İndüksiyon ve Kronik Relaps Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis Klinik Puanlama

Ben Christine Beaton. Irvine'deki California Üniversitesi Fizyoloji ve Biyofizik Bölümü'nde George Chen'in laboratuvarında yardımcı araştırmacıyım. Ve önümüzdeki birkaç gün içinde size göstereceğim şey, DA sıçanlarında Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit anlamına gelen kronik nükseden EAE'nin nasıl indükleneceği ve izleneceğidir.

Bu multipl skleroz için bir hayvan modeli, ya da demeliyim ki, multipl skleroz için hayvan modellerinden biri. Ve bu hayvanlarda artan bir flacid felç ve insan hastalığına benzeyen histolojik özellikler ile karakterizedir. Yani bu birkaç gün sürecek.

Bu yüzden ilk gün size tam trans adjuvanda naif kırmızı omurilik homojenatı ile genetik emülsiyonu nasıl hazırlayacağınızı göstereceğim. İkinci gün, size fareleri UCAE'ye nasıl bağışık hale getireceğinizi göstereceğim, ve sonra bu hayvanlarda ilk klinik belirtileri görmek için yedi ila 15 gün bekleyeceğiz, bu noktada size EAE'nin farklı hayvanlardaki farklı ilerleme aşamalarını göstereceğim. Bu yüzden önce size emülsiyonu hazırlamak için gereken tüm reaktifleri ve malzemeleri göstereceğim.

Yani kullandığım şey tam ön adjuvan H 37 ra, ama bu, zaten mikrobiyum tüberkülozu olmasına rağmen, onu M'de dört miligrama daha fazla kurumuş mikobakteri tüberkülozu IH 37 ra ile takviye edeceğim. Ve bu kurutulmuş bakteriyi hazırlamak için daha fazla katrana koymam ve Pele ile ince bir toz yapmam gerekiyor. Bu yapıldıktan sonra, bu bakterileri adjuvana ekleyeceğim.

Sonra adjuvan hazır. Bir sonraki adım antijenimi hazırlamak. Eksi 80 derecede donmuş D sıçan omuriliklerini çıkaracağım ve gerçekten donmuş halde kalmaları için, onları kuru buzda tartı kabının üzerine koyacağım ve onları tek tek çıkaracağım ve basit jiletler kullanarak, omurilikleri doğrayarak tartı tabaklarına dönüştüreceğim.

O zaman takviye edilmiş adjuvanımı girdabın üzerine koyacağım. Ve girdap oluştururken, tüm omuriliği girdaptaki adjuvana karıştırdıktan sonra omuriliğimi yavaş yavaş adjuvanıma ekleyeceğim. Beş dakika daha girdap yapacağız ve bundan sonra hazırlanan daldırmayı beş M cam şırıngaya aktaracağız.

16 G'lik bir köprü kullanarak iki adet beş M cam şırıngayı birbirine bağlayacağız ve emülsiyonu bir şırıngadan diğerine mümkün olduğunca hızlı bir şekilde iteceğiz. Ve birkaç dakika sonra, emülsiyon sertleşmeye başladığında, daha küçük bir köprüye geçeceğiz. Bu 18 G, ve bu emülsiyonu daha da zorlaştıracak, ve biz onu şırıngalarda tutacağız ve bu köprü üzerinde alüminyum folyoya sarılı olarak gece boyunca buzdolabında tutacağız.

Bu yüzden tartı kağıdına 30 miligram mikrop tüberkülozu tarttım. Onları bir morara aktardım. Ve bir Pele kullanarak, bakteri kümelerini ince bir toz haline getirdim.

Ancak bakterileri kırmamak için havaneli ile çok sert bastırmak istemezsiniz. Bir prosedürün başlangıcında toplanan bakteriler sarı bej rengindedir. İnce, ince bir toz yaptıysanız, sonunda beyaz bir toz elde edersiniz ve istediğiniz şey budur, ancak bakterileri kırmak için çok sert bastırmak istemezsiniz.

Bunu yaptıktan sonra, 10 mil amperlik tam trans adjuvan aldım ve tüm bakterilerin süspansiyon halinde olduğundan emin oldum. Bu numuneyi kırdım ve 10 millik tam trans adjuvanın tamamını, ayrıştırılmış mikobakteri tüberkülozunun üzerine mortaya döktüm. Ve şimdi takviye edilmiş tam trans adjuvanı 50 mil'lik bir tüpe aktaracağım.

