Name: Mitokondri Yüksek Coupled Sıçan Kalp hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-23T17:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 28 s
Description: Öğrenin, sıçan kalp mitokondrisini yüksek kalitede izole etme yöntemini. Diferansiyel santrifüjasyon ve sıcaklık kontrolü ile biyokimyasal analizler için fonksiyonel mitokondri elde edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz yazarların tanıtımı için bu yordamı mitokondriyal biyoloji ve birçok yararlı açılımlar ve öneriler alanına Prof A. Vinogradov ve Dr. Vera Grivennikova teşekkür ederim. Yazarlar video hazırlanması için Queens Üniversitesi medya ofisi Bayan Amanda McKintock minnettar.

Giriş Sıçan kalp Mitokondri hücresel metabolizma geçmiş ve güncel çalışmalar için en yaygın hazırlıkları biridir. Onlar vahşi tip veya knock-dışarı hayvanların büyük miktarda hızlı ve güvenilir bir şekilde elde edilebilir. Genel prosedür tripsin, bölme ve diferansiyel santrifüj doku sindirim oluşur. (Şekil 1) kalp de dahil olmak üzere, çeşitli dokulardan mitokondri izolasyonu sırasında tutulması gereken bazı koşullar vardır. <ul><li> Doku, elde edilen mitokondri verim doğrudan etkilediği için iyice kıyılmış vardır. Kalp dokusu küçük kavisli makas ile kıyma iyi olur ve bir doku değirmeni, yaklaşık 1.0 mm çapında çıkış delik çapı ile sarımsak basın mevcut değilse, bir Latapie doku değirmeni kullanımı ile takip edilebilir. </li><li> Bu çözümler her adımda sıcaklığını korumak için gereklidir. Bu nedenle soğuk oda ve tüm enstrümanlar bütün prosedür yürütülecek ve çözümleri, önceden hazırlanmış ve soğutulması gerekiyor. Sıcaklık koşullarında tutulması değilse hazırlık istikrarlı çeşitli özelliklerini kaybetmiş olabilir. Mitokondrial yapısı, aktif taşıma çalışmaları önemlidir, özellikle de izin verilmez (örneğin santrifüj sırasında) süspansiyon overfreezing donmaya karşı çok hassastır. </li><li> Önemli bir parametre prosedürün zaman uzunluğu, izolasyon mümkün olduğunca çabuk ve elde edilen hazırlık hemen kullanılmak üzere olmalıdır. Bu nedenle, cerrahi aletler, çözümleri ve cihazlar, önceden hazırlıklı olmamız gerekiyor. </li></ul> Malzeme ve araçlar Enstrümanlar <ol><li> Düz işletim makas, sivri </li><li> Eğri makas </li><li> Forseps </li><li> Petri kabı </li><li> Küçük huni + parça naylon filtre (prewashed) </li><li> 6 bardak 50 ml </li><li> İki manyetik karıştırıcı ve iki buz banyoları </li><li> Bir büyük buz banyosunda </li><li> 2 küçük manyetik çubuklar </li><li> Pelet kazıma için spatula </li><li> Santrifüj tüpleri </li><li> Latapie doku basın (sarımsak basın ile ikame edilebilir) </li><li> 20ml teflon cam homogenisers ve 1-2ml </li><li> Atık beher </li><li> Protein tayini için son mitokondriyal süspansiyon ve örnekler için Eppendorf tüpleri </li><li> Buz banyosu </li></ol> Çözümler (2 sıçanlarda başına hesaplanan): <ol><li> Yıkama tamponu: 0.3 M Sakkaroz, 10 mM HEPES (pH = 7.2), 0.2 mM EDTA (1000 ml) </li><li> İzolasyon tamponu: 0.3 M Sakkaroz, 10 mM Hepes (pH = 7.4), 0.2 mM EDTA, 1 mg / ml BSA (Sigma A6003) (Çamaşır tampon hazırlanmış 100ml). Sığır serum albümin daha az pahalı yağ asit analogları ile ikame edilebilir. Aynı tampon ya da izotonik varyasyonlar, tampon Resuspending olarak kullanılır. </li><li> Tripsin (Sigma T8003) çözüm: 2.5mg/ml 1mm HCl (0.5 ml) </li><li> Soya fasulyesi tripsin inhibitörü (Sigma T9128) İzolasyon tamponu 6.5 mg/10 ml </li></ol> Protokol Prosedürün genel şeması Şekil gösterilir. 