilir. </li><li> Arzu hacim enjekte edildiğinde, 2 dakika süreyle parankimi içine ilaç diffüz sağlar. Sonra yumuşak ve yavaş yavaş iğne kaldırmak için devam edin. </li><li> Tutkal cerrahi yara ve hayvan stereotaktik cihazdan çıkarmak ve hayvan anestezi kurtarma için temiz bir yatak içeren önceden ısıtılmış bir kafese koymak. </li><li> Post-operatif analjezi sağlamak için tüm hayvanların 24 saat için 5 mg / kg subkutan Ketorolak alınan her 12 saat </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar: Bu protokol, bir çok hassas enjeksiyon elde edilen ve çok dar bir iğne parça beyin hasarı en aza indirir. Bu yöntem bir temsilcisi Sonuç olarak, beyaz cevher yolları 1-4 demiyelinizasyon üreten korpus kallosum içine enjekte lysophosphatidyl kolin (lysolecithin). Cam iğne ile üretilen beyin hasarı en aza indirmek için, biz sadece lysolecithin, 20 nl korpus kallosum içine enjekte edilen, ancak 200 nl kadar kadar eğer gerekli yüksek hacimli aynı yöntemi ile enjekte edilebilir. Demiyelinizasyon beyaz cevher yolları (Şekil 2) miyelin temel protein ifade yok tarafından algılanır. <img src="/files/ftp_upload/2082/2082fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. 50 mikron çaplı cam iğne. İki kısa keneler arasındaki mesafe50-mikron ölçeğinde bir uzunluğu temsil eder. <img src="/files/ftp_upload/2082/2082fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 korpus kallosum Lysolecithin enjeksiyon. Demiyelinizasyon miyelin temel protein ifade (noktalı alan) olarak gösterilmiştir. Küçük boyutlu cam iğne yolu (oklar) dikkat edin. Bar = 100 mikron

<ol><li>Menn, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Origin+of+oligodendrocytes+in+the+subventricular+zone+of+the+adult+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain.</a> J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).</li>
<li>Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+Growth+Factor+Induces+the+Progeny+of+Subventricular+Zone+Type+B+Cells+to+Migrate+and+Differentiate+into+Oligodendrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Epidermal Growth Factor Induces the Progeny of Subventricular Zone Type B Cells to Migrate and Differentiate into Oligodendrocytes.</a> Stem Cells. 27, 2032-2043 (2009).</li>
<li>Hall, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+aspects+of+remyelination+after+demyelination+produced+by+the+intraneural+injection+of+lysophosphatidyl+choline%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Some aspects of remyelination after demyelination produced by the intraneural injection of lysophosphatidyl choline.</a> J Cell Sci. 13, 461-477 (1973).</li>
<li>Webster, G. R., Thompson, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Observations+on+the+presence+of+lysolecithin+in+nervous+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Observations on the presence of lysolecithin in nervous tissues.</a> Biochim Biophys Acta. 63, 38-45 (1962).</li>
<li>Doetsch, F., Caille, I., Lim, D. A., García-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subventricular+Zone+Astrocytes+Are+Neural+Stem+Cells+in+the+Adult+mammalian+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Subventricular Zone Astrocytes Are Neural Stem Cells in the Adult mammalian Brain.</a> Cell. 97, 1-20 (1999).</li>
<li>Doetsch, F., Petreanu, L., Caille, I., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EGF+converts+transit-amplifying+neurogenic+precursors+in+the+adult+brain+into+multipotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">EGF converts transit-amplifying neurogenic precursors in the adult brain into multipotent stem cells.</a> Neuron. 36, 1021-1034 (2002).</li>
<li>Baraban, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+seizures+by+transplantation+of+cortical+GABAergic+interneuron+precursors+into+Kv1.1+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Reduction of seizures by transplantation of cortical GABAergic interneuron precursors into Kv1.1 mutant mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 15472-15477 (2009).</li>
<li>Richardson, R. M., Barbaro, N. M., Alvarez-Buylla, A., Baraban, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+cell+transplantation+for+temporal+lobe+epilepsy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurg+Focus%22%5BJournal%5D)">Developing cell transplantation for temporal lobe epilepsy.</a> Neurosurg Focus. 24, E17-E17 (2008).</li>
<li>Alvarez-Dolado, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+inhibition+modified+by+embryonic+neural+precursors+grafted+into+the+postnatal+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cortical inhibition modified by embryonic neural precursors grafted into the postnatal brain.</a> J Neurosci. 26, 7380-7389 (2006).</li>
</ol>

