Name: Lenfosit Silahların Yayılmasının Önlenmesi Monitör Carboxyfluorescein diasetat Succinimidyl Ester (KAKE) Kullanımı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-12T17:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 10 s
Description: Öğrenin fare lenfositlerini CFSE ile etiketleme yöntemini ve akış sitometrisiyle hücre bölünmesini izleme tekniğini. Bu protokol T hücresi yanıtlarını ve bağışıklık araştırmalarını geliştirmek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu yazıda, Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi (NHMRC), Avustralya Programı Hibe (CRP) ve NHMRC Projesi Hibe (CRP ve BJCQ) tarafından desteklenmiştir. Ayrıca BJCQ NHMRC Peter Doherty doktora sonrası çalışmalarını yürütüyor.

1) Reaktif Kurulum 1.1) KAKE stok solüsyonu KAKE boya genellikle 25 mg flakon carboxyfluorescein diasetat succinimidyl ester (CFDA, SE) (MW 557,47 g / mol) olarak satın alınmaktadır. (-20 ° C'de birkaç ay için 50-100 mcL alikotları olarak saklamak) 5 mM nihai bir stok solüsyonu için 8.96 mL DMSO 25 mg çözülür. Depolama sırasında bu tür bir poz kaçınılmalıdır kritik böylece CFDA, SE, sulu çözelti ile reaksiyona girer. 1.2) Lenfositler Farelerin dalak ve lenf düğümleri ile 1 ml kültür ortamı (örneğin RPMI) lenfositlerin yalıtın ve tekrar süspansiyon arasında 0.5 x 10 6 hücre konsantrasyonu ile fetal buzağı serumu (FCS), - 10% 5 ısı ile inaktive edilmiş (HI) x 10 7 / ml. 2) KAKE Etiketleme 2.1) Rutin yöntemi: <ol class="lalpha"><li> Dikkatlice taze (ıslatılmış) 10 ml konik tüp alt, orta ve yerin 1 ml hacmi iyice hücreleri tekrar süspansiyon haline getirin. </li><li> (Islak olmayan bir tüp kullanarak hareketli ve erken CFDA, GD çözümler ile karıştırılarak 1 ml hücre süspansiyonu önleyecektir) tüp yatay yatırın. </li><li> Hücre çözümü ile temas yapmaz sağlanması tüpün üstündeki plastik olmayan ıslak kısmını dikkatlice PBS 110 mcL ekleyin. </li><li> 110 mcL PBS CFDA, GD, 5 mM stokunun 1.1 mcL tekrar </li><li> Hızla tüp kapağı ve çözümleri hızlı üniforma karıştırma almak için de ters ve vorteks. KAKE boya 5 mcM son bir konsantrasyonda olduğunu unutmayın, ancak, optimum konsantrasyonda hazırlanan her parti için belirlenecek, ve ardından etkili olduğundan emin olmak için her 6 ayda bir kontrol. </li><li> Hücrelerin oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin. CFDA, SE KAKE dönüştürülmesi üzerine (tartışma) boya, floresan ve böylece aşırı ışığa maruz tarafından beyazlatma eğilimli hale gelir. Bu nedenle, örneğin, alüminyum folyo ile kaplayıp, bu noktadan itibaren tüp ışıktan korumak için tavsiye edilir. </li><li> Hücreleri, 20 ° C ve süpernatant atarak 5 dakika boyunca 300 xg'de santrifüj yoluyla sedimenting, 20 ° C PBS% 5 HI FCS içeren 10 ciltlik seyreltilmesi ile yıkayın. Iki kez daha yıkayın tekrarlayın. </li></ol> (10 daha yüksek hücre sayıları için de uygun olan 2.2) Alternatif yöntem, 30 x 10 7) : <ol class="lalpha"><li> 5 mM stok 2 mcL 1 PBS ml ve 1 ml tamamen yeniden süspanse hücrelerin hızlı bir şekilde bu eklentiyi ekleyerek 2 x CFDA (10 mcM), GD çözüm hazırlayın, sonra hızlı bir şekilde tüpün kapağı ve ters ve vorteks almak hızlı üniforma karıştırma. </li><li> Hücrelerin oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin ve adımları 2.1 (f) ve 2.1 (g) olarak yıkayın. </li></ol> 2.3) Hücreler daha sonra hücre bölünmesi indüksiyonu için bir ilgi protokolü uygulanabilir. Etiketli hücreleri hem de in vitro ve in vivo testleri kullanılabilir. 2.4) yayılması testin bitiminde, hücre hasat ve flow sitometri ile analiz (temsili örnekler için aşağıya bakınız). 3) Temsilci Sonuçlar KAKE seyreltme lenfosit proliferasyonunu değerlendirmek için, bölünmemiş hücrelerinin (yani maksimum floresans) ve olmayan etiketli hücreleri (yani en az floresan) floresan bilmek yararlıdır. Bu nedenle, deney tasarımı, bu kontroller dikkate almalıdır. Aşağıda, in vitro ve in vivo deneylerde flow sitometri CD8 + T hücre bölünmesi ölçmek için KAKE kullanarak örnekler. 3.1 in vitro stimülasyon) Şekil 1 KAKE profilleri gösterir KAKE-etiketli ovalbumin (OVA)-spesifik T hücre reseptörü transgenik OVA çeşitli miktarlarda darbeli dendritik hücreler ile 3 gün kültür sonra CD8 + OT-T hücreleri. CD8 + T hücreleri OT-I farelerin dalak ve lenf düğümleri arınmış KAKE ve 3.3 x 10 4 DC kültürlü 1 x 10 5 hücreleri ile etiketlenir. DC 37 ° C 1 saat için OVA ile darbeli ve kültüre önce iki kez yıkanır. 3 gün sonra, hasat ve etiketli anti-CD8-APC antikorlar ve Hoechst 33.258 ve daha sonra analiz flow sitometri (50.000 olaylar toplanan) hücreler. Live (Hoechst 33.258 -) CD8 + hücreler gösterilmiştir. Etiketli hücre hücre ve sınırlarını tespit hücre bölünmeleri floresan otomatik gösterirken, kontrol grubu olarak, tek başına kültür CD8 + T hücreleri, olmayan bölünen hücrelerden KAKE yoğunluğunu gösterir. 4 KAKE doruklarına, bu örnekte, paneller her hücreleri 3 bölümler uğramadığını belirten görülebilir olduğunu unutmayın. 3.2 in vivo stimülasyon) Şekil 2 transgenik CD8 + OT-T hücrelerinin in vivo olarak 3 gün sonra KAKE etiketli OVA-spesifik T hücre reseptör KAKE profilleri gösterir In 20 mg OVA varlığı. CD8 + T hücreleri CD45.1 congenic OT-I farelerin dalak ve lenf düğümleri arınmış KAKE ve 5 x 10 6 hücre içine iv enjekte C56BL/6J lateral kuyruk ven (CD45.2 +), farelerde ile etiketlenir . , 2 saat fareler sonra 20 mg OVA iv enjekte edildi. 3 gün sonra fareler dalak, anti-B220-PerCP anti-CD8-APC-Cy7 ve anti-CD45.1-PE-Cy7 antikorlar ve Hoechst 33.258 ile etiketlenmiş, bir tek hücre süspansiyonu haline getirilmiş, toplanan ve daha sonra analiz edildi flow sitometri (1.000.000 olaylar toplanan). Live (Hoechst 33.258 -) B220-hücreleri sağ panelde gösterilen sol paneli ve kapılı CD8 + CD45.1 + hücreler gösterilmiştir. Kontrol grubu olarak, unstimulated CD8 KAKE etiketli + T hücreleri, bölünen hücrelerden KAKE yoğunluğunu gösterir olmayan etiketli hücreleri, hücreler ve sınırlarını tespit hücre bölünmeleri otomatik floresan gösterir. CD45 allotypic fark devredilen konak çözme CD8 + T hücreleri, toplam CD8 + T hücreleri (sol panel) küçük bir alt kümesi olarak hayati olduğunu unutmayın. En hücreler hücreleri 6 bölünmelere uğramadığını belirterek, bu örnek (sağ panel) 7 KAKE doruklarına giren unutmayın. <img src="/files/ftp_upload/2259/2259fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. KAKE-işaretli ovalbumin (OVA)-spesifik T hücre reseptör transgenik CD8 Not OVA, farklı konsantrasyonları ile darbeli DC in vitro cevap için + OT-I T hücreleri,, 3 gün kültür sonra gösterilen veriler. CD8 olmayan-bölünmüş nüfus + T yeteneği antijen (açık gri histogram) ve oto-floresan etiketli olmayan nüfus (koyu gri histogram) yokluğunda hücre. Şekil gösteriyor CD8 + T hücreleri, T hücreleri yüksek antijen konsantrasyonlarda bölünmesi, KAKE seyreltme doruklarına göre 1-3 kez bölünmüş var. <img src="/files/ftp_upload/2259/2259fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Yeteneği KAKE-işaretli ovalbumin (OVA)-özel adoptively OVA için cevap C57BL / 6 farelerinde içine transfer T hücre reseptör transgenik CD8 + OT-I T hücreleri,, evlatlık transferi sonrası 3 gün gösterilen veri Sol paneli:. CD8 +, CD45. alıcı farelerde 1 + OT-1 T hücreleri. Sağ panel: KAKE çoğalması profili. Not CD8 olmayan bölünmüş nüfus + alıcı farelerde T hücreleri antijen (açık gri histogram) ve otomatik olmayan etiketli lenfositleri (koyu gri histogram) floresan almıyor. Şekil KAKE seyreltme doruklarına göre 1-6 kez bölünmüş CD8 + T hücreleri gösteriyor. <img src="/files/ftp_upload/2259/2259fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Tartışma metin carboxyfluorescein diasetat succinimidyl ester (CFDA, SE) ile hücrelerin etiketleme sırasında meydana gelen çeşitli moleküler olayların bir temsili. Süreçle ilgili ayrıntılar için bkz. Not: genel kısaltma 'KAKE' değil, CFDA, SE, genel etiketleme reaktif ve etiketleme işlemi tanımlamak için kullanılır. Parish 4 dayalı Şekil.

<ol><li>Lyons, A. B., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+lymphocyte+division+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Determination of lymphocyte division by flow cytometry.</a> J. Immunol. Methods. 171, 131-137 (1994).</li>
<li>Parish, C. R., Glidden, M. H., Quah, B. J., Warren, H. S. Use of the intracellular fluorescent dye CFSE to monitor lymphocyte migration and proliferation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aParish%2C+CR+%22Current+protocols+in+immunology%22">Current protocols in immunology</a>. Coligan, J. E. , (2009).</li>
<li>Quah, B. J., Warren, H. S., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+lymphocyte+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+with+the+intracellular+fluorescent+dye+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Monitoring lymphocyte proliferation in vitro and in vivo with the intracellular fluorescent dye carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester.</a> Nature Protocols. 2, 2049-2056 (2007).</li>
<li>Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+dyes+for+lymphocyte+migration+and+proliferation+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Fluorescent dyes for lymphocyte migration and proliferation studies.</a> Immunol Cell Biol. 77, 499-508 (1999).</li>
</ol>

KAKE çalıştığını ve neden hızlı üniforma etiketleme çoğalması analizinde kullanılmak üzere gerekli nasıl takdir için, KAKE hücre etiketleme moleküler temelini anlamak için yararlıdır. Bu iki faz, 1) Hücre giriş ve 2) Protein etiketleme (Şekil 3) ayrılabilir. 1) Hücre giriş: Giriş hücre boya boya diacetylated formu, carboxyfluorescein diasetat succinimidyl ester (CFDA, SE) aracılığı ile. Asetatlar plazma zarından hızlı akı sağlayan boya yüksek membran permeant olun. Böylece hücre içinde bulunan esterazlar, böylece tutunmaya CFDA, SE asetatlar ve daha az membran permeant boya KAKE formu doğuran, hücre içinde konsantre boya. 2) Protein etiketleme: CFDA, SE ve KAKE hem de amino-reaktif succinimidyl yan zincirler olmasına rağmen, sadece KAKE floresan. KAKE yüksek hücre içi konsantrasyonu hızlı ve proteinlerin yüksek düzeyde hücre içi etiketleme kolaylaştırır. Hücre KAKE etiketleme temsilcisi sonuçları (Şekil 1 ve 2) &#39;de gösterildiği gibi birçok bölünmeler geçiren hücreler çözmek için kritik hücre etiketli homojen bir nüfus, elde etmek için hızlı bir şekilde yapılmalıdır.

<table><tbody><tr><td>CFDA,SE</td><td>Molecular Probes, Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Cambridge Isotope Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lenfositler</td><td>örneğin fare veya insan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>SAFC Global</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-15ml konik tüpler</td><td>Falcon BD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alüminyum folyo</td><td>Capral Aluminium</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vorteks</td><td>Scientific Industries Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Akış sitometresi</td><td>BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

lenfosit silahların yayılmasının Önlenmesi monitör carboxyfluorescein diasetat succinimidyl ester (kake) kullanımı

The Use of Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester (CFSE) to Monitor Lymphocyte Proliferation

Carboxyfluorescein succinimidyl ester (KAKE) lenfosit bölümü 1-3 izlemek için etkili ve popüler bir araç . KAKE kovalent, floresan boya, carboxyfluorescein uzun ömürlü hücre içi moleküller etiketler. Böylece KAKE etiketli hücre bölünürken, onun nesillerinde carboxyfluorescein etiketli moleküllerinin yarısı numarası ile donatılmış ve böylece her bir hücre bölünmesi, Flow sitometri ile hücre floresan karşılık gelen azalma ölçerek tespit edilebilir. Düşük hücre toksisite ile birleştiğinde son derece düşük varyansın yüksek bir floresan yoğunluğu ile lenfosit toplulukları, etiket için KAKE kapasitesi, hücre bölünmesi ölçmek için ideal bir boya olun. Floresein bazlı boya olduğundan, aynı zamanda çok renkli akış sitometri uygulanabilir hale fluorochromes geniş bir yelpazesi ile uyumludur. Bu makale, genellikle fare lenfositler 8 hücre bölünmeleri kadar izleme amaçlı etiketlenmesi için kullanılan prosedürler açıklanmaktadır. Bu etiketli hücreleri in vitro ve in vivo çalışmalar için de kullanılabilir.

KAKE kovalent, floresan boya, carboxyfluorescein uzun ömürlü hücre içi moleküller etiketler. Gibi KAKE etiketli hücre böler, döl ve böylece hücre bölünmesini değerlendirmek için kullanılan floresan yarısı miktarı, var. Bu makalede, tipik olarak KAKE fare lenfositler etiketlenmesi için kullanılan prosedürler açıklanmaktadır.

Lenfosit Silahların Yayılmasının Önlenmesi Monitör Carboxyfluorescein diasetat Succinimidyl Ester (KAKE) Kullanımı

Karboksi floresein süksinimidil ester (CFSE), lenfosit bölünmesini izlemek için etkili ve yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir1-3. CFSE, uzun ömürlü ...'ları kovalent olarak işaretler

Bu deneyin genel amacı, lenfositleri hücre içi floresan boya olan CFSE ile işaretleyerek, hücre bölünmelerinin akış sitometrisi ile izlenebilmesini sağlamaktır. Bu işlem, lenfositlerin CFSE'nin diasetil formu olan CFDA se ile karıştırılmasıyla gerçekleştirilir. İki asetil grubu, boyanın lenfositlerdeki hücrelere hızla girmesine olanak tanır.Esterazlar, C-F-D-A-S-E'den asetil gruplarını uzaklaştırarak boyanın CFSE formunu oluşturur. Asetil grupları olmadan CFSE floresan hale gelir ve aynı zamanda membran geçirgenliği azalır, böylece boya hücrelerin içinde yoğunlaşır. CFSE'nin amino reaktif AL yan zinciri daha sonra boyayı hücre içi proteinlere kovalent olarak bağlar ve böylece hücrelerin neredeyse kalıcı olarak floresan olmasını sağlar.CFSE, yavru hücrelerin floresan yoğunluğunun ardışık olarak azalmasına dayanarak lenfosit bölünmesini izlemek için kullanılabilir. Bu tekniğin, tritiyasyonlu timidin inklüzyonu gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, tekil hücrelerin hücre bölünmesi açısından izlenebilmesidir. Hücreleri etiketlemek amacıyla yapılacak prosedür, laboratuvarımdan araştırma görevlisi Ben Qua tarafından gösterilecektir.Farelerin dalak veya lenf düğümlerinden yeni izole edilmiş lenfositlerle başlayın ve %5 ısı ile inaktive edilmiş fetal dana serumu ile desteklenmiş kültür ortamının mililitresi başına 0,5 ile 10 milyon hücre arasında bir konsantrasyon ekleyin, hücreleri tamamen süspande edin ve bir mililitresini dikkatlice yeni bir 10 mililitrelik konik tüpün dibine aktarın. Tüpü dikkatlice yatay konuma getirin.Tüpün plastiğinin ıslanmamış üst kısmına, hücre çözeltisiyle temas etmediğinden emin olarak 110 µL PBS ekleyin. 110 µL PBS'ye, 5 mM stok C-F-D-A-S-E'den 1,1 µL taze boya çözeltisi ekleyin. Boya floresan hale geldiği için solmaya meyillidir; bu nedenle çözeltilerin hızlı ve homojen bir şekilde karışması için tüpün kapağını hızla kapatın, ters çevirin ve iyice vorteksleyin.Tüpü alüminyum folyo ile sararak ışıktan koruyun. Hücreleri oda sıcaklığında beş dakika inkübe edin; hücreleri %5 H-I-F-C-S içeren 20 °C'deki PBS'nin 10 hacminde seyrelterek yıkayın, 20 °C'de 300 Gs ile beş dakika santrifüjleyerek çöktürün ve süpernatantı uzaklaştırın. Yıkama işlemini iki kez daha tekrarlayın.Hücreler daha sonra hücre bölünmesini indüklemek için ilgili bir protokole tabi tutulabilir. İşaretlenmiş hücreler hem in vitro hem de in vivo analizlerde kullanılabilir. Proliferasyon analizi tamamlandığında, hücreler hasat edilir ve akış sitometrisi ile analiz edilir.Bu örnekte, genetiği değiştirilmiş transgenik farelerden alınan T hücrelerinin, farklı konsantrasyonlarda antijenle yüklenmiş dendritik hücrelere nasıl yanıt verdiğini ölçmek için in vitro CFSE etiketlemesi kullanılmıştır. Gölgelenmemiş CFSE dilüsyon pikleri, bir ila üç kez bölünmüş olan transgenik CD eight pozitif T hücrelerini göstermektedir. Antijen konsantrasyonu arttıkça daha fazla T hücresinin bölündüğü görülmektedir.CFSE etiketleme yöntemi, adoptif transfer deneyleri gibi in vivo analizler için de uygundur. Burada, alıcı farelerde ilgi duyulan T hücresi popülasyonunu tanımlamak için faks kullanılır. Ardındanki CFSE proliferasyon profili, gelişimi sonrası CFSE dilüsyon piklerine dayanarak bir ila altı kez bölünmüş CD eight pozitif T hücrelerini betimlemektedir.Bu prosedür, araştırmacıların ve immünolojinin bir bağışıklık yanıtı sırasında lenfosit proliferasyonunu incelemesinin önünü açmıştır.

the-use-carboxyfluorescein-diacetate-succinimidyl-ester-cfse-to

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Birçok enfeksiyonları güçlü bir CTL yanıtı ortaya çıkarmak, fakat bazen yanıt hücrelerinin miktarı patojenin kontrol etmek için orantılı...

Antijen Özgül In Vivo</emKAKE Etiketli Hedef Hücreler> Killing Testi

Bu video protokol hücre bölünmesi sıklığına göre insan glioblastoma hücreleri farklı alt-popülasyonlarının belirlenmesi ve ayrılması için floresan boya carboxyfluorescein sukkinimidil ester (KAKE) uygulamasını gösterir.

Karboksi Flöresein sukkinimidil ester (KAKE) Kullanarak İnsan Glioblastoma Yavaş-bölme Hücreleri Tanımlama ve İzolasyonu

Video, sitotoksik T lenfositlerinde veya CTL yanıtlarında immünodominansı test etmek için akış sitometrisi tabanlı bir testi göstermektedir. Enjekte edilen floresan hedef hücreler, immünojenik epitoplara karşılık gelen değişen floresan sergiler. Dalak sonrası toplama ve sınıflandırma, yüksek yoğunluklu floresan hücrelerde bir azalma olduğunu ortaya koyarak CTL yanıtlarında immünodominansı doğrular.

Sitotoksik T Lenfosit Yanıtlarında İmmün Baskınlığı Değerlendirmek İçin Bir Test

Bu video, mezenkimal kök hücrelerin (MSC'ler) efektör T hücresi proliferasyonu üzerindeki immünomodülatör etkisini araştırmak için bir in vitro testi göstermektedir. Test, monosit popülasyonunu immünomodülatör bir fenotip kazanmaya teşvik etmek için MSC'lerin PBMC'lerle birlikte kültürlenmesini içerir ve bu da interlökin-10'un (IL-10) salgılanmasına yol açar. Aktive edilmiş CD4 + T hücreleri ile inkübasyonun ardından, indüklenen monositler T hücresi proliferasyonunu etkili bir şekilde baskılar.

Monositlerin Lökosit Proliferasyonu Üzerindeki İmmünomodülatör Etkisini Değerlendirmek İçin Bir İn Vitro Test

In vivo ayrıntılı olarak T hücresi tepkilerini izlemek için yeteneği, bağışıklık tepkisinin anlamamıza geliştirilmesi için önemlidir. Burada akış sitometresi ile eş zamanlı olarak&gt; 250 parametrelerini değerlendiren bir in vivo T hücresi tahlilinde floresan hedef diziler (STA) kullanımını tarif eder.

T hücre yanıtlarının Değerlendirme Floresan hedef Dizilerin Kullanımı<em&gt; In vivo</em

Makrofajlar hematopoietik sistemin koruyucu immünite ve homeostazda önemli bir role sahip plastik hücrelerdir. Bu raporda, tolerogenik koşullar altında nakledilen organda biriken greft infiltrasyon düzenleyici makrofajları fenotipik ve fonksiyonel olarak karakterize eden optimize in vitro teknikler açıklanmaktadır.

Greft Reaktif Bağışıklığı Engelleyen Düzenleyici Makrofajların Fonksiyonel Karakterizasyonu

Lenfositler, adaptif immün yanıtlarda ana oyunculardır. Burada, in vitro ve in vivo lenfosit aktivasyonunda istenen moleküllerin fizyolojik fonksiyonlarını belirlemek için bir lenfosit saflaştırma protokolü sunuyoruz. Açıklanan deneysel prosedürler, kontrol ve genetik olarak değiştirilmiş lenfositler arasındaki fonksiyonel kapasiteleri karşılaştırmak için uygundur.

İzolasyon ve murin lenfositlerin aktivasyonu

Göz dolaşımındaki etiketli kan hücrelerinin canlı hücre görüntülemesi, diyabetik retinopati ve yaşla ilişkili maküler dejenerasyonda inflamasyon ve iskemi hakkında bilgi sağlayabilir. Kan hücrelerini etiketlemek ve retinal dolaşımda etiketli hücreleri imal etmek için bir protokol tarif edilmiştir.

Fare Retinal Sirkülasyonunda Akış Dinamikleri Çalışmak İçin Eritrositler ve Lökositlerin Floresan Boya Etiketlenmesi

Burada sunulan bir protokol Proliferasyona CD4+ T hücreleri antijenik proteinler veya peptidler boya seyreltme kullanarak yanıt olarak. Bu tahlil nadir antijen özgü T hücrelere özellikle duyarlıdır ve antijen özgü hücrelerin klonlama kolaylaştırmak için değiştirilebilir.

Proliferasyon ınsan antijeni spesifik CD4+ T hücrelerinin Karboksflorcein Succinimidyl Ester kullanarak ölçülmesini

Tek tümör antijenini hedefleyen kimerik antijen reseptörü (CAR) eksprese eden Jurkat hücreleri tarafından kantitatif tümör hücresi öldürmesini değerlendirmek için bir protokol. Bu protokol, periferik kandan türetilen T hücrelerinde onaylanmadan önce CAR menteşe yapılarının hızlı optimizasyonu için bir tarama platformu olarak kullanılabilir.

Floresan Görüntüleme Kullanılarak Jurkat Eksprese Eden Kimerik Antijen Reseptörünün Hızlı İn Vitro Sitotoksisite Değerlendirmesi

Öğrenin fare lenfositlerini CFSE ile etiketleme yöntemini ve akış sitometrisiyle hücre bölünmesini izleme tekniğini. Bu protokol T hücresi yanıtlarını ve bağışıklık araştırmalarını geliştirmek için kullanılır.

Lenfosit Silahların Yayılmasının Önlenmesi Monitör Carboxyfluorescein diasetat Succinimidyl Ester (KAKE) Kullanımı

Daha fazla video keşfet