1. Kalpler soğutmalı ve tampon, ventriküler doku eksize kıyılmış ve tripsin ile fotolitik tedavi sırasında homojenize Çamaşır yıkanmalıdır. Süspansiyon, düşük hızda santrifüj edilir ve elde edilen süpernatant mitokondri toplamak için yüksek hızda tekrar santrifüj edilir. Resuspending tampon planlanan deneyler bağlı diğer herhangi bir izotonik solusyon tarafından değiştirilebilir. Hayvanlar uygun olarak İngiltere ile sonlandırıldı "Animals (Scientific Procedures) Yasası." dekapitasyon takip servikal dislokasyon. Hayvan dekapitasyon hemen sonra kalp ayıklamak için gereklidir, bu nedenle hayvan fesih ve kalp çıkarma arasında herhangi bir gecikme olduğunu. Mitokondri karaciğer paralel izolasyon bekleniyor sıçanlar deney öncesinde gece aç olmalıdır. <ol><li> Yıkama Tampon 40 ml içeren üç bardak hazırlayın. Onları bir sonraki adıma geçmeden önce 3 ila 5 dakika süreyle buz-tuz banyosu soğutun. Overfreeze ve buz kristalleri bulutları hemen sonra görünmeye başlar hemen kullanmak için değil emin olun. </li><li> Dekapite sıçan toraks açın ve kalp ayıklayın. Küçük kesiler olun ve hemen ardından ilk beher buz gibi bir çözüm kalp transfer. Kalp, kan kaldırmak ve ikinci behere koyun sıkın. Her kalp için bu işlemi tekrarlayın. </li><li> Kuru filtre kağıdı kalpleri. Tüm yağ, pıhtılaşmış kan, auricles ve fasya ve havuz ventriküler doku çıkarın. </li><li> Parçacıkların büyüklüğü 1-2 mm kadar yaklaşık 5 dakika buz üzerinde Petri kabı küçük kavisli makas ile toplanmış doku Kıyma. </li><li> Doku basın içine kıyılmış doku koyun ve passüzerinden. Önemli bir miktarda malzeme basın basın duvarları ve alttan tüm kalp dokusu toplamak kalır ki farkında olun. </li><li> 50 ml Yıkama Tampon behere aktarın ve karıştırın. Sonra bir naylon filtre aracılığıyla süspansiyon filtre. Çamaşır Tampon filtre 3 kez kıyılmış doku yıkayın ve süzüntü atın. </li><li> Yıkama Tampon 20 ml içine yıkanmış doku transferi ve manyetik karıştırıcı buz banyosu içine koyun. 0,5 ml tripsin sürekli karıştırma altında çözüm ekleyin ve Sayacı başlatmak. Başka bir manyetik karıştırıcı, buz banyosu ve ikinci bir 50 ml beher hazırlayın. </li><li> 4. dakikada kısaca süspansiyon dağıtmak için yukarı ve aşağı birkaç vuruş ile gevşek takılmış küçük bir cam-teflon Homojenizatörler (10-15ml) bölümünü kullanarak süspansiyon kısmı homojenleştirme. Süspansiyon homojenleştirme sonra ikinci bir behere aktarın. 9. dakikada, toplam süspansiyon iki kez homojenleştirme gerçekleştirmek o kadar aynı işlemi tekrarlayın. Inkübasyon 15 dakika sonra, 10 ml tripsin inhibitörü içeren tampon izole ekleyin ve 1 dakika boyunca inkübe edin. </li><li> Naylon filtre ile tekrar süspansiyon ve süzülen kaydetmek. Çamaşır Buffer 15-20 ml 1 dakika için bir filtre ve homojenize sol partikül fraksiyonu toplayın. </li><li> Homojenat süzüntü ve 600g az 15 dakika süreyle santrifüj ile birleştirin. </li><li> Meydana gelen supernatant, yeni bir santrifüj tüpü içine dikkatlice filtre. Pelet kirletil ve 8500g az 15 dakika tekrar santrifüj. </li><li> Süpernatantı yüksek hızda santrifüj sonra atmak ve 1 ml tampon atarak kabarık beyaz dış kenarı katmanı pelet 2-3 kez yıkayın. Spatula ile pelet kadar Break ama altta kırmızı nokta eritrositlerin önlemek. Kan hücreleri Loos geldiyseniz, homojenleştirme önce süspansiyon kırmızı bit kaldırın. </li><li> Nazik pipetleme, küçük bir Homojenizatörler veya alternatif pelletini tekrar. Daha Isolationbuffer süspansiyon seyreltilir ve 8500g az 15 dakika tekrar santrifüj. </li><li> Süpernatantı atın Buffer (seçim izotonik tampon) Resuspending, pelet tekrar süspansiyon haline getirin ve tekrar santrifüj. </li><li> Çıkan kahverengi pelet yıkanmış sağlam mitokondri içerir. Seçtiğiniz izotonik tampon çok küçük bir hacim içinde pelletini tekrar. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2202/2202fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 mitokondri sıçan kalp izolasyonu adım prosedürü adım gösteren Programı. Üst kısmı, Aşamaları 1-9: doku bozulması, tripsin tedavi homojenleştirme ve alt kısmı, aşamaları 10-15: diferansiyel santrifüj.