Şimdi takviye edilmiş tam trans adjuvanımı alıyorum ve bir tüpe koyuyorum. Tabii ki, bakteriler sıvının dibinde ve ben onların çoğunu tüpün içine çıkarmaya çalışacağım. Ama harcın içinde biraz bırakırsam, o kadar da sorun olmayacak çünkü omurilik emülsiyonumu hazırlamak için bu harcı temizlemeden tekrar kullanacağım.

İşte burada omurilikler. Eksi 80'de donmuş halde tutuldular. Takviye edilmiş adjuvanımın 10 ml'sine eklemek için 10 gram ağırlığındaydım.

Bu yüzden bu omurilikleri mümkün olduğunca uzun süre donmuş halde tutarken ne yapacağım, onları jiletle tartılan bulaşıklarda çok ince bir şekilde doğrayacağım. Bu omurilikleri çok ince bir şekilde doğramak için iki tıraş bıçağına ve bir tartı kabına ihtiyacınız var. Yaptığım şey bir omurilik almak, onu tartı kabıma koymak, ve kesmeye başlamak, ve elimi üzerine koydum, böylece donmuş olduğu için, kalbi, etrafta zıplamaya başlayacak ve ilk büyük parçaları yakalayacağım ve çok hızlı bir şekilde çözülmeye başlayacak ve tıraş bıçağımın kenarına yapışacak.

Bu yüzden onu çıkarmak için diğer tıraş bıçağını kullanıyorum ve erimeye zaman kalmaması için mümkün olduğunca ince ve mümkün olduğunca hızlı doğramaya çalışıyorum çünkü eridikten sonra kesmek çok daha zor oluyor. Bu nedenle, omuriliğin tamamen, çok ince bir şekilde kıyılması son derece önemlidir, çünkü ne kadar ince olursa, o kadar ince olur, en homojen daldırma olur ve daha fazla sıçan hastalanır ve daha homojen bir hastalığa sahip olur. Bu yüzden tüm bu omurilikleri çok, çok iyi bir şekilde doğramak son derece önemlidir.

Şimdi bu omuriliklerin her birini aynı şekilde doğramaya devam edeceğim, ta ki 10 gram omuriliğin tamamı ile işim bitene kadar. Şimdi yapacağım şey, adjuvan takviyesini bitirdikten sonra hala mortada kalan tüm mikobakteri tüberkülozunu topladığımdan emin olmak için omuriliği mortadaki biraz karıştıracağım. Ve bundan sonra yapacağım şey, adjuvanı girdabın üzerine koymak.

Ve mümkün olduğunca hızlı bir şekilde sürekli girdap yaparken, ortalama omuriliğimi bu adjuvana yavaş yavaş ekleyeceğim. Şimdi girdapta takviye edilmiş adjuvanım var ve eklemeye başlayacağım, araç panel kordonumu yavaş yavaş ekleyeceğim. A'yı, antijeni adjuvana çok yavaş eklememin nedeni, yağda su emülsiyonu yapıyor olmamızdır.

Bu nedenle adjuvan çoğunlukla mineral yağdır ve antijen eşit bir çözeltidir. Yapmak istediğimiz şey, antijeni çok yavaş bir şekilde yağa karıştırmak, böylece her eklediğimizde yağ antijeni tamamen kaplıyor. Yani tek seferde eklersek, antijeni tamamen kaplamaz.

Şimdi tüm ortalama omuriliği girdabın üzerindeki adjuvana ekledim ve her şeyin tamamen karıştığından emin olmak için beş dakika daha dönmesine izin vermek için tüpü girdabın üzerine yapıştırdım. Ve hızı, tüpün sonlarında çok fazla kaybetmeden mümkün olan en yüksek tepe noktasına sahip olacak şekilde ayarlıyorum. Şimdi beş dakika daha girdap bitti ve ben bu girdabı durduracağım ve tüccarımı cam şırıngalara aktaracağım.

Bu yüzden tam şırınga topladım. Onu daha büyük çaplı köprüye taktım ve köprünün diğer eline sadece bir şırınganın namlusunu taktım ve şimdi emülsiyonu o şırıngaya ekleyeceğim. Yani şimdi, hayır.

