İndüksiyon ve Kronik Relaps Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis Klinik Puanlama

Ben Christine Beaton. University of California at Irvine'ın Fizyoloji ve Biyofizik Bölümü'nde, George Chen'in laboratuvarında araştırma asistanıyım. Önümüzdeki birkaç gün içinde size, DA sıçanlarda deneysel otoimmün ensefalomiyelit olan kronik relapslı EAE'nin nasıl indükleneceğini ve izleneceğini göstereceğim.

Bu, multipl skleroz için bir hayvan modeli veya daha doğrusu, multipl skleroz için kullanılan hayvan modellerinden biridir. Bu model, söz konusu hayvanlarda yükselen flaksid paralizi ve insan hastalığına benzeyen histolojik özellikler ile karakterize edilir. Bu işlem birkaç gün sürecektir.

İlk gün size, complete trans adjuvant içerisinde naif kırmızı omurilik homojenatı ile genik emülsiyonun nasıl hazırlanacağını göstereceğim. İkinci gün, sıçanların UCAE'ye karşı nasıl immunize edileceğini göstereceğim ve ardından bu hayvanlarda ilk klinik belirtileri görmek için yedi ila 15 gün bekleyeceğiz; bu noktada, farklı hayvanlarda EAE'nin farklı ilerleme aşamalarını size göstereceğim. Öncelikle, emülsiyonu hazırlamak için gerekli olan tüm reaktifleri ve malzemeleri göstereceğim.

Kullandığım madde komple ön adjuvan H 37 ra; ancak, halihazırda mycobacterium tuberculosis içerse de, bunu daha fazla kurutulmuş mycobacterium tuberculosis IH 37 ra ile mL başına 4 mg olacak şekilde takviye edeceğim. Bu kurutulmuş bakteriyi hazırlamak için, onu havana koyup spatül ile ince bir toz haline getirmem gerekiyor. Bu işlem tamamlandığında, bakterileri adjuvana ekleyeceğim.

Böylece adjuvan hazır hale gelir. Bir sonraki adım antijeni hazırlamaktır. Bu nedenle, -80 °C'de dondurulmuş D sıçan omuriliklerini çıkaracağım; donmuş halde kalmalarını sağlamak için bunları kuru buz üzerindeki tartım kaplarına yerleştireceğim ve her birini tek tek alarak basit jiletler yardımıyla omurilikleri tartım kaplarının içine ince ince doğrayacağım.

Ardından, takviye edilmiş adjuvanımı vorteks cihazına yerleştireceğim. Vorteksleme işlemi sırasında, omuriliği azar azar adjuvana ekleyeceğim; tüm omurilik adjuvanla karıştırıldıktan sonra, beş dakika daha vorteksleme yapacağız ve sonrasında hazırlanan daldırma solüsyonunu 5 M'lik cam şırıngalara aktaracağız.

İki adet beş M cam şırıngayı 16 G bir köprü ile birbirine bağlayacağız ve emülsiyonu, söz konusu köprü için mümkün olan en yüksek hızla bir şırıngadan diğerine aktaracağız. Birkaç dakika sonra, emülsiyon koyulaşmaya başladığında, daha küçük bir köprüye geçiş yapacağız. Bu 18 G bir köprüdür ve emülsiyonu daha da koyulaştıracaktır; emülsiyonu bu köprü takılıyken şırıngaların içinde, alüminyum folyoya sarılı halde gece boyunca buzdolabında muhafaza edeceğiz.

Tartım kağıdı üzerinde 30 miligram Mycobacterium tuberculosis tarttım. Bunları bir havana aktardım. Ardından bir havan eli kullanarak, bakteri agregatlarını ince bir toz haline getirdim.

Ancak bakterileri parçalamamak için havan eliyle çok sert bastırmamalısınız. Bakteriler bir prosedürün başlangıcında küme halindeyken sarı-bej renktedirler. İnce, ince bir toz elde ettiğinizde, sonunda beyaz bir tozunuz olacak ve istenen budur; fakat bakterileri parçalamamak için çok sert bastırmaktan kaçınmalısınız.

Bunu yaptıktan sonra, 10 ml'lik bir ampul complete trans adjuvant aldım ve tüm bakterilerin süspansiyon halinde olduğundan emin oldum. Bu örneği açtım ve complete trans adjuvant'ın tamamını (10 ml), ayrıştırılmış mycobacterium tuberculosis'in üzerine, havana boşalttım. Şimdi, takviye edilmiş complete trans adjuvant'ı 50 ml'lik bir tüpe aktaracağım.

