Fare Hipokampal Dilim Kültürlerinde Tek Hücreli Elektroporasyon Yoluyla Gen İfadesi

Bir tabaktaki bir kültür ekinde kültürlenmiş bir fare beyninden alınan hipokampal bir dilimle başlayın.

Dilimi içeren eki kesin ve mikroskop altında bir elektroporasyon odasına sabitleyin.

Odayı, aşırı uyarılmayı engellemek ve hücresel toksisiteyi önlemek için voltaj kapılı bir sodyum kanal blokeri içeren bir tamponla perfüze edin.

Dilimin yakınına, ilgilenilen geni içeren plazmitleri içeren bir pipet yerleştirin.

Bir zar çukuru oluşana kadar hedef hipokampal nörona yaklaşırken pipet tıkanmasını önlemek için pozitif basıncı koruyun.

Membran ile bir sızdırmazlık oluşturmak için negatif basınca geçin.

Hücresel hasarı en aza indirmek için pozitif ve negatif basınç arasında geçiş yapın.

Membranı geçici olarak geçirgen hale getirmek için bir elektroporasyon darbesi uygulayın ve plazmit girişini kolaylaştırın.

Pozitif basıncı korurken pipeti geri çekin ve komşu hedef nöronlar için elektroporasyonu tekrarlayın.

Elektroporasyonlu dilimi yeni bir parçaya aktarın ve ilgilenilen genin ekspresyonuna izin vermek için inkübe edin.

Elektroporasyon için dilim kültürleri hazırlamak için, ilgilenilen kültür eklerini 900 mikrolitre kültür ortamı ile yüklenmiş ayrı üç santimetrelik petri kaplarına aktarın ve kü