Name: Enterik Sinir Sistemi Alpha-sinüklein İçermelerin bir sonda ve Görüntü Analizi kullanarak Rotenone Oral İdaresi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-26T17:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: Keşfedin, farelerde oral gavaj yoluyla rotenon uygulayarak enterik sinir sisteminde alpha-sinüklein birikimini analiz etme yöntemini. Bu teknik Parkinson hastalığı nörotoksisite araştırmaları için değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

- Pedro Barrie de la Maza Vakfı bu çalışmaları destekledi.

1) Rotenone intragastrik İdaresi <ol><li> Hayvan tartılır. </li><li> Gerekli rotenone / araç çözüm toplam hacmi hesaplayın. Bu durumda hayvan ağırlığı gram başına 0,01 ml. </li><li> Önceden hesaplanmış rotenone çözüm hacmi (0.625 mg / ml rotenone,% 4 karboksimetilselüloz ve% 1.25 kloroform) veya araç çözüm (% 4 karboksimetilselüloz ve kloroform% 1.25) ile 1 ml şırınga şarj edin. Bu durumda, bir 5 mg / kg rotenone doz karşılık gelir. </li><li> Öte yandan ilk iki parmakları ile çekerek fare Pick up ve fare kuyruğu, tek elle tutarak, boyun cildi germek. </li><li> Başı iki parmak arasında sabit bir kez, elin avuç içi karşı yalın ve baş aşağı çevirin. Dördüncü ve beşinci parmakları kullanarak kuyruk sabitleyin. </li><li> Baş arkaya doğru tutmak, damak farenin ağzına açmak için tuşuna basın. Yavaşça ağzına gavaj tanıtmak. Sonda bir iğne ve düzenli bir iğne kullanmak önemlidir. Yavaş yavaş, yeteri kadar mide yönde sonda taşımak. Bu akciğerlerin elde malzeme önlemek olacaktır. </li><li> Emboli hafifçe basarak rotenone çözüm veya araç yönetin. Tamamlandığında, yavaş yavaş gavaj ayıklayın. </li><li> Bütün hayvanlar bir kafes yapılır kadar başka bir kafeste hayvan geri yerleştirin. </li></ol> 2) immün Prosedürleri <ol><li> Tedaviden sonra, fare Ketamin 100 mg / kg und Xylazin 10 mg / kg ip ve intrakardiyak PBS içinde% 4 Paraformaldehit ile perfüze kullanarak anestezi. </li><li> Cesaret sonra diseksiyon tarafından çıkarılan ve bir gecede% 15 sakaroz yerleştirilir. Ertesi gün, doku% 30 sakaroz aktarılır ve 4 gecede tekrar inkübe ° C </li><li> Daha sonra doku Doku tek yerleştirilir ve kullanana kadar -80 ° C derin dondurucuda saklanır. </li><li> Bir Kriyostat kullanarak, 20 mikron bağırsak kesitleri SuperFrost slaytlar aktarılır. </li><li> Anti-βIII-tubulin ve anti-alfa-sinüklein antikorları kullanarak prosedürleri Engelleme ve immün sonra daha önce açıklanan 9 olarak yapılmaktadır. </li></ol> 3) Alfa-sinüklein İçerme Görüntü Analizi Bu görüntüleri 'kökenli habersiz harici bir kişi analizi gerçekleştiren tavsiye edilir. Bu nedenle, veri kodlanmış olmalıdır. Görüntü analizi Fiji yazılımı kullanılarak yapıldı. <ol><li> Konfokal görüntü dosyasını açın. Daha sonra, bu her kanal bağımsız çalışmak mümkün olduğunu kanalları ayrıldı. </li><li> Bu kanalların kullanımı ve Analiz&gt; Ölçek ayarlama ve 1 Piksel boyutu ayarlamak seçmek için gidiş değildir kapatın. 