Şimdi, takviye edilmiş komple trans adjuvanımı alıp bir tüpe aktarıyorum. Bakteriler haliyle sıvının dibinde yer alıyor, bu yüzden çoğunu tüpe almaya çalışacağım. Ancak havan içerisinde bir kısmı kalsa bile bu çok büyük bir sorun teşkil etmeyecek, çünkü spinal kord emülsiyonunu hazırlamak için bu havanı temizlemeden tekrar kullanacağım.

İşte spinal kordlar burada. Bunlar -80 °C'de dondurulmuş halde saklandı. Takviyeli adjuvanımın 10 ml'sine eklemek için bunlardan 10 gram tarttım.

Dondurulmuş halde mümkün olduğunca uzun süre tuttuğum bu spinal kordları, tartım kapları içerisinde jiletler kullanarak çok ince şekilde kıyacağım. Spinal kordları çok ince kıymak için iki adet jilet ve bir tartım kabına ihtiyacınız vardır. Uygulama şu şekildedir: bir adet spinal kordu alıp tartım kabına koyarım ve kesmeye başlarım; spinal kord donmuş olduğu için parçalar etrafa sıçrayacağından elimle üzerini kapatırım, önce büyük parçaları yakalarım ancak doku çok hızlı çözülmeye başlayacak ve jiletin kenarına yapışacaktır.

Bu yüzden, onu çıkarmak için diğer jilet bıçağını kullanıyorum ve erimesi için zaman kalmaması adına mümkün olduğunca ince ve hızlı bir şekilde kıymaya çalışıyorum; çünkü eridiğinde kesmek çok daha zordur. Bu nedenle, omuriliğin tamamen ve çok ince bir şekilde kıyılması son derece önemlidir; çünkü ne kadar ince olursa, immersiyon o kadar homojen olur ve böylece daha fazla sıçan, daha homojen bir hastalıkla hastalanır. Bu yüzden, tüm bu omuriliklerin çok ama çok iyi kıyılması son derece önemlidir.

Şimdi, 10 gramlık omurilik miktarının tamamı bitene kadar her bir omuriliğin aynı şekilde kıyma işlemine devam edeceğim. Şimdi yapacağım şey, adjuvan ekleme işlemini bitirdikten sonra havan içerisinde kalan tüm Mycobacterium tuberculosis bakterilerini topladığımdan emin olmak için omuriliği havanda hafifçe karıştırmak olacak. Ardından, adjuvanı vorteks cihazına yerleştireceğim.

Mümkün olduğunca hızlı ve sürekli olarak vortekslerken, spinal kord örneğimi bu adjuvana azar azar ekleyeceğim. Şu an vorteks üzerinde takviye edilmiş adjuvanım var ve spinal kord örneğimi yavaş yavaş eklemeye başlayacağım. Antijeni adjuvana çok yavaş eklememin nedeni, yağ içinde su emülsiyonu hazırlıyor olmamızdır.

Adjuvan çoğunlukla mineral yağdır ve antijen ise eşit bir çözeltidir. Yapmak istediğimiz, antijeni yağa çok yavaş bir şekilde karıştırmaktır; böylece her eklemede yağ, antijeni tamamen kaplar. Eğer antijeni tek seferde ekleseydik, antijeni tamamen kaplamazdı.

Şimdi omurilik ortalamasının tamamını vorteksteki adjuvana ekledim ve her şeyin tamamen karıştığından emin olmak için tüpü beş dakika daha döndürmek üzere vortekse yerleştirdim. Hızı, tüpün kapağından çok fazla kayıp yaşamadan mümkün olan en yüksek vorteks etkisini sağlayacak şekilde ayarlıyorum. Beş dakikalık vorteksleme işlemi sona erdi, şimdi vorteksi durduracağım ve karışımımı cam şırıngalara aktaracağım.

Böylece şırıngayı tamamen monte etmiş oldum. Şırıngayı daha geniş çaplı köprüye taktım; köprünün diğer ucuna ise sadece bir şırınganın gövdesini yerleştirdim ve şimdi bu şırınganın içine emülsiyon ekleyeceğim. Şu an için, hayır.