Şimdi tüm sıvıyı alt şırıngaya alacağım, Üst kısmı çıkarın, üst kısmı monte etmeyi bitirin, alt şırıngamda veya köprüde hava kabarcığı olmadığından emin olun. Ve şimdi yeniden bağlayacağım. Şimdi her iki şırıngayı da bu köprüden birbirine bağladım.

Biri daldırma dolu, diğeri boş. Ve şimdi yapacağım şey, bir şırınganın sayacını diğerine ileri geri itmek mümkün olduğunca hızlı bir şekilde itmek. Şimdi büyük çaplı köprüyü 18 G köprüsüne daha küçük bir köprüyle değiştireceğim.

Daha küçük köprü, emülsiyonu daha da kalın hale getirecek. Bu yüzden köprüleri değiştirmek için tüm emülsiyonu tek bir şırıngaya koydum. Boş şırıngayı çıkarıyorum, köprüde hiçbir şey kaybetmediğimden emin oluyorum, köprüyü çıkarıyorum, yenisini takıyorum, tüm hava kabarcıklarını kovalıyorum ve diğer şırıngayı tekrar takıyorum.

Ve şimdi emülsiyonun geçmesi çok daha zor olduğu prosedürünü tekrarlıyorum ve çok kırılgan olan bu köprüyü kırmamaya dikkat ediyorum. Ve tüpümde emülsiyon olduğu sürece bu işlemi başka bir şırınga seti ile tekrarlıyorum. Bu yüzden tüm emülsiyonu kullanmak için gerektiği kadar şırınga kullanıyorum.

Şimdi emülsiyonu birkaç kez, belki 10, 15 kez karıştırdım, ancak bu partilere göre değişir. Ve şimdi üstesinden gelmek son derece zorlaşıyor. Ve bunu birkaç kez daha yapacağım, ya da belki de yapmayacağım.

Şimdi gerçekten sıkışmış durumda, bu yüzden orada bırakacağım. Aksi takdirde, bir şırıngayı veya köprüyü kırma riski vardır. Yani geçmesi durduğunda, eğer çok erken olursa, bu belki de köprünün tıkandığı anlamına gelir.

Ama bu noktada en az 10 ya da 15 kez karıştırdığım için emülsiyon hazır demektir. Çok kalın, bu yüzden onu yalnız bırakmalıyım. Şimdi onu alüminyum folyoya saracağım ve gece için buzdolabına koyacağım.

Bu yüzden dün emülsiyonu kırmızı omuriliklerle hazırladık ve emülsiyonu bir gece buzdolabında bıraktık. Bugün onu çıkarıyoruz ve kuyruğun tabanına sıçan başına 200 mikrolitre enjekte edeceğiz. Ancak enjekte etmeden önce, emülsiyonun iyi olduğundan emin olmalıyız.

Bu yüzden hala sağlam olmalı ve hala güzel bir katıdır. Burada gördüğünüz çatlak bile bize bunun güzel bir katı olduğunu söylüyor, fazlara ayrılmamış, iki faza ayrılmış, ki bu kötü olurdu. Bu yüzden bu emülsiyonun kullanılması iyidir.

Yani her kulübe 200 mikrolitre emülsiyonumuz alacak. Ve bunu enjekte etmek için üç mil şırınga kullanıyoruz, ancak lu kilit uçlu şırıngalar kullandığımızdan emin oluyoruz çünkü kaymış kullanırsak, şırıngaları. Emülsiyon o kadar kalın ki, enjekte etmeye çalışırken iğne dışarı çıkabilir.

Bu yüzden her zaman lu kilit tipi şırınga ile gidin. Ve bir iğne olarak, mümkün olan en küçük iğne ile gitmeye çalışıyoruz, ancak bu kadar kalın bir emülsiyonla, 20 gauge bir iğne ile gitmek zorundayız. Kuyruğun tabanına çok hassas bir şekilde enjekte etmemiz gerektiğinden, fareleri birkaç dakika boyunca anize ediyoruz ve bu farelerin onları işaretlemek ve işaretlemek için derin uykuda olduklarını görüyoruz.