0,13 (bu amacı ve kullanılan çözünürlük bağlıdır) olarak bilinen mesafeyi ayarlayın ve küresel tıklayın. Görüntünün boyutu artık mikron gösterilir. </li><li> Alfa-sinüklein kanalı seçin ve ganglion seçin, seçimi tüm dilimleri ganglion kapsadığından emin olun. </li><li> Basın Image&gt; görüntü çoğaltmak için çoğaltın. Ganglion seçildiğinde, sadece bir görüntü boyutu ganglion yinelenir. </li><li> Basın Düzenle&gt; Temizle dışında. Seçilen bölge dışından görüntü parçası siyah olacak. </li><li> Prosedürü ne kadar iyi gitti sonraki adımları belirlemek için görüntüyü yeniden çoğaltın. Gürültü arka plan oranı yüksek bir sinyal Görüntüler görüntü analizi için kullanılan olmamalıdır. </li><li> Image&gt; Adjust&gt; Threshold seçin ve sonra MaxEntropy seçin. Sonra prosedürü iyi gittiğini sağlamak için kırpılmış resim ve özgün bir dilimleri üzerinde taşıyın. Entropik eşik görüntü histogram ve bu eşiğin daha yüksek şiddetlerde siyah resmin üzerine beyaz görünecektir, yalnızca piksel dayalı bir yoğunluk sinyal seviyesi seçer. </li><li> Süreç seçin, ardından Pürüzsüz tıklayın. Bu adım pixeled kenarları düzgün kenarlara görüntüleri dönüştürür. </li><li> Süreç seçin, sonra İkili tıklatın ve İkili olun seçin. Görüntü üzerine siyah beyaz görüntü olarak görünecektir. </li><li> Çoğaltılmış görüntü sonraki adımı gerçekleştirmek için görüntü çoğaltın. </li><li> Analiz&gt; analiz parçacıklar üzerine tıklayın. Sonra Göster'i seçin: Anahatları ve özetleyin tıklayın. Varsayılan ayarları geri kalanı yapraklı olmalıdır. Bu fonksiyon, bir sinyal ve birlikte gruplandırılır toplam piksel sayısı tanır. Sinyal artı piksel gruplarının sayısı ve ortalama büyüklüğü piksel toplam yüzey rapor edilmiştir. </li><li> Karşılaştırın ve iyi ayarlayan büyük dilim seçin. Dilim işaretlenir. </li><li> Toplam alfa-sinüklein yüzey kapanımlar sayısı ve ortalama partikül boyutu ile veri tablosu kopyalayın. Verileri bir excel tablo ya da başka bir yerde açıklamalı içine yapıştırın. </li><li> Fiji dönün ve β-tubulin kanal önceden seçilmiş bir dilim bulmak ve seçmek. </li><li> Ganglion alanı seçin ve sonra ölçün seçin analiz. Başka bir tablo gösteren görünecektirganglion toplam yüzey. </li><li> Alfa-sinüklein ölçüm yakın excel sayfasına tablodan veri ayıklamak ya da başka bir yere kopyalayın. </li><li> Excel kullanarak, alfa-sinüklein ölçüm ganglion boyutuna göre normalize toplam alfa-sinüklein yüzey ve içerme numarası ganglion yüzey elde etmek için elde edilen farklı parametreler bölün. </li></ol> 4) Temsilcisi Sonuçlar Gavaj yönetim protokolü doğru yapıldığında sakıncaya hayvan için en az düzeydedir. Tedavi rotenone bu konsantrasyonu kullanılarak kan rotenone