Şimdi tüm sıvıyı alt şırıngaya alacağım, üsttekini ayıracağım, üsttekinin montajını tamamlayacağım ve alt şırıngada veya köprüde hava kabarcığı kalmadığından emin olacağım. Ve şimdi tekrar bağlantı yapacağım. Böylece şu an her iki şırınga da bu köprü aracılığıyla birbirine bağlı durumda.

Biri tamamen dolu, diğeri ise boştur. Şimdi yapacağım işlem, bir şırınganın pistonunu diğerine doğru mümkün olduğunca hızlı bir şekilde ileri geri itmektir. Şimdi, geniş çaplı köprüyü daha küçük olan 18 G köprü ile değiştireceğim.

Daha küçük köprü, emülsiyonu daha da yoğunlaştıracaktır. Bu nedenle köprüleri değiştirmek için, emülsiyonun tamamını tek bir şırıngaya aktarıyorum. Boş şırıngayı çıkarıyorum, köprüde hiçbir kayıp olmadığından emin oluyorum, köprüyü söküp yenisini takıyorum, tüm hava kabarcıklarını dışarı itiyorum ve diğer şırıngayı tekrar bağlıyorum.

Ve şimdi emülsiyondan geçmenin çok daha zor olduğu prosedürü tekrarlıyorum ve oldukça kırılgan olan bu köprüyü kırmamaya dikkat ediyorum. Tüpümde emülsiyon olduğu sürece bu işlemi başka şırınga setleriyle tekrarlıyorum. Böylece, tüm emülsiyonu tüketmek için gereken sayıda şırınga kullanıyorum.

Şu ana kadar emülsiyonu birkaç kez, belki 10-15 kez karıştırdım, ancak bu durum partilere göre değişiklik gösterir. Artık karışımın kıvamı oldukça koyulaştı ve içinden geçmek çok zorlaştı. Birkaç kez daha yapacağım, ya da belki yapmayacağım.

Şu an gerçekten sıkıştı, bu yüzden orada bırakacağım. Aksi takdirde, ya şırınganın ya da köprünün kırılma riski var. Dolayısıyla, geçiş durduğunda, eğer bu çok erken bir aşamada gerçekleşirse, bu durum köprünün tıkanmış olabileceği anlamına gelir.

Ancak bu noktada, en az 10 veya 15 kez karıştırdığım için emülsiyonun hazır olduğu anlamına gelir. Çok kıvamlı olduğu için onu kendi haline bırakmalıyım. Şimdi onu alüminyum folyoya saracağım ve gece boyunca buzdolabında bekleteceğim.

Dün kırmızı spinal kordlar ile emülsiyonu hazırladık ve emülsiyonu gece boyunca buzdolabında beklettik. Bugün emülsiyonu dışarı çıkarıyoruz ve sırt her bir fare için kuyruk tabanından 200 µL enjekte edeceğiz. Ancak enjekte etmeden önce, emülsiyonun uygun olduğundan emin olmalıyız.

Bu nedenle hala katı formda olmalı ve hala güzel bir katı kıvamdadır. Burada gördüğünüz çatlak, bileşiğin fazlara, yani iki ayrı faza ayrılmadığını ve güzel bir katı olduğunu göstermektedir; fazlara ayrılması istenmeyen bir durumdur. Dolayısıyla bu emülsiyon kullanıma uygundur.

Böylece her bir bölmeye emülsiyonumuzdan 200 µL ekleyeceğiz. Enjeksiyon işlemi için 3 ml'lik şırıngalar kullanıyoruz ancak Luer-lock uçlu şırıngalar kullandığımızdan emin oluyoruz; çünkü standart uçlu şırıngalar kullandığımızda, emülsiyon çok kıvamlı olduğu için enjeksiyon sırasında iğne yerinden çıkabilir.

Bu nedenle her zaman Luer-lock tipi şırınga kullanın. İğne olarak mümkün olan en küçük iğneyi seçmeye çalışırız ancak bu kadar yoğun bir emülsiyon için 20 gauge bir iğne kullanmamız gerekir. Kuyruk tabanına çok hassas bir şekilde enjeksiyon yapmamız gerektiğinden, sıçanları birkaç dakika boyunca anestezi altında tutarız ve bu sıçanların derin uykuda olmasını onları işaretlemek için bir fırsat olarak değerlendiririz.