<ol><li>Jacobus, W. E., Saks, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Creatine+kinase+of+heart+mitochondria%3A+changes+in+its+kinetic+properties+induced+by+coupling+to+oxidative+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Biochem.+Biophys%22%5BJournal%5D)">Creatine kinase of heart mitochondria: changes in its kinetic properties induced by coupling to oxidative phosphorylation.</a> Arch. Biochem. Biophys. 219, 167-178 (1982).</li>
<li>Gostimskaya, I. S., Grivennikova, V. G., Zharova, T. V., Bakeeva, L. E., Vinogradov, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+assay+of+the+intramitochondrial+enzymes%3A+use+of+alamethicin+for+permeabilization+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">In situ assay of the intramitochondrial enzymes: use of alamethicin for permeabilization of mitochondria.</a> Anal. Biochem. 313, 46-52 (2003).</li>
</ol>

Kaplin yüksek derecede sağlam mitokondri izolasyonu için Ayrıntılı hızlı protokol açıklanmıştır. Elde edilen preparat hücresel biyoenerjetik, proteomik çalışmaları veya mitokondriyal DNA analizi ve lipid içeriği fonksiyonel veya yapısal araştırma için kullanılabilir. Iyonları ve metabolik ara aktif taşıma Biyofiziksel çalışmalar da yapılabilir. Submitochondrial parçacıklar, dış membran veya oksidatif fosforilasyon arındırır ayrı bileşenden izole etmek için daha mitokondriyal hazırlık süreci mümkündür. Açıklanan yöntem Jacobus ve Saks 1 izolasyon standart bir protokoldür bir değişiklik. Hazırlanan mitokondri beklenen verim başına mitokondriyal protein ve kalp böyle bir hazırlık malat / glutamat arasında değişmektedir solunum kontrol oranı yaklaşık olarak 10-15 mg 0.12 etrafında mol O 2 xmin -1 xmg protein Devlet IV solunum ile 8 ila 12 23 -1 ° C 0,25 M sukroz, 10 mM KCl, 0.2 mM EDTA, 150 mcM başlatma Devlet III solunum ADP (tam deneysel koşullar ve eklemeler için, bkz. ref ile 5 mM potasyum fosfat (pH 8.0) oluşan orta 2). Özel dikkat izolasyon prosedürü başlamadan önce birkaç teknik detayları verilmelidir. Temiz polikarbonat veya polipropilen santrifüj tüplerine kullanılması çok önemlidir, bu nedenle tüpler temiz bir fırça ve sıcak su, deterjan Ancak tedavinin en az tutulmalıdır ile iyice yıkanmalıdır. Ayrıca, soğuk oda izolasyonu bir gün önce gerekli tüm cam ve aletleri toplamak için daha iyidir. Izolasyon sırasında bardak için matara tamponlar aktarırken, а özel dikkat çözümler buzlu su damlaları önlemek için verilen olmalıdır. Dokuların işleme zaman kalp çıkarma hayvanın baş kesme ve soğutma doku arasında kısa süreli bir gecikme bile kısmen Kuplajsız mitokondri neden, çünkü mümkün olan en kısa sürede yapılacaktır gerektiği vurgulanmalıdır. Hızlı soğutma ve kaldırılır kalpleri iyice yıkama standart hazırlama, hemoglobin ve eritrosit NADase ücretsiz elde etmek için esastır. Tripsin, doku duyarlılık homojenleştirme sırasında kesme kuvveti artırmak için bağlayıcı proteinlerin bozulması için kullanılır. Proteaz dokusunun uzun süreli maruz kalma, düşük kaliteli mitokondri sonuçları kaçınılmalıdır. Yüksek hızda santrüfüj sonra santrifüj tüplerine duvarlar duvarlar üzerinde biriken yağ malzemenin herhangi bir mevduat kaldırmak için kağıt mendil ile silinmelidir. Son tabanda için depolama (150-200 ul kalp başına tampon) sırasında, mitokondriyal fonksiyonların kaybını en aza indirmek için son tampon düşük hacimli kullanmak daha iyidir. Kalsiyum katyonların ulaşım çalışmaları için herhangi bir şelat ajanları EGTA ücretsiz orta ile birkaç kez yıkanır ve izolasyon sonrası ilk saat içinde kullanılmalıdır, böylece mitokondri son hazırlık mevcut olmalıdır.

mitokondri yüksek coupled sıçan kalp hazırlanması

Preparation of Highly Coupled Rat Heart Mitochondria

Oksidatif fosforilasyon sürecinde hücresel ATP nesil mitokondri fonksiyonu yaygın olarak kabul edilmektedir. Geçtiğimiz yıllarda enerji üretimi daha mitokondri diğer fonksiyonları anlayışımızda önemli gelişmeler olmuştur. Bunlar, organelleri, memeli geliştirme sinyalizasyon ve hücre metabolizması ve hücre çoğalması arasındaki koordinasyonu katkıları yanı sıra yaşlanma gibi davranan, apoptozis rollerini içerir. Mitokondri tarafından modüle biyolojik süreçlerin anlayışımız sağlam dokulardan laboratuvar hayvanları mitokondri izolasyon ve taşıma için sağlam bir yöntem dayanmaktadır. Sıçan kalp Mitokondri knock-out hayvanlar üzerinde yapılan çalışmalar da dahil olmak üzere hücresel metabolizma geçmiş ve şimdiki çalışmaları için en yaygın hazırlıkları biridir. Burada bozulmamış bir yüksek derecesi ile kaplin mitokondri izolasyonu için ayrıntılı bir hızlı yöntemi açıklanmaktadır. Böyle bir hazırlık mitokondri rat kalp, fonksiyonel ve yapısal araştırma hücresel biyoenerjetik, mitokondriyal DNA, proteinler ve lipidler biyomoleküllerin, proteomik çalışmalar ve analizler taşınması için mükemmel bir nesnedir.

Biz а hücresel biyoenerjetik, biyofiziksel ölçümleri, proteomik veya mitokondriyal DNA ve lipidler analizi fonksiyonel veya yapısal çalışmalar mitokondri saf, çok birleştiğinde sıçan kalp izolasyonu için protokol açıklar.

Mitokondri Yüksek Coupled Sıçan Kalp hazırlanması

Mitokondrilerin, oksidatif fosforilasyon sürecinde hücresel ATP üretimindeki işlevi yaygın olarak kabul görmektedir. Geçtiğimiz on yıllar boyunca...

Ben Dr. Ska. Bugün size kırmızı kalp mitokondrilerinin nasıl izole edileceğini göstereceğim. Dokulardan mitokondri izolasyonundaki temel adımlar, öncelikle doku ve hücrelerin mekanik veya enzimatik işlemle parçalanmasıdır.İkinci olarak, kalıntıları, parçalanmış hücreleri ve çekirdekleri uzaklaştırmak için düşük hızda diferansiyel santrifüj uygulanır. Üçüncü olarak ise mitokondrileri toplamak için daha yüksek hızda santrifüj gerçekleştirilir. Enstrümanlar ve solüsyonlar önceden soğuk odada hazırlanmış ve saklanmıştır.İzolasyon sırasında birkaç koşula dikkat edilmelidir. Birincisi, mitokondri verimini doğrudan etkilediği için dokunun tamamen parçalanmasıdır. İkincisi, tüm adımlar boyunca sıcaklığın düşük tutulmasıdır; ancak özellikle santrifüjleme sırasında çözeltilerin aşırı donmamasına dikkat edilmelidir.Üçüncü olarak, işlem ne kadar hızlı yapılırsa, elde edilen mitokondrilerin kalitesi o kadar yüksek olur. Hayvanlar, Birleşik Krallık Hayvan Bilimsel Prosedür Yasası'na uygun olarak itlaf edilmiş ve sonraki tüm işlemler soğuk odada gerçekleştirilmiştir. İçerisinde 40 mils yıkama tamponu bulunan üç beher hazırlayın.Bir sonraki adıma geçmeden önce bunu buz banyosunda üç ila beş dakika boyunca soğutun. Aşırı dondurmamaya dikkat edin ve buz kristali bulutları hızla görünmeye başlar başlamaz hemen kullanın; başı kesilmiş farelerin toraksını açın ve kalbi çıkarın. Küçük insizyonlar yapın ve ardından kalbi hemen buz gibi soğuk solüsyona aktarın.İlk beherde, kanı çıkarmak için kalbi sıkın ve kalbi ikinci behere koyun. Bu işlemi her bir kalp için tekrarlayın. Hemoglobin, eritrosit ve adaslardan arındırılmış standart bir preparat elde etmek için çıkarılan kalplerin hızla soğutulması ve yıkanması esastır.Kalpleri filtre kağıdı üzerinde kurulayın. Tüm yağları, pıhtılaşmış kanları ve arterleri hızla temizleyin. Ardından ventrikül dokusunu çekip çıkarın.Ardından, dokuyu Petri kabı üzerinde küçük kavisli makaslarla kesin. Beş dakika boyunca, dokuyu MIT'ye yerleştirin. Bastırın ve geçirin. Doku preslemeden sonra, materyali 50 ml yıkama tamponu içeren behere aktarın ve karıştırın.Ardından süspansiyonu bir ada filtre üzerinden süzün. Filtre üzerindeki dokuyu yıkama tamponu ile üç kez yıkayın ve filtreyi atın. Yıkanmış dokuyu 20 mL yıkama tamponuna aktarın ve manyetik karıştırıcının üzerindeki buz banyosuna yerleştirin.Sürekli karıştırma altında çözeltiye damlalar ekleyin ve inkübasyonun dördüncü dakikasında zamanlayıcıyı başlatın. Küçük, gevşek takılmış cam Teflon homojenizatör kullanarak süspansiyon kısmını azar azar, bölüm bölüm kısa süreliğine homojenize edin. Homojenizasyondan sonra süspansiyonu ikinci bir karıştırıcı üzerindeki başka bir behere aktarın.Dokuzuncu dakikada prosedürü tekrarlayın; böylece ikinci homojenizasyondan sonra toplamda iki kez daha homojenizasyon yapmış olursunuz. İnkübasyonun 15. dakikasında, tripsin inhibitörü içeren 10 ml izole etme tamponu ekleyin ve bir dakika daha inkübe edin. Süspansiyonu tekrar bir naylon filtreden süzün. Ancak bu sefer filtratı saklayın, dokunun geri kalanını homojenizatöre aktarın ve homojenize edin.Homojenat ile filtratı santrifüj tüpünde bir dakika daha karıştırın. Tüplerin eşit şekilde dengelendiğinden emin olun ve 15 dakika boyunca düşük hızlı santrifüj işlemi uygulayın. 600 G hızda, elde edilen süpernatantı dikkatlice yeni bir santrifüj tüpüne filtreleyin.Pelet ile kontaminasyondan kaçınmaya çalışın ve 8,500 G'de 15 dakika boyunca tekrar santrifüjleyin. Yüksek hızlı santrifüjden sonra süpernatantı atın ve beyaz, tüylü dış kenar tabakasını uzaklaştırmaya çalışarak peleti bir tamponla durulayın. Bir mL izolasyon tamponu ekleyin. Tüpü yanlara doğru eğerek kalan tamponu uzaklaştırın.Pelleti, dipteki eritrositlerin oluşturduğu kırmızı noktaya değmemeye çalışarak ula ile parçalayın veya alternatif olarak pelleti küçük bir homojenizatör ya da nazikçe pipetleyerek süspande edin; ardından süspansiyonu daha fazla izolasyon tamponu ile seyrelterek 8,500 G'de 15 dakika boyunca tekrar santrifüjleyin. S süpernatanını atın. Pelleti Resus süspansiyon tamponu içinde süspande edin ve 8,500 G'de tekrar santrifüjleyin. Elde edilen kahverengi pellet, yıkanmış sağlam mitokondrileri içerir. Pelleti çok küçük bir hacimdeki resus süspansiyon tamponu içinde tekrar süspande edin.Kullandığınız hacim ne kadar düşük olursa, mitokondri preparatı o kadar stabil olacaktır. Genellikle kalp başına 200 µL tampon çözelti yeterlidir. Hazırlanan mitokondrilerden beklenen verim, kalp başına yaklaşık 10 ila 15 mg mitokondriyal proteindir.Ve bu tür bir preparatın kompleks bir substratları üzerindeki solunum kontrol oranı 8 ile 12 arasında olmalıdır. Hazırlama işleminizde başarılar dileriz.

preparation-of-highly-coupled-rat-heart-mitochondria

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu çalışmada, yetişkin sıçan kalp miyositler izole ve kültürü tipik bir şekilde tanımladı. Kollajenaz ve proteaz tek miyositler sindirimi ve izole etmek için kullanılır. Miyositler Çoğu deney gereksinimlerini karşılamak bu protokolü takip kültürü.

Yetişkin Sıçan Kalp miyositler İlköğretim Kültür

Mitokondri izole fare kalbinde mitokondriyal permeabilite geçiş gözenek açılması ölçümü için bir spektrofluorometrik protokolü sunulmuştur. Tahlil mitokondri Ca eşzamanlı ölçüm...

Mitokondri İzole Fare Heart Geçirgenliği Geçiş Gözenek Açma Multi-parametre ölçümü

Memeli Doku biyopsilerinden mitokondri hızlı izole edilmesi için bir yöntem tarif edilmektedir. Sıçan karaciğer, iskelet kası ya da preparat, ticari ayrıştırıcı doku homojenize edildi ve mitokondri naylon gözenekli filtrelerden geçerek, süzme ile izole edilmiştir. Seçenek yöntemler kullanılarak da 100 dakika - Mitokondriyal izolasyon süresi 60 kıyasla &lt;30 dk.

Doku Ayrışma Ve Diferansiyel süzülerek Nakli İçin Mitokondri Of Rapid İzolasyon ve saflaştırma

Bir fare kalpten farklı kardiyak hücre tiplerinin izolasyonu için çeşitli protokoller geliştirilmiş ve açıklanmıştır. Burada, yüksek kaliteli ana kardiyak hücre tiplerinin (kardiyomiyosit, endotel hücreleri ve fibroblastların) tek bir preparasyondan izole edilmesini sağlayan deneysel maliyetleri düşüren optimize edilmiş bir protokol tarif edilmiştir.

Bir Yetişkin Sıçan Kalpten Yüksek Kalitede Kardiyomiyosit, Endotel Hücresi ve Fibroblastların Eşzamanlı İzolasyonu

Burada, iki protokol mitokondrial Ca2 + akını izole mitokondri ve kültürlü hücreleri ölçümü için mevcut. İzole mitokondri için biz bir plaka okuyucu tabanlı Ca2 + alma detaylı tahlil Ca2 + hassas kullanarak boya kalsiyum yeşil-5N. Kültürlü hücreler için Ca2 + boya Rhod-2/AM kullanarak bir confocal mikroskopi yöntemi açıklanmaktadır.

Mitokondrial kalsiyum akını izole mitokondri ve kültürlü hücreleri analizleri

Burada, biz bir en iyi duruma getirilmiş, Langendorff tabanlı bir fare modeli Metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu tek hücreli atriyal cardiomyocytes yalıtım için açıklayınız. El ile düzenleme intraluminal basınç kalp boşlukları, işlevsel olarak sağlam miyositler uyarma-kasılma-kaplin çalışmaları için uygun verim için uygulanır.

Bir fare modeli Metabolik sendromu ile ilgili kalp yetmezliği ile korunmuş ejeksiyon fraksiyonu atriyal Cardiomyocytes izolasyonu

Daha önce dondurulmuş arşivlenmiş katı dokulardan mitokondri ile zenginleştirilmiş örneklerin hazırlanması, araştırmacıların çeşitli deneysel yöntemlerde mitokondrilerin hem fonksiyonel hem de analitik değerlendirmelerini yapmalarına izin verdi. Bu çalışma, donmuş kalp dokusundan mitokondri ile zenginleştirilmiş preparatların nasıl hazırlanacağını ve mitokondrilerin analitik değerlendirmelerinin nasıl yapıldığını göstermektedir.

Daha Önce Dondurulmuş Kardiyak Dokudaki Mitokondriyal Elektron Transfer Komplekslerinin Sow'un Yavrularından Ölçülmesi: Egzersize Bağlı Mitokondriyal Biyoenergetik Değişikliklerini Değerlendirmek için Bir Model

Burada, fare iskelet kasından mitokondri izolasyonu için ayrıntılı bir yöntem ve ardından mikroplaka tabanlı respirometrik testler kullanılarak Oksijen Tüketim Hızı (OCR) ile solunum analizi için ayrıntılı bir yöntem açıklanmaktadır. Bu boru hattı, çoklu çevresel veya genetik müdahalelerin mitokondriyal metabolizma üzerindeki etkilerini incelemek için uygulanabilir.

Respirometrik Testler için Fare İskelet Kasından Mitokondri İzolasyonu

Bu yöntem, mitokondriyal geçirgenlik geçiş gözeneklerinin düşük iletkenlikli proton sızıntısına katkısından, vahşi tip kontrolüne kıyasla artmış kardiyomiyosit mitokondriyal koenzim Q içeriğine sahip yenidoğan kırılgan X sendromlu farelerde gözenek açılması için voltaj eşiğini belirlemek için kullanır.

Mitokondriyal Geçirgenlik Geçiş Gözünün Koenzim Q Fazlalığı Ortamında Açık Olasılığının Değerlendirilmesi

Mitokondri ile ilgili biyoenerjetik ve metabolomik çalışmalar, mitokondrilerin birçok hastalıkta çok yönlü rolünü ortaya koymuştur, ancak bu organeller için izolasyon yöntemleri farklılık göstermektedir. Burada ayrıntılı olarak açıklanan yöntem, yüksek kaliteli mitokondriyi birden fazla doku kaynağından saflaştırma yeteneğine sahiptir. Kalite, solunum kontrol oranları ve yüksek çözünürlüklü respirometri ile değerlendirilen diğer metriklerle belirlenir.

Kemirgen Kalp Dokusundan Sağlam Mitokondriyal İzolasyon 

Öğrenin, sıçan kalp mitokondrisini yüksek kalitede izole etme yöntemini. Diferansiyel santrifüjasyon ve sıcaklık kontrolü ile biyokimyasal analizler için fonksiyonel mitokondri elde edin.

Mitokondri Yüksek Coupled Sıçan Kalp hazırlanması

Daha fazla video keşfet