Name: İskelet kas-içi hayati Mikroskopi in vivo Mikro sirkülasyon Ölçümü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-05-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Öğrenin in vivo mikroskopi ile mikrosirkülasyon ölçümü yöntemini. Canlı hayvan kaslarında kapiller düzeyde kan akışını görüntüleyin ve uzun süreli detaylı gözlem yapın.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz kasların in vivo gözlem onun tavsiye JW Lichtman teşekkür ederim.

RBC membran boyanması <ol><li> Fare kırmızı kan hücreleri, heparin ile aynı fare suşu düzeltildi. </li><li> Fare RBC PKH26 boya (Kırmızı floresan hücre ilintileyici kiti, Sigma, ABD 551/567 nm) ile boyandı. </li><li> RBC PBS ile yıkandı ve oda sıcaklığında 5 dakika boyunca PKH26 boya 2μM çözüm ile inkübe edildi. Tepki plazma ekleyerek (ısı 65 ° C önceden 1 saat süreyle inaktive) ve 1 dakika inkübe tarafından durduruldu. </li><li> Lekeli RBC PBS ile 5 kez yıkandı. </li></ol> Fare Hazırlık <ol><li> Bu çalışmada üç ila altı aylık bir erkek C57BL/10 fareler kullanıldı. Biz pentobarbital intraperitoneal enjeksiyon (50mg/kgBW) tarafından anestezi farelerde. </li><li> Fare, sonra 20-Gage polietilen tüp ile entübe mekanik ventilasyon ve 37 ° ısınmış ° C sıcaklık sensörü ve geri besleme sıcaklığı kontrol sistemi bağlı bir Kapton sac ısıtıcı. </li><li> Boyun ventral tarafta traş oldu. Sağ ve sol sternomastoid kasları maruz bırakıldı. Kasları bir paslanmaz çelik sahibi tarafından desteklenen ve steril Krebs Ringer solüsyonu ile superfused. </li></ol> Enjeksiyon <ol><li> Vitray eritrositlerde 37 ° C, Krebs Zil ile seyreltilmiş ısındı. Lekeli RBC (hematokrit% 12) 50ul penil ven fare enjekte edildi. </li></ol> İskelet Kaslar in vivo Mikroskobik Gözlem Biz modifikasyonu 1 ile Jeff W. Lichtman &#39;yöntemi takip etti: <ol><li> Hayvanlar Nikon Eclipse 800 mikroskop el yapımı demir sahne üstünde bir ısıtma yastığı yerleştirildi. Su daldırma objektif lens canlı epi-floresan gözlem için kullanılmıştır. Biz Mercury lamba floresan ışığı altında damar PKH26 lekeli RBC akan içinde gözlemledik. Biz onların eritrositlerde akış yönleri ve mimarileri, birincil arteriyollerin, ikincil arteriyoller, kılcal damarlar ve damarlar belirledi. </li><li> Gerçek zamanlı video hızı (saniyede 30 kare), düşük yoğunluklu sinyal yakalamak için yoğun bir SİT Kamera (Photonics, C2400, Japonya) ve video frame grabber kuruldu. Görüntüler video dosyalarını DVD kaydedildi. </li></ol> Kas Uyarım <ol><li> Periferik Sinir Stimulator (Innervator 252, Fisher &amp; Paykel Healthcare, Yeni Zelanda) bir elektrik sinyali kullanılarak oluşturulan ve kas yüzeyi kaplı paslanmaz prob ile teslim edildi. Proksimal kas parçası üzerinde eksi bir sonda yerleştirildi ve bir artı ucu kasının distal parçası yerleştirildi. Tetanoz uyarılara 5 saniye süreyle 50 Hz hızında verildi. Elektrik uyaranlara doğrudan temas alanının çevresinde myofiber hasara neden olmadı. </li></ol> RBC akı analizi <ol><li> Frame grabber yazılım (Video Savant, ABD) aracılığıyla kaydedilmiş DVD video görüntüleri Video Savant görüntü dosyaları transfer edildi. Video görüntüleri, bireysel lekeli RBC görselleştirmek için ayarlanan hız incelendi. RBC akı dakikada odaklanmış bir birincil arteriyol üzerinden uçtu RBC, sayma ile ölçüldü. </li></ol>