düzeyleri olmadan ENS üzerinde rotenone yerel bir etkisi sağlar ve kas veya beyin mitokondriyal Kompleksi inhibisyonu ben bile tedavi 1.5 ay sonra (bkz. Şekil 1). Görüntü analiz doğru yapılmazsa, alfa-sinüklein desen titiz bir analiz mümkün olmalıdır. Alfa-sinüklein (toplam yüzey), alfa-sinüklein hücre deseni (inklüzyon sayısı) ve alfa-sinüklein inklüzyon varlığı (dahil boyutu) (Şekil 2) toplam tutarı hakkında güvenilir veriler verir. <img src="/files/ftp_upload/2123/2123fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Rotenone Motor fonksiyon bozukluğu, kan ya da MSS rotenone algılama olmadan fareler davrandı. A, standart (50 ng / ml) ve 20, 10 ve 5 mg / kg tedavi edilen farelerin beyin örnekleri kromatogram B ve C, ölçümü, rotenone kan düzeyleri (B) ve MSS (C) B, kan seviyeleri 1 , tedaviden sonra 2 ve 3 saat. Fareler üç grup (n = 3) bölünmüş ve 2.5, 5, 10 ve 20 mg / kg rotenone ile tedavi edildi (n = 3), 300 mcL kan rotenone uygulamadan sonra 1, 2 ve 3 saat ayıklanır ve bir araya toplanmış oldu HPLC analizi ile günde 5 (n = 3), 10 (n = 3) ve 20 mg / kg (n = 1) rotenone, beyin ve beyin sapı 2 saat sonra 1 çıkarılan ve bir kez C, fareler bir hafta süreyle tedavi edildi son yönetim ve HPLC analizi D, mitokondriyal Kompleksi 1,5 ay tedavi edilen farelerde kas ve beyin örnekleri faaliyet için hazır. <img src="/files/ftp_upload/2123/2123fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Yerel idare rotenone ENS ganglionlarda gliozis ile alfa-sinüklein fosforilasyon, birikim ve toplama indükler (20 mikron ölçekli barlar). A, B, C, anti βIII-tubulin, alfa-sinüklein ve onikiparmak bağırsağı DAPI boyama (B) ve ileum ( A, C) bölümleri. 3 ay kontrolleri (A) kıyasla B Ok, 1.5 ay tedavi, enterik sinir sistemi ganglionlar içinde artan bir alfa-sinüklein noktalı desen kaynaklı . C Ok, büyük alfa-sinüklein kapanımlar (Ø&gt; 6 mm) 3 ay tedavi indüklenen oluşumu D anti-alfa-sinüklein, Thioflavine G ve DAPI kullanarak immünofloresan boyama. D Ok, tedavi edilen farelerin sadece 3 ay bu büyük alfa-sinüklein birikimleri agregasyon gösterdi. D, E, D'', görüntü analiz kantifikasyon adımları, E, bir ENS ganglion gösteren nicellendirmesinde kullanılan görüntü örnek gösteren alfa sinüklein karşı immunohistokimyasal farklı kapanımlar E ', görüntü analiz protokolü sonra elde edilen görüntü örneği E'', bazı orijinal kapanımlar (yeşil) ve protokolü (sarı hat) gerçekleştirdikten sonra elde edilen temsili arasındaki örtüşme. FG, gösterilen deney ölçümü AC otomatik segmentasyon ve entropi tabanlı eşikleme yöntemleri kullanılarak yapıldı. Tek yıldız, p &lt;0.05, ve çift-yıldız, p &lt;0.01 F, her sütun toplam alfa-sinüklein yüzey / ganglion yüzey temsil G, her sütun, alfa-sinüklein kapanımlar / ganglion yüzey toplam sayısını temsil eder . Tüm grafikler ortalama ± sem

