Name: Söz konusu modelde Saponin permeabilize Kardiyak Elyaf Oksidatif Fosforilasyon Değerlendirmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-28T18:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 10 s
Description: Öğrenin saponin ile permeabilize edilmiş kardiyak liflerde oksidatif fosforilasyonu değerlendirme yöntemini. Bu protokol fare kalp dokusunda mitokondriyal fonksiyonu yüksek çözünürlüklü respirometri ile hassas şekilde ölçer.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Kanada Sağlık Araştırma ve Genom Kanada Enstitüsü tarafından desteklendi. JS, Alberta, Kanada Sağlık Araştırma, Kalp ve İnme Vakfı ve Kanada Diyabet Derneği Heritage Vakfı&#39;ndan maaş desteği ödül tutar. Laboratuvar saponin permeabilize fiber tekniği kazanılması sırasında Oroboros Araçların teknik yardım kabul etmek istiyorum.

<ol><li>Saks, V. A., Veksler, V. I., Kuznetsov, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Permeabilized+cell+and+skinned+fiber+techniques+in+studies+of+mitochondrial+function+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Permeabilized cell and skinned fiber techniques in studies of mitochondrial function in vivo.</a> Mol Cell Biochem. 184, 81-100 (1998).</li>
<li>Gnaiger, E., Kuznetsov, A. V., Schneeberger, S. Mitochondria in the cold. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGnaiger%2C+E+%22Life+in+the+Cold%22">Life in the Cold</a>. Heldmaier, G., Klingenspor, M. , Springer. Berlin, Heidelberg, New York. 431-442 (2000).</li>
<li>Rasmussen, H. N., Rasmussen, U. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+solubilities+of+media+used+in+electrochemical+respiration+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Oxygen solubilities of media used in electrochemical respiration measurements.</a> Anal Biochem. 319, 105-113 (2003).</li>
<li>Visscher, G. D. e, Rooker, S., Jorens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pentobarbital+fails+to+reduce+cerebral+oxygen+consumption+early+after+non-hemorrhagic+closed+head+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Pentobarbital fails to reduce cerebral oxygen consumption early after non-hemorrhagic closed head injury in rats.</a> J Neurotrauma. 22, 793-806 (2005).</li>
<li>Kuznetsov, A. V., Veksler, V., Gellerich, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+mitochondrial+function+in+situ+in+permeabilized+muscle+fibers%2C+tissues+and+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Analysis of mitochondrial function in situ in permeabilized muscle fibers, tissues and cells.</a> Nat Protoc. 3, 965-976 (2008).</li>
<li>Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+conformance+of+cellular+respiration.+A+perspective+of+mitochondrial+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Oxygen conformance of cellular respiration. A perspective of mitochondrial physiology.</a> Adv Exp Med Biol. 543, 39-55 (2003).</li>
<li>Gnaiger, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capacity+of+oxidative+phosphorylation+in+human+skeletal+muscle%3A+new+perspectives+of+mitochondrial+physiology%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Capacity of oxidative phosphorylation in human skeletal muscle: new perspectives of mitochondrial physiology.</a> Int J Biochem Cell Biol. 41, 1837-1845 Forthcoming.</li>
<li>Sena, S., Hu, P., Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+insulin+signaling+accelerates+cardiac+mitochondrial+dysfunction+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Cell+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Impaired insulin signaling accelerates cardiac mitochondrial dysfunction after myocardial infarction.</a> J Mol Cell Cardiol. 46, 910-918 (2009).</li>
<li>Boudina, S., Sena, S., O'Neill, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+mitochondrial+oxidative+capacity+and+increased+mitochondrial+uncoupling+impair+myocardial+energetics+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Reduced mitochondrial oxidative capacity and increased mitochondrial uncoupling impair myocardial energetics in obesity.</a> Circulation. 112, 2686-2695 (2005).</li>
<li>Lenaz, G., Genova, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+and+organization+of+mitochondrial+respiratory+complexes%3A+a+new+understanding+of+an+old+subject%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Structure and organization of mitochondrial respiratory complexes: a new understanding of an old subject.</a> Antioxid Redox Signal. 12, 961-1008 Forthcoming.</li>
<li>Lemieux, H., Hoppel, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria+in+the+human+heart%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bioenerg+Biomembr%22%5BJournal%5D)">Mitochondria in the human heart.</a> J Bioenerg Biomembr. 41, 99-106 (2009).</li>
<li>O, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retarded+diffusion+of+ADP+in+cardiomyocytes%3A+possible+role+of+mitochondrial+outer+membrane+and+creatine+kinase+in+cellular+regulation+of+oxidative+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Retarded diffusion of ADP in cardiomyocytes: possible role of mitochondrial outer membrane and creatine kinase in cellular regulation of oxidative phosphorylation.</a> Biochim Biophys Acta. 1144, 134-148 (1993).</li>
<li>Endo, M., Kitazawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((E-C+coupling+studies+in+skinned+cardiac+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Aspects+of+Cardiac+Muscle%22%5BJournal%5D)">E-C coupling studies in skinned cardiac fibers.</a> Biophysical Aspects of Cardiac Muscle. Morad, M. , Academic. New York. 307-327 (1978).</li>
<li>Veksler, V. I., Kuznetsov, A. V., Sharov, V. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+respiratory+parameters+in+cardiac+tissue%3A+a+novel+method+of+assessment+by+using+saponin-skinned+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial respiratory parameters in cardiac tissue: a novel method of assessment by using saponin-skinned fibers.</a> Biochim Biophys Acta. 892, 191-196 (1987).</li>
<li>Bangham, A. D., Horne, R. W., Glauert, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Action+of+saponin+on+biological+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Action of saponin on biological cell membranes.</a> Nature. , 196-952 (1962).</li>
<li>Daum, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipids+of+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Lipids of mitochondria.</a> Biochim Biophys Acta. 822, 1-42 (1985).</li>
<li>Milner, D. J., Mavroidis, M., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Desmin+cytoskeleton+linked+to+muscle+mitochondrial+distribution+and+respiratory+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Desmin cytoskeleton linked to muscle mitochondrial distribution and respiratory function.</a> J Cell Biol. 150, 1283-1298 (2000).</li>
<li>Skladal, D., Sperl, W., Schranzhofer, R. Preservation of mitochondrial functions in human skeletal muscle during storage in high energy preservation solution (HEPS). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSkladal%2C+D+%22What+is+Controlling+Life%3F%22">What is Controlling Life?</a>. Skladal, E., Gellerich, F., Wyss, M. , Univ. Press. Vol 3. Modern Trends in BioThermoKinetics 268-271 (1994).</li>
<li>Kuznetsov, A. V., Wiedemann, F. R., Winkler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+saponin-permeabilized+muscle+fibers+for+the+diagnosis+of+mitochondrial+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Biofactors%22%5BJournal%5D)">Use of saponin-permeabilized muscle fibers for the diagnosis of mitochondrial diseases.</a> Biofactors. 7, 221-223 (1998).</li>
<li>Gnaiger, E. Polarographic oxygen sensors, the oxygraph and high-resolution respirometry to assess mitochondrial function. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGnaiger%2C+E+%22Drug-Induced+Mitochondrial+Dysfunction%22">Drug-Induced Mitochondrial Dysfunction</a>. Dykens, J., Will, Y. , John Wiley & Sons, Inc. 327-352 (2008).</li>
</ol>

Saponin permeabilize kalp fiber tekniği, in vitro ve in vivo olarak değerlendirilmesi mitokondriyal Kadıköy oksijen tüketimi arasında eşsiz bir uzlaşma sunuyor. Bu tekniğin avantajları korunur hücresel mimarisi olarak izole mitokondri göre fizyolojik önemi artan içerir. Plazma zarı bozulmuş olsa da, mitokondri 12 olmak üzere hücre içi membran yapılar, 14, sarkoplazmik retikulum 14, myofilaments ve 1, 17 hücre iskeleti bozulmadan kalır . Ayrıca, mitokondri ve ...

<table><tbody><tr><td>100% Etanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>HC600</td><td></td></tr><tr><td>70% Etanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>HC-1000</td><td></td></tr><tr><td>Adenozin 5&amp;#8242;-difosfat monopotasyum tuzu dihidrat (ADP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5285</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini, esasen yağ asidi&amp;#8211;içermeyen</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-6003</td><td></td></tr><tr><td>Antimisin A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8674</td><td></td></tr><tr><td>Askorbik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4403</td><td></td></tr><tr><td>Adenozin 5&amp;#8242;-trifosfat disodyum tuzu hidrat (ATP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2383</td><td></td></tr><tr><td>Atraktilosid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6882</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum karbonat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4830</td><td></td></tr><tr><td>Karbonil siyanür p-(triflorometoksi) fenilhidrazon (FCCP)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>Sitokrom c</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C7752</td><td></td></tr><tr><td>Digitonin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D141</td><td></td></tr><tr><td>Ditiyotreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>Etilen glikol-bis-(2-amino&amp;#8211;etileter)-N,N,N&amp;#8242;,N&amp;#8242;-tetraasetik asit (EGTA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>Glutamik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>27647</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4034</td><td></td></tr><tr><td>İmidazol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5513</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Pfizer Pharma GmbH</td><td></td><td>Ketaset</td></tr><tr><td>Laktobiyonik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>153516</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum klorür (MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum klorür hekzahidrat (MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;&amp;#8729;6H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr><tr><td>Malik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1000</td><td></td></tr><tr><td>MES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3671</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N&amp;rsquo;,N&amp;rsquo;-Tetrametil- p-fenilendiamin dihidroklorür (TMPD)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3134</td><td></td></tr><tr><td>Oligomisin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O4876</td><td></td></tr><tr><td>Fosfokreatin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7936</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum hidroksit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5958</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum siyanür</td><td>Fluka</td><td>60178</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum fosfat monobazik</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>Rotenon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8875</td><td></td></tr><tr><td>Saponin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>47036</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum pentobarbital</td><td>Ceva Sante Animale</td><td>1715 138</td><td>Kons. 54.7 mg/ml</td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2256</td><td></td></tr><tr><td>Süksinik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3674</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S7903</td><td></td></tr><tr><td>Taurin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8691</td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin</td><td>Bayer AG</td><td></td><td>Rompun</td></tr><tr><td>ddH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buz</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oroboros Oxygraph-2k</td><td>Oroboros Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>VWR international</td><td>21905-026</td><td></td></tr><tr><td>15ml polipropilen santrifüj tüpleri</td><td>VWR international</td><td>89004-368</td><td></td></tr><tr><td>50ml polipropilen santrifüj tüpleri</td><td>VWR international</td><td>89004-364</td><td></td></tr><tr><td>Düz kuyumcu pensi</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-50B</td><td></td></tr><tr><td>Eğri kuyumcu pensi</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-57B</td><td></td></tr><tr><td>Düz cerrahi makas</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-402</td><td></td></tr><tr><td>Steril cerrahi bistüri ucu</td><td>VWR international</td><td>BD371610</td><td></td></tr><tr><td>0.45-&amp;mu;m şırınga filtreleri</td><td>VWR international</td><td>CA28145-485</td><td></td></tr><tr><td>pH metre</td><td>VWR international</td><td>CA11388-308</td><td></td></tr><tr><td>Cam Petri kapları</td><td>VWR international</td><td>89000-300</td><td></td></tr><tr><td>12 kuyucuklu polistiren doku kültürü plakaları</td><td>VWR international</td><td>82050-926</td><td></td></tr><tr><td>Plaka karıştırıcı</td><td>VWR international</td><td>97042-594</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand mikro manyetik balıklar</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-511-67</td><td></td></tr><tr><td>Hassas terazi</td><td>VWR international</td><td>CA11278-162</td><td></td></tr><tr><td>10&amp;mu;l Hamilton mikro şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-815-1</td><td></td></tr><tr><td>25&amp;mu;l Hamilton mikro şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-824-7</td><td></td></tr><tr><td>50&amp;mu;l Hamilton mikro şırınga</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-824-5</td><td></td></tr><tr><td>Nalgene sıkmalı şişeler</td><td>Wilkem Scientific</td><td>LNA2407-1000</td><td></td></tr><tr><td>Polistiren tartım kapları</td><td>VWR international</td><td>89106-750</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon mikroskobu</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

söz konusu modelde saponin permeabilize kardiyak elyaf oksidatif fosforilasyon değerlendirmesi

Respirometric Oxidative Phosphorylation Assessment in Saponin-permeabilized Cardiac Fibers

Mitokondri, enerji metabolizması, oksidatif stres, apoptoz, yaşlanma, mitokondriyal encephalomyopathies ve ilaç toksisitesinin yer olarak mitokondriyal fonksiyon araştırılması kalp fizyolojisi önemli bir parametre temsil eder. Bu göz önüne alındığında, kalp mitokondrial fonksiyonu ölçmek için teknolojiler talep vardır. Mitokondrial fonksiyonu ölçmek için bütüncül bir yaklaşım kullanır Bir teknik Söz konusu modelde oksidatif fosforilasyon (Kadıköy) analizi. Söz konusu modelde Kadıköy değerlendirme ilkesi Clark elektrot kullanan oksijen konsantrasyonu ölçüm etrafında merkezli. Permeabilize elyaf demeti, kapalı oda düşüşler, oksijen, oksijen konsantrasyonu tüketir. Seçilen substrat inhibitörü-uncoupler titrasyon protokolleri kullanarak, elektronlar, mitokondriyal fonksiyon değerlendirme sağlayan, elektron taşıma zinciri belirli siteleri sağlanmaktadır. Kas liflerinin sarcolemma permeabilize, mitokondriyal fonksiyon modelde aynı analizi öncesinde mekanik ve kimyasal hazırlık teknikleri kullanılmaktadır. Kimyasal permeabilization hücresel mimarili korurken seçici hücre zarı perfore saponin kullanmaktadır. Bu kağıt iyice mitokondriyal Kadıköy değerlendirmek için, oksijen tüketimi ölçümleri için saponin tenli kalp lifleri hazırlanmasında yer alan adımları açıklamaktadır. Ayrıca, danışmanlık hizmetlerinin yanı sıra özel substratlar gidermeye, elektron taşıma zinciri belirli siteleri mitokondri fonksiyonunu belirlemek için kullanılıyor olabilir inhibitörleri ve uncouplers sağlanmaktadır. Önemlisi, açıklanan protokol çeşitli hayvan modellerinde ve insan örnekleri kalp ve iskelet doku kolayca uygulanabilir.

Söz konusu modelde oksidatif fosforilasyon analizi ile birlikte Saponin-permeabilize elyaf hazırlama, mitokondriyal fonksiyon bütünleştirici değerlendirme sağlar. Mitokondriyal solunum fizyolojik ve patolojik durumlar mitokondriyal etkileşimleri, morfolojisi ve biyokimya da dahil olmak üzere çeşitli düzenleyici etkileri yansıtabilir.

Söz konusu modelde Saponin permeabilize Kardiyak Elyaf Oksidatif Fosforilasyon Değerlendirmesi

Mitokondriyal fonksiyonun incelenmesi, mitokondrilerin enerji metabolizmasında rol oynamaları nedeniyle kardiyak fizyolojinin önemli bir parametresini temsil eder, ...

Bu prosedürün genel amacı, polarografik ölçümler için saponin permele kardiyak lifler hazırlamaktır. Bu işlem, öncelikle kalbin fareden çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, gevşek bir şekilde birbirine bağlı en fazla altı ila sekiz lif içeren kardiyak lif demetlerinin mekanik olarak hazırlanmasıdır.Ardından, kardiyak demetler saponin ile kimyasal olarak permeabilize edilir. Daha sonra kardiyak demetler, saponinden ve kalan tüm metabolitlerden arındırılmak üzere yıkanır. Sonuç olarak, polarigrafik ölçümler aracılığıyla mitokondriyal oksidatif fosforilasyona dair içgörüler sağlayan sonuçlar elde edilebilir.Merhaba, ben Calgary Üniversitesi Biyokimya ve Moleküler Biyoloji Bölümü'nde Dr. Jane Sheer'in laboratuvarından Curtis Huey. Bugün size saponin ile permeabilize edilmiş kalp liflerinin hazırlanma prosedürünü göstereceğiz. Laboratuvarımızda bu prosedürü, in situ mitokondriyal oksidatif fosforilasyonu değerlendirmek için kullanıyoruz.Hadi başlayalım. Bu prosedüre başlamak için bir deniz kalbi çıkarın ve buz üzerinde RP çözeltisi içeren bir Petri kabına yerleştirin. Bir disseksiyon mikroskobu kullanarak, tüm bağ dokusunu ve/veya yağları dikkatlice temizleyin.Kalbi

respirometric-oxidative-phosphorylation-assessment-saponin

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Vastus lateralis biyopsi saflaştırılmış mitokondrinin preparasyonu ve respirometrik profil için yöntemler tarif edilmiştir. Küçük kas hacminin kullanımı klinik araştırma uygulamaları için bu teknik uygundur.

Perkütan İğne Biyopsisi ile Elde Edilen İskelet Kası Doku İzole Mitokondri hazırlanması ve Respirometrik Değerlendirmesi

Sunulan yöntemler, minimum miktarlarda fare iskelet kasından izole mitokondri kullanılarak yapılan bir mikroplaka bazlı respirometrik tahliller koleksiyonunun performansı için adım adım talimatlar sağlar. Bu tahliller, yaygın olarak kullanılan bir hayvan modelinde mitokondriyal oksijen tüketimindeki mekanik değişiklikleri/adaptasyonları ölçebilir.

Yüksek verim Mikroplate Solunum Ölçümler Fare İskelet Kası Minimal Miktarları gelen kondriyayı İzole kullanma

Aşağıdaki protokol, izole edilmiş çalışan sıçan kalbinde glikoz ve yağ asidi oksidasyon oranlarının kantitatif ölçümü için tamponların hazırlanmasını ve kullanılmasını açıklar. Örneklem analizi ve verilerin yorumlanması için kullanılan yöntemler de tartışılmaktadır.

İzole Çalışma Sıçan Kalp Glukoz ve Yağ Asidi Oksidasyonu Oranlarının Belirlenmesine Yöntemleri

Yüksek çözünürlüklü Solunum mitokondriyal oksijen tüketimini belirlemek için kullanılır. Bu mitokondriyal solunum zinciri kompleksleri '(I-IV) solunum hızları, maksimum mitokondriyal elektron transport sistem kapasitesi ve mitokondriyal dış membran bütünlüğü belirlemek için basit bir tekniktir.

Yüksek çözünürlüklü Solunum permeabilize ve bozulmamış Hücreleri Mitokondrial fonksiyonu değerlendirmek için

Bu iletişim kuralı calorespirometry, ısı dağılımı ve enerji metabolizmasını değerlendirmek için invaziv olmayan bir yaklaşım sağlar solunum yolu tarif etmek ve aynı anda ölçümü anlatılmaktadır. Bu teknik enerji kullanımı aerobik ve anaerobik yolları katkısı toplam hücresel enerji akışı izleyerek değerlendirmek için kullanılır.

Calorespirometry: Hücresel enerji metabolizması araştırmak için bir güçlü, invaziv olmayan bir yaklaşım

Yüksek çözünürlüklü respirometreler kullanılarak oksidatif fosforilasyonun değerlendirilmesi, mitokondri ve hücresel enerji metabolizmasının fonksiyonel analizinin ayrılmaz bir parçası haline gelmiştir. Burada, oda ve mikroplaka tabanlı yüksek çözünürlüklü respirometreler kullanılarak hücresel enerji metabolizmasının analizi için protokoller sunuyoruz ve her cihazın temel faydalarını tartışıyoruz.

Oda ve Plaka Tabanlı Respirometreler Kullanarak Hücrelerdeki ve Dokulardaki Biyoenerjetik Değerleri Değerlendirmek için Yüksek Çözünürlüklü Respirometri

Burada, fare iskelet kasından mitokondri izolasyonu için ayrıntılı bir yöntem ve ardından mikroplaka tabanlı respirometrik testler kullanılarak Oksijen Tüketim Hızı (OCR) ile solunum analizi için ayrıntılı bir yöntem açıklanmaktadır. Bu boru hattı, çoklu çevresel veya genetik müdahalelerin mitokondriyal metabolizma üzerindeki etkilerini incelemek için uygulanabilir.

Respirometrik Testler için Fare İskelet Kasından Mitokondri İzolasyonu

Floresan sensörlerine bağlı yüksek çözünürlüklü respirometri, mitokondriyal oksijen tüketimini ve reaktif oksijen türlerinin (ROS) oluşumunu belirler. Bu protokol, geçirgenleştirilmiş siyatik sinirde mitokondriyal solunum hızlarını ve ROS üretimini değerlendirmek için bir teknik tanımlamaktadır.

Siyatik Sinirde Mitokondriyal Fonksiyonun Yüksek Rezolüsyonlu Respirometri ile Değerlendirilmesi

Atlar olağanüstü bir aerobik egzersiz kapasitesine sahiptir, bu da at iskelet kasını hem at egzersiz fizyolojisi hem de memeli mitokondriyal fizyolojisi çalışmaları için önemli bir doku haline getirir. Bu makalede, at iskelet kasında mitokondriyal fonksiyonun kapsamlı değerlendirilmesi için teknikler açıklanmaktadır.

At İskelet Kasının Yüksek Çözünürlüklü Floro-Respirometrisi

Sperm mitokondriyal fonksiyonunun yüksek çözünürlüklü respirometri ile analizi, kapalı bir oda sisteminde serbestçe hareket eden spermatozoanın oksijen tüketiminin ölçülmesine izin verir. Teknik, sperm mitokondriyal özellikleri ve bütünlüğü hakkında bilgi sağlayan insan spermatozoasında solunumu ölçmek için uygulanabilir.

İnsan Spermatozoasında Mitokondriyal Fonksiyonu Değerlendirmek için Yüksek Çözünürlüklü Respirometri

Burada, insan veya fare kasından taze geçirgen iskelet kası liflerinde mitokondriyal oksidatif fosforilasyonu ölçmek için kapsamlı bir yöntem açıklıyoruz. Bu yöntem, mevcut mitokondriyal ağları ve membran bütünlüğünü korurken mitokondriyal solunumun gerçek zamanlı olarak ölçülmesine ve yakıt tercihinin ve metabolik esnekliğin değerlendirilmesine olanak tanır.

İnsan ve Fare İskelet Kası Liflerinde Mitokondriyal Solunumun Yüksek Çözünürlüklü Respirometri ile Ölçülmesi

Öğrenin saponin ile permeabilize edilmiş kardiyak liflerde oksidatif fosforilasyonu değerlendirme yöntemini. Bu protokol fare kalp dokusunda mitokondriyal fonksiyonu yüksek çözünürlüklü respirometri ile hassas şekilde ölçer.

Söz konusu modelde Saponin permeabilize Kardiyak Elyaf Oksidatif Fosforilasyon Değerlendirmesi

Daha fazla video keşfet