<ol><li>Lichtman, J. W., Magrassi, L., Purves, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+neuromuscular+junctions+over+periods+of+several+months+in+living+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Visualization of neuromuscular junctions over periods of several months in living mice.</a> J Neurosci. 7, 1215-1222 (1987).</li>
</ol>

Hayvan deneyleri ile ilgili tüm işlemler, Massachusetts Genel Hastanesi Araştırma Hayvan Bakım Alt Komitesi tarafından gözden geçirilmeli ve onaylanmalıdır.

Önemli Teknik Özellikleri noktalar şunlardır: (1) gözlem için hayvanın fizyolojik durumu (havalandırma perfusative çözüm, vücut ısısı, pH), (2) enjeksiyon hacmi lekeli RBC, ve (3) koşulları bakım (en uygun lens seçimi, floresan). Potansiyel gelecekteki uygulamalar şunlardır: (a) pharmacophysiological ve / veya moleküler biyolojik müdahaleler ile kombinasyonu, (b) arterio / arteriolo-skleroz ve neovaskülarizasyon uzun vadeli bir gözlem.

<table><tbody><tr><td>PKH26 boyası </td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>551/567 nm; Kırmızı floresan hücre bağlayıcı kit</td></tr><tr><td>C57BL/10 fareler </td><td>Hayvan</td><td></td><td></td><td>Üç ila altı aylık erkekler</td></tr><tr><td>pentobarbital </td><td></td><td></td><td></td><td>anestezik, 50mg/kgBW, i.p.</td></tr></tbody></table>

İskelet kas-içi hayati mikroskopi in vivo mikro sirkülasyon Ölçümü

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

AMAÇ: Düzenleyici faktörleri ve in vivo mikrosirkülasyon detaylı fizyolojisi kalmıştır tam görüntüleme icat eden pek çok farklı modaliteleri sonra açıkladı. Kan akımının birçok makroskopik parametreler akış hızı, kan akış hızı ve kırmızı kan hücre (RBC) değişiklikler yansıtırken akı mikroskobik gözlemler doğrusal bir ilişki tutmaz. RBC hız ve RBC akı, eritrosit akı ve plazma akışı hacmi arasında ve mikroskobik gözlemler, mikrosirkulasyonu yönetmelikte daha ayrıntılı çalışmalar gereksinimi için bilimsel bir temeli periferik dokularda akışını düzenleme mekansal ve zamansal heterojenliğin tutarsızlık raporları vardır intravital mikroskopi. Yöntem: Biz in vivo fare sternomastoid kasların mikroskobik gözlem Jeff Lichtman yöntemi değiştirildi. Fareler anestezi, havalandırılmış ve mikroskobik gözlem PKH26L-floresan etiketli eritrositlerde enjekte. SONUÇ &amp; SONUÇLAR: floresan etiketli eritrositlerde algılanır ve çok geniş bir alan mikroskobu ile ayırt edilirler. RBC akı elektrik stimülasyonu bağlı artış ile uyarılmış kas kasılması. RBC hızı ve kapiller yoğunluğu da dahil olmak üzere diğer parametreleri Niceleme mümkün. Fare cerrahi, lekeli eritrosit enjeksiyonu, mikroskobik gözlem ve elektrik stimülasyonu iyi tolere edilir. Bizim yöntem, nispeten daha az invazif ve uzun vadeli gözlemler için uygundur olduğunu düşündüren herhangi bir kas veya kan damarı hasar gözlenmiştir.

Mikrodolaşımında gözlem için yeni bir çok yönlü bir yöntem sunulmuştur. Bu uzun vadeli bir gözlem için uygun olduğu düşünülen ve pharmacophysiological veya moleküler biyolojik müdahaleler ile birlikte.