Kulak zımbaları kullanıyoruz ve her sıçan, zımbalamanızın belirli bir modeliyle tanımlanır. Şimdi farelere enjekte etmeye hazırız ve her fareye kuyruğun tabanında 200 mikrolitre emülsiyon vereceğiz ve aynı zamanda kulakları da işaretleyeceğiz. Enjeksiyon şırıngasında sadece bir seferde bir sıçan için emülsiyon hazırlıyorum çünkü enjekte etmek genellikle gerçekten zor oluyor ve gerçekten çok bastırıyorum ve bir sıçana ihtiyaç duyduğundan daha fazlasını enjekte etmek istemiyorum.

Bu yüzden şırıngayı bir seferde sadece bir hu için dolduruyorum. Şırıngayı doldurmak için, plastik enjeksiyon şırıngamı, emülsiyonu içeren cam şırıngaya bağlı olan köprüye bağlarım. Plastik şırıngama yaklaşık 300 mikrolitre emülsiyon koydum.

Sonra iğneyi bağlıyorum ve iğnede kaybettiğim bu 50 mikrolitre alanı kaybetmemek için iğnenin havasını dışarı bastırıyorum. Ve sadece 200 mikrolitreye sahip olduğumdan emin oluyorum, ve sonra farenin kuyruğunun tabanına enjekte ediyorum. Artık tüm kalplerimizi enjekte ettiğimize göre, onları günlük olarak izleyeceğiz.

Bu yüzden onları her sabah tartacağız ve EAE'nin klinik belirtileri için günde iki kez kontrol edeceğiz. İlk belirtiler, ortaya çıktıklarında size göstereceğim gibi, sarkık bir kuyruk olacak ve bu işaretlerin enjeksiyondan sonraki yedinci gün, sekizinci gün civarında ilk fareler için ortaya çıkmasını bekliyoruz. Sıçanların çoğu 10. günden 12. güne kadar hastalanacak ve en son sıçanlar 15 ila 17. gün arasında hastalanacaktır.

Kalplerimizi omurilik emülsiyonu ile aşıladıktan sonra 13. gündeyiz ve şimdi klinik skorlarını kontrol etmek için bu hayvanları izleyeceğim. Ama bunu yapmadan önce, size hayvanlarımızı nasıl barındırdığımızı tanıtmama izin verin. Bu nedenle otoimmün hastalıklar, hayvanda bulunan herhangi bir patojenin otoimmün yanıtı azaltacağı bir özelliktir.

Bu yüzden bunu en üst düzeye çıkarmak için farelerimizi belirli koşullarda barındırıyoruz. Filtrelenmiş hava içeren ve pozitif basınç altında olan bu hücredeki ev, hayvanların kendileri otoklavlanmış kafeslere yerleştiriliyor. Yani kesinlikle kafesteki her şey, fare ağını koymadan önce otoklavlanır.

Ve kafeslerin üstünde filtreleri var. Yiyecek standart kemirgen yemeğidir. Ben kökenliyim.

Ayrıca farelerimize asitlendirilmiş su veriyoruz. Normal içme suyu alıyoruz ve standart protokollere göre hidroklorik asit ekliyoruz ve bağırsak florasını minimumda tutmak için asitlendirilmiş sular kullanıyoruz, bu da otoimmün yanıtımızı bozma riskini azaltacaktır. Şimdi farelerimin klinik puanlamasını yapmaya hazırım.

Puanlama, klinik belirti olmayan sıfır puandan, hayvanların kurban edildiği morbid bir durum olan altıya kadar değişir. Ve şimdi size adım adım ilerleyeceğim, bu modelde bulabileceğimiz her klinik skorun örneklerini göstereceğim. Bu yüzden şimdi sıçanların UCAE'ye aşılanmasından sonraki 13. gündeyiz.

Ve o kafeste henüz hastalanmamış iki farem var. Bu yüzden kesinlikle hiçbir klinik yay belirtisi yok. Yani her iki sıçan da hala sağlıklı.

Etrafta koşuşturuyorlar, etrafta koşuşturuyorlar ve gördüğünüz gibi, hareket ettiklerinde kuyruklarını yataktan kaldırıyorlar. Bu yüzden bazen kuyruğun kurumasına izin verirler, ancak çoğu zaman onu yataktan kaldırmaya çalışırlar. Ve eğer şans verilirse, kafesten de çıkacaklar, bu da dört uzvun da tam kontrolüne sahip oldukları ve gerektiğinde ayağa kalkabilecekleri anlamına geliyor.

Bu nedenle, EA'nın ilk klinik belirtisi gevşek bir kuyruktur. Yani bir sıçan alırsam ve parmağımı kuyruğa bastırırsam, sıçan kuyruğun ucuyla tutma eğiliminde olacaktır. Az önce gördüğünüz gibi, bu farenin li kuyruğu yok ve ben bunu diğeriyle yapabilirim.

Kuyruk parmağı tutar, bu da farelerin tam bir reaktif kuyruğa sahip olduğu anlamına gelir. Klinik puanları sıfırdır, bu da aslında hiç a e olmadığı anlamına gelir. İşte burada klinik skoru O 0.5 olan bir sıçan.

Yani sadece kafesin içine bakarsanız, kesinlikle öyle davranıyor, normalde etrafta koşuyor, kafesin yan tarafına tırmanıyor, ama kuyruğunun ucu asla yataktan çıkmıyor. Yani bu sıçanın kısmi bir uzuv kuyruğu olabilir. Ben de fareyi tutuyorum ve aynı testi yapıyorum, ve kuyruğun bir tonu olmasına rağmen, ucu parmağımda tamamen kıvrılmıyor.

Bu yüzden bu fareyi 1.5 puanla puanlayacağım, bu kısmi li kuyruk. Bu nedenle, birinin klinik skoru tam flad kuyruğu ile karakterize edilir, bu nedenle kuyruğun hiçbir kısmı herhangi bir tona sahip değildir, ancak kırmızı hala arka çizgilerini kullanabilir. Gördüğünüz gibi, bu sıçan kafesin yan tarafına karşı duruyor, bu da arka bacaklarının normal şekilde çalıştığını gösteriyor.

Ama bu farelerin kuyruğunu kucağıma alarak kontrol edersem, kuyruklarında kesinlikle bir ton olmaz. Yapabileceğiniz başka bir test, RU kafesin dibindeyken, kuyruğu normal bir ru ile kaldırırsanız, kuyruk yavaşça aşağı iner veya belki de bir puanla RU ile yere bile ulaşamaz. Kuyruğu kaldırırsanız, hemen yere düşer.

Buradaki bu RU dört uzvu da hareket ettirebilir, ancak arka bacaklar bu RU'nun ayağa kalkmasına izin veremeyecek kadar zayıftır. Bu yüzden bu RU'yu iki klinik skorla sınıflandıracağım. Dolayısıyla, bir ile iki puan arasındaki temel fark, bir puanın sadece gevşek bir kuyruk olmasıdır.

Arka bacaklar tamamen işlevseldir ve üç puan, sıçan yan tarafına düşecektir. İki orta düzeydir, bu yüzden sıçan onu sırtını, arka bacaklarını kullanabilir, ancak normal bir sıçanınkinden çok daha zayıftırlar. Yani bu sıçan EAE'nin alışılmadık bir özelliğine sahip.

Normalde EAE, yükselen bir flasit felç olarak karakterize edilir, ancak bunun gibi oldukça nadir görülen bazı durumlarda, sıçanlar arka bacak felç olmadan önce ilk ön bacak felci geliştirir. Ve bu farenin durumu. Yani ona bakarsanız, başı vücudunun geri kalanından daha aşağıdadır çünkü sağ bacakları ön bacaklarıyla ilgili zorluklar yaşar ve kafesin yan tarafına tırmanamaz.

Ve arka bacakları normal çalışmasına rağmen, ön bacaklarıyla itemez. Bu yüzden yine de bu fareyi iki puanla puanlardım, bu da hafif paralara karşılık gelirdi, ancak normalde bu ru'da arka bacaklarla görürüz, dört uzuvla görürüz. Yani bu RU, öncekilerden çok daha şiddetli bir fenotipe sahip.

Klinik skoru üçtür. Size göstereceğim gibi, ön bacaklar kesinlikle normal bir şekilde çalışıyor, ancak iki arka bacak şu anda ılımlı bir paraise sahip. Yani her iki hy uzuv da RU tarafından hareket etmek için kullanılabilir, ancak RU yan tarafına düşer ve bu bacakları tamamen kontrol edemez.