Bu yöntem beynin içine çok hassas yerlere ilaçlar veya viral vektörlerin en sunmak için çok yararlı olan bu video gösterdi. Bu tekniğin başlıca avantajlarından bazıları hedefleme nokta enjeksiyonları doğruluğu ve beyin lezyon ve sistem zarar 1, 2, 5, 6 küçük boyutlu güvenilirliğini. Sonra teknik mistargeting aralığında standardize 50 mm veya 1, 2 daha az. Hücre nakli aynı zamanda daha geniş, 100-150 mikron 7-9, iğneler kullanılarak yapılabilir. Bu nedenle verimli hücre teslim hücre nakli...

<table><tbody><tr><td>Kılcal cam tüp</td><td>Wiretrol I</td><td>5-000-1001</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipet çekici</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model 730</td><td></td></tr><tr><td>Mikroforge</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>Model 48000</td><td></td></tr><tr><td>Mineral yağ</td><td>MSDS</td><td>M7700</td><td></td></tr><tr><td>Yüksek vakum gresi</td><td>Dow Corning</td><td>05054-AB</td><td></td></tr><tr><td>Anestezi: %2,5 Avertin</td><td></td><td></td><td>2,2,2-tribrom&amp;#8211;etanol + tert-amil alkol, 1:1 a/h</td></tr><tr><td>Isıtıcı ped</td><td>Mastex</td><td>Model 900</td><td></td></tr><tr><td>Stereotaktik cihaz</td><td>Kopf Instruments</td><td>Model Kopf-900</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi bistüri ucu # 15</td><td>Medi-Cut</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikro matkap</td><td>Ideal Micro Drill</td><td>67-1000</td><td></td></tr><tr><td>Hassas pens</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1-&amp;mu;L Mikropipet</td><td>Rainin</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi mikroskop</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td>Contraves sistemli Vasiorkop</td><td></td></tr><tr><td>Mikroenjektör</td><td>Narishige International</td><td>Model MO-10</td><td></td></tr></tbody></table>

İlaçlar, viral vektörler, veya hücre transplantasyon teslimi için microinjections derin beyin yapıları hedefleme

Targeting of Deep Brain Structures with Microinjections for Delivery of Drugs, Viral Vectors, or Cell Transplants

Beyin parankimi içine Microinjections ilaçlar, viral vektörlerin veya hücre nakli sunmak için önemli prosedürler vardır. Bir enjeksiyon iğnesi, yörünge sırasında ürettiği beyin lezyonu sadece beyin küçük ama aynı zamanda bazen çoklu enjeksiyon ihtiyaç vardır özellikle fare beyinde önemli bir husustur. Biz burada cam kılcal iğneler beyin hasarı önemli ölçüde azaltır ve kemirgen beyin içine hassas bir hedefleme sağlar 50 mikron lümen üretmek için bir yöntem gösteriyor. Bu yöntem, küçük hacimli bir teslimat (20 100 nl), kanama riskini azaltır sağlar ve beyin parankimi içine ilaç pasif difüzyon en aza indirir. Farklı boyutta kılcal cam tüpler kullanarak veya iğne lümen değişen, çeşitli madde ve hücreler enjekte edilebilir. Cam kapiller tüp ile Microinjections enjeksiyon teknikleri ve küçük kemirgenler minimum teminat hasar hedefleyen derin beyin önemli bir iyileşme temsil eder.