<ol><li>Braak, H., de Vos, R. A., Bohl, J., Del Tredici, K., K, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gastric+alpha-synuclein+immunoreactive+inclusions+in+Meissner%27s+and+Auerbach%27s+plexuses+in+cases+staged+for+Parkinson%27s+disease-related+brain+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Gastric alpha-synuclein immunoreactive inclusions in Meissner's and Auerbach's plexuses in cases staged for Parkinson's disease-related brain pathology.</a> Neurosci Lett. 396, 67-72 (2006).</li>
<li>Wakabayashi, K., Takahashi, H., Ohama, E., Ikuta, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease%3A+an+immunohistochemical+study+of+Lewy+body-containing+neurons+in+the+enteric+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease: an immunohistochemical study of Lewy body-containing neurons in the enteric nervous system.</a> Acta Neuropathol. 79, 581-583 (1990).</li>
<li>Wakabayashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Restricted+occurrence+of+Lewy+bodies+in+the+dorsal+vagal+nucleus+in+a+patient+with+late-onset+parkinsonism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Restricted occurrence of Lewy bodies in the dorsal vagal nucleus in a patient with late-onset parkinsonism.</a> J Neurol Sci. 165, 188-191 (1999).</li>
<li>Braak, H., Sastre, M., Bohl, J. R., de Vos, R. A., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease%3A+lesions+in+dorsal+horn+layer+I%2C+involvement+of+parasympathetic+and+sympathetic+pre-+and+postganglionic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease: lesions in dorsal horn layer I, involvement of parasympathetic and sympathetic pre- and postganglionic neurons.</a> Acta Neuropathol. 113, 421-429 (2007).</li>
<li>Braak, H., Ghebremedhin, E., Rub, U., Bratzke, H., Del Tredici, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stages+in+the+development+of+Parkinson%27s+disease-related+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Stages in the development of Parkinson's disease-related pathology.</a> Cell Tissue Res. 318, 121-134 (2004).</li>
<li>Gorell, J. M., Johnson, C. C., Rybicki, B. A., Peterson, E. L., Richardson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+risk+of+Parkinson%27s+disease+with+exposure+to+pesticides%2C+farming%2C+well+water%2C+and+rural+living%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">The risk of Parkinson's disease with exposure to pesticides, farming, well water, and rural living.</a> Neurology. 50, 1346-1350 (1998).</li>
<li>Semchuk, K. M., Love, E. J., Lee, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parkinson%27s+disease+and+exposure+to+agricultural+work+and+pesticide+chemicals%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Parkinson's disease and exposure to agricultural work and pesticide chemicals.</a> Neurology. 42, 1328-1335 (1992).</li>
<li>Butterfield, P. G., Valanis, B. G., Spencer, P. S., Lindeman, C. A., Nutt, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environmental+antecedents+of+young-onset+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Environmental antecedents of young-onset Parkinson's disease.</a> Neurology. 43, 1150-1158 (1993).</li>
<li>Pan-Montojo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progression+of+Parkinson%27s+disease+pathology+is+reproduced+by+intragastric+administration+of+rotenone+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Progression of Parkinson's disease pathology is reproduced by intragastric administration of rotenone in mice.</a> PLoS One. 5, e8762-e8762 (2010).</li>
<li>Sherer, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+toxicity+in+rotenone+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mechanism of toxicity in rotenone models of Parkinson's disease.</a> J Neurosci. 23, 10756-10764 (2003).</li>
<li>Bove, J., Prou, D., Perier, C., Przedborski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toxin-induced+models+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Toxin-induced models of Parkinson's disease.</a> NeuroRx. 2, 484-494 (2005).</li>
<li>Inden, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurodegeneration+of+mouse+nigrostriatal+dopaminergic+system+induced+by+repeated+oral+administration+of+rotenone+is+prevented+by+4-phenylbutyrate%2C+a+chemical+chaperone%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Neurodegeneration of mouse nigrostriatal dopaminergic system induced by repeated oral administration of rotenone is prevented by 4-phenylbutyrate, a chemical chaperone.</a> J Neurochem. 101, 1491-1504 (2007).</li>
</ol>