Bu sporlar, normalde EE olmadan olacaklarından çok daha zayıf hale geliyorlar. Ve bu aşamada, artık kuyruğun topallaması konusunda endişelenmiyoruz çünkü bu farelerin çoğu bir süre sonra çok ince bir kuyruğa sahip olmaya başlıyor. Yani bunun hala çok gevşek bir kuyruğu var, ama bazen biraz distoni görebilirsiniz. Böylece kuyruk koordinesiz bir şekilde hareket etmeye başlar.

Yani artık bu seviyede kuyruğa bakmıyoruz, sadece uzuvların nasıl çalıştığına bakıyoruz. Bu doğru 3.5 puan alıyoruz çünkü arka bacaklarına bakarsak, biri hareket ediyor, ancak diğeri tamamen felç oluyor ve ru'nun ileri hareketine hiç yardımcı olmuyor. Yani bu, bir arka hattın tam felci olarak kabul edilir ve bu nedenle 3.5 puandır.

Bu RU'nun klinik puanı dörttür, bu da tam arka hat felci anlamına gelir ve bu, arka bacaklarını tamamen hareket ettirememe ile karakterizedir. Bu kafeste bulunan farenin klinik puanı beş, bu da ek bir inkontinans ile birlikte tam bir arka hat felcine karşılık geliyor. Bu hayvan, gördüğümüz gibi, kıtada olmayan diğer hayvanlarda görmediğimiz, bu bölgedeki ağırlığının tamamen idrarını tutamamaktadır.

HUS'umuz üç veya daha fazla puana sahip olduğunda, suya erişebildiklerinden emin olmak için onlara uzun yudum tüplü su şişeleri veriyoruz. Ayrıca kafesin dibine yiyecek koyuyoruz ve onlara jel paketleri de veriyoruz. Ancak tüm bunlara rağmen, fareleri onları izlemek için her dışarı çıkardığımızda, ki bu günde iki kez, gün boyunca yeterli suya erişememeleri durumunda onlara her zaman su sunuyoruz.

Burada klinik puanı dört olan bir farem var. Ve bu aşamada, bu hayvanların yemek yemeleri için biraz teşvik edilmesi gerekiyor. Bu yüzden yaptığım şey, yiyeceklerini ıslatmak, bu da onların çiğnemesini çok daha kolay hale getiriyor.

Geçtiğimiz iki hafta boyunca, size DA sıçanlarında kronik nükseden EAE'yi nasıl indükleyeceğinizi ve izleyeceğinizi gösterdim. İlk adımda, size omuriliğe daldırmayı nasıl hazırlayacağınızı, sonra da farelerin kuyruğunun tabanına nasıl enjekte edeceğinizi gösterdim. Ve bugün size farklı hastalık seviyelerine sahip fareleri nasıl puanlayacağınızı gösterdim.

Tabii ki, bu kronik nükseden bir modeldir, bu yüzden sıçanların dalgalı skorlara sahip olmasını bekliyoruz. Hastalık birkaç gün içinde remisyona girecek ve zamanla nüksedecek. Bazı fareler hastalığın daha kronik bir aşamasına girecek.

Hayvandan hayvana değişecektir. Şimdi, bu videoyu bitirmeden önce, bu modellerde ilaçların test edilmesiyle ilgili bir şeyi vurgulamak istiyorum. En önemli nokta, hayvanları mümkün olan en iyi şekilde randomize etmektir.

Bilinmesi gereken çok önemli bir şey, hayvanın ne kadar erken hastalandığı, hastalığının o kadar şiddetli olduğudur. Bu nedenle, tüm kontrol hayvanlarınızı ilk gün içinde gruplandırmak istemezsiniz ve sonraki birkaç gün içinde hayvanlar tedavi edilir. Yaptığımız şey, bir hayvan hastalanır hastalanmaz ve tedaviye başlamak istediğimiz gün, hayvanları rastgele iki farklı gruba yerleştiriyoruz.

Örneğin, bir kontrol grubumuz ve bir tedavi grubumuz varsa, ilk kalp kontrol grubuna, ikincisi tedavi edilen bir gruba gidecek ve tüm hayvanlar kendi gruplarına yerleştirilene kadar bu şekilde devam edecektir. Ancak bu rastgeleleştirmenin protokolde mümkün olduğunca erken gerçekleşmesini sağlıyoruz. Umarım bu video sizin için yararlı olmuştur ve D sıçanlarında kronik nükseden EAE'yi indükleyebilir ve izleyebilirsiniz.

Ve Deneylerinizde iyi şanslar.