Kulak delme yöntemini kullanıyoruz ve her sıçan, delme işleminizin oluşturduğu özel bir desenle tanımlanıyor. Artık sıçanlara enjeksiyon yapmaya hazırız; her sıçanın kuyruk tabanına 200 µL emülsiyon vereceğiz ve aynı zamanda kulaklarını işaretleyeceğiz. Emülsiyonu her seferinde sadece tek bir sıçan için enjeksiyon şırıngasında hazırlıyorum; çünkü enjekte etmek genellikle gerçekten zordur ve çok sert bastırıyorum, bu yüzden bir sıçana ihtiyacından fazlasını enjekte etmek istemiyorum.

Bu nedenle, şırıngayı her seferinde yalnızca bir HU için dolduruyorum. Şırıngayı doldurmak için, plastik enjeksiyon şırıngamı, emülsiyonu içeren cam şırıngaya bağlı olan köprüye bağlıyorum. Plastik şırıngama yaklaşık 300 µL emülsiyon koyuyorum.

Ardından iğneyi takıyorum ve iğnedeki 50 µL'lik boşluk kaybını önlemek için iğnedeki havayı dışarı itiyorum. Sadece 200 µL olduğundan emin oluyorum ve ardından bunu sıçanın kuyruk tabanına enjekte ediyorum. Tüm kalplere enjeksiyonu tamamladığımıza göre, artık onları günlük olarak izleyeceğiz.

Bu nedenle her sabah onları tartacağız ve klinik EAE belirtileri açısından günde iki kez kontrol edeceğiz. Belirtiler ortaya çıktığında size göstereceğim üzere, ilk işaretler kuyrukta gelişen flaksidite (gevşeklik) olacak ve bu belirtilerin ilk farelerde enjeksiyondan sonraki yedinci veya sekizinci gün civarında görülmesini bekliyoruz. Farelerin çoğu 10. ile 12. günler arasında hastalanacak ve en geç hastalanan fareler ise 15. ile 17. günler civarında belirti gösterecektir.

Omurilik emülsiyonu ile kalpleri immünize ettikten sonra şu an 13. gündeyiz ve şimdi bu hayvanların klinik skorlarını kontrol etmek için onları gözlemleyeceğim. Ancak bunu yapmadan önce, hayvanlarımızı nasıl barındırdığımızı size tanıtayım. Otoimmün hastalıklarda, hayvanda bulunan herhangi bir patojenin otoimmün yanıtı azaltacağı karakteristik bir durum söz konusudur.

Bu durumu maksimum düzeyde önlemek için sıçanlarımızı özel koşullarda barındırıyoruz. Filtrelenmiş havaya sahip ve pozitif basınç altında olan bu bölmede, hayvanlar otoklavlanmış kafeslerde tutulmaktadır. Dolayısıyla, sıçanı yerleştirmeden önce kafesteki her şey kesinlikle otoklavlanmıştır.

Kafeslerin üst kısımlarında filtreler bulunmaktadır. Yem olarak standart kemirgen yemi kullanılmaktadır. Bunlar orijinaldir.

Sıçanlarımıza ayrıca asitlendirilmiş su veriyoruz. Standart protokolleri takip ederek normal içme suyuna hidroklorik asit ekliyoruz ve otoimmün yanıtımızın bozulma riskini azaltmak için bağırsak florasını minimumda tutmak amacıyla asitlendirilmiş sular kullanıyoruz. Artık sıçanlarımın klinik skorlamasını yapmaya hazırım.

Puanlama, klinik belirtilerin olmadığı sıfır puandan, hayvanların sakrifiye edildiği morbid bir durum olan altı puana kadar değişmektedir. Şimdi, bu modelde rastlayabileceğimiz her bir klinik puan için örnekler göstererek sizi adım adım yönlendireceğim. Şu an, sıçanların UCAE ile immünizasyonundan sonraki 13. gündeyiz.

Ve bu kafeste henüz hastalanmamış iki sıçanım var. Dolayısıyla hiçbir klinik belirti göstermiyorlar. Yani her iki sıçan da hâlâ sağlıklı.

Etrafta koşuşturuyorlar ve gördüğünüz üzere, hareket ettiklerinde kuyruklarını altlığın üzerinden kaldırıyorlar. Bu nedenle bazen kuyruklarının kurumasına izin veriyorlar, ancak çoğu zaman kuyruklarını altlıktan kaldırmaya çalışıyorlar. Ayrıca fırsat bulduklarında kafesten dışarı tırmanıyorlar; bu da dört uzuvlarının tamamı üzerinde tam kontrole sahip olduklarını ve gerektiğinde ayağa kalkabildiklerini gösteriyor.