Francisco Pan-Montojo bu hayvan modeli (Application sayısı PCT / EP 2009/005688) için bekleyen bir patent başvurusu vardır.

Intragastrik yönetiminin daha önce 12 yapılmıştır . Ancak,% 0.5 karboksimetilselüloz sodyum tuzu (CMSS) tek başına Inden Kullanıcı el yazmasına göre, rotenone verildi çözülmüş. Rotenone yüksek bir liphophylic madde. Bu nedenle, rotenone yalnız% 0.5 CMSS içinde çözünmüş olamaz ve eğer bunu çöktürmek olacaktır. Kloroform yağış kaçınarak eşit olarak dağıtılmış bir rotenone süspansiyon oluşturur. Ayrıca, yüksek konsantrasyonlarda CMSS pestisit nedeniyle, uygulanan çözümün nihai hacmi de önemli ölçüde azalmıştır. ...

<table><tbody><tr><td>Rotenon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td>Almanya</td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>3313.1</td><td>Almanya</td></tr><tr><td>Karboksimetilselüloz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5678</td><td>Almanya</td></tr><tr><td>Gavage kanülü 1,2 mm x 60 mm</td><td>Unimed</td><td></td><td>İsviçre</td></tr><tr><td>LSM 510</td><td>Carl Zeiss, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FIJI</td><td>http://pacific.mpi-cbg.de</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

enterik sinir sistemi alpha-sinüklein İçermelerin bir sonda ve görüntü analizi kullanarak rotenone oral İdaresi

Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System

Parkinson hastalığında (PH) olan hastalarda, ilgili patoloji, diğerlerinin yanı sıra enterik sinir sistemi (ENS) 1,2, koku ampul (OB), vagus (DMV) 3 dorsal motor çekirdeği, intermediolateral içeren bir karakteristik bir yol izler omurilik 4 ve substantia nigra çekirdeği, hastalığın 4,5 nöropatolojik evreleme için bir temel sağlamaktadır. ENS ve OB en çok maruz kalan sinir yapıları ve ilk etkilenecek olanlar. İlginçtir, PD pestisit maruziyetinin 6-8 ile ilgili olmuştur. Burada ayrıntılı olarak, önceki çalışmada 9 kullanılan iki yöntem gösteriyor . ENS üzerinde yerel olarak hareket rotenone etkilerini analiz etmek için, biz, bir yıl eski C57/BL6 fareler bir sonda kullanarak rotenone yönetilmektedir. Rotenone güçlü mitokondriyal Kompleksi Ben 10 inhibe yaygın olarak kullanılan pestisit. Bu yüksek lipofilik ve kötü gastrointestinal sistem 11 emilir. Bizim sonuçlarımız, 5 mg / rotenone kg yönetimi mitokondriyal Kompleksi kas veya beyin aktivitesi inhibe etmediğini gösterdi. Böylece, bizim yönetim yöntemi rotenone kullanarak hepatoportal sistemi çapraz vermedi ve sadece ENS üzerinde hareket ediyordu düşündüren. Burada pestisitler ENS alfa-sinüklein birikimi pestisit etkilerini analiz etmek için kullanılan bir sonda ve görüntü analizi protokolü kullanarak yönetmek için bir yöntem. Ilk bölümünde istenen hassas konsantrasyonda pestisitler (rotenone) intragastrik yönetimi sağlayan bir yöntem gösterir. İkinci yöntem, bir görüntü analiz yazılımı kullanarak ENS alfa-sinüklein birikimi analiz etmek için bir yarı-otomatik görüntü analiz protokolünü gösterir.

Parkinson hastalığı, pestisitlere maruz kalma ile ilgili olmuştur. Burada bir gastrik tüp istenen konsantrasyon ve enterik sinir sistemi alfa-sinüklein birikimi etkilerini analiz etmek için bir yöntem kullanarak pestisitler sağlamak için bir yöntem gösteriyor.

Enterik Sinir Sistemi Alpha-sinüklein İçermelerin bir sonda ve Görüntü Analizi kullanarak Rotenone Oral İdaresi

Parkinson hastalığı (PH) olan hastalarda, ilişkili patoloji, diğerlerinin yanı sıra enterik sinir sistemini (ESS) içeren karakteristik bir seyir izler 1,2, ...

