Name: Tüm Yaprak Görüntüleme kullanarak Bakteriyel Hücreler Live Stoma Tepki Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-02T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 3 s
Description: Keşfedin canlı bakterilere karşı stomatal yanıtları değerlendirme yöntemini; sağlam yapraklar ve propidyum iyot boyama kullanarak guard hücre hareketlerini gerçek zamanlı gözlemleyin. Bu teknik bitki-patojen etkileşimlerini doğal koşullarda incelemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüsü ve The University of Texas at Arlington MM fonları tarafından hibe destek verdi.

1. Büyüyen Bitkiler ve hazırlanması Bakteriler <ol><li> V: v büyüyen orta karışımı (Redi-toprak fiş ve fide karışımı Sun, Gro), ince vermikülit, perlit, bu yordamı başlamak için 01:01:01 v Arabidopsis tohumları eker . </li><li> Bir büyüme odası (22 ° C, 12 saat 100 mmol / mm 2 / sn günlük ışık ve 65 ±% 5 nem) ve gerektiği kadar su bitkileri yetiştirin. Bitkiler 4-6 hafta içinde tamamen genişletilmiş genç yaprakları önce civatalama zaman kullanıma hazır. </li><li> Deney başlamadan önce iki gün bakteri kültürü hazırlar. LB, orta (10 g / L Tripton, 5 g / L maya özü, 5 g / L NaCl, pH 7.0 ve% 1.5 agar) değiştirilmiş ve 28 az 24 saat süreyle inkübe ° C gliserol stok Streak Pseudomonas syringae Inokulum hazırlamak ve bakteriler alt-kültür sonra daha az öldürücü olur gliserol stokları her zaman olduğu gibi kültür plakaları başlatmak için taze kültür kullanın. </li><li> Plaka üzerinde büyüdü bakteri P. 10 ml sıvı kültürü başlatmak için kullanın syringae 50 ml Erlenmeyer balonuna. Gecede kültür 28 ° C'de 0.8 ile 1 arasında 600 nm dalga boyunda optik yoğunluk veya OD ulaşıncaya kadar kuvvetli sallayarak. </li><li> 600 OD ölçün ve 10 dakika 1360 xg'de santrifüj hücrelerin hasat. Distile su ile son OD 0.2, böylece hücreleri tekrar Bu OD 10 8 koloni oluşturan birim (CFU) / mL karşılık gelir. Hazır bakteri, yaprakları hazırlamak ve analiz gerçekleştirmek için devam edin. </li></ol> 2. Bakteriler Yaprak Boyama ve Kuluçka <ol><li> Yaprakları ilk 20 mcM propidium iyodür veya suya PI çözüm hazırlamak leke için. 10 ml çözelti, bir seferde 3 küçük yaprak leke için yeterli. </li><li> 3 genç, tam genişletilmiş yaprak büyüme odasından ve forseps detach ile bitkiler al. 5 dakika PI çözüm tüm yaprakları bırakın. Sonra yaprakları kaldırmak ve onları saf su ile kısa bir süre yıkayın. </li><li> Sonraki yerde bir mikroskop lamı üzerine aşağı bakacak şekilde alt yüzeye sahip bir yaprak. Slayt yaprak düz bırakır, böylece orta damar içine keskin bir jilet hariç dört adet yaprak kesin. </li><li> Yaprakları ile bakteri inkübasyon için, slayt yaprak parçaları altında bakteriyel süspansiyon 300 mcL ekleyin. Yaprağın alt yüzeyi inokulum ile temas halinde olduğundan emin olun. </li><li> Bitkilerin büyümesi için kullanılan aynı çevre koşullarında örnekleri inkübe edin. Mikroskop altında yaprakları gözlemlemek zamanda yaprak parçaları, alt yüzeyi yukarı bakacak şekilde yeni bir slayt aktarın. Slaytlar montaj kapağı kayma olmadığını unutmayın. Aynı yaprak örneği inkübasyon sırasında birden çok kez görüntülenmiş olabilir ve bir süre ders, araştırma hedeflerine göre ayarlanmış olabilir. </li></ol> 3. Mikroskopi, Ölçme ve Veri Analizi <ol><li> Burada konfokal mikroskop bir lazer tarama (EKK 510 Meta, Carl Zeiss Inc.) Yaprakları incelemek için kullanılır. PI (eksitasyon 453 nm, emisyon 543 ve 620 nm) floresan algılamak için yaprakların alt yüzeyi dikkat edin. </li><li> Aynı yaprak örnekleri kullanarak zamanla stoma görüntüleri yakalayabilir. Stoma diyafram genişliğini ölçmek için kaydedin. </li><li> LSM görüntü tarayıcısı kullanarak her zaman bir noktada her bir tedavi için en az 60 stoma stoma diyafram genişliği ölçün. </li><li> Stoma diyafram genişliği için ortalama ve standart hata hesaplayın. Sonuçlarının istatistiksel anlamlılık 2 kuyruklu bilge Öğrenci, eşleştirilmiş t-testi kullanılarak hesaplandı. </li></ol> 4. Bakteriler Kuluçka Stoma Tepki Temsilcisi Görüntüler <ol><li> İşte, parlak bir alan görünümü (Şekil 1) konfokal mikroskop lazer tarama altında bir Arabidopsis yaprak yüzeyi tipik bir mikroskobik görüntü (20x amacı kullanarak) . </li><li> Propidium iyodür lekeleri veri toplama (Şekil 2) hasarsız hücrelerinin tanımlanması için izin vermeye ek olarak bekçi hücreleri görünürlüğünü artırarak canlı hücreleri hücre duvarı. Stoma gözenek açıklıkları bir dizi, tamamen kapalı stoma geniş açık stoma, bu mikrograflar görülebilir. </li><li> Tamamı kapalı stoma bekçi hücrelerin şekil (Şekil 3) tarafından tespit edilir. Diyafram genişliği 0 mm olarak kabul edilir. </li><li> Açık stoma (Şekil 4) için gösterilen diyafram genişliği stoma gözenek geniş alan boyunca çizilen düz bir çizgi ile ölçülür. </li><li> Bunlar bu stoma testin tipik deneysel sonuçlar Arabidopis yaprakları Pseudomonas syringae üç farklı suşları ile karanlıkta inkübe edildi. Sadece bakteri Pst DC3000 koyu-kapalı stoma, bakteri suşunun başına rastgele seçilen 60 stoma (Şekil 5) diyafram genişliği ile ölçülen açmak mümkün. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2185/2185fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Arabidopsis bir yaprak yüzeyi Mikrografik konfokal mikroskobu (LSCM) 20x objektif kullanarak lazer tarama altında yaprak yüzeyi görüş alanı. Propidium iyodür boyama (Şekil 2) yardımıyla floresan görünümüne göre stoma diyafram gibi belirgin olmadığını unutmayın. <img src="/files/ftp_upload/2185/2185fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Propidium iyodür lekeli Arabidopsis yaprak yüzeyi Mikrografik konfokal mikroskobu (LSCM) 20x objektif kullanarak lazer tarama altında yaprak yüzeyi görüş alanı. Stoma gözenek açılması bir dizi dikkat edin. Sarı oklar stoma tamamen kapatmak için işaret ve yeşil okları geniş açık stoma işaret edilir. <img src="/files/ftp_upload/2185/2185fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Tamamen şekil ve bekçi hücreleri arasındaki açıklık tespit yakın stoma diyafram genişliği 0 mm olarak kabul edilir. <img src="/files/ftp_upload/2185/2185fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4. Mikron diyafram genişliği gösteren Açık stoma. Ölçümler stoma gözenek geniş alan boyunca çizilen düz bir çizgi dayalı LSCM tarayıcı kullanarak alındı. <img src="/files/ftp_upload/2185/2185fig5.jpg" alt="Şekil 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 5"> Şekil 5. Arabidopsis yaprakları üç Pseudomonas syringae pv domates suşları ile inkübe Stoma diyafram: DC3118, DB29 ve DC3000 Tesisleri deneme süresi boyunca karanlıkta tutulmuştur. Sonuçlar ortalama olarak verilmiştir (n = 50-70) ± standart hata. Iki kuyruklu Student t-testi ile istatistiksel anlamlılık tespit edildi. Deney benzer sonuçlar veren üç kez tekrarlandı.