Böylece, EA'nın ilk klinik belirtisi kuyrukta gevşemedir. Dolayısıyla, bir sıçaganı tutup parmağımı kuyruğuna bastırdığımda, sıçagan kuyruk ucuyla tutunma eğilimi gösterecektir. Az önce gördüğünüz gibi, bu sıçaganda kuyruk gevşemesi yok ve bunu diğerinde de deneyebilirim.

Kuyruk parmağı yakalıyor, bu da söz konusu farelerin tam reaktif bir kuyruğa sahip olduğu anlamına gelir. Klinik skorları sıfırdır, yani aslında hiç EAE yoktur. İşte burada klinik skoru 0,5 olan bir fare var.

Böylece, sadece kafesteyken baktığınızda tamamen normal davranıyor; etrafta koşuyor, kafesin kenarlarına tırmanıyor, ancak kuyruğunun ucu asla altlığın üzerinden kalkmıyor. Bu sıçan, kısmi bir kuyruk felcine sahip olabilir. Bu durumda yaptığım şey, sıçanı tutup aynı testi uygulamaktır ve kuyrukta bir miktar tonus olmasına rağmen, uç kısmı parmağımda tamamen kıvrılmıyor.

Bu nedenle, kısmi gevşek kuyruk anlamına gelen 1,5 puanı vereceğim. Klinik olarak 1 puan, kuyruğun tamamen gevşek olmasıyla karakterizedir; yani kuyruğun hiçbir kısmında tonus yoktur, ancak sıçan hala arka bacaklarını kullanabilir. Gördüğünüz gibi, bu sıçan kafesin kenarına yaslanarak ayakta duruyor, bu da arka bacaklarının normal şekilde çalıştığını gösteriyor.

Ancak, bu sıçanları kaldırıp kuyruklarını kontrol ettiğimde, kuyruklarında kesinlikle hiç tonus yoktur. Yapabileceğiniz bir başka test ise, RU kafesin tabanındayken, eğer kuyruğu normal bir ru ile kaldırırsanız, kuyruk yavaşça aşağı inecek veya skor puanı bir olan RU ile yere bile ulaşmayacaktır. Eğer kuyruğu kaldırırsanız, anında yere düşecektir.

Buradaki RU'nun dört uzvunu da hareket ettirebildiği görülmektedir, ancak arka üyeler bu RU'nun ayağa kalkmasını sağlayamayacak kadar zayıftır. Bu nedenle, bu RU'yu iki klinik skorla sınıflandıracağım. Dolayısıyla, bir ve iki skor arasındaki temel fark, bir skorun yalnızca sarkık bir kuyruk olmasıdır.

Arka bacaklar tam işlevseldir ve üç puanlık bir skorla sıçan yan tarafına düşer. İki puan ara değerdir; dolayısıyla sıçan arka kısmını, yani arka bacaklarını kullanabilir, ancak bunlar normal bir sıçaninkinden çok daha zayıftır. Bu nedenle, bu sıçan EAE'nin sıra dışı bir özelliğine sahiptir.

Normalde EAE, yükselen bir flaksid paralizi ile karakterize edilir ancak bu örnekte olduğu gibi oldukça nadir görülen bazı durumlarda, sıçanlarda arka üyeler felç olmadan önce ön üyelerde paralizi gelişir. Bu sıçan için durum budur. Dikkatle bakıldığında, sıçanın başı vücudunun geri kalanından daha aşağıdadır çünkü ön üyelerinde zorluk yaşamaktadır ve kafesin kenarına tırmanamamaktadır.

Arka ekstremiteleri normal çalışıyor olsa da, ön ekstremiteleriyle itiş yapamıyor. Bu nedenle, bu sıçana hafif paraliziye karşılık gelen iki puan vermeye devam ederim; ancak normalde bu RU'da bunu arka ekstremitelerde görürüz, burada ise dört ekstremitede de görüyoruz. Dolayısıyla bu RU, öncekilere göre çok daha şiddetli bir fenotipe sahip.

Klinik skoru üçtür. Size göstereceğim üzere, ön ekstremiteler tamamen normal işlemektedir ancak iki arka ekstremitede orta derecede parezi mevcuttur. Dolayısıyla, her iki arka ekstremite de RU tarafından hareket etmek için kullanılabilmektedir, fakat RU yan tarafa doğru düşmekte ve bu bacakları tam olarak kontrol edememektedir.