Motor ve konuşma fonksiyon bozuklukları da dahil olmak üzere Parkinson hastalığının semptomları, beyindeki dopamin salgılayan hücrelerin aktivitesinin azalmasından kaynaklanır. Enterik sinir sistemi ve olfaktör bulb, en çok maruz kalan sinir yapılarıdır ve ilk etkilenen bölgelerdir. Parkinson hastalığı, pestisit maruziyeti ile ilişkilendirilmiştir.Pestisitlerin enterik sinir sistemi üzerindeki etkilerini analiz etmek amacıyla, farelere oral gavaj yoluyla roone pestisiti uygulanır. Ardından farelere, beyin ve enterik sinir sistemini sabitlemek için %4 paraformaldehit ile intrakardiyak perfüzyon yapılır. Dokular çıkarılır, hazırlanır ve PD ile ilişkili proteinler için immünboyama işlemine tabi tutulur.Konfokal mikroskopi ile elde edilen Beta three tubulin ve alpha synuclein görüntüleri, pestisite maruz kalan hayvanlarda enterik sinir sistemi nöronlarının içinde alpha synuclein birikimini göstermektedir. Bu tekniğin rotenonun sistemik uygulaması gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, bu teknik kullanıldığında rotenonun etkisinin enterik sinir sistemi ile sınırlandırılmasının sağlanmasıdır. Bu yöntem, Parkinson hastalığının etiyolojisi ve ilerlemesinin altında yatan mekanizmalar g

oral-administration-rotenone-using-gavage-image-analysis-alpha

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, nöroinflamasyonu indüklemek için alfa-sinüklein fibrillerinin bir fareye enjeksiyonunu göstermektedir. Fibriller, mutasyona uğramış alfa-sinüklein proteinlerini eksprese eden transgenik bir fareye intraperitoneal olarak enjekte edilir. Merkezi sinir sistemine ulaştıktan sonra, fibriller nöronlara girer ve mutasyona uğramış proteinlerin toplanmasını indükler. Agregalar komşu nöronlara, mikroglialara ve astrositlere yayılır. Agregaların tanınması, nöroinflamasyonu indüklemek için...

Alfa-sinüklein Fibrillerinin Enjeksiyonu ile Farelerde Nöroinflamasyonun İndüksiyonu

Yeni bir kantitatif yaklaşım sunan bir ELISA açıklanmaktadır. Spesifik olarak, bir transgenik fare modeli (M83) içindeki (M83) sinoleinopatide, Ser129 fosforile αS formu veya proteinin C-terminal kısmına karşı çeşitli antikorlar kullanarak hastalıkla ilişkili α-sineulini (αSD) tespit etmektedir.

İnsan A53T aşırı eksprese eden transjenik farelerin beyninde Geliştirilmiş ELISA ile Hastalık ile ilişkili α-sinüklein tespiti α-sinüklein Mutasyona uğramış

Bu el yazması, viral vektör aracılı yerel gen iletiminin, merkezi sinir sistemindeki transgenleri ifade etmek için nasıl çekici bir yol sağladığını açıklamaktadır.  Protokol, Parkinson hastalığı için viral vektör tabanlı bir hayvan modeli geliştirmek için sıçanın substantia nigra'sında bir viral vektör enjeksiyonu gerçekleştirmek için tüm önemli adımları özetlemektedir.

Bir rekombinant adeno-ilişkili viral vektörün stereotaktik enjeksiyon yoluyla Parkinson Hastalığı için bir alfa-sinüklein Bazlı Fare Modeli Geliştirme

(+/- M83: GFAP -Luc +/-) Tg periton ya da dil içine alfa-sinüklein fibrillerinin Çevresel enjeksiyon ailesel A53T mutasyon ve ateş böceği lusiferaz ile insan alfa-sinükleinin eksprese eden farelerden, nöro de dahil olmak üzere, nevropatlojinin uyarabilir bunların merkezi sinir sistemindeki.

