Name: Keten içinde değişiklikler Kalıtsal Çevre İndüklenmiş (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-26T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: Keşfedin, keten bitkilerinde besin stresi altında genomik varyasyon ve fenotipik yanıtları incelemek için PCR ve Q-R-T-P-C-R yöntemlerini kullanarak. Bu yöntem, bitki genetiği ve tarımsal dirençlilik araştırmalarına katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. Indükleyici koşullar altında keten Büyüme. <ol><li> 5 "tencere toprakla doldurulur ve onaylanır. </li><li> Pot başına üç tohum ekildi ve ¼ inç derin toprak, tohum üzerinde onaylanır. </li><li> Tencere sonra uygun besin çözümler 100ml ile sulanan <ol><li> Olmayan inducing kontrolü (C) koşulları her hafta 1 / 10 th gücü Miracle-Gro kullanın. Yüksek besin durumu (NPK tedavi) tam gücü Mucize haftalık uygulanan yetiştirin. Düşük besin - bitkiler sadece kendi büyüme boyunca uygulanan musluk suyu vardı. (Durrant 1971, Cullis 1980). </li></ol></li><li> Bitkiler, yaz aylarında doğal ışık altında yetiştirilir. Kış aylarında 16 / 8 saat aydınlık / karanlık döngüsü ile sodyum ışıkları altında yetiştirilir. </li><li> Haftalık aralıklarla toplanan yaprakları ve meristemlerde. </li><li> Bitki materyali hızlı bir sıvı nitrojen içinde dondurulur. </li></ol> Sonuçlar Üç genotipleri (Şekil 1) koşullara bağlı olarak farklı nispi oranları büyür. Bu nedenle kontrol koşulları altında Pl hattı L, S (Şekil 1a) daha kuvvetli olan en iyi yetişir. Düşük besinleri altında (su), S L veya Pl (Şekil 1b) ya da daha iyi yetişir. Yüksek besin altında (NPK) L sadece S (Şekil 1c) biraz daha iyi yetişir Pl daha iyi yetişir. Her üç farklı tedaviler altında yetiştirilen satırlar arasında bir karşılaştırma Şekil 1 d gösterilir f. Pl, kontrol koşulları (Şekil 1d), altında iyi yetişir, yüksek besin (Şekil 1e) ve S altında L iyi benzer yüksek besin ve kontrol koşulları altında (Şekil 1f). Bu veriler, üç satır üç ortamlarda büyüme göre ayırt edilebilir olduğunu göstermektedir. Not L (indüklenen altında) NPK koşulları altında en iyi yetişir Pl kontrol koşulları altında iyi yetişir. S geliştirilmiş besin koşulları yararlanmak mümkün değildir, ancak çok düşük bir besin koşullar altında büyümek için daha iyi yapabiliyor, her üç koşulları, aynı yetişir. Bitkilerin farklılaşma ile ilgili büyüme parametreleri (ve her yaprak arasındaki mesafe bu boğum uzunluğu, ile ilişkili), bitki boyu, yaprak boyutu ve dallanma derecesi içerir. Pl kontrol koşulları altında bitki dalları ile uzun boylu ve yaprakları büyük ve koyu yeşil renktedir. Düşük besinleri altında bitki çok kısa, her yaprağı arasındaki mesafe çok kısa ve yaprakları, küçük ve hafif yeşil. Ucunda yaprak, kök aşağı düşürmek daha koyu yeşil. Yüksek besin altında bitki kontrol koşulları altında, ana kök ve yan sürgünler hem kontrol bitkilerin daha kısa olması dışında çok benzer görünüyor. Büyük genotroph için bitkiler yüksek besin altında en güçlü büyüme dışında Pl bu çok benzer. Yine düşük besinleri altındaki bitki çok kısa ve açık yeşil yaprakları vardır. Yaprakları, düşük besin altında hafif yeşil olmasına rağmen S genotroph üç ortamlarda benzer yetişir. Ancak, S genotroph Pl veya L hatları ya da daha düşük besin koşullarında çok daha güçlü. 2. RNA ve DNA ekstraksiyonu, keten meristemlerde ve yaprakları ayrı ayrı yapılır. RNA ekstraksiyonu ve Qiagen DNeasy Bitki DNA hazırlık kiti DNA ekstraksiyon için kullanılan Roche toplam RNA hazırlık kiti kullanıldı. RNA Ekstraksiyon <ol><li> 3 meristemlerde artı bazı çevreleyen yaprak Eppendorf tüp depolama cryovial taşınmış ve zemin olmak için hazır olana kadar sıvı azot içine yerleştirilir. </li><li> Steril kum tüpüne eklenir ve doku ince kadar micropestle kullanılarak öğütülür. </li><li> Roche toplam RNA hazırlık kiti 400 ul lizis / bağlayıcı tamponu eklenir ve doku daha fazla zemin kümeleri görünür olana kadar. </li><li> Örnek için 15 saniye, 1 dakika 13.000 rpm'de kum ve herhangi bir enkaz toplamak için spun sonra lizis yardım ve vortekslenmiş. </li><li> Süpernatant sütun spin eklenir ve yönetmen olarak RNA hazırlık seti talimatlarını geri kalanı takip edilmektedir. </li></ol> DNAz tedavi <ol><li> 10X DNAz tampon 1 / 10 RNA numune hacmi eklenir. </li><li> DNAz, 30 adet ilave edilir ve reaksiyon 37 inkübe ° C de 30 dakika ve 70 ° C 5 dk. </li></ol> Ters Transkripsiyon <ol><li> Her yöne 37 inkübe tepki ° C 1 saat ve 95 ° C'de 5 dakika. Applied Biosystems RNA cDNA kiti olarak kullanılır </li></ol> CDNA sonra PCR veya qPCR için kullanılır. qPCR qPCR ABI Adım Bir sistemi kullanılarak yapıldı. Tüm testlerin her çalışma, üç nüsha olarak yapılmıştır. Aktin gen kopya sayısı kontrolü olarak kullanılmıştırmevcut en iyi temizlik gen. <ol><li> Uygun primer çifti 1μl her tüpe eklendi. </li><li> CDNA, uygun konsantrasyonda ve 9μl seyreltilmiş her tüpe eklendi </li><li> 10μl 2x Güç SYBR Green PCR Mastermix (ABI) ve her tüp eklendi </li><li> Program amplifikasyon programı: <ul><li> 10 dakika 95 ° C </li><li> 95 15sn 40 döngü ° C, 60 ° C'de 1 dakika </li></ul> Amplifikasyon özgüllüğü doğrulamak için termal denatürasyon adım </li><li> 2 değeri (- CTactin CTunknown) göreceli ifade düzeyleri tespit edildi. </li></ol> DNA hazırlığı <ol><li> Tampon AP1 Qiagen DNeasy Bitki DNA hazırlık kiti bir mikrofuge'de tüp içinde steril kum ile 6 yaprakları eklenir. Kümeleri görülebilir kadar doku micropestle zemin. </li><li> Kit talimatlarını olarak takip edilmektedir. </li></ol> Sonuçlar Kök boyunca çeşitli pozisyonlarda yapraklarından izole edilen DNA PCR bitkiler indükleyici koşullar altında (4) büyürken, LIS-1 görünüm oluşur göstermektedir. QPCR sonuçları LIS-1 (veya indüksiyon ile ilişkili diğer genomik değişiklikler) varlığını hemen yakınında LIS-1 (Şekil 2) gen ifadesi etkilediğini göstermektedir. Şekil 2'de gösterildiği gibi altı genler farklı dört yüksek PL ifade (LIS-1 olmadan) ve S daha yüksek ifadesi (LIS-1 var) olan iki sahip Pl ve S olarak ifade edilir. Panel 1 ve 2 LIS-1 ekleme noktasına yakın iki gen vardır. Bu gen ifadesi, farklı büyüme koşulları altında büyük genotroph (indüklenen değişiklikler oldu ama LIS-1 bulunmamış) ve ifade LIS-1 ve ifade değişiklikleri arasında herhangi bir nedensel ilişkiyi belirlemek için gerekli olacaktır. <img src="/files/ftp_upload/2332/2332fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1: Pl, L, S, üç değişik besin rejimler altında büyüdü . Paneller bir kontrolü, b - düşük besin ve c - NPK. d - Pl, e - f - L. Panelleri d - f, soldan sağa: düşük besinler, kontrolü ve NPK. D - Pl, e-L, F - S. <img src="/files/ftp_upload/2332/2332fig2tmb.jpg" alt="Şekil 2 başparmak" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2 başparmak"> Şekil 2 LIS-1 yerleştirme noktası etrafında. Gen ekspresyonu. Gene 1 (büyüme Inhibitor) LIs1 hemen 5 've LIS-1 gen 2 (Kip-siklin-bağımlı kinaz inhibitörü id 3 "diğer genlerin inşa aynı iskele (~ 500kb) boyunca keten genom dizisi. Lütfen <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/2332/2332fig2.jpg">daha büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img src="/files/ftp_upload/2332/2332fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3 Stormont Cirrus düşük besin koşullar altında yetiştirilen bitkilerin yaprakları ayıklanır DNA'lar PCR. PCR ürünleri% 2'lik agaroz-TBE jel ayrıldı. Uninserted site Paneli gösterilir, eklenen sitenin iki ucu b ve c Panelleri gösterilmiştir Yaprak örnekleri 1 - 6 haftalık aralıklarla örnek 1 ekim sonrası erken izole edildi.

<ol><li>Durrant, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+environmental+induction+of+heritablel+change+in+Linum%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">The environmental induction of heritablel change in Linum.</a> Heredity. 17, 27-61 (1962).</li>
<li>Cullis, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+aspects+of+the+environmental+induction+of+heritable+changes+in+flax%5BTitle%5D)+AND+%22Heredity%22%5BJournal%5D)">Molecular aspects of the environmental induction of heritable changes in flax.</a> Heredity. 38, 129-154 (1977).</li>
<li>Chen, Y., Schneeberger, R. G., Cullis, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+site-specific+insertion+sequence+in+flax+genotrophs+induced+by+the+environment.+New+Phytol%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">A site-specific insertion sequence in flax genotrophs induced by the environment. New Phytol.</a> , 167-171 (2005).</li>
<li>Chen, Y., Lowenfeld, R., Cullis, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+environmentally+induced+adaptive+%28%3F%29+insertion+event+in+flax%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Genet.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">An environmentally induced adaptive (?) insertion event in flax.</a> Int. J. Genet. Mol. Biol. 1, 38-47 (2009).</li>
</ol>

Keten doğası gereği istikrarsız bir genom gibi görünüyor. Birkaç nesiller için büyüdüğü zaman ticari lif keten çeşitlerinin sayısı hızla olmayan tekdüze haline. Aynı gözlemler yağ keten çeşitleri için geçerli görünmüyor. Bu nedenle, lif kalitesi ve genom istikrarsızlık seçim arasında bir ilişki varmış gibi görünür. Çevre başlangıçta fiber bitki büyüme agronomik gözlemlerin soruşturma aracılığıyla tespit edilmiştir keten değişiklikler kalıtsal indüklenen. Bu, spesifik fenotipik ve genomik varyasyon tekrarlanabilir gözlemler çevresel stres oluşabilir genomik düzenlenmeleri takımı nasıl etkileyecek sorusunu gündeme getirmektedir. Belirli ortamlara yanıt LIS-1 tekrarlanan bir görünüm, bu mutasyon doğrudan ya da dolaylı olarak seçilen ile tutarlı. Çeşitli tedaviler ile indüklenen hatlarının büyüme de ilgili indükleyici koşullar altında gelişmiş bir performans gösterir. Ifadesi de yine LIS-1 varlığı ile ilişkili değişiklikler bu ekleme bitki performansını etkilediğini göstermektedir. Video sunumu geleneksel basılı malzeme ile iletmek için imkansız bir şekilde bitki fenotipik değişiklikleri gözlemlemek için bir forum sağlar.

<ul><li> Orijinal Stormont Cirrus çeşitli Keten tohumu Pl ve genotrophs L ve S. gösterilir </li><li> 5 &quot;tencere </li><li> toprak saksı </li><li> Miracle-Gro </li><li> sera </li><li> Yüksek basınçlı sodyum lambaları </li><li> Sıvı nitrojen </li><li> Harç ve havan </li><li> Micropestles ve mikrofuge&#39;de tüpler </li><li> PCR </li><li> Agaroz jel elektroforez ekipmanları </li><li> Dijital görüntüleme kurulumu </li><li> StepOne qPCR modülü </li><li> Qiagen DNeasy Bitki DNA hazırlık kiti </li><li> Uygulamalı Biyosistem RNA, cDNA kiti </li><li> Roche toplam RNA hazırlık kiti </li></ul>

keten içinde değişiklikler kalıtsal Çevre İndüklenmiş

Environmentally Induced Heritable Changes in Flax

Bazı keten çeşitleri genom değiştirme ve birçok nesiller boyunca bu değişiklikler kalıtsal olabilir besin strese cevap verir. Ayrıca bu genomik değişiklikler ile ilişkili fenotipik varyasyon kalıtsal 1,2. Üç farklı besin koşullar altında yetiştirilen keten çeşitli Stormont Cirrus (Pl) ya da (kontrol koşullar altında) indüklenebilir kalır, ya da stabil bir şekilde, sırasıyla, yüksek ya da düşük besin koşullar altında büyüme ile büyük veya küçük genotroph ya da değiştirilmiş haline. Bu koşulların her birinin altında ilk büyüme kaynaklanan çizgiler daha sonraki nesillere de aynı şartlar altında yetiştirilen büyümeye Pl hattı, özellikle yüksek ve düşük besin hem de altında büyüyen bitkilerin altında olduğunu belirten kontrol tedavi altında en iyi yetişir stres. Bitkilerin besin stres altında büyürken kalıtsal değişikliklerin indüksiyonu ile ilişkili genomik değişikliklerin biri bir ekleme elemanının görünümünü (LIS-1) 3, 4. Bu ekleme olayı ile ilgili olarak, keten çeşitli Stormont Cirrus (Pl) üç farklı besin koşullar altında yetiştirilen ya (kontrol koşullar altında) değişmeden kalır, ekleme, tüm bitkilerin (düşük besinleri altında) ve bu yolla bulaşan yeni nesil, veya ekleme (veya parçaları) görünür ancak nesiller (yüksek besin altında) 4 üzerinden aktarılabilir. Bu ekleme görünümünü frekans, aynı zamanda sonraki nesillere büyüme yanıtı ile tutarlı pozitif seçimi, altında olduğunu gösterir. Büyümenin çeşitli aşamalarında hasat edilen yapraklar veya meristemlerde DNA ve RNA izolasyonu için kullanılır. RNA çeşitli büyüme ortamları ve / veya t LIS-1 varlığı / yokluğu ile ilgili ifadesinde varyasyonu tanımlamak için kullanılır. Izole edilmiş DNA ekleme oluştu bu bitkilerin tanımlamak için kullanılır.

Genom ve fenotipik varyasyon bir alt kümesi içinde genomik değişimi besin stres altında bazı keten çeşitleri Büyüyen. Belirli bir yerinde karmaşık bir ekleme çeşitli besin rejimler altında büyüme ile bu sitede çevresinde gen ekspresyonu değişiklikleri ile ilişkilidir.

Keten içinde değişiklikler Kalıtsal Çevre İndüklenmiş

Bazı keten çeşitleri, genomlarını değiştirerek besin stresine yanıt verir ve bu modifikasyonlar birçok nesil boyunca aktarılabilir. Ayrıca...

Bu prosedürün genel amacı, kalıtsal genomik varyasyonla sonuçlanan koşullar altında indüklenebilir bir keten çeşidinin yetiştirilmesi için bir yöntem göstermektir. Ayrıca, genomik değişiklikler izlenmekte ve indüklenen bitkilerin sonraki nesillerdeki büyümesi çeşitli ortamlar altında gözlemlenmektedir. Bunu başarmak için keten, bir dizi indükleme koşulu altında yetiştirilir.Ardından, çeşitli ortamlar altında bitkilerin büyüme süreçleri boyunca farklı zamanlarda yaprak ve Maris gövde dokusu toplanır. Sonrasında, doku örneklerinden DNA ve RNA izole edilir. Prosedürün son adımı, farklı çevresel koşullar altında büyümenin sonucunda meydana gelen genomik değişiklikleri ve gen ekspresyonu değişikliklerini belirlemek amacıyla DNA örnekleri kullanılarak PCR ve izole edilen RNA kullanılarak Q-R-T-P-C-R gerçekleştirilmesidir.Nihayetinde, işlem görmüş bitki dokularından izole edilen nükleik asitlerle gerçekleştirilen PCR ve R-T-P-C-R ile görselleştirildiği üzere, genomun belirli bir noktasında LIS bir insersiyon elementinin ortaya çıkmasıyla büyüme koşullarına verilen genomik yanıt ve bu elementin varlığıyla ilişkili ekspresyon farklarını gösteren sonuçlar elde edilebilir. Merhaba, ben Case Western Reserve Üniversitesi Biyoloji Bölümü'nden Chris Cull. Ben de Cull Laboratuvarı'ndan Cory Johnson.Ben de Cull laboratuvarından Tiffany Moss. Ben de Cull laboratuvarındaki lisansüstü araştırma yaz programında olan bir lisans öğrencisi Marshall Lucas.Laboratuvarımızda, büyüme ortamındaki varyasyonlardan kaynaklanan genom ve gen ekspresyonundaki değişiklikleri incelemek için bu prosedürü kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım. Ketenle indükleyici koşullar altında yetiştirmek için önce beş inçlik saksıları toprakla doldurup sıkıştırarak başlayın.Sıradaki bitki için saksı başına üç keten tohumu, çeyrek inç derinliğe ekilir. Ardından, indüklemeyen kontrol koşulları için tohumların üzerindeki toprağın durumu ayarlanır. Bitkiler, 100 mililitre 1/10 konsantrasyonundaki Miracle-Gro çözeltisi ile sulanır.Yüksek besin koşullarındaki bitkileri 100 mililitre tam konsantrasyonlu Miracle grow ile işleme tabi tutun. Son olarak uygulayın.Düşük besinli bitkilere sadece musluk suyu verin. Bitkiler büyürken, yaz boyunca doğal ışık altında yetiştirin. Tüm bitkileri otomatik bir püskürtme sistemiyle günde iki kez beşer dakika boyunca sulayın.Büyüme koşullarını bitkilere haftada bir kez uygulayın. Yaprakları ve gövde kısımlarını haftalık aralıklarla toplayın. DNA ekstraksiyonu için altı yaprak ve RNA ekstraksiyonu için üç gövde kısmı toplanır; toplama işleminin ardından bitki materyallerini bir kriyoviyale yerleştirin, sıvı nitrojen ile hızlıca dondurun ve örnekleri ekstraksiyon yapılana kadar -80 °C'de saklayın.Üç genotip, koşullara bağlı olarak farklı bağıl hızlarda büyür. Kontrol koşulları altında, safketir çeşidi storm veya PL hattı en iyi büyümeyi sergiler. Bu ebeveynden türetilen birkaç hat arasından, büyük veya L çeşidi, küçük veya S çeşidine göre daha güçlüdür.Bununla birlikte, düşük besin ortamında S, L veya pl'den daha iyi büyür. Yüksek besin koşullarında ise L, pl'den daha iyi büyürken; pl ise S'den sadece biraz daha iyi büyür. Üç farklı işlem altında yetiştirilen her bir hattın karşılaştırılması, PL'nin kontrol koşullarında en iyi şekilde büyüdüğünü göstermektedir. L yüksek besin koşullarında en iyi şekilde büyürken, S hem yüksek besin hem de kontrol koşullarında benzer şekilde büyür.Bu veriler, üç hattın üç farklı ortamdaki büyümelerine göre ayırt edilebileceğini göstermektedir. PL ve L spesifik ortamlarda daha iyi büyürken, S her üç koşulda da yaklaşık olarak aynı düzeyde büyümektedir. S, iyileştirilmiş besin koşullarından yararlanamamakta ancak çok düşük besin koşullarında daha iyi büyüyebilmektedir.DNA ekstraksiyonu için Qiagen DNEZ plant DNA prep kitinden gelen AP one tamponunu, steril kum ile birlikte bir mikrosantrifüj tüpündeki altı yaprağa ekleyin; dokuyu, topaklanma görünmeyene kadar mikro havan ile ezin. Kit talimatlarını izleyerek ekstraksiyona devam edin. RNA ekstraksiyonuna başlamak için, bir saklama kriyoviyali içindeki üç maris gövdesini ve çevresindeki bazı yaprakları bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Tüpe steril kum ekleyin ve dokuyu, ince bir toz haline gelene kadar mikro havan kullanarak ezin.Lizisi kolaylaştırmak için örneği 15 saniye boyunca vorteksleyin, ardından kumu ve tüm kalıntıları toplamak için 13,000 RPM'de bir dakika boyunca santrifüjleyin. SNAT'ı spin kolona ekleyin ve üretici talimatlarına göre RNA hazırlama işlemine devam edin. RNA dokudan ekstrakte edildikten sonra, RNA örnek hacminin onda biri kadar 10 XDNA tamponunu reaksiyona aktarın.Ve 30 unit DNase ekleyerek, reaksiyonu önce 37 °C'de 30 dakika, ardından 70 °C'de beş dakika inkübe edin. Uygulanan biosystems RNA'dan cDNA kitini kullanarak ters transkripsiyonu gerçekleştirin. Üretici talimatlarına göre, reaksiyonu 37 °C'de bir saat ve ardından 95 °C'de beş dakika inkübe edin.Son olarak, verimi belirlemek için 5 µL cDNA'yı %1,5 agaroz jelde yürütün. Keten cDNA'sı hazırlandıktan sonra qPCR için kullanılır. qPCR işlemini bir ABI StepOne sistemi kullanarak gerçekleştirin.Tüm analizleri her çalışma için üç tekrarlı olarak gerçekleştirin ve QPCR reaksiyonlarını hazırlamak için kopya sayısı kontrolü olarak housekeeping geni Acton'u kullanın. Her tüpe uygun primer çiftinden bir mikrolitre ekleyin. CD NA'yı uygun konsantrasyona seyreltin ve her tüpe dokuz mikrolitre ekleyin.Son olarak, her tüpe 10 µL 2x cyberg green PCR master mix ekleyin. Ardından, amplifikasyon programını kurulumunu gerçekleştirin. Göreceli ekspresyon düzeylerini, step one yazılımındaki varsayılan parametreler tarafından belirlenen ve amplifikasyon eğrilerinin incelenmesiyle onaylanan eşik döngü sayısı üzerinden hesaplayın.Gövde boyunca çeşitli konumlardaki yapraklardan izole edilen DNA'dan yapılan PCR amplifikasyonu, bitkiler indükleyici koşullar altında yetiştirildiğinde, hat ekleme dizisi veya LIS bir olarak adlandırılan tek kopya 5.7 kilobazlık bir DNA fragmanının ortaya çıktığını göstermektedir. LIS bir, PL düşük besinli indükleyici koşullar altında yetiştirildiğinde ortaya çıkar ve sonunda homozigot hale gelir. Burada, bir ila altı arasındaki yaprak örnekleri haftalık aralıklarla izole edilmiş olup, birinci örnek ekimden sonraki en erken örnektir; ardından örneklerden DNA ekstraksiyonu gerçekleştirilmiştir.PCR amplifikasyonu, ilk örnek hariç tüm örneklerde LAS one'ın her iki terminusunun da mevcut olduğunu ortaya koymaktadır. Bu durum, insersiye edilmemiş bölgenin ortadan kalkmasıyla ve beşinci yaprak QPCR'ında buna dair herhangi bir kanıt bulunmamasıyla örtüşmektedir. Sonuçlar, LAS one'ın varlığının veya indüksiyonla ilişkili diğer genomik değişikliklerin, LAS one'ın hemen yakınındaki genlerin ekspresyonunu etkilediğini göstermektedir.Burada gösterilen altı genin tamamı PL ve S'de farklı şekilde eksprese edilmiştir; genlerin dördü, LIS'e sahip olmayan PL'de daha yüksek ekspresyona sahiptir. Aksine, ikisi LIS'e sahip olan S'de daha yüksek ekspresyona sahiptir. Size indüklenebilir keten hatlarının nasıl yetiştirileceğini göstermiş olduk. Böylece genom, büyüme ortamına ve sonraki nesillerin büyüme özelliklerine yanıt olarak değişiklik gösterir.Bu prosedürü uygularken, değişimlerin tekrarlanabilir bir şekilde indüklenmesi için büyüme koşullarının yeniden oluşturulması gerektiğini hatırlamak önemlidir. İşte hepsi bu. Birçoğunuzun bu fenomen konusunda şüpheleri olduğunu biliyorum, ancak artık gözlemleri kendiniz tekrarlayabilirsiniz.İzlediğiniz için teşekkürler, deneylerinizde başarılar dileriz.

environmentally-induced-heritable-changes-in-flax

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bir çift sarmallı RNA girişimi (dsRNAi) tekniği mısır sinamoil koenzim alt bitki lignin içeriğine A redüktaz (ZmCCR1) geni aşağı regüle etmek için kullanılır. Lignin hücre duvarından aşağı-regülasyon mikroskopik analiz ile görselleştirilmiştir ve Klason yöntemi ile ölçülür. Yarı selüloz ve kristalin selüloz içinde Bileşim değişiklikler analiz edilmiştir.

Lignin Aşağı düzenleme<em&gt; Zea mays</em&gt; DsRNAi ve Klason Lignin Analizi ile

Burada, biz çiçek daldırma yoluyla Agrobacterium aracılı bitki dönüşümü kullanarak keten dönüştürmek için bir protokol mevcut. Bu protokol için basit ve ucuzdur, ancak keten transformasyonu için mevcut veriler yöntemlere göre daha yüksek bir dönüşüm oranını verir.

Keten Çiçekli-Dip Dönüşüm ( Linum usitatissimum) Yüksek Dönüşüm Oranı ile Transgenik progeny'lerinde oluşturmak için

Bu protokol, etkili jeomanyetik alanın (GMF) tersine çevrilmesinin diferansiyel gen ekspresyonunu indüklediği ve Arabidopsis thaliana'nın morfolojisini değiştirdiği hipotezini test etmek için bir yöntemi açıklar. Bitki büyüme odasında yapay olarak ters GMF koşulları oluşturmak için üç eksenli sekizgen bir Helmholtz bobin çifti sistemi kullanıldı.

Manyetik Alan (GMF) ve Bitki Gelişimi: GMF İptalleri Etkileri üzerine Araştırılması<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Geliştirme ve Gen İfadesi

Bu iletişim kuralı işlevsel olarak protein bazlı miras S. cerevisiaeiçin ekran için bir yüksek-den geçerek metodoloji açıklar.

S. cerevisiae Protein bazlı miras için yüksek üretilen iş tarama

BLISS, lignification dinamikleri, eğitim için bir çift etiketleme iletişim kuralı geliştirilmiştir. Sentetik monolignol kullanarak gazetecilere ve SPAAC ve CuAAC bioorthogonal sıralı bir arada tepkiler, bu metodoloji açıyor lignins planta içindeBiyogenez düzenleyen faktörler derinlemesine analiz için yolu tıklatın.

Lignification Dynamics ile tıklatın kimya tesislerinde görselleştirme: Çift etiketleme BLISS olduğunu!

Aspergillus flavus büyüme ve aflatoksin üretim mısır çekirdekleri antifungal bir protein ifade içinde analiz etmek için bir iletişim kuralı mevcut burada.  A. flavus GFP ifade etmek zor kullanarak biz izlenen enfeksiyon ve gerçek zamanlı olarak olgun çekirdekleri içinde mantar yayılmasını. Tahlil hızlı, güvenilir ve tekrarlanabilir.

Aspergillus flavus büyüme ve transgenik Mısır ifade α-amilaz inhibitörü Lablab purpureus L. gelen aflatoksin üretim inhibisyonu

Erken gelişim, maternal kalıtsal ürünlere bağlıdır ve bu ürünlerin çoğunun rolü şu anda bilinmemektedir. Burada, tek bir nesilde anne-etki fenotiplerini tanımlamak için CRISPR-Cas9 kullanan bir protokol tanımladık.

Maternal Crispantlarla Erken Gelişimde Annelik İfade Edilen Genlerin Rolünün Belirlenmesi

Klorofil floresansı kullanılarak düşük CO2 ile muamele edildikten sonra bitkilerde fotosentetik verimlilikteki değişiklikleri ölçmek için bir yaklaşım tanımladık.

Fotorespiratuar Mutantlarda Fotosentetik Etkinliğin Klorofil Floresan Analizi ile Değerlendirilmesi

Bu protokol, C. elegans'ta RNAi kaynaklı susturma ve ilişkili kromatin modifikasyonlarının epigenetik kalıtımını incelemek için bir RNA girişimini ve ChIP testini açıklar.

Nesiller Arası Epigenetik Kalıtımın Analizi C. elegans Floresan Raportör ve Kromatin İmmünopresipitasyon (ChIP) Kullanılarak

Görsel-Motor Yanıt hafif artışlarla ve azaltır yanıt larva zebrafish motor çıkışını ölçmek için geliştirdi. Biz de dahil olmak üzere başka bir görme testi optokinetik refleks tarafından test edildiğinde tamamen kör olduğu düşünülüyordu optokinetik yanıt (NRC) mutantlar, hiçbir zebrafish vizyon mutant inceledi.

Işık Parlaklıkları değişiklikler Zebra balığı, Duyarlılık Tedbir Davranış Testi

Keşfedin, keten bitkilerinde besin stresi altında genomik varyasyon ve fenotipik yanıtları incelemek için PCR ve Q-R-T-P-C-R yöntemlerini kullanarak. Bu yöntem, bitki genetiği ve tarımsal dirençlilik araştırmalarına katkı sağlar.

Keten içinde değişiklikler Kalıtsal Çevre İndüklenmiş

Daha fazla video keşfet