Name: Sıçanlarda Aktif Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) İndüksiyon ve İzlenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 26 s
Description: Öğrenin, Lewis sıçanlarında KLH antijeni ve Freund adjuvanı kullanarak gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) indüksiyonu ve ödem ölçümü ile inflamatuar yanıt izleme yöntemini.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Emülsiyon hazırlanması <ol><li> Emülsiyon antijen 1:1 karışımı (DTH çeşitli antijenleri ikna edilebilir ovalbumin, tetanoz toksoidi, sulu çözelti içinde anahtar deliği limpet hemosiyanin ....) Freund adjuvan tamamlamak için eklenen. Bu antijen adjuvan ve başka bir yol boyunca eklemek için çok önemlidir! </li><li> Yapma ve bir emülsiyon enjekte atık bir sürü vardır, bu nedenle her zaman ihtiyacınız olandan 1.5 ya da 2 kez daha fazla hazırlamak. </li><li> 2 mg / ml solüsyon hazırlamak için tuzlu antijen çözülür. Agregaların gevşek istemiyorum, filtre etmeyin! </li><li> Yüksek hızda bir tüp ve vorteks Freund adjuvan H37Ra (Difco, katalog # 231.131) tamamlamak koyun. Vorteks ise antijen damla damla ekleyin. antijen eklenir, 5 dakika daha karıştırın. Karışımı beyaz açmalısınız. </li><li> Bir cam şırınga koyun ve emülsiyon (Fisher katalog # 14-825-17L) 18G köprü kullanarak başka bir cam şırınga bağlamak. (5-10 dk) sabit hale gelinceye kadar, diğer bir şırınga emülsiyon gönder. Iki 5 ml şırınga kullanmak en iyisidir. En fazla 5 ml emülsiyon gerekiyorsa, 5 ml enjektör birkaç setleri kullanın. </li><li> Emülsiyon şırınga 4 ° C&#39;de 3 hafta süreyle saklanabilir. </li></ol> 2. Sıçan, Bağışıklama <ol><li> Birkaç dakika için şırınga emülsiyon karıştırın ve enjeksiyon için kullanılan şırınga transfer. 23G iğneler ve bir Luer-Lok ucu 3 ml şırınga kullanarak kuyruk dibinde 1-2 sitelerinde subkutan 200 ml enjekte edilir. </li></ol> 3. Geri antijen ile Mücadelesi <ol><li> Bağışıklama Yedi gün sonra sıçanların sırtında 2 noktalar tıraş ve bir diğer nokta nokta ve tuzlu (veya ilgisiz antijen), 1 mg / ml antijen çözüm intradermal 20 ml enjekte. Inflamatuar reaksiyon geliştirmek agregaların gevşek olarak, antijen çözüm filtre yapmayın. </li><li> Sıçanlarda hareketleri önlemek için anesthesized olmalıdır. 27G ½ iğneleri ve 1 ml şırınga kullanarak çözüm intradermal enjekte edilir. Enjeksiyonlar arasında iğne değiştirin. Not: zorluk, daha hassas ölçümler için arka yerine kulak kepçesi yapılabilir . See video <a href="/index/Details.stp?ID=325">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=325</a> </li></ol> 4. DTH, ölçümü <ol><li> Enjeksiyon yerinde kırmızı dönüm ve inflamasyonun bir işareti olarak şişme başlayacaktır. Bir cetvel ya da daha iyisi, bir kaliper ile iltihaplı bölgenin çapı ölçün. 24 ve 72 saatleri arasında maksimum şişme meydana gelmelidir. </li></ol>

<ol>
	<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+monitoring+of+adoptive+delayed-type+hypersensitivity+in+rats.">Induction and monitoring of adoptive delayed-type hypersensitivity in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).</li></ol>

Yazarlar Airmid A.Ş. kurucularından ve danışmanlar

DTH reaksiyon daha hassas bir ölçüm için, kulak kepçesi antijen ile sıçan zorlu tavsiye ederiz. Reaksiyon sonra kulakta şişme ilgili antijen-meydan kulak ve kulak ya da serum fizyolojik tek başına ya da alakasız bir antijen ile meydan arasında bir fark olarak ölçülür. Kulak meydan okuma bir gösteri 1&#39;de gösterilmiştir.

Steril solüsyonların reaktifler ve şırınga kullanın. Cam şırınga ve 18G köprüler otoklava olabilir. Ilk kez bir reaktif dokunmadan önce malzeme veri sayfasını okuyun ve uygun koruyucu ekipman giyin.

sıçanlarda aktif gecikmiş tip aşırı duyarlılık (dth) İndüksiyon ve İzlenmesi

Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH), bağışıklık sisteminin astarlanmalıdır karşı antijen enjeksiyonu site sızmaya CCR7 efektör bellek T lenfositleri aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyondur. Inflamatuar reaksiyon antijenik meydan yerinde kızarıklık ve şişme ile karakterize edilir. Immunsupresanların in vivo etkinliğini belirlemek için uygun bir model. Kutanöz DTH, antijen-spesifik T lenfositlerin evlatlık havalesi ile veya antijen ile aktif bağışıklama ve inflamatuar reaksiyon, belirli bir cilde alanda ikna etmek için antijen ile daha sonraki intradermal meydan tarafından başlatılabilir. DTH yanıtları örneğin ovalbumin, tüberkülin, tetanoz toksoidi ya da anahtar deliği limpet hemosiyanin (KLH), çeşitli antijenleri ikna edilebilir. Burada nasıl ikna etmek için Lewis sıçanlarda aktif bir DTH reaksiyon göstermektedir. Önce, bizim ilgi antijen, KLH Freund adjuvan tam bir su-yağ emülsiyonu hazırlamak ve bu emülsiyon sıçanlara subkutan enjekte. Bu KLH yönlendirilmiş bellek T hücreleri geliştirmek için bağışıklık sistemini başbakan. Yedi gün sonra diğer tarafta, bir tarafta ve ovalbumin, ilgisiz bir antijen ile KLH ile geri intradermal sıçanlarda meydan okuyacaktır. Inflamatuar reaksiyon 16-72 saat sonra görülebilir ve kırmızı ve şişmiş alan DTH şiddetinin bir göstergesi olarak ölçülen olacaktır.

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) CCR7-efektör bellek T lenfositlerin aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyon. Burada Lewis sıçanlarda aktif DTH neden ve inflamatuar yanıt nasıl izleneceğini gösteriyor.

Sıçanlarda Aktif Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) İndüksiyon ve İzlenmesi

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (GDA), ... enjeksiyon bölgesine sızan CCR7+ efektör bellek T lenfositleri aracılığıyla gerçekleşen inflamatuar bir reaksiyondur.

Merhaba, ben Christine Beaton. UCI'daki Fizyoloji ve Biyofizik Bölümü'nde, George Chandy laboratuvarında çalışıyorum. Bugün size sıçanlarda aktif DTH'nin nasıl indükleneceğini göstereceğim.Bunun için, antijenim olan KLH'nin Freon adjuvan içindeki bir emülsiyonunu hazırlayacağım. Ardından bu emülsiyonu Lewis sıçanlarının kuyruk tabanına enjekte edeceğim. Bu işlem, sıçanların KLH'ye karşı bağışıklık kazanmasını sağlayacak. Bir hafta sonra sıçanları KLH ile challenge edeceğim ve DTH reaksiyonunu, şişliği ölçerek belirleyeceğim.Burası meydan okuma bölgesidir ve PO kanal blokerlerinin DTH gibi enflamatuar reaksiyonlar üzerindeki etkisini gözlemlemek için laboratuvarda bunu kullanıyoruz. İşte emülsiyonu hazırlamak için kullanacağım eksik Freund adjuvanı. Ayrıca tam Freund adjuvanı da kullanabilirdim.Bugünküle antijenim olan KLH kuvarsları burada ve burada ml başına iki miligramlık bir çözeltim var. PBS içinde, eksik tamamlanmış trans adjuvanı çıkarmak ve 15 mil tüpe aktarmak için bu 5 ml'lik şırıngayı kullanacağım. Ardından tüpü vortekse yerleştireceğim ve vorteksleme işlemi sırasında, antijenimi damla damla adjuvana ekleyeceğim.Ardından, beş dakika daha vorteksleyeceğim. Bu işlem tamamlandıktan sonra, bu 5 M'lık cam şırıngayı karışımla dolduracağım; adjuvant plastikleri aşındırma eğiliminde olduğu için cam şırınga kullanılması gerekmektedir. Emülsiyon hazırlamak için bulduğumuz 5 M'lık şırıngaların en uygun olduğunu gördük.Daha küçük veya daha büyük olanlar o kadar iyi değildir. Şırıngamı karışımla doldurduğumda, bu cam şırıngayı başka bir beş mil'lik cam şırıngaya bağlamak için bu metal köprüyü kullanacağım. Ardından, emülsiyon iyice sertleşene kadar karışımın bir şırıngadan diğerine mümkün olduğunca hızlı geçmesini sağlamak için şırıngalara basınç uygulayacağım ve böylece enjeksiyona hazır hale gelecektir.Şimdi 2,5 mL adjuvan ekleyeceğim. Adjuvanı daha kolay alabilmek için önce hava enjekte ediyorum ve ardından adjuvanın tamamını tüpüme aktarıyorum. Şimdi yapacağım işlem, bunlardan 2,5 mL alıp vorteks cihazında karıştırarak eklemek olacak.Adjuvanın 2,5 µL'sini aldığım için, KLH'den de 2,5 µL alacağım. Damla damla ekledikçe, karışımın renginin değiştiğini ve beyazladığını göreceksiniz. Böylece tüm antijeni adjuvana eklemiş oldum.Şimdi yapacağım işlem, karışımı beş dakika daha vortekslemektir. Ancak tüpü beş dakika boyunca elimde tutmak istemediğim için, tüpü vorteks cihazına bantlayacağım. Tüpün içinde vorteks oluşturmak için mümkün olan en yüksek hızı ayarlamanız gerekir; ancak karışımın taşmamasına dikkat etmelisiniz. Bu şekilde beş dakika boyunca bırakacağım.Böylece beş dakika doldu. Şimdi vorteksi durduracağım ve karışımım beyaz renkte. Bu yüzden tüpü dışarı çıkarıyorum. Eyvah.Karışım şu an tamamen beyaz ancak hâlâ oldukça sıvı. Enjeksiyon için daha katı bir yapı istediğimden, tüm karışımı 5 mL'lik bir cam şırıngaya aktaracağım.Bu şırıngalar otoklavlanmıştır. Bu nedenle, bir şırıngayı komple köprüme bağlıyorum. Diğer şırıngadan ise sadece gövde kısmını bağlıyorum.Pistonu dışarıda bırakıyorum ve ardından karışımımı üst şırıngaya döküyorum. Her şeyi alt şırıngaya aktaracağım. Sonrasında ise burada oluşan hava kabarcığını itmem gerekiyor.Şimdi üstteki şırıngayı ayıracağım ve hava kabarcığını dışarı iteceğim. Kabarcığı görmek zor ancak tam burada. Bu yüzden hava kabarcığını dışarı itiyorum.Karışımı köprüden dışarı itiyorum ve ardından üst şırıngayı yeniden bağlıyorum. Her şeyin sıkıca bağlandığından emin oluyorum ve ardından karışımı bir şırıngadan diğerine aktarıyorum. Başlangıçta bu işlem kolaydır, ancak kısa süre sonra karışım sertleşmeye başlayacaktır.Bu nedenle bu gece işlem zorlaşıyor ve köprüyü bozmak istemiyorum, bu yüzden sadece şırıngalarımı çeviriyorum. Bazen daha uzun sürüyor. Emülsiyondan emülsiyona farklılık gösterir.Muhtemelen sıcaklığa ve ayrıca nem seviyesine bağlıdır. Ancak emülsiyonumun hazır olduğunu düşünüyorum. Döktüğüm zamankinden çok daha kıvamlı görünüyor.Tamamen beyazdır. Ve sadece tek bir faz vardır. ACO fazının yağdan ayrılması asla gerçekleşmemelidir.Artık enjekte edilmeye hazır. Artık imersiyon enjekte edilmeye hazır. Enjekte etmek için her hücreye 200 µL enjekte edeceğim.Bunun için üç ml'lik şırıngalar kullanacağım. Emülsiyon çok yoğun olabilir ve enjekte etmesi zorlaşabilir, bu nedenle iğnenin yerinden çıkmadığından emin olmak için Luer-lock uçlu şırıngalar kullanıyorum. İğneler konusunda ise, emülsiyonun geçişine izin veren mümkün olan en küçük iğneleri kullanmaya çalışıyorum.Ve bu emülsiyon için 20 G 3G'liklerin yeterli olduğunu gördüm. Daha kıvamlı emülsiyonlar için daha büyük şırıngalar kullanmanız gerekebilir. Uygulama yöntemimiz ise şöyledir; bir kişi sıçanı tutarken diğer kişi enjeksiyonu gerçekleştirir.Ve maksimum güvenlik için, sıçanlar çok sakin olmalarına ve tutulmaya alışkın olmalarına rağmen, sıçanları tutan kişi maksimum güvenlik adına kemirgen dişlerine dayanıklı eldivenler kullanır; sıçan tarafından ısırılmak istemeyiz. Böylece tüm emülsiyonu bir cam şırıngaya koyuyorum ve boş cam şırıngayı köprüden ayırıyorum. Onun yerine 3 ml'lik plastik Luer lock şırıngamı yerleştiriyorum.Şimdi, bir emülsiyon hattı için ihtiyacımdan fazlasını transfer ediyorum. Hava kabarcığını dışarı itiyorum. Her hat başına 200 µL enjekte edeceğim için, şırıngamda 300 µL bırakıyorum.Köprüyü ayırıyorum, iğneyi plastik şırıngama takıyorum, ardından iğneyi doldurup pistonu 200 microliters seviyesine indiriyorum. Bu sayede hava kabarcığı kalmadığından emin oluyorum. Artık enjeksiyon yapmaya hazırız.Sıçağın hareket etmediğinden emin olmak istiyoruz. Bu yüzden sıçağı kavrayıp bir parmağımı omzun üzerine, birini ise altına yerleştiriyorum; diğer elimle arka bacakları ve kuyruğu tutuyorum. Enjeksiyonu yan bölgelere gerçekleştireceğiz; bu tarafa on mikroliter, diğer tarafa ise on mikroliter uygulayacağız. Geçen hafta sıçanları, antijen olarak KLH içeren bir emülsiyonla immunize ettim.Bugün, antijenim olan KLH ve ilgili bir antijen olan o albumin ile sırt bölgelerinden intradermal olarak challenge yapacağım; ancak sırtlarına intradermal enjeksiyon yapabilmek için önce onları tıraş etmem gerekiyor. Bunun için basit bir elektrikli tıraş makinesi kullanıyorum. Evet, iğnenin körelmediğinden emin olmak için her sıçan arasında iğneleri değiştiriyorum.Bu işlemle intradermal enjeksiyon yapmak çok daha kolaylaşır, özellikle her bir antijenden 20 microliters gibi küçük hacimler enjekte ediyorum. Böylece tüm sıçanlara iki antijenimi enjekte etmiş oldum ve onları yarına kadar kafeslerinde bırakacağım. Yarın bir inflamasyon gözlemleyebileceğiz.Böylece enjeksiyon bölgesi kızaracak ve şişecek, böylece inflamasyonun bir ölçüsü olarak inflamasyon bölgesinin çapını ölçebileceğiz. Dün sıçanların sırtına intradermal olarak ilgili antijenim olan KLH'yi ve ilgisiz bir antijen olan albümini uyguladım. Şimdi 24 saat sonra sıçanları inceleyeceğim ve inflamasyon olup olmadığına bakacağım.Bu nedenle, yalnızca KLH uygulama bölgesinde enflamasyon bekliyorum ve enflamasyon kızarıklık ve şişkinlik şeklinde görülecektir. Enflamasyonu gözlemledikten sonra, etkilenen alanın çapını ölçerek enflamasyonlu bölgeyi ölçeceğim. Burası KLH enjekte edilen bölge ve görüldüğü üzere ciddi bir enflamasyon mevcut.Normal cilde kıyasla çok kırmızı ve şişmiş durumda. Şimdi albümin alan diğer bölgeye bakarsak, enjeksiyon yerini tam burada görebilirsiniz ancak belirgin bir kızarıklık veya şişlik yoktur. Yani negatif kontrol çalıştı.Şimdi inflamasyon bölgesini ölçeceğim. Bunun için standart bir cetvel kullanacağım ve ölçümü milimetre cinsinden yapacağım. Bu altı milimetre geliyor ve ikinci bir ölçüm daha yapıyorum.Bu beş milimetre ağırlığında. Çok az kızarıklık var, ölçüm yapacağım ancak zarfı bir milimetre. Böylece size burada, bir antijenle emülsiyonun nasıl hazırlanacağını, sıçanların bu emülsiyonla nasıl immünize edileceğini, ardından bir hafta sonra immünizasyon için kullandığım antijenle ve ayrıca ilgili antijenle nasıl challenge edileceğini ve kullanılan ve Chan laboratuvarındaki inflamasyon derecesinin nasıl görselleştirilip ölçüleceğini gösterdim.Bu tekniği, potasyum kanalı blokörlerinin sıçanlarda inflamasyon üzerindeki etkisini ölçmek için basit bir analiz olarak oldukça rutin bir şekilde kullanıyoruz.

induction-monitoring-active-delayed-type-hypersensitivity-dth

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) CCR7-efektör bellek T (TEM) lenfositlerin aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyon. Burada, antijen spesifik TEM hücreleri aktive Lewis sıçanlarda evlatlık DTH neden ve inflamatuar yanıt izlemek nasıl göstermektedir.

Sıçanlarda Kabul edilmiş Gecikmeli-Tipi aşırı duyarlılık indüksiyonu ve İzleme

Burada uyaran ve sıçan kulak gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) reaksiyon ilerleme kaydetmek için bir yöntem gösteriyor. Bu sıçan kulak doku hazırlanması / bellek efektör T hücre yanıtının iki foton görüntüleme için bir gösteri izledi.

Kabul edilmiş DTH indüksiyonu sonra Kulak Görüntüleme Efektör Bellek T hücreleri

Bazofil aktivasyon testi, IgE bağımlı alerji tespiti için güçlü bir...

İlaç Aşırı duyarlılık IgE aracılığı ile Mekanizmalarının Araştırılması bazofil Etkinleştirme Test

Biz potansiyel greft reddi yüksek riski olmadan nakli sonrası immünsüpresyonun sonlandırmaya karar için kullanılabilecek değerli bir tanı testi açıklar. Tahlil Gecikmeli Tip Aşırı duyarlılık ilkelerini kullanır ve alıcılar tarafından monte hem donör özel efektör ve düzenleyici immün yanıtın doğru bir değerlendirme sağlar.

Antijen Özgül Düzenleme için Trans-vivo Gecikmeli Tip Aşırı Duyarlılık Testi

Mast hücreleri ve bazofillerin aktivasyonuyla karakterize alerjik tepkiler, IgE çapraz bağlanması ve proenflamatuar aracıların salınması ile tahrik edilmektedir. Alerjik tepkilerin bir kantitatif olarak değerlendirilmesi allerjen vasküler geçirgenlikte değişiklikleri izlemek için Evans mavisinin kullanılması sureti ile elde edilebilir.

Farelerde Yerel Anafilaksi Ölçme

Burada doğru bir şekilde pasif sistemik anafilaksi (PSA) ve bir kızılötesi termometre kullanarak gıda Anti fare modelleri vücut sıcaklık farklılıkları ölçmek için yeni bir yöntem mevcut. Bu yordamı doğru önceki PSA sonuçlarında yinelenen.

Kızılötesi termometre pasif sistemik anafilaksi ve gıda Anti değerlendirme sırasında kullanarak fare vücut sıcaklık ölçümü

Bu çalışmada, BALB/c farelerde, bu hastalıkta görülen cinsiyet farklılıkları da dahil olmak üzere ilaca bağlı otoimmün hepatitin patogenezini incelemek için kullanılabilecek bir in vivo immünizasyon, translasyonel hepatit modeli tanımlanmıştır. Bu modelin in vivo ve in vitro deneysel teknikler kullanarak tekrarlanabilir analizleri nasıl gösterdiğini açıklayacağız.

Patojenik Mekanizmalarının İncelenmesi için BALB/c Farelerde İlaca Bağlı, Otoimmün Hepatitin İndüklenmesi

Kontakt aşırı duyarlılık (CHS), alerjik kontakt dermatitin (AKB) murin deneysel bir modelidir. CHS, göğüs ve karın bölgesinin traş edilmiş cildini boyayarak reaktif hapten ile hassaslaşmaya dayanır, daha sonra seyreltilmiş bir hapten ile kulak derisi meydan okuması ile çeşitli şekillerde değerlendirilen bir şişlik reaksiyonuna neden olur.

Alerjik Kontakt Dermatitin Murin Modeli Olarak Kontakt Aşırı Duyarlılık

Telomeraz katalitik altbirim izole etmek için çabalar, TERT, yapısal çalışmalar için yeterli miktarda, bir on yıl daha sınırlı bir başarı ile yerine getirildiğini var. Burada, rekombinant Tribolium castaneum TERT izolasyonu (yöntemleri...

Active T. in vitro Sulandırma castaneum Telomeraz

Burada kültürlerin hipoksik durumunu değerlendirmek için, hücre kültürleri ve basit testler hipoksi ikna etmek için basit yöntemler öneriyoruz.

Hücre Kültürü ve Hipoksi Test İndüksiyon

Öğrenin, Lewis sıçanlarında KLH antijeni ve Freund adjuvanı kullanarak gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) indüksiyonu ve ödem ölçümü ile inflamatuar yanıt izleme yöntemini.

Sıçanlarda Aktif Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) İndüksiyon ve İzlenmesi

Daha fazla video keşfet