<ol><li>Brooks, D. M., Hernandez-Guzman, G., Kloek, A. P., Alarcon-Chaidez, F., Sreedharan, A., Rangaswamy, V., Penaloza-Vazquez, A., Bender, C. L., Kunkel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+a+well-defined+series+of+coronatine+biosynthetic+mutants+of+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato+DC3000%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant-Microbe+Interact%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of a well-defined series of coronatine biosynthetic mutants of Pseudomonas syringae pv. tomato DC3000.</a> Mol Plant-Microbe Interact. 17, 162-174 (2004).</li>
<li>Katagiri, F., Thilmony, R., He, S. Y. The Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae interaction. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKatagiri%2C+F+%22The+Arabidopsis+Book%22">The Arabidopsis Book</a>. Somerville, C. R., Meyerowitz, E. M. , American Society of Plant Biologists. Rockville, MD. (2002).</li>
<li>Ma, S. W., Morris, V. L., Cuppels, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+DNA+region+required+for+production+of+the+phytotoxin+coronatine+by+Pseudomonas+syringae+pv.+tomato%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant-Microbe+Interact%22%5BJournal%5D)">Characterization of a DNA region required for production of the phytotoxin coronatine by Pseudomonas syringae pv. tomato.</a> Mol Plant-Microbe Interact. 4, 69-74 (1991).</li>
<li>Melotto, M., Underwood, W., Koczan, J., Nomura, K., He, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plant+stomata+function+in+innate+immunity+against+bacterial+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Plant stomata function in innate immunity against bacterial invasion.</a> Cell. 126, 969-980 (2006).</li>
</ol>

Biz, farklı tedavilere stoma yanıt kolay bir değerlendirme için izin sağlam yaprak dokusunda stoma diyafram ölçmek için bir yalındır prosedürü sundu. Model sistem Arabidopsis / Pseudomonas syringae kullanarak sonuçlarını sundu olmasına rağmen, bozulmamış yaprak stoma tahlil potansiyel olarak herhangi bir bitki-bakteri kombinasyonu ile yapılabilir . Protokolü, diğer bitkiler ve bakteriyel patojenler büyüme gereksinimlerini kolayca sığacak şekilde modifiye edilebilir. Genel ilke ve prosedür aynı kalır. Buna ek olarak, bu yöntem mikroplar yaşamak için bekçi hücreleri sadece fonksiyonel çıktı okumak isteyen araştırmacılar için yararlı olabilir, ama aynı zamanda, yaprak doğal ortamını korumak koşullar altında diğer uyaranların ve kimyasal ajanlar olabilir. Tüm yaprak kalınlığı ve engebeli topografyası nedeniyle görüntü için zor olabilir. Bu sorun, yaprak orta damar düz durduğundan slayt kaldırma ve konfokal mikroskopi kullanılarak kontrol altına alınabilir. Ancak, diğer tip floresan mikroskop yaprak yüzeyinin yüksek çözünürlüklü görüntüleri elde etmek için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Propidium iyodür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4864</td><td></td></tr><tr><td>Tripton</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1421-1</td><td></td></tr><tr><td>Maya Ekstraktı</td><td>Difco Laboratories</td><td>0127-01-7</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>VWR international</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Bio Express</td><td>J637-2500G</td><td></td></tr><tr><td>Bitki büyüme kabini</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Çalkalamalı inkübatör</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lazer taramalı konfokal mikroskop</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

tüm yaprak görüntüleme kullanarak bakteriyel hücreler live stoma tepki değerlendirilmesi

