Name: Hücre Orta Wolbachia bakımı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 33 s
Description: Keşfedin Wolbachia pipientis bakterisini Anopheles gambiae hücre hattından saflaştırma ve hücre dışı ortamda kültürleme yöntemini. Canlılık testi ile bakteri saflaştırmasını öğrenin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

hücre orta wolbachia bakımı

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

Bu video protokolde, prosedürler gösterilmiştir (1), kültürlü sivrisinek hücreleri Wolbachia symbionts arındırmak, (2) saflaştırılmış Wolbachia uygulanabilirliğini tespit etmek için bir floresan tahlil ve (3) hücre orta şimdi ekstrasellüler Wolbachia korumak . Saflaştırılmış Wolbachia ekstraselüler fazda hayatta kalmak ama ökaryotik hücrelerin içine yeniden inoküle kadar çoğaltmak değil. Bu şekilde saflaştırılmış Ekstrasellüler Wolbachia oda sıcaklığında en az bir hafta boyunca canlı kalır ve muhtemelen daha uzun olacak. Saflaştırılmış Wolbachia mikro-enjeksiyon, DNA ekstraksiyonu ve diğer uygulamalar için uygundur.

Bu video hücre orta endosymbiont Anofel gambiae hücre hattı Wolbachia pipientis arındırıcı ve sonra kültür için bir yöntem açıklanır. Bakterinin canlılığı için bir test olduğunu göstermiştir.

Hücre Orta Wolbachia bakımı

Bu video protokolünde, (1) kültürlenmiş sivrisinek hücrelerinden Wolbachia symbiontlarının saflaştırılması ve (2) ... için floresan bir analiz yönteminin kullanılmasına yönelik prosedürler gösterilmektedir.

Benim adım Courtney Ston. Dr. Jason Rascon'un laboratuvarında, Johns Hopkins Bloomberg Halk Sağlığı Okulu'nda çalışıyorum. Bugün, kültürlenmiş böcek hücrelerinden bakteriyel saflaştırma işlemi gerçekleştireceğiz.Aslında oldukça basit bir prosedürdür. İlk olarak hücrelerimizi hasat ederek başlarız ve ardından cam boncuk lizisi kullanarak ökaryotik konak hücre membranlarını fiziksel olarak parçalarız. Sonrasında, bakterileri konak hücre kalıntılarından ayırmak için diferansiyel santrifüjleme uygularız.Ardından, konak hücre partiküllerini daha fazla uzaklaştırmak için bir dizi filtrasyon adımı uygularız, böylece sonunda elimizde sadece saflaştırılmış bakteriyel pelet kalır. Bu aslında temel gereksinimlerden biridir. Bu bir hücre kültürü kabinidir ve hücre kültürü kontamine olmaya çok yatkın olduğu için her şeyi steril tutmak amacıyla kullanılır.Ayrıca hücre kültürü ortamına, hücrelerin kendilerine ve bunları yetiştirmek için plastik flasklara ihtiyacımız var. Ayrıca üç milimetrelik blast boncuklarına, 50 ml'lik konik tüplere ve bakterilerimizi çöktürmek için yaklaşık 18,000 G gibi yüksek hızda santrifüj yapabilen, aynı zamanda konak hücrelerimizi çöktürmek için yaklaşık 3000 G veya 2,

maintaining-wolbachia-in-cell-free-medium

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Drosophila Wolbachia Bakteriyel Enfeksiyon

Nicel ve Otomatik Yüksek throughput Genom çapında RNAi Ekranlar C. elegans</em

Dan Ekstrasellüler Akışkan Vampiric İzolasyonu<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Bu videoda, embriyonik C. elegans hücrelerinin in vitro olarak izole edilmesi ve steril olarak kültürlenmesi için bir yöntem tanıtılmaktadır.

Enzimatik Sindirim ve Elle Ayrışma: C. elegans Embriyolarını Hücre Kültürüne Hazırlamak İçin Bir Yöntem

C. elegans genellikle katı agar plakaları üzerinde büyütülmüş ve sıvı kültürlerde E ile tohumlanır coli. Toksikolojik ve beslenme çalışmaları karıştırıcı bakteriyel yan ürünleri önlemek için, biz aşağı bir uygulama yelpazesi için solucanlar çok sayıda büyümeye ve senkronize etmek için, bir aksenik sıvı ortam, CeHR kullanılmaktadır.

Kültürleme Caenorhabditis elegans Mikroparçacık bombardımanı ile aksenik Sıvı Medya ve Transgenik Worms Yaratılış

Wolbachia ile enfekte aedes aegypti sivrisinek arboviruses iletimini bastırmak için doğal nüfus serbest edilmektedir. Biz laboratuvar adaptasyon ve seçimi en aza indirmek önlemler alarak deneyler ve alan açıklaması, arka Ae. aegypti laboratuvarda Wolbachia enfeksiyonları ile yöntemleri açıklanmaktadır.

Aedes aegypti sivrisinek enfekte Wolbachia ile bakımını yapma

Bu iletişim kuralı, viral enfeksiyon vivo içinde virüs ana bilgisayar etkileşimi analiz için nano-enjeksiyon yöntemi ve temel teknikleri kullanarak Drosophila melanogaster içinde kurmak açıklar.

Viral enfeksiyon ve analiz Drosophila Melanogaster ana bilgisayar virüs etkileşimin kurulması

Hücre içi Wolbachia'yı tespit etmek için birbirini tamamlayan ve Aedes albopictus'tan türetilmiş Aa23 ve Aa23-T'nin Wolbachia enfeksiyonunun antibiyotik kullanılarak tedavi edilen Wolbachia enfeksiyonunun tespit doğruluğunu artıran  dört yöntem kullanıldı.

Aedes albopictus Hücre Hatlarında Wolbachia Suşu wAlbB'nin Tespiti

Burada sunulan, mikrofabrikasyon çok kuyucuklu cihazlarda katı ortam üzerinde izole edilmiş bireysel nematodların kültürlenmesi için optimize edilmiş bir protokoldür. Bu yaklaşım, bireysel hayvanların, aktivite, vücut büyüklüğü ve şekli, hareket geometrisi ve hayatta kalma dahil olmak üzere yaşlanma ve sağlıkla ilgili çeşitli fenotipler için yaşamları boyunca izlenmesini sağlar.

Çok Kuyulu Cihazlarda Katı Ortamda İzole Caenorhabditis elegans'ın Uzun Süreli Kültürü ve İzlenmesi

Burada, yaşam boyu fizyolojik parametre takibi ve floresan ölçümü için katı ortam üzerinde izole edilmiş bireysel nematodların kültürlenmesine yönelik bir protokol sunuyoruz. Bu kültür sistemi, hayvanların kaçmasını önlemek için tek solucan kuyularının etrafında bir palmitik asit bariyeri içerir ve patojenik bakteriler ve kimyasal stresörler de dahil olmak üzere önleyici müdahalelerin kullanılmasına izin verir.

Uzunlamasına floresan izleme ve aversif müdahaleler için katı ortam üzerinde bireysel caenorhabditis elegans'ın uzun süreli kültürü

Hücre hatları, konakçı hücrelerinin dışında kültürlenemeyen hücre içi organizmalar üzerinde yapılan çalışmalarda faydalıdır. Wolbachia ile enfekte olmuş hatlar birçok keşfi mümkün kılmış olsa da, bu hatlardaki heterojenlik değişken deneysel sonuçlara yol açabilir. Wolbachia ile enfekte JW18 hücrelerinden tek hücreli klonlar ve sürekli kültürler oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

Wolbachia ile enfekte Drosophila melanogaster JW18 Hücre Hattından Monoklonal Kültürlerin Üretilmesi

Keşfedin Wolbachia pipientis bakterisini Anopheles gambiae hücre hattından saflaştırma ve hücre dışı ortamda kültürleme yöntemini. Canlılık testi ile bakteri saflaştırmasını öğrenin.

Hücre Orta Wolbachia bakımı

Daha fazla video keşfet