Name: Sıçanlarda Meme Bezi Morfolojisi ve Meme Kanseri Riski değişiklikler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-16T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: Öğrenin sıçanlarda meme bezi diseksiyonu ve tam preparat analizi ile meme kanseri riskini morfolojik olarak değerlendirme yöntemini. Bu teknik erken yaşam diyet değişikliklerinin etkisini incelemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

NCI (U54 CA00100970), NCI (1 R03 CA150040-01), ACS (116.602-PF-09-018-01-CNE)

1. Karın Meme Bezi kaldırılması ve Tüm Dağı hazırlanması <ol><li> IACUC kurallarına göre hayvan Euthanize. , Iğneler, veya bant bacakları ile yüzey tahta üzerine ayakları hayvan sırtında Pin, ve etanol (EtOH) ile ıslak cilde silin. Cilt forseps ile biraz kaldırın ve keskin bir makas, boyun doğru çift # 5 meme ve kesme arasında başlayan deri içine bir orta hat kesi ile. Arka ayakları doğru orta hatta ters bir Y kesi olun. Torasik meme bezlerinde toplanan de varsa, orta hat # 2 meme ön ayakları doğru çifti arasında da bir Y kesi olun. </li><li> Cilt, karın # 4 meme bezi maruz ters Y kesi bir tarafta makas açık teşrih; meme bezlerinin cilde bağlı. Bezi tamamen açığa çıkarmak için, cilt yüzeyinde tahta üzerine iğne ile sabitleyin. Zamanda bir yan ve bez çalışın. </li><li> Meme yakın proksimal alandan başlayan ve hayvan omurga doğru bezi distal sonuna doğru, keskin bir makas ve / veya bir neşter kullanılarak ya cilt ücretsiz meme bezi parçalara ayır. (Bu, özellikle eski bir sıçan birkaç dakika sürebilir.) </li><li> Hemen uygun bir şekilde etiketli cam slayt (uygun bir kalıcı marker kalem ve / veya 'elmas kalem kullanın) üzerine müstakil bezi yayılır, ve in situ orijinal boyutu ve şekli dikkatle ilgili bezi yayılır. Cam slayt bezinin daha büyük olmalıdır. Slayt üzerine bezi yayıldıktan sonra, bezi slayt üzerine yapışır, böylece bir süre için masaya oturup, ancak kuru izin vermeyin. </li><li> Slayt Carnoy Kullanıcı fiksatif (% 75 buzul asetik asit,% 25 mutlak etanol = EtOH) içeren bir kavanoza koyun, davlumbaz 2 gün veya daha uzun süre oda sıcaklığında (RT) sabit olsun izin verin. Slaytlar da daha uzun bir süre için fiksatif bırakılabilir. </li><li> Oda sıcaklığında 1 saat süreyle% 70 EtOH slaytlar yıkayın. </li><li> RT 30 dakika distile su ile durulayın. </li><li> 2 gün veya daha uzun bir süre için) * leke Carmine Şap Leke slayt arka yüzüne bakmak); (lenf düğümleri ile boyanmış olduğunu görene kadar. </li><li> EtOH artan serisi, her biri 1 saat Yıkama:% 70 -% 95 -&gt;% 100. Mutlak EtOH son yıkamadan sonra ksilen bezleri koydu. RT davlumbaz en az 2 gün bekletin. Bu son adım, meme yağ yastığı meme bezinin anlamı delipidation temizleme, ve şeffaflık sonraki artış. Yağlıdır bezinin uzun temizleme süresi gereklidir. </li><li> Permount olarak montaj medya, kapak fişleri ile monte edin. Stereo mikroskop altında gözlemleyerek önce (birkaç gün) slayt kurumasını bekleyin. * Carmine Şap Lekesi: Place 1 g karmin (Sigma C1022) ve 20 dakika için 500 ml distile su ve kaynatın 2.5 g alüminyum potasyum sülfat (Sigma A7167). Son hacim 500 ml su ile ayarlayın. Filtre ve buzdolabına kaldırın. Çözüm, birkaç ay boyunca kullanılabilir. Renk zayıf hale geldiğinde atın. </li></ol> 2. Meme Bezi Tüm Dağı Morfoloji Analizi Meme bezi bütün bağlar morfolojisi aşağıdaki uç noktaları ve meme kanseri riski ile ilişkili sonuçlar göre analiz edilir. <ol><li> Meme bezi PND 21, tüm montaj (pre-pubertal yaş): <ul><li> Epitelyal büyüme: <ul><li> Meme epitel ağacının sonuna kadar (milimetre) Uzaklık, bir cetvel kullanılarak ölçülen </li></ul></li><li> Potansiyel