Assessing Stomatal Response to Live Bacterial Cells using Whole Leaf Imaging

Stoma bitki iç ve çevre arasındaki gaz değişimi için sorumlu olan bitki epidermisin doğal açıklıklar. Bu ışık yoğunluğu, karbon dioksit konsantrasyonu, ve bağıl nem (RH) de dahil olmak üzere bir dizi dış etkenlere yanıt olarak stoma gözenek kapatmak için bekçi hücreleri, bir çifti tarafından oluşturulur. Stoma gözenek da ana güzergah yaprakların içine patojen giriş, hastalık gelişimi için önemli bir adım. Son çalışmalar, gözenek kapatılması Arabidopsis bitkilerin bakteriyel hastalık gelişimi en aza indirilmesinde etkili olduğunu açıkladı; bitki doğal bağışıklık ayrılmaz bir parçasıdır . Önceden, canlı bakteriler (Melotto et al 2006), stoma tepki değerlendirmek için epidermal peeling; ancak bitki epidermal peeling ve bakteri hücreleri için olumlu çevre koşulları muhafaza zorlu olmuştur . Yaprak epidermisin bekçi hücreleri elektrofizyolojik deneyler için MES tamponu (10 mM KCl, 25 mM MES-KOH, pH 6.15) ile canlı ve sağlıklı olarak muhafaza edilebilir. Ancak, bu tampon bakteri süspansiyonu elde etmek için uygun değildir. Öte yandan, bakteri hücrelerinin epidermal peeling kez uzun süre korumak için uygun değildir su canlı tutulabilir. 4 saat içinde hava kuru maruz kalan kabuğu, su üzerinde epidermal kabuğu yüzer, hücreleri deney yapmak için zamanlama sınırlayıcı. Bekçi hücreleri belirli bir uyaranın etkisini değerlendirmek için ideal bir yöntem stoma fizyolojisi ve tesisi mümkün olduğunca doğal çevreye minimal girişim sunmalıdır. Bu nedenle, yaprak yaralama ve manipülasyon kolayca tekrarlanabilir ve güvenilir bir stoma tahlil sağlamayı amaçlayan önemli ölçüde minimize edildiği bakterilerin yaşaması için stoma yanıtı değerlendirmek için yeni bir yöntem geliştirdi. Protokol propidium iyodür (PI), bakteri süspansiyonu ile yaprak boyama inkübasyon, lazer tarama konfokal mikroskop altında yaprakları gözlem ve sağlam yaprak boyama dayanmaktadır. Son olarak, bu yöntem bitkiler patojenler tarafından saldırıya altında doğal koşulları yakından taklit koşulları kullanarak uzun süre boyunca aynı canlı yaprak örnek gözlem için izin verir.

Biz canlı bakteri stoma yanıt erişmek için basit ve tekrarlanabilir bir protokol geliştirmiştir. Bu yöntem daha önce bildirdiği epidermal peeling kullanımı ile karşılaştırıldığında yaprak yaralama ve manipülasyona en aza indirir.

Tüm Yaprak Görüntüleme kullanarak Bakteriyel Hücreler Live Stoma Tepki Değerlendirilmesi

Stomalar, bitki içi ile çevre arasındaki gaz değişiminden sorumlu olan, bitki epidermisindeki doğal açıklıklardır. Bir çift ... tarafından oluşturulurlar.