Alfa-sinüklein fibrillerinin Çevresel Aşılama sonrası Tranjenik Farelerde Nöroinflamasyondan Biyoparlaklık Görüntüleme

Burada sıçan substantia nigra pars compacta dopaminerjik nöron sayısının yarı nicel belirlenmesi için otomatik bir yöntem sunuyoruz.

Otomatik Görüntü Analizi Kullanılarak Kemirgen Modellerinin Substantia Nigra'sında Dopaminerjik Nöron Yoğunluğunun Yarı Nicel Belirlenmesi

Bu yazıda, C. elegans'tadopaminerjik nöron dendrit morfolojislerindeki değişiklikleri tutarlı bir şekilde ölçmek için yedi puanlık bir puanlama sisteminin nasıl kullanılacağını sergiliyoruz. Bu sistem, nörodejeneratif bozuklukların genetik, kimyasal ve yaşa dayalı modellerini kullanan dopaminerjik nörodejenerasyon testlerinin analizleri için tasarlanmıştır.

Caenorhabditis elegans'ta Dopaminerjik Nöron Morfolojik Değişim ve Dejenerasyon Seviyelerinin Ölçülmesi

Bu çalışma, Parkinson hastalığının bu klinik öncesi modelinde nöroinflamasyonu, nörodejenerasyonu ve motor bozukluğu indüklemek için gereken vektör dozunu ve maruz kalma süresini analiz etmektedir. İnsan α-sinükleini kodlayan bu vektörler, Parkinson hastalığı ile ilişkili sinüklein patolojisini özetlemek için substantia nigra'ya verilir.

İnsan α-Sinükleini Kodlayan Adeno İlişkili Viral Vektörler Tarafından İndüklenen Parkinson Hastalığı Fare Modelinin Analizi

Fare merkezi sinir sisteminin histolojik analizi için uygun bir yerçekimi beslemeli perfüzyon yöntemi sunulmaktadır. Fosforile α-sinükleinin immünofloresan tespiti, Parkinson hastalığının bir fare modelinde gösterilmiştir. Bu çalışma aynı zamanda transkardiyal perfüzyon, diseksiyon, doku dondurma/gömme ve dondurulmuş kesit adımlarını kapsamlı bir şekilde tanımlamaktadır.

Fare Merkezi Sinir Sisteminin Histolojik Analizi için Yerçekimi Beslemeli Transkardiyal Perfüzyon Yöntemi

Mevcut protokol, α-sinüklein agregatlarının intranazal uygulaması için bir yöntemi tanımlamaktadır. Bu yöntem, Parkinson hastalığında koku alma mukozasından koku soğancığına α-sinüklein yayılımı hakkında bilgi sağlar.

α-Sinüklein Agregatlarının İntranazal Uygulama Tekniği

Bu makalede ayrıntılı olarak utero serebral korteks ve farelerde E14.5 de hipokampus electroporate bir protokol tanımlamaktadır. Biz de bu bu iki beyin bölgelerinde dendrit ve dikenler incelemek için değerli bir yöntem olduğunu göstermektedir.

Kullanarak Fare Serebral Korteks ve Hippocampus Görselleştirme ve Dendritler ve Spine Genetik Manipülasyon<em&gt; Utero olarak</em&gt; Elektroporasyon

Keşfedin, farelerde oral gavaj yoluyla rotenon uygulayarak enterik sinir sisteminde alpha-sinüklein birikimini analiz etme yöntemini. Bu teknik Parkinson hastalığı nörotoksisite araştırmaları için değerli bilgiler sunar.

Enterik Sinir Sistemi Alpha-sinüklein İçermelerin bir sonda ve Görüntü Analizi kullanarak Rotenone Oral İdaresi

Daha fazla video keşfet