Bu sporlar, EE olmadan normalde olacaklarından çok daha zayıf hale geliyorlar. Ve bu aşamada, kuyrukta gevşeme olmasıyla artık ilgilenmiyoruz çünkü bu farelerin çoğu bir süre sonra çok sert, tel benzeri bir kuyruğa sahip olmaya başlar. Bu farenin kuyruğu hâlâ çok gevşek, ancak bazen bazı distoniler görülebilir. Böylece kuyruk koordinasyonsuz bir şekilde hareket etmeye başlar.

Bu seviyede artık kuyruğa bakmıyoruz, sadece ekstremitelerin nasıl çalıştığına bakıyoruz. Bunu 3,5 olarak puanlıyoruz çünkü arka ekstremitelerine baktığımızda, biri hareket ediyor ancak diğeri tamamen felçli ve farelerin ileriye doğru hareketine hiçbir şekilde yardımcı olmuyor. Bu durum, bir arka ekstremitenin tam felci olarak kabul edilir ve bu nedenle puanı 3,5'tur.

Bu RU'nun klinik skoru dörttür, bu da arka hatta tam paralizi anlamına gelir ve arka bacaklarını hareket ettirememesiyle karakterizedir. Bu kafesteki sıçanın klinik skoru beştir, bu da inkontinansa ek olarak arka hatta tam paraliziye karşılık gelir. Gördüğümüz gibi bu hayvan inkontinanttır, bu bölgede tamamen ıslaktır; bunu inkontinant olmayan diğer hayvanlarda görmüyoruz.

HUS skorları üç veya daha fazla olduğunda, suya erişebildiklerinden emin olmak için onlara uzun emici tüplü su şişeleri veririz. Ayrıca kafesin tabanına yem koyarız ve onlara jel paketleri de veririz. Tüm bunlara rağmen, sıçanları izlemek için günde iki kez çıkardığımız her seferyinde, gün içinde yeterli suya erişememiş olma ihtimaline karşı onlara her zaman su sunarız.

Burada klinik skoru dört olan bir sıçanım var. Bu aşamada, bu hayvanların yemek yemeleri için biraz teşvik edilmeleri gerekir. Bu nedenle, çiğnemelerini çok daha kolaylaştırmak için yemeklerini ıslatıyorum.

Böylece son iki hafta boyunca, DA sıçanlarında kronik nükseden EAE'yi nasıl indükleyeceğinizi ve izleyeceğinizi gösterdim. İlk adımda, spinal kord immersiyonunun nasıl hazırlanacağını ve ardından bunun sıçanların kuyruk tabanına nasıl enjekte edileceğini gösterdim. Bugün ise, bu sıçanların farklı hastalık seviyelerine göre nasıl skorlanacağını gösterdim.

Elbette, bu kronik relapslı bir model olduğu için sıçanların skorlarının dalgalanmasını bekliyoruz. Hastalık birkaç gün içinde remisyona girecek ve zamanla nüksedecektir. Bazı sıçanlar hastalığın daha kronik bir evresine girecektir.

Bu durum hayvandan hayvana farklılık gösterecektir. Şimdi, bu videoyu bitirmeden önce, bu modellerde ilaçların test edilmesiyle ilgili bir noktanın altını çizmek istiyorum. En önemli husus, hayvanların mümkün olduğunca iyi bir şekilde randomize edilmesidir.

Bilinmesi gereken çok önemli bir husus, hayvan ne kadar erken hastalanırsa hastalığın o kadar şiddetli seyretmesidir. Bu nedenle, tüm kontrol hayvanlarını ilk günde, tedavi edilen hayvanları ise sonraki birkaç günde gruplandırmak istemezsiniz. Bizim yaptığımız ise, bir hayvan hastalandığı ve tedaviyi başlatmak istediğimiz gün, hayvanları rastgele iki farklı gruba ayırmaktır.

Örneğin, bir kontrol ve bir işlem görmüş grubumuz varsa; birinci kalp kontrol grubuna, ikincisi işlem görmüş gruba yerleştirilecek ve tüm hayvanlar kendi gruplarına yerleştirilene kadar bu şekilde devam edilecektir. Ancak bu randomizasyonun protokolün mümkün olan en erken aşamasında gerçekleştiğinden emin oluruz. Umarım bu video sizin için faydalı olmuştur ve D sıçanlarda kronik relapsing EAE'yi indükleyebilecek ve izleyebileceksiniz.

Deneylerinizde başarılar dileriz.