Bu prosedürde, canlı bakteri hücrelerine yanıt olarak bekçi hücre hareketini değerlendirmek için yaprak görüntüleme yöntemi kullanılır. İlk olarak, bakteriler gliserol stoktan kültüre edilir ve bir inokülüm hazırlanır. Ardından, genç ve sağlıklı yapraklar toplanır ve propidyum iyodür ile boyanır.Boyanmış yapraklar kesilir ve yaprak parçaları bir bakteri süspansiyonunun üzerinde inkübe edilir. Son olarak, yaprak yüzeyi mikroskop altında incelenir ve stomatal açıklıklar ölçülebilir. Floresan mikroskobu kullanılarak elde edilen sonuçlar, bakterilere yanıt olarak stomatal açıklıktaki değişimleri göstermektedir.Bu yöntemin epidermal soyulma gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, bakterilerle temas eden yaprağın sağlam olması ve böylece bakterilerin yapraklara nüfuz etmesi için doğal koşulların taklit edilmesidir. Bu prosedüre başlamak için, Arabidopsis tohumlarını; yetiştirme ortamı, vermikülit ve perlitin 1:1:1 hacimsel oranındaki karışımına ekin. Bitkileri bir büyüme odasında yetiştirin ve gerektiğinde sulayın.Bitkiler, sapa kalkma öncesinde genç ve tamamen genişlemiş yapraklara sahip oldukları dört ila altı hafta içinde kullanıma hazır hale gelir. Deneye başlamadan iki gün önce bakteri kültür çizgisi hazırlayın. Pseudomonas ringe'yi gliserol stoktan modifiye LB besiyerine ekim yapın ve 28 °C'de 24 saat boyunca inkübe edin.İnokülumu hazırlamak için taze kültür kullanın ve kültür plaklarını her zaman gliserol stoklarından başlatın. Bakteriler alt kültürleme sonrası daha az virülan hale geldiğinden, 10 mililitrelik bir Pseudomonas singe sıvı kültürü başlatmak için plak üzerinde büyümüş bakterileri kullanın. Kültürü, 600 nanometredeki optik yoğunluk veya od değeri 0,8 ile 1 arasına ulaşana kadar 50 mililitrelik bir erlenmeyer flaskında, 28 °C'de kuvvetli çalkalamayla gece boyunca inkübe edin.600 nm'de OD değerini ölçün ve hücreleri 1.360 ×g'de 10 dakika boyunca santrifüj ederek toplayın. Hücreleri, final OD değeri 0.2 olacak şekilde distile su içinde yeniden süspande edin. Bu OD değeri, mililitre başına 10⁸ koloni oluşturan birime karşılık gelir.Bakteriler hazır olduğunda, yaprakları hazırlama aşamasına geçin ve yaprakları boyamak için deneyi gerçekleştirin. İlk olarak, suda 20 µM propidyum iyodür veya PI çözeltisi hazırlayın. 10 mL çözelti, aynı anda üç küçük yaprağı boyamak için yeterlidir.Bitkileri büyüme odasından çıkarın ve penset yardımıyla üç adet genç, tam gelişmiş yaprağı koparın. Yaprakların tamamını beş dakika boyunca PI çözeltisine batırın. Ardından yaprakları çıkarın ve distile su ile kısaca durulayın.Ardından, bir yaprağı alt yüzeyi aşağı gelecek şekilde bir mikroskop lamı üzerine yerleştirin. Bakterilerin yapraklarla inkübe edilebilmesi için yaprağın lam üzerinde düz durmasını sağlamak amacıyla, orta damarı hariç tutarak yaprağı keskin bir jiletle dört parçaya bölün. Lam üzerindeki yaprak parçalarının altına 300 µL bakteriyel süspansiyon ekleyin; yaprağın alt yüzeyinin inokulumla temas ettiğinden emin olun.Numuneleri, bitkilerin büyütülmesinde kullanılan çevresel koşulların aynısında inkübe edin. Yaprakları mikroskop altında gözlemleme zamanı geldiğinde, yaprak parçalarını alt yüzeyleri yukarı bakacak şekilde yeni bir lama aktarın. Lamların hazırlanması sırasında lamel kullanılmadığını unutmayın.Aynı yaprak örneği inkübasyon sırasında birden fazla kez görüntülenebilir ve araştırma amaçlarına göre bir zaman serisi oluşturulabilir. Burada, yaprakları incelemek, aynı yaprak örneklerini kullanarak PI floresansını tespit etmek için yaprakların alt yüzeyini gözlemlemek ve stomaların zaman içindeki görüntülerini yakalamak için bir lazer taramalı konfokal mikroskop kullanılır. Stomatal açıklık genişliğini ölçmek için görüntüleri kaydedin.Her zaman noktasında, her işlem için en az 60 stomanın açıklık genişliğini ölçün. LSM görüntü tarayıcısını kullanarak, stomaların açıklık genişliği için ortalama ve standart hatayı hesaplayın. Sonuçların istatistiksel anlamlılığı, çift kuyruklu eşleştirilmiş ikili Student's t-testi kullanılarak hesaplanabilir.Bu, lazer taramalı konfokal mikroskop altında bir arabidopsis yaprak yüzeyinin tipik bir mikroskobik görüntüsüdür. Brightfield görünümünde, propidyum iyodür canlı hücrelerin hücre duvarını boyayarak, hasarsız hücrelerin tanımlanmasına olanak sağlamasının yanı sıra bekçi hücrelerin görünürlüğünü artırır. Bu mikrograflarda, tamamen kapalı stomalardan genişçe açık stomalara kadar çeşitli stomatik açıklıklar görülebilir.Tamamen kapalı stomalar, bekçi hücrelerinin şekli ile tanımlanır. Açık stomalar için açıklık genişliği sıfır mikrometre olarak kabul edilir. Gösterilen açıklık genişliği, stoma gözeneklerinin en geniş alanı boyunca çizilen düz bir çizgi kullanılarak ölçülür.Bunlar, canlı yaprak inokülasyon analizinin tipik deneysel sonuçlarıdır. Arabidopsis yaprakları, üç farklı Pseudomonas şubesi ile karanlıkta inkübe edilmiş; her bakteri şubesi başına rastgele seçilen 60 stomadan ölçülen açıklık genişliğine göre, yalnızca P-S-T-D-C 3000 bakterisi karanlık stomaları açabilmiştir. Bu teknik, bitki-bakteri etkileşimleri alanındaki araştırmacıların, bitki türlerinde patojenlere karşı erken yanıt mekanizmalarını keşfetmelerinin yolunu açmıştır.