Bu makalede, 50 mikron lümen cam kılcal iğneler yapmak için bir yöntem gösteriyor. Bu teknik, beyin hasarı önemli ölçüde azaltır, ilaç pasif difüzyon en aza indirir ve kemirgen beyin içine hassas bir hedefleme sağlar.

İlaçlar, Viral Vektörler, veya Hücre Transplantasyon teslimi için Microinjections Derin Beyin Yapıları Hedefleme

Beyin parankimına yapılan mikroenjeksiyonlar; ilaçların, viral vektörlerin veya hücre transplantlarının iletilmesi için önemli prosedürlerdir. Bir ... tarafından oluşturulan beyin lezyonu...

Bu prosedürün genel amacı, ilaçların, viral vektörlerin veya hücre transplantlarının iletimi için derin beyin yapılarına yüksek hassasiyetle mikro enjeksiyonlar gerçekleştirmektir. Bu işlem, öncelikle 50 µm lümene sahip cam kapiler iğnelerin üretilmesiyle gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, iğnenin %50'sinin kapiler etkiyle mineral yağ ile doldurulması ve pistonun tüpün en geniş ucundan yerleştirilmesidir.Prosedürün üçüncü adımı, iğneyi enjekte etmek istediğiniz madde veya hücre süspansiyonu ile doldurmaktır. Prosedürün son adımı ise iğne ucunu yerleştirmek ve maddeyi çok düşük bir akış hızıyla derin beyin yapısına enjekte etmektir. Sonuç olarak, cam kılcal tüp kullanılarak yapılan mikro enjeksiyonlar aracılığıyla maddelerin beyne çok hassas bir şekilde hedeflendiğini gösteren sonuçlar elde edilebilir.Merhaba, ben Meksika'daki Colima Üniversitesi Psikoloji Fakültesi Nörobilim Laboratuvarı'ndan Oscar Gonzalez. Bugün sizlere, fare beynine ilaç iletmek için cam kılcal tüp ile mikroenjeksiyon uygulama prosedürünü göstereceğiz. Bu prosedürü, yetişkin nöral kök hücreleri incelemek amacıyla laboratuvarımızda kullanmaktayız.Öyleyse başlayalım. Beyne yapılan mikro enjeksiyonlarda 50

targeting-deep-brain-structures-with-microinjections-for-delivery

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bozulmamış 3-D Beyin Devrelerin Hedefleme Viral için Ölçeklenebilir akışkan Enjektör Diziler

Kaynak: Poland, R. et al. Motive edilmiş davranışın moleküler substratlarını incelemek için kemirgen beyin mikroenjeksiyonu. J. Vis. Uzm. (2015)Bu videoda, hassas ilaç iletimi için bir şırınga ve mikroenjektör hortumundan oluşan su dolu bir mikroenjeksiyon kurulumu kullanılmıştır. Önceden implante edilmiş bir kılavuz kanülü olan bir sıçan, hedefe yönelik beyin mikroenjeksiyonuna tabi tutulur ve bu da uyanık hayvanlarda minimum doku hasarı ile terapötik ajanların doğru bir şekilde uygulanmasını...

Terapötik Bir Ajanın Uyanık Bir Kemirgen Beynine Mikroenjeksiyon Tabanlı Verilmesi

Kaynak: Fricano-Kugler, C. J., et al. Stereotaksik enjeksiyon yoluyla yüksek titreli CRISPR retro ve Lentivirüslerin tasarımı, paketlenmesi ve teslimi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, fare beyninde hassas nöronal gen düzenlemesi için stereotaksik viral enjeksiyonu göstermektedir. Protokol, dentat girusa doğru virüs iletimini sağlayarak, nöral devreleri, gen fonksiyonunu ve hastalık mekanizmalarını in vivo olarak incelemek için floresan etiketleme ve CRISPR aracılı gen nakavtını mümkün kılar.

Fare beyninde hedeflenen nöronal gen düzenlemesi için stereotaksik viral enjeksiyon

Organotipik beyin dilimi preparatlarındaki son gelişmeler, bunların biyoteknolojik uygulamalar için kullanılmasına izin vermiştir. Organotipik dilimler, fonksiyonel sinaptik bağlantılar da dahil olmak üzere in vivo biyolojinin yerel yapısal özelliklerini korur. Burada, bu dilimleri etiketlemek ve genetik olarak manipüle etmek için bölgesel seçici bir biyolistik dağıtım yöntemi sunuyoruz.

Regioseçici Biolistik Modifiye Gen Tabancası kullanarak Organotipik Beyin Dilimleri Hedefleme

Derin Beyin Stimülasyonu (DBS) cerrahisinin terapötik etkilerinin altında yatan mekanizmanın araştırılması gerekiyor. Bu yazıda sunulan yöntemler, DBS cerrahisi sonrası nörojenezi kolaylaştırabilecek aday genlerin gen ekspresyon profilini analiz ederek DBS tarafından tetiklenen hücresel olayları incelemek için deneysel bir yaklaşımı tanımlamaktadır.

Ön Talamusun Çekirdek Derin Beyin Stimülasyon sonra Sıçan Hippocampus Gen İfade Değişim Analizi

MicroRNA'lar beyinde çok önemli roller oynar ve nöro-dejenerasyonu modellemek için potansiyel hedeflerdir. Bununla birlikte, miRNA'nın kısa uzunluğu ve beyin dokusunun erişilememesi nedeniyle miRNA seviyelerini bozmak zordur. Bu video, farelerde bir nöropeptit kullanarak antagomir tasarımı ve beyne özgü uygulama için bir yöntem sunmaktadır.

MiRNA Beyin Özgül demonte için Stereotaktik Injection Basit Alternatif

Mevcut protokol, maddeleri internal karotis arter yoluyla doğrudan beyne etkili bir şekilde ileten bir fare mikrocerrahi infüzyon tekniğini tanımlamaktadır.

CNS içine Hedeflenen Madde Teslimat için Fare Mikrocerrahi İnfüzyon Tekniği yoluyla İç Karotis Arter

Bu protokol, ex vivo beyin dilimlerinde optogenetik stimülasyonlar kullanarak uzak beyin bölgelerinden gelen uzun menzilli girdilerin hücre tipi spesifik fonksiyonel bağlantısını belirlemek için bir dizi yöntemi açıklamaktadır.

Fare Beyin Dilimlerinde Uzun Menzilli Girdilerin Optogenetik Stimülasyonu için Vivo İntraserebral Stereotaksik Enjeksiyonlarda

Bu protokol, odaklanmış ultrason kan beyin bariyeri (BBB) açılması, ortaya çıkan gen ekspresyonunun değerlendirilmesi ve histolojik testlerle kemogenetik reseptörlerin nöromodülasyon aktivitesinin ölçülmesi yoluyla gen iletimi için gerekli adımları tanımlar.

Beyin Yapılarını Hedeflemek ve Kemogenetik Nöromodülasyonu Değerlendirmek için Odaklanmış Ultrason Kaynaklı Kan-Beyin Bariyeri Açılması

Primat serebral organoidlerinin elektroporasyonu, primat (pato) fizyolojik neokorteks gelişimine yakın bir model sistemde farklı progenitör tiplerine ve nöronlara geçici genetik modifikasyonları tanıtmak için kesin ve etkili bir yaklaşım sağlar. Bu, nörogelişimsel ve evrimsel süreçlerin incelenmesine izin verir ve hastalık modellemesi için de uygulanabilir.

Genetik Modifikasyon için Primat Serebral Organoidlerinin Hedefe Yönelik Mikroenjeksiyonu ve Elektroporasyonu

Öğrenin, 50 µm lümenli cam kapiler iğneler kullanarak derin beyin yapılarına ilaç, viral vektör veya hücre nakli için hassas mikroenjeksiyon tekniğini. Bu yöntem beyin hasarını en aza indirir ve hedefe yönelik teslimat sağlar.

İlaçlar, Viral Vektörler, veya Hücre Transplantasyon teslimi için Microinjections Derin Beyin Yapıları Hedefleme

Daha fazla video keşfet