İskelet kas-içi hayati Mikroskopi in vivo Mikro sirkülasyon Ölçümü

ARKA PLAN: İn vivo mikrosirkülasyonun düzenleyici faktörleri ve detaylı fizyolojisi, birçok farklı ... modalitesi uygulanmasına rağmen henüz tam olarak açıklığa kavuşmamıştır.

Merhaba, ben Aki, Harvard Tıp Okulu, Massachusetts Genel Hastanesi'nde araştırma görevlisiyim. Bu video günlüğünde, yeni bir in vivo mikroskop yöntemini göstereceğim. Bu teknikle, mikro sekresyonda kantitatif kan akışını ölçebiliriz.Deneyimizin amacı, in vivo mikro salgının sürekli ölçümü için bir sistem kurmaktır. Bu projeyi, canlı hayvanlardaki kılcal damarlar ve kasların ön bölgelerindeki kan akışını mikroskop altında görselleştirmek için tasarladık; kan ultrasonu veya oksijen tansiyonu gibi geleneksel in vivo iyon ölçüm yöntemlerinin aksine, bizim yöntemimiz kan akışının birden fazla parametresinin, yani eritrosit akışının veya akış hızının ve plazma akışının ölçülmesine olanak sağlayacaktır. Bu parametrelerin ölçülmesi, mikro sirkülasyondaki değişikliklerin daha ayrıntılı bir şekilde ortaya çıkarılmasını sağlayacaktır.Ardından yöntemimiz, canlı kas dokularında fizyolojik stimülasyona yanıt olarak gelişen kan akışı değişikliklerini tespit etmek için uygulanır. Yöntemimiz, konvansiyonel in vivo mikroskobiden daha basit ve daha az invaziv olduğundan, kaslara doğrudan erişim sağlanabilir; böylece fare kaslarına elektriksel fizyolojik stimülasyon uygulayabilir ve kan akışının kas k

in-vivo-micro-circulation-measurement-skeletal-muscle-intra-vital

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Intravital mikroskopi pial mikrosirkülasyon zamansal ve mekansal hemodinamik ve inflamatuar olayları takip etmek.

Kapalı Kranial Pencere kullanarak Fare Beyin Mikrosirkülasyon intravital Mikroskopi

Endotelyal endotel / glycocalyx yüzey tabakası ideal intravital mikroskobu kullanılarak incelenmiştir. Intravital mikroskop teknik gibi akciğer gibi hareketli bir organ zordur. Biz eş zamanlı aydınlık ve floresan mikroskop serbestçe-hareket eden endotel yüzey tabakasının kalınlığını belirlemede nasıl kullanılabileceğini...

Fare Pulmoner Endotelyal Yüzey Katman in vivo ölçümü olarak

Bu yazıda, dinamik kontrastlı floresan videomikroskopi kullanarak in vivo tümör mikrodamarlar analiz etmek için bir yöntem mevcut. İki sayısal parametreler elde edilmiştir: işlevsel tümörün damarlanma yansıtan kılcal yoğunluk ve endotel duvarın bir sızıntının yansıtma indeksi sızıntı.

Flüoresans Konfokal videomikroskopi kullanılarak tümör Angiogenesis İn vivo

Fare M. Cremaster'ın mikro intravital mikroskopi eşsiz ve çevresel kemik iliği kök hücre göçü analizi için in vivo model yanı sıra standart sunmaktadır.

Periferik Kök Hücre Göç Analizi Fare Cremaster Muscle Mikrosirkülasyon Intravital Mikroskopi

Bu makale, görüntü elde etme ve analiz için özel bir metodoloji ile birlikte intravital mikroskopi görüntüleme kullanılarak fare karaciğer damar sisteminin tek tek kan damarları içindeki kan akış hızının dinamik ölçümü ve miktarının belirlenmesi için ayrıntılı bir yöntem hakkında ayrıntılı bir yöntem hakkında rapor vermektedir.

Aşağıdaki Karaciğer intravital Mikroskopi Görüntüleme<em&gt; Leishmania</em&gt; Enfeksiyon: Karaciğer Hemodinami Üzerine Bir Değerlendirme

Bu yöntem, deneysel olarak indüklenen miyokard iskemisi olan farelerde kardiyak morfolojiyi, fonksiyonu, perfüzyonu, metabolizmayı ve iyotlu kontrast madde ile canlılığı değerlendirmek için Kuantum Mikro Bilgisayarlı Tomografi (MikroBT) kullanımını ana hatlarıyla belirtir. Teknik, insan kalbi hastalığının çeşitli hayvan modellerinin tahribatsız, yüksek verimli uzunlamasına in vivo görüntülenmesi için uygulanabilir.

Miyokard Yapı, Fonksiyon Vivo Kantitatif Değerlendirilmesi yılında Perfüzyon ve Canlılık Kardiyak Mikro-bilgisayarlı Tomografi ile

İnsülin kaynaklı vazodilatasyon kas perfüzyon düzenleyen ve mikrovasküler artırır kan ve doku interstitium arasında yüzey alanı (mikrovasküler işe alım) çözünen değişimi için kullanılabilir. Kombine intravital mikroskobu ve kontrast-artırılmış Ultrasonografi sunulan aynı anda insülin'ın eylem daha büyük gemiler ve mikro değerlendirmek için içinde vivo.

Intravital mikroskobu ve kontrast-artırılmış Ultrasonografi fare Hindlimb, insülin kaynaklı vazodilatasyon ve kas perfüzyon çalışmaya kombine

Videomicroscopy sistemleri izole yağ dokusu arteriyoller fizyolojik ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak fonksiyonel özelliklerini incelemek için kullanılır. Bu teknik obez insanlarda farklı yağ dokusu etki alanlarındaki mikrovasküler fenotipleri incelemek için kullanılabilir.

İnsan yağ dokusu mikrovasküler işlevini kullanarak Videomicroscopy değerlendirilmesi

Burada, reaktif hiperemi, nörovasküler kaplin ve kas iskelet oksidatif kapasite tek bir klinik veya laboratuvar ziyaret değerlendirmek için yakın kızılötesi Spektroskopi kullanarak basit, non-invaziv bir yaklaşım açıklar.

Kas iskelet nörovasküler kaplin, oksidatif kapasite ve mikrovasküler işlevi 'One Stop Shop' yakın kızılötesi spektroskopi ile

Bu protokol, anestezi uygulanan domuzlarda ortak peroneal sinirin elektriksel stimülasyonu yoluyla elde edilen in vivo tork verilerinin değerlendirilmesi ve yorumlanması ile ilgili kısa deneysel ayrıntıları açıklamaktadır.

İn Vivo Domuzdan Hindlimb Dorsiflexor İzometrik Tork Ölçümü

İntravital floresan mikroskopi, lökosit-endotel etkileşimlerini ve kılcal perfüzyonu gerçek zamanlı olarak incelemek için kullanılabilir. Bu protokol, vakumla stabilize edilmiş bir akciğer görüntüleme sistemi kullanarak pulmoner mikrosirkülasyondaki bu parametreleri görüntüleme ve ölçme yöntemlerini açıklar.

Vakumla Stabilize Edilmiş Bir Görüntüleme Sistemi Kullanılarak Deneysel Akut Akciğer Hasarında Pulmoner Mikrosirkülasyonun İntravital Geniş Alan Floresan Mikroskopisi

Öğrenin in vivo mikroskopi ile mikrosirkülasyon ölçümü yöntemini. Canlı hayvan kaslarında kapiller düzeyde kan akışını görüntüleyin ve uzun süreli detaylı gözlem yapın.

İskelet kas-içi hayati Mikroskopi in vivo Mikro sirkülasyon Ölçümü

Daha fazla video keşfet