assessing-stomatal-response-to-live-bacterial-cells-using-whole-leaf

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Biz perfluorodecalin infiltratif montaj aracı olarak kullanımı açıklanmaktadır. Bu görüntüleme derinliğini artırmak için basit bir yöntem.

Görüntüleme için Basit Bir Yöntem Arabidopsis Infiltratif Görüntüleme Orta Perfluorodecalin kullanarak bırakır.

Kaynak: Lee, H. ve diğerleri, Enfeksiyon Sırasında Bakterilerden Verilen Efektörleri Görselleştirmek için Bölünmüş Yeşil Floresan Protein Sistemi. J. Vis. Uzm. (2018)Bu video, konfokal mikroskopi ile birlikte bölünmüş süper klasör yeşil floresan proteini (sfGFP) tamamlama kullanılarak bitki hücrelerinde bakteriyel enfeksiyonu ve efektör protein dağıtımını izlemek için bir yöntem göstermektedir. Yaklaşım, efektör translokasyonunun konakçı hücre sitozolüne hassas bir şekilde görselleştirilmesini...

Bitki Hücrelerinde Bakteriyel Enfeksiyon ve Efektör Protein Dağıtımının İzlenmesi

Patojen büyümesinin niceliksel olarak belirlenmesi, çeşitli Arabidopsis thaliana (bundan böyle Arabidopsis olarak anılacaktır) bağışıklık tepkilerini karakterize etmek için güçlü bir araçtır. Burada açıklanan yöntem, Pseudomonas syringae pv'yi ölçmek için optimize edilmiş bir şırınga infiltrasyon testi sunar. maculicola ES4326 yetişkin Arabidopsis yapraklarında büyüme.

Kullanarak Bitki Savunma Yanıtları ince Karakterizasyonu için Bakteriyel Yaprak Sızma Deneyi<em&gt; Arabidopsis thaliana-Pseudomonas syringae</em&gt; Pathosystem

Kloroplastların yüzeyinden uzanan stroma dolu tübüller olan kloroplast stromullerinin dinamiklerini araştırmak için protokoller açıklanmıştır.

Floresan Mikroskopi ile Stromule Frekansı görselleştirme

Floresan canlı görüntüleme Arabidopsis thaliana yaprakların uzun bir zaman aralığı içinde gerçekleştirmek için basit ve çok yönlü bir yöntemi bildirin. Biz bir transgenik Arabidopsis bitki bitki bağışıklık yanıtı kronolojik zamanmekansal anlayış kazanıyor için bir örnek olarak bir bağışıklık ile ilgili düzenleyici denetimi altındaki bir floresan muhabir gen ifade kullanın.

Arabidopsis montaj için çok yönlü bir yöntem Intravital zaman hata görüntüleme için yaprakları

Burada bir hidroponik bitki büyüme tahlil türler varlığı ölçmek ve bitki kökleri ilk kolonizasyon ve farklı büyüme ortamları içine transfer edildikten sonra bakterilerin uzamsal dağılımı görselleştirmek için açıklanmaktadır.

Yüzen hidroponik sistemde Arabidopsis thaliana kökleri üzerinde bakteriyel kolonizasyon ve bakım izleme

Bu protokol, bitki apoplastı içinde yetiştirilen Pseudomonas şırıngası popülasyonları üzerinde tek hücreli gen ekspresyon analizine izin veren bir yöntemi açıklamaktadır.

Bitki Dokusu İçindeki Pseudomonas syringae Genlerinin Ekspresyonunun Tek Hücreli Analizi

Bir plazma membran reseptörü kinazının membran kaçakçılığı olaylarını incelemek için burada yaygın olarak kullanılan birkaç yöntem tanıtılmaktadır. Bu yazıda bitki materyali hazırlama, farmakolojik tedavi ve konfokal görüntüleme kurulumu dahil olmak üzere ayrıntılı protokoller açıklanmaktadır.

Stoma Soy Hücrelerinde Membran Kaçakçılığı Olaylarını İncelemek için Görüntü Tabanlı Yöntemler

Burada, Arabidopsis thaliana'da bakteri istilasına karşı stoma yanıtlarının doğrudan gözlemlenmesi ve otomatik ölçümü için basit bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, cihaz tarafından yakalanan yaprak görüntüleri için tasarlanmış bir görüntü analizi boru hattı ile birlikte taşınabilir bir stoma görüntüleme cihazından yararlanır.

Pseudomonas syringae pv'ye Stoma Yanıtlarının Doğrudan Gözlemi ve Otomatik Ölçümü. domates DC3000 içinde Arabidopsis thaliana

Bu protokol, aynı örnekte bitki iyon sızıntısı, peroksidaz aktivitesi ve kallos üretimini değerlendirmek için yüksek verimli bir yaklaşımı tanımlar.

Mikrobiyal İkincil Metabolitlere Yaprak Yanıtlarının Yüksek Verimlilikli Bir Formatla Değerlendirilmesi

Bu protokol, epidermal peeling, temizleme teknikleri ve yapay zeka destekli görüntü analizi kullanarak iki farklı türde stoma ve epidermal özellikleri değerlendirmek için karşılaştırmalı bir yöntem sunmaktadır. Amaç, tarımsal uygulamalar ve geniş bitki araştırmaları için stoma fonksiyonunun altında yatan hücresel yapıların yüksek verimlilik, tekrarlanabilir niceliklendirilmesini sağlamaktır.

Stomatal ve Epidermal Özelliklerin Peeling, Clearing ve AI Tabanlı Görüntü Analizi Kullanılarak Karakterize Edilmesi

Keşfedin canlı bakterilere karşı stomatal yanıtları değerlendirme yöntemini; sağlam yapraklar ve propidyum iyot boyama kullanarak guard hücre hareketlerini gerçek zamanlı gözlemleyin. Bu teknik bitki-patojen etkileşimlerini doğal koşullarda incelemeyi sağlar.

Tüm Yaprak Görüntüleme kullanarak Bakteriyel Hücreler Live Stoma Tepki Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet