Fare diş dokusu kesitlerinde bakterilerin yerinde tespiti

Patojenik bakterilerle enfekte edilmiş bir fare diş eti bölümü alın, bakteriyel DNA'ya erişim için önceden tedavi edilmiş.

Bakteriyel DNA'yı hedefleyen digoksigenin etiketli bir DNA probu ile bir tampon uygulayın.

Numune kurumasını önlemek için bir kapak ve sızdırmazlık takın.

DNA'yı denatüre etmek için ısı ekleyin, ardından sıcak ve nemli koşullarda kuluçka yapın ve prob hibritleşmesine izin verin.

Sürgüyü soğutun ve kapak kaydırmasını çıkarın, ayrıca açılan probları çıkarmak için tampon ile birkaç kez yıkayın.

Spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir bloklama çözeltisi ekleyin.

Digoksigenine bağlanan enzimle konjuge edilmiş antikorlarla kuluçka yapın.

Bağlanmamış antikorları çıkarmak için yıkama.

Endogen enzimi seçici olarak inaktive etmek için bir inhibitör ekleyin.

Enzimle reaksiyona girerek renkli bir çökelti veren bir substrat uygulayın.

Fazla substratı çıkarmak için suyla durulayın.

Çekirdekleri boyamak için bir boya ekleyin.

Fazla boya gidermek için yıkayın.

Etanolde kurutma ve doku şeffaflığını artırmak için ksilen ile tedavi edin.

Bölümü monte et.

Mikroskop altında, kesitteki bakterileri görselleştirin.

Önce slaytları 2x SSC'ye 20 dakika batırarak yerinde başlayın. Bu arada