malign transformasyon: <ul><li> TEBS sayısı (terminal sonuna tomurcukları), bir ışık mikroskobu altında sayılır. TEBS sadece meme epitel ağacın distal ucunda bulunan büyük soğanlı yapılar </li></ul></li><li> Farklılaşma: <ul><li> AB1 (alveol tomurcuk) skoru (0-5). Alveoler tomurcukları epitel yayılmış. </li><li> AB2 skoru (0-5) </li></ul></li></ul> Wholes bağlar ışık mikroskobu altında puan. AB1 ve AB2 puan değerleri, son bir farklılaşma skor için eklenir. </li><li> Meme bezi tüm montaj toplanan PND 50 (post-pubertal yaş): <ul><li> Epitelyal büyüme: <ul><li> Lenf nodu epitel ağacının sonuna (milimetre) Mesafe, bir cetvel kullanılarak ölçüldü. </li><li> Epitel ağacın ucundan yağ yastığı sonuna kadar olan mesafe bir cetvel kullanılarak ölçüldü. </li></ul></li><li> Potansiyel malign transformasyon: <ul><li> Işık mikroskobu altında sayılır TEBS sayısı, </li></ul></li><li> Farklılaşma: <ul><li> AB1 skoru (0-5) </li><li> AB2 skoru (0-5) </li><li> Lobülleri skoru (0-5) </li></ul></li></ul> Wholes bağlar ışık mikroskobu altında puan. Farklılaşma iki şekilde de değerlendiren olacaktır. İlk olarak, AB1, AB2 ve lobülleri puan değerleri nihai bir farklılaşma puan için eklenir. Buna ek olarak, lobülleri skoru arasındaki oran ve AB1 + AB2 puanı hesaplanacaktır. ABS lobüllere farklılaştırmak ve lobüller ve ABS arasındaki oranı daha yüksek, daha farklılaşmış bir salgı bezidir. </li></ol> 3. Palpasyon ve Sıçanlar ve Meme Bezi Morfoloji Korelasyon Meme Tümör Ölçüm <ol><li> Bu yordamı başlamak için, başın arkasında ve ters aksilla altında başparmak ve ikinci parmak ile işaret parmağı, arkasına avuç içi ile tüm vücut tutarak sıçan tutun. Onun posterior yalan böylece sıçan açın ve herhangi bir meme tümörleri tespit etmek için palpe palpe edilebilir tümörler "götürü" gibi hissediyorum. </li><li> Sonraki kaliper, genişlik, uzunluk, ve yükseklik tümör ölçmek için kullanın. Elipsoid formül, Cilt = 1/6πabc, 'a' = genişlik, 'b' = uzunluk, ve 'c' = yükseklik kullanarak tümör hacmi hesaplayın </li><li> El, haftalık bazda bir dizüstü tümörün yerini ve büyüklüğünü kaydeder. Bu veriler daha sonra bir elektronik tabloya aktarılacaktır. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar Meme yağ yastığı ve wholemount işleme dikkatli diseksiyon meme bezinin kalkınmacı devlet değerlendirme sağlayacaktır. Her adımı doğru bir şekilde yapıldığında, tüm meme epitel ağacı yağ yastığı içinde açıkça görülebilir ve bu TEBS sayısı ve yoğunluğu alveoler tomurcukları ve lobülleri hesaplama kolay belirliyor. Hazırlanması wholemounts missteps tüm yağ yastığı, yetersiz sabitleme ve yetersiz takas incelemek için başarısızlık içerebilir. Meme bezi morfolojisi değerlendirilmesi meme tümörleri (TEBS), epitelyal yapılar (alveoler tomurcukları ve lobüller) farklılaşma derecesi ve büyüme ölçüsü (duktal uzama) ortaya çıkmasına neden olabilir yapılar mevcut sayısı hakkında bilgi verecektir. TEBS terminal ucuna ayrı önemlidir; ikincisi benzer TEBS epitel distal ucunda bulunan, ancak TEBS daha küçük ve habis tümörlere yol açmaz. Terminal uçları da epitel ağaç içinde görülür. <img src="/files/ftp_upload/2260/2260fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1: iyi hazırlanmış meme bezi bütün montaj Temsilcisi sonucu bezinin tüm bileşenlerini düzgün bir şekilde diseke edilmiş ve karmin boyama en uygunudur. <img src="/files/ftp_upload/2260/2260fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2: kötü hazırlanmış meme bezi bütün montaj Temsilcisi sonucu bezinin düzgün, (bezinin distal eksik) disseke olmuştur düzgün gerilmiş olmamıştır ve delipidation tamamen oluştu değil.

<ol><li>Rasmussen, S. B., Young, L. J. T., Smith, G. H. Preparing mammary gland whole mounts form mice. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRasmussen%2C+SB+%22Methods+in+Mammary+Gland+Biology+and+Breast+Cancer+Research%22">Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer Research</a>. Ip, M. M., Asch, B. B. , Kluwer Academic / Plenum Publishers. New York. 75-85 (2000).</li>
<li>Consensus statements from Mammary Gland Whole Mount Round Robin meeting. Oakland, CA, , (2009).</li>
<li>Hilakivi-Clarke, L., Clarke, R., Onojafe, I., Raygada, M., Cho, E., &amp, L. ippman, E, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+maternal+diet+high+in+n-6+polyunsaturated+fats+alters+mammary+gland+development%2C+puberty+onset%2C+and+breast+cancer+risk+among+female+rat+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">A maternal diet high in n-6 polyunsaturated fats alters mammary gland development, puberty onset, and breast cancer risk among female rat offspring.</a> Proc Natl Acad Sci. 94, 9372-9377 (1997).</li>
<li>Russo, I. H., Russo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammary+gland+neoplasia+in+long-term+rodent+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Mammary gland neoplasia in long-term rodent studies.</a> Environ. Health Perspect. 104 (9), 938-967 (1996).</li>
<li>Hilakivi-Clarke, L., de Assis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+origins+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22TRENDS+in+Endocrinol+and+Metabol%22%5BJournal%5D)">Fetal origins of breast cancer.</a> TRENDS in Endocrinol and Metabol. 17 (9), 340-348 (2006).</li>
<li>Hilakivi-Clarke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutritional+modulation+of+terminal+end+buds%3A+its+relevance+to+breast+cancer+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Cancer+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Nutritional modulation of terminal end buds: its relevance to breast cancer prevention.</a> Curr Cancer Drug Targets. 7 (4), 465-474 (2007).</li>
<li>Silva Idos, S., De Stavola, B., Mccormack, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collaborative+Group+On+Pre-Natal+Risk+Factors+And+Subsequent+Risk+Of+Breast+Cancer.+Birth+size+and+breast+cancer+risk%3A+re-analysis+of+individual+participant+data+from+32+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Collaborative Group On Pre-Natal Risk Factors And Subsequent Risk Of Breast Cancer. Birth size and breast cancer risk: re-analysis of individual participant data from 32 studies.</a> PloS Medicine. 5, e193-e193 (2008).</li>
<li>Warri, A., Saarinen, N. M., Makela, S., Hilakivi-Clarke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+early+life+genistein+exposures+in+modifying+breast+cancer+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">The role of early life genistein exposures in modifying breast cancer risk.</a> Br J Cancer. 98, 1485-1493 (2008).</li>
<li>Russo, J., Hu, Y. F., Yang, X., Russo, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental%2C+cellular%2C+and+molecular+basis+of+human+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst+Monogr%22%5BJournal%5D)">Developmental, cellular, and molecular basis of human breast cancer.</a> J Natl Cancer Inst Monogr. , 17-37 (2000).</li>
<li>Oza, A. M., Boyd, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammographic+parenchymal+patterns%3A+A+marker+of+breast+cancer+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Epidemiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Mammographic parenchymal patterns: A marker of breast cancer risk.</a> Epidemiological Reviews. 15, 196-208 (1993).</li>
</ol>

Meme bezinin morfolojik son noktaları ve epitel ağacının büyüme değerlendirilmesi, erken yaşam diyet manipülasyonlar, ya da diğer manipülasyonlar utero veya prepubertal hormonal ortamda değiştiren, daha sonra meme kanseri riskini değişiklik olmadığını tahmin etmek için kullanılabilir. Insanlarda meme kanseri, sıçanlarda TEBS benzer meme yapıları (terminal duktal lobüler birimleri, TDLUs) başlatılan olduğundan, bu tekniğin, meme kanseri riskini etkilemez hayatın erken döneminde maruz kalma potansiyeli belirlemek için kullanılır. Ayrıca, kadınlarda mamografik yoğunluğu yüksek meme kanseri riski 4-6 kat artar, meme epitel ağacının büyüme değerlendirilmesi ve mamografik yoğunluğu ve bu yoğunluk azaltan faktörleri belirlemek faktörleri belirlemek için kullanılabilir. Bu bilgileri elde etmek için, meme bezi tamamen disseke düzgün bir cam slayt tüm bileşenleri bir mikroskop altında görüntülenir böylece gergin olmalıdır. Buna ek olarak, uygun karmin boyama ve ksilen içinde delipidation, meme kanseri risk değerlendirmesi için uygun olan bütün bağlar sağlayacaktır.

<table><tbody><tr><td>Glasiyal asetik asit</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>AX0073-9</td><td>Carnoy&amp;rsquo;s Fiksatifi</td></tr><tr><td>Mutlak etanol</td><td>The Waner-Graham Co.</td><td>64-17-5</td><td>Carnoy&amp;rsquo;s Fiksatifi</td></tr><tr><td>Karmin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1022</td><td>Karmin çözeltisi</td></tr><tr><td>Alüminyum potasyum sülfat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7167</td><td>Karmin çözeltisi</td></tr></tbody></table>

sıçanlarda meme bezi morfolojisi ve meme kanseri riski değişiklikler

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

Meme kanseri gösterisi kemirgen modellerinde yapılan çalışmalar sırasında utero ve pubertal dönem, diyet / hormonal faktörler maruziyet meme bezi kapsamlı modelleme ve yeniden modelleme uğrar, kanserojen bağlı meme tümörlerinde duyarlılık değiştirmek. Benzer bulgular insanlarda tarif edilmiştir: örneğin, yüksek doğum ağırlığı, daha sonra meme kanserine yakalanma riski artar, ve çocukluk döneminde soya besin alımı meme kanseri riskini azaltır. Bu doğum öncesi ve doğum sonrası diyet değişiklikleri, daha sonra da yaşamın meme kanseri riskini değiştirmek meme bezi kalıcı morfolojik değişikliklere neden olduğu düşünülmektedir. Bu morfolojik değişiklikler büyük olasılıkla DNA metilasyon değişiklikleri, histon ve sonra gen transkripsiyonunu etkileyen miRNA ifadesi gibi epigenetik modifikasyonlar yansıtmaktadır. Bu yazıda, meme bezi morfolojisi değişiklikler sıçanlarda meme kanseri riskini tahmin nasıl açıklar. Bizim protokol özellikle incelemek ve kaldırmak sıçan karın meme bezi ve meme bezi bütün bağlar nasıl hazırlamak için nasıl açıklamaktadır. Aynı zamanda üç uç noktaları (terminal uç tomurcukların sayısı, epitel uzama ve farklılaşma) ve meme kanseri gelişme riskini tahmin etmek için veri kullanmak göre meme bezi morfolojisi nasıl çözümleneceği anlatılmaktadır.

Bizim protokol sıçan karın meme bezi nasıl incelemek ve meme bezi bütün bağlar hazırlamak için nasıl açıklamaktadır. Aynı zamanda üç uç noktaları (terminal sonuna tomurcukları sayısı, epitel uzama ve farklılaşma) kullanılarak meme bezi morfolojisi analiz etmek ve bu sonuçlar, diyet değişiklikleri maruz kalan farelerde meme kanseri riskini tahmin etmek için kullanmak nasıl açıklar<em&gt; In utero</em&gt; Veya prepuberty sırasında.

Sıçanlarda Meme Bezi Morfolojisi ve Meme Kanseri Riski değişiklikler

Meme bezi gelişimi gösteren utero ve puberte dönemlerinde diyetle alınan/hormonal faktörlere maruz kalmanın, meme kanseri kemirgen modelleri üzerindeki çalışmalar...

Bu prosedürün genel amacı, bir ma bezi delik montajının nasıl diseke edileceğini ve hazırlanacağını göstermek ve bellek kanseri riskini öngörmek için morfolojisinin nasıl analiz edileceğini sunmaktır. Bu işlem, öncelikle bir sıçan abdominal bellek bezinin diseke edilmesi ve ardından diseke edilen bezden bir bellek bezi delik montajının hazırlanmasıyla gerçekleştirilir. Bir sonraki adım, bellek bezinin analiz edilmesidir.Delik montajlarında görünür hale getirilen morfoloji. Prosedürün son adımı, meme tümörünün tespiti için bir sıçanı palpe etmek ve tümör hacmini milimetre cinsinden ölçmektir. Bir kumpas kullanarak, meme dokusundaki yapıların tanımlanması, ev montajlarının incelenmesi ve miktarlarının mikroskop altında sayılması veya skorlanması yoluyla meme bezi morfolojisindeki değişiklikleri gösteren sonuçlar elde edilebilir.Bu yöntem, gelişim sırasında etkili olan diyetle veya çevresel maruziyetlerin, yaşamın ilerleyen dönemlerinde meme kanseri riskini etkileyen MA akciğer diferansiyasyonunu nasıl etkileyebileceği gibi, erken yaşam maruziyetleri ve meme kanseri alanıyla ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin kapsamı meme kanseri önleme çalışmalarına da uzanmaktadır. Örneğin, gelişim sırasındaki çevresel ve diyetle ilgili maruziyetleri inceleyebilir ve meme bezindeki değişikliklerin meme kanseri riskinin artmasıyla veya azalmasıyla ilişkili olup olmadığını gözlemleyebiliriz.Tümör palpasyon prosedürünü, hayvan paylaşımlı kaynaklar yöneticisi ve hayvan teknisyeni Idli Cruz gösterecektir. Meme bezini çıkarma prosedürüne başlamak için, önce ötenazi uygulanmış hayvanı bacaklarından iğnelerle sırt üstü olacak şekilde yüzey tahtasına sabitleyin. Ardından cildi etanol ile ıslatarak silin.Pensle deriyi hafifçe kaldırın ve keskin makas kullanın. Beş numaralı meme uçlarının arasından başlayarak deriye orta hat boyunca bir insizyon yapın ve boyna doğru kesin. Ardından, orta hattan arka bacaklara doğru ters Y şeklinde bir insizyon yapın.Ters Y insizyonun bir tarafındaki cildi makasla açarak, cilde yapışık olan abdominal dördüncü bellek bezini ortaya çıkarın. Bezi tamamen açığa çıkarmak için cildi iğnelerle yüzey tablasına sabitleyin. Ardından, bellek bezini ciltten ayırmak için keskin makas kullanın.Meme ucuna yakın olan proksimal bölgeden başlayın ve bezin distal ucuna, hayvanın omurgasına doğru ilerleyin. Hafıza bezi ayrıldıktan sonra, tam bağlama (whole mount) hazırlığı için bezi hemen bir lam üzerine yayın. Lam, bezden daha büyük olmalı ve uygun şekilde etiketlenmiş olmalıdır. Kalıcı bir markör ve/veya elmas kalem kullanarak, bezi C iki'deki orijinal boyutuna ve şekline uygun şekilde dikkatlice yayın.Bezi lam üzerine yaydıktan sonra, bezin lama yapışması için yaklaşık 30 dakika boyunca masada bekletin ancak kurumasına izin vermeyin. Ardından, lamı karnoy fiksatif içeren bir kavanoza yerleştirin ve çeker ocak içerisinde oda sıcaklığında iki gün veya en az iki gün geçtikten sonra daha uzun süre bekletin. Lamı oda sıcaklığında bir saat boyunca %70 etanol ile yıkayın.Lamı oda sıcaklığında 30 dakika boyunca distile su ile durulayın. Ardından, bezi iki gün veya daha uzun süre boyunca Carmine alum boyası ile boyayın. Lamın arkasını kontrol ettiğinizde lenf düğümlerinin tamamen boyandığını gördüğünüzde boyama işlemi tamamlanmış olur.Lamı, her biri bir saat süreyle, artan etanol konsantrasyonları serisinde yıkayın. %70 etanol ile başlayın, ardından %95 etanol ve üçüncüsü olarak %100 etanol ile devam edin. Morfolojik analiz için teknik olarak uygun meme bezi tüm mount örnekleri elde etmek için iki adım temel öneme sahiptir: tüm bezin diseksiyonu ve meme yağ yatağının lipid likidasyonu.Lipidlerin uzaklaştırılması ve şeffaflığın artırılması için bez ksilen içine yerleştirilir. Bu şeffaflaştırma işlemi, bezin boyutuna ve yağ miktarına bağlı olarak iki gün veya daha uzun sürer. Mutlak etanol ile yapılan son yıkamanın ardından, lam ksilen içerisine konur.Bezle ilgili dokunun oda sıcaklığında, ksilende en az iki gün boyunca kalmasını sağlayın. Çözünme işlemi tamamlandığında, lamı bir lamel ile kapatın. Per mount gibi bir montaj medyumu kullanarak, lamı stereo mikroskop altında gözlemlemeden önce çekme dolabında birkaç gün kurumaya bırakın; bellek bezi deliği montajının morfolojisi üç son nokta olan epitel uzaması, terminal uç tomurcuklarının sayısı ve farklılaşmaya göre analiz edilir.Sonuçlar daha sonra meme kanseri riski ile ilişkilendirilir. İlk olarak, epitel uzamasını değerlendirmek için prepubertal yaşta bir meme bezi tüm mount örneğinin analizini göstereceğiz. Meme ucundan epitel ağacının ucuna kadar olan mesafeyi milimetre cinsinden ölçmek için bir cetvel kullanın.Terminal uç tomurcuklarının (T Bs) sayısı olan ikinci bitiş noktası, malign transformasyon potansiyelini yansıtır. Işık mikroskobu altında, diferansiyasyon olan üçüncü bitiş noktası için meme epitelyal ağacının yalnızca distal ucunda yer alan ve en büyük pulpöz yapılar olan T Bs'lerin sayısı sayılır. Tüm preparat ışık mikroskobu altında da incelenir.Diferansiyasyon, epitel boyunca dağılmış olan alveoler tomurcukların skorlanmasıyla ölçülür. AB bir ve AB iki olarak adlandırılan iki alveoler tomurcuk tipine, bezdeki bolluklarına göre sıfırdan beşe kadar bir skor verilir. Ardından, nihai diferansiyasyon skorunu belirlemek için AB bir ve AB iki için belirlenen skor değerleri toplanır.Puberte sonrası bir H meme bezi home mount'un morfolojik analizi, aşağıdaki farklarla birlikte puberte öncesi bir H meme bezi home mount'un analizine benzerdir. Epitel uzamasını incelemek için öncelikle, lenf düğümünden epitel ağacının ucuna kadar olan mesafeyi bir cetvel yardımıyla milimetre cinsinden ölçün. İkinci olarak, epitel ağacının ucundan yağ yastığının sonuna kadar olan mesafeyi ölçün.Ayrıca diferansiyasyon analizi için milimetre cinsinden de değerlendirilir. Puberte sonrası bir H meme bezi tüm mount örneğinde, alveoler tomurcukların yanı sıra lobüller ışık mikroskobu altında sıfırdan beşe kadar olan bir ölçekle puanlanır. Bu puan, bezdeki lobüllerin bolluğunu yansıtır.Diferansiyasyon daha sonra iki şekilde değerlendirilir. İlk olarak, nihai bir diferansiyasyon skoru için AB bir, AB iki ve LOE'lerden gelen skor değerleri toplanır. İkinci olarak, LOE skorunun, AB bir artı AB iki skoruna oranı hesaplanır.ABS iki LOE'yi ayırt ettiği için, daha farklılaşmış bir bezde LOE'lerin abs'lere oranı daha yüksek olacaktır. Bu prosedüre başlamak için, ratı sırt kısmını avuç içiyle kavrayıp, işaret parmağını başın arkasına, başparmak ve orta parmağı ise karşı koltuk altına yerleştirerek tutun. Ratı sırt üstü yatacak şekilde çevirin ve herhangi bir bellek tümörü olup olmadığını tespit etmek için palpasyon yapın; palpabl tümörler bir yumru gibi hissedilmelidir.Ardından, tümörün genişliğini, uzunluğunu ve yüksekliğini ölçmek için bir kumpas kullanın. Tümör hacmini elipsoid formülünü kullanarak hesaplayın. Hacim; altıda bir pi, A, B, C değerine eşittir; burada A genişliği, B uzunluğu ve C yüksekliği temsil eder.Tümörün konumunu ve boyutunu her hafta bir deftere manuel olarak kaydedin. Bu veriler, daha sonra diseksiyon yapılıp doğru şekilde işlendiğinde bir hesap çizelgesine aktarılacaktır. Bellek bezi delik montajındaki tüm bileşenler, bu örnekte gösterildiği gibi açıkça görünür olmalıdır.Buna karşılık, bu örnek kötü hazırlanmış bir meme bezi tüm mount (hole mount) örneğidir. Distal kısmın eksik olması nedeniyle bez düzgün bir şekilde diseke edilmemiştir. Ayrıca, bez yeterince gerilmemiş ve dilapidasyon gerçekleşmemiştir.Tamamı gösterilmiştir. Burada, meme bezi morfolojisindeki değişikliklerin meme kanseri riskini nasıl öngörebileceğine dair temsili sonuçlar yer almaktadır. Kanserojen DMBA'ya maruz bırakılan sıçanlarda, terminal N tomurcukları veya TBS sayısı sayıldığında, tedavi grubunun 21. günde kontrol grubuna kıyasla daha yüksek TBS sayısına sahip olduğu görülmüştür.Süt bezi morfolojisindeki bu değişiklikler, tedavi grubundaki sıçanlarda kontrol grubuna kıyasla daha yüksek oranda bellek tümörü görülmesiyle ilişkilendirilmiştir. Bu grafikte gösterildiği üzere. Bu prosedürü gerçekleştirirken, süt bezi yapılarının iyi şekilde görselleştirilmesini sağlamak için tüm süt bezinin diseke edilmesi ve tüm lipidlerin temizlenmesi gerektiğini hatırlamak önemlidir.Bu videoyu izledikten sonra, bir meme bütün montajının (whole mount) nasıl diseke edileceği ve hazırlanacağı ile meme kanseri riskini öngörmek için morfolojisinin nasıl analiz edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

changes-in-mammary-gland-morphology-and-breast-cancer-risk-in-rats

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu makale DeOme KB tarafından geliştirilen yöntemle...

Meme Epitel Nakli Prosedürü

Bu yöntem, farelerde meme bezi gelişimi ve işlevi incelemek ve değerlendirmek anlatılmaktadır. Eksize meme bezleri süt ejeksiyon bir oksitosin tabanlı miyoepitelyal hücre daralma tahlil kullanılarak değerlendirilmiştir ise bütün montaj kullanarak geliştirme derecesi değerlendirilir.

Fare Modeller Meme Bezi Geliştirme ve Fonksiyon Değerlendirme

Bu makalede açıklanan dolaylı immünfloresan protokol algılama ve fare meme bezinde proteinlerin yerelleştirme verir. Tam bir yöntem olup, meme bezi örnekleri hazırlamak için floresan mikroskobu ile görüntü, doku kesitlerinde immunhistokimya gerçekleştirmek için ve görüntüleri yeniden verilir.

Fare Meme Bezinin Dondurulmuş Bölümler Dolaylı İmmünofloresan

Meme tümör hücrelerinin portal ven enjeksiyonu yoluyla murin karaciğerine iletilmesi için cerrahi bir prosedür geliştirilmiştir. Bu model, tümör hücresi ekstravazasyonu, tohumlama, sağkalım ve karaciğerde metastatik büyüme dahil olmak üzere tamamen immün yetkin bir konakta karaciğer metastazının geç aşamalarının araştırılmasına izin verir.

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Kemirgen içindeki meme bezi gelişimi tipik olarak tanımlayıcı değerlendirmeler kullanılarak veya temel fiziksel özellikleri ölçerek değerlendirilmiştir. Dallanma yoğunluğu, meme gelişiminin objektif olarak ölçülmesi güç bir göstergesidir. Bu protokol, meme bezi dallanma özelliklerinin niceliksel değerlendirmesi için güvenilir bir yöntem tanımlamaktadır.

Sıçan Memesi Bezinde Dallanma Yoğunluğunun Nicelleştirilmesi Sholl Analiz Yöntemini Kullanarak Bütünüyle Tutturulur

Başlangıçta slaytlar üzerinde sabitlenmiş olan meme dokusunu histopatolojik değerlendirme için başarıyla çıkarmak, işlemek, kesmek ve lekelenmek için bir yöntem geliştirdik. Bu yöntem, üreme ve gelişimsel test kılavuz çalışmalarında meme bezlerinin tümünün monte edilmesini ve değerlendirilmesini teşvik edebilir.

Lezyon Tanımlaması için Meme Bandı Bütün Dağılımları

Burada, hücre dışı Matriks (ECM) ifade ve duktal Morfoloji araştırmak için meme dokuları bütün, olduğu gibi fare yalıtım için bir iletişim kuralı mevcut. Fare #4 karın bezleri tarafsız tampon formalin içinde sabit kesitli ve ECM proteinler için immünhistokimya kullanarak lekeli 8-10 hafta eski kadın nulliparous fareler, elde.

Sağlam, Bütün fare meme dokuları yalıtım hücre dışı matriks ifade ve bezi Morfoloji analizi için

Bu protokol amacı yeni bir meme kanseri modelleme yaklaşımı CRE-ifade adenovirüsü fare meme bezleri içine intraduktal enjeksiyon dayalı açıklamak için. Bu yaklaşım, Onkojenik olayların hem hücre tipi hem de Organ spesifik manipülasyon geçici olarak kontrollü bir şekilde sağlar.

CRE-ifade Adenovirus fare mammary bezi içine bir Intraductal enjeksiyon yoluyla meme kanseri modelleme

Bu makalede, alıcı hayvanların interscapular beyaz yağ yastığı içine donör sıçan meme epitel hücreleri greft bir transplantasyon yöntemi açıklanmaktadır. Bu yöntem, meme epitel gelişimi üzerindeki konak ve/veya donör etkilerini incelemek ve ön temizleme ihtiyacını ortadan kaldırmak ve böylece bu tekniğin kullanışlılığını genişletmek için kullanılabilir.

Interscapular Beyaz Yağ Ped içine Rat Mammary Epitel Hücre Nakli

Hasta kaynaklı ksinograft (PDX) modelleri ve nakledilebilir genetik olarak tasarlanmış fare modelleri insan hastalığına sadık kalınarak rekapitulate edilir ve temel ve çevirisel meme kanseri araştırmaları için tercih edilen modellerdir. Burada, tümör biyolojisini incelemek ve ilaç yanıtını değerlendirmek için meme tümörü parçalarını meme yağ yastığına ortotopik olarak nakleden bir yöntem açıklanmaktadır.

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Meme kanserinin görüntü rehberliğinde önleyici tedavisi için sıçan meme duktal ağacına kimyasal bir ablatif çözeltinin verilmesi için bir prosedür açıklanmaktadır. Meme epitel hücreleri, doğrudan meme başı açıklığına kanülasyon ve %70 etanol bazlı ablatif solüsyonun intraduktal infüzyonu yoluyla minimal kollateral doku hasarı ile hedeflenebilir.

Sıçan Modellerinde Meme Kanserinin Önlenmesi için İntraduktal Etanol Bazlı Ablatif Tedavinin X-Ray Görselleştirmesi

Öğrenin sıçanlarda meme bezi diseksiyonu ve tam preparat analizi ile meme kanseri riskini morfolojik olarak değerlendirme yöntemini. Bu teknik erken yaşam diyet değişikliklerinin etkisini incelemeye yardımcı olur.

Sıçanlarda Meme Bezi Morfolojisi ve Meme Kanseri Riski değişiklikler